牛大力總黃酮抗氧化作用的研究

曹志方 ，楊雨輝，郝赫宣，姜亞磊，姚　倩，陳　濤

(1. 海南大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，海南 ?？?570228；2.海南省熱帶動物繁育與疫病研究重點實驗室，海南 ?？?570228)

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牛大力總黃酮抗氧化作用的研究

曹志方1，楊雨輝2，郝赫宣1，姜亞磊1，姚倩1，陳濤1

(1. 海南大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，海南 ?？?570228；2.海南省熱帶動物繁育與疫病研究重點實驗室，海南 ?？?570228)

摘要：為了研究牛大力總黃酮(Flavonoids from Millettia specisoa Champ,以下簡稱FMSC)的抗氧化作用，通過制備牛大力總黃酮，分別測定了其體外和體內(nèi)的抗氧化活性，F(xiàn)MSC的體外抗氧化活性結(jié)果表明: FMSC對DPPH·，OH·，O2·自由基有較強的清除能力，其IC50分別為31.50 μg/mL，225.04 μg/mL，115.39 μg/mL；此外，它對金屬離子還具有較強的螯合和還原能力；在小鼠體內(nèi)試驗中，與模型組比較，F(xiàn)MSC不僅能降低小鼠血清中的BUN(29.63%) 含量和提高T-AOC (58.89%)的活性(P<0.05)，而且它還能提高肝組織中的T-SOD (43.99%)，CAT(47.33%)和GSH-Px(40.76%) 酶的活性和GSH(62.17%)的含量(P<0.05)，此外，它還能降低MDA(36.53%)的含量(P<0.05).由此可得出：FMSC在機體內(nèi)外的抗氧化作用存在差異，其在體外的作用強于其在體內(nèi)的作用，整體而言，其抗氧化活性較強，且具有多途徑和多方面參與抗氧化的特點.

關(guān)鍵詞：牛大力； 黃酮； 抗氧化； 自由基

黃酮類化合物(flavonoids)是一類廣泛存在于自然界中，且具有2-苯基色原酮結(jié)構(gòu)的天然化合物，是許多中草藥的有效成分.現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)黃酮化合物有上萬種，多以游離或與糖結(jié)合成苷的形式存在.黃酮類化合物的種類、含量存在很大差異，因而其藥理作用也不盡相同，研究表明，黃酮類化合物的主要藥理作用是保護心腦血管、清除自由基、抗氧化、利膽保肝、抗癌、抗菌、抗過敏、抗炎癥和抗病毒.近年來，關(guān)于黃酮類化合物的抗氧化作用備受關(guān)注，并有望將其開發(fā)成為天然抗氧化劑，發(fā)揮其預(yù)防疾病和延緩衰老的作用.

牛大力，別名為山蓮藕、大力薯等，為豆科崖豆藤屬美麗崖豆藤(MillettiaspecisoaChamp)的干燥根莖.臨床上已證明其對腰痛、腎虛帶下、風濕性關(guān)節(jié)炎、腰肌勞損、慢性肝炎、病后體虛有顯著療效.有文獻報道，牛大力提取物有較好的抗氧化能力，并推測其可能與黃酮類化合物有關(guān)[1]；另有研究表明，牛大力生藥中總黃酮的含量較高，其提取率高達2.14%[2].但是，到目前為止，尚未見關(guān)于牛大力總黃酮抗氧化作用的研究報道，為了深入地研究牛大力的藥理作用，本研究通過體內(nèi)和體外實驗的方法評價了牛大力中總黃酮的抗氧化和抗衰老活性, 以期為牛大力天然抗氧化劑和天然保健品的開發(fā)提供理論和實驗的依據(jù).

1材料與方法

1.1實驗藥品與試劑牛大力，購于海南源安隆大藥堂，經(jīng)海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院王金花副教授鑒定，其為豆科崖豆藤屬植物—美麗崖豆藤的干燥根莖；蘆丁標準品(購自阿拉丁公司，D1515108)；Vc(Solarbio公司，305D036)；DPPH(武漢艾科化學(xué)試劑公司，201503101)；菲洛嗪(Aladdin公司，L1416039)；EDTA-Na(Dojindo公司，DE140)；Ve(上海慶安藥業(yè)集團宿州制藥有限公司，141102)；D-半乳糖(購自Sigma公司，C1518010)；硫酸亞鐵，氯化亞鐵，氯化鐵，三氯乙酸，硝酸鋁，亞硝酸鈉，氫氧化鈉(均為分析純).

1.2實驗動物 昆明種小白鼠，SPF級，購于長沙市天勤生物技術(shù)有限公司，許可證號SCXK(湘)2014-0011，實驗前分籠預(yù)養(yǎng)3d.

1.3實驗測定試劑盒羥基自由基、抗超氧陰離子自由基、總抗氧化能力(TotalAntioxidantCapacity，T-AOC)、尿素氮(BloodUreaNitrogen，BUN)、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)、總超氧化物歧化酶(TotalSuperoxideDismutase，T-SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GlutathionePeroxidase，GSH-Px)、還原性谷胱甘肽(Glutathione，GSH)、過氧化氫酶(Catalase，CAT)、一氧化氮合酶(NitricOxideSynthase，NOS)分型、考馬斯蛋白測定試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所.

1.4方法

1.4.1牛大力總黃酮(FMSC)的制備及含量測定牛大力粉碎樣品，過80目篩，80 ℃持續(xù)烘干6h，干燥冷卻后稱取2kg，加φ=95 %的乙醇溶液(料液比1g∶20mL)，超聲輔助提取3次，每次2.0h.抽濾后收集所有濾液，加入φ=15 %的三氟乙酸溶液以沉淀蛋白，靜置沉淀后再過0.2μm孔徑的濾膜.以w=4 %的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)濾液pH值至中性.所得濾液經(jīng)減壓濃縮后得到濃縮浸膏，然后再加入少量水分散后，離心(5 000r/min)，收集沉淀.沉淀經(jīng)適量無水乙醇再次完全溶解后，重復(fù)濃縮與析出結(jié)晶過程2次.最后所得到的沉淀經(jīng)低溫、冷凍、干燥后即為黃酮試樣.以蘆丁為標準測出黃酮樣品的質(zhì)量分數(shù)為81.24 %.

1.4.2FMSC體外抗氧化活性的測定

1.4.2.1FMSC對DPPH的清除作用反應(yīng)體系包含2mL不同濃度的FMSC乙醇溶液和2mL0.1mmol·L-1的DPPH-乙醇溶液，于暗光處室溫放置30min后，在517nm波長下測定溶液的吸光度[3].空白校準用乙醇溶液代替DPPH溶液.對照組用乙醇代替試樣.相同濃度系列的維生素C(Vc)組作為陽性對照，清除率=(Ac-Ab)/(Ac-A0)×100%.

注：Ab為測定樣品的吸光度，Ac為對照組的吸光度，A0為空白校準的吸光度.

1.4.2.2FMSC對羥基自由基(OH·)的清除作用采用抗羥基自由基試劑盒測定試樣清除羥基自由基的能力，空白校準由蒸餾水代替樣品和H2O2，吸光度為A0.對照組由蒸餾水替代樣品，吸光度為Ac.以相同濃度系列的Vc組為陽性對照，清除率=(Ac-Ab)/(Ac-A0)×100%.

1.4.2.3FMSC對超氧陰離子(O2-)的清除作用采用抗超氧陰離子自由基測試盒測定試樣清除超氧陰離子的能力，空白校準由蒸餾水代替樣品和H2O2，吸光度為A0.對照組由蒸餾水替代樣品，吸光度為Ac.以相同濃度系列的Vc組為陽性對照，計算出試樣對超氧陰離子自由基的影響能力，清除率=(Ac-Ab)/(Ac-A0)×100%.

1.4.2.4FMSC對金屬離子螯合力的測定[4]EDTA-Na對照曲線的繪制：取不同濃度的EDTA-2Na溶液1mL，加入6.7mL的水，0.2mLφ=0.1 %的菲洛嗪和0.1mLφ=0.35 % 的氯化亞鐵，混合均勻后，在562nm處測定其吸光度值，并用蒸餾水代替樣液做空白實驗.

樣品的測定：取1mL不同濃度的試樣，按上述方法測得吸光度，并以蒸餾水代替樣品做吸光度值.以相同濃度系列的Vc組作為陽性對照.

實驗結(jié)果以螯合率來表示樣品抗氧化程度的大小，螯合率=(A0-A1)/A0×100% ，

注：A0表示空白實驗的吸光度，A1表示樣品的吸光度.同時參照EDTA的螯合率來評價樣品螯合率的大小，從而得出樣品抗氧化能力的大小.

1.4.2.5FMSC還原力的測定采用鐵氰化鉀法測定還原能力[5]，反應(yīng)體系包括2.5mLpH6.6的磷酸鹽緩沖液，2.5mLw=1 %的鐵氰化鉀溶液，樣品液2.5mL，混合均勻后于50 ℃水浴反應(yīng)20min；冷卻后加入2.5mLφ=10 %的三氯乙酸溶液，以3 000r/min離心10min；取上清液5mL，加入1mLw=0.1 % 的FeCl3溶液和5mL蒸餾水，混勻，靜置5min后，于700nm波長下測定其吸光度.測得的吸光度值越高，則表示待測物的還原能力越強.

1.4.3FMSC體內(nèi)抗氧化活性的研究

1.4.3.1最佳給藥方式及最大耐受量(MTD)的確定選取小鼠20 只，隨機分為2組，分別采用灌胃和腹腔注射的方式給予高濃FMSC液，每天給藥2次，給藥量為每10g體質(zhì)量0.1mL，連續(xù)10d，觀察小鼠的外觀、行為、精神狀態(tài)、給藥部位及死亡情況，比較后確定最佳的給藥方式，最后計算出MTD值.

1.4.3.2動物分組、模型制備和給藥選取健康的昆明小鼠60只，體重(22.5±1.4)g，隨機分為6組，即正常對照組、模型對照組、Ve對照組、FMSC的高、中、低劑量組[0.16g·(kg·d)-1，0.04g·(kg·d)-1，0.01g·(kg·d))-1]建模時，除正常組注射等量生理鹽水(每10g體質(zhì)量0.1mL)外，其余各組每天均經(jīng)腹腔注射D-半乳糖生理鹽水[120mg·(kg·d)-1].連續(xù)建模2周后開始給藥，根據(jù)耐受實驗確定所有組均采用腹腔注射給藥，正常組和模型組給予等量的生理鹽水，持續(xù)給藥3周.正常飼喂，每2天測定和記錄各組平均采食量及小鼠體重1次，同時參考所測定的體重變化，及時調(diào)整當天的給藥量.

1.4.3.3日常相關(guān)項目的記錄和后續(xù)檢測除記錄各組小鼠日常采食及體重變化外，每天還應(yīng)觀察小鼠生理、行為和精神狀態(tài)的變化.持續(xù)給藥3周后, 于最后一次造模和給藥后6h稱重, 各小鼠摘眼球取血，3 000r·min-1離心10min，分離血清，低溫保存?zhèn)溆?將小鼠立即斷頸椎處死, 迅速取肝臟、腎臟、胸腺、脾臟，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗，并以濾紙吸干、稱重，同時計算各臟器系數(shù)，臟器系數(shù)=臟器重量(g)/體重(g)×100 %.

取血清，按試劑盒說明書分別測定其血清總抗氧化能力和BUN含量；取肝臟，在冰水浴中制備w=10 %的肝勻漿，并按試劑盒說明書分別測定肝臟總蛋白、T-SOD、T-SOD、GSH-Px、CAT和TNOS/iNOS的活性以及GSH和MDA的含量.

1.5統(tǒng)計分析使用SPSS19 .0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計比較，同時采用單因素方差分析中的LSD方法對組間差異顯著性進行多重比較檢驗.

2結(jié)果與分析

2.1FMSC的體外抗氧化能力

2.1.1FMSC對DPPH的清除作用DPPH是一種較穩(wěn)定的自由基, 當反應(yīng)體系中存在質(zhì)子供體(如抗氧化劑)時將會被清除，具體表現(xiàn)為溶液的吸光度降低[6].基于這一原理，用清除DPPH自由基的能力能夠評價物質(zhì)的抗氧化活性.由圖1可以看出：牛大力黃酮類提取物對DPPH自由基具有較高的清除率，質(zhì)量濃度與清除率呈正相關(guān)，F(xiàn)MSC的IC50值為31.50μg·mL-1.

2.1.2FMSC對羥基自由基(OH·)的清除作用

羥基自由基是一種重要的氧自由基，由氫氧根失去一個電子形成.在人體中如果大量存在羥基自由基，將會殺死紅細胞，降解DNA、脂類和多糖等化合物，從而造成許多有害效應(yīng)，當加入羥基自由基的清除劑后則會明顯降低這類危害.因此，抗氧化物質(zhì)清除羥自由基的能力常被作為評價抗氧化劑抗氧化功效的重要指標[7].從結(jié)果可以看出(見圖2)，F(xiàn)MSC和Vc對OH·自由基有較強的清除作用，隨著其質(zhì)量濃度的增大，其清除作用增強；其IC50值為225.04μg·mL-1，且當質(zhì)量濃度高于200μg·mL-1時，等質(zhì)量濃度的FMSC的清除能力開始強于Vc的清除能力.

2.1.3FMSC對超氧陰離子(O2-)自由基的清除作用該反應(yīng)的機理是：通過黃嘌呤與黃嘌呤氧化酶反應(yīng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基，在加入電子傳遞物質(zhì)和顯色劑后，溶液將顯紫紅色，此時測得溶液的吸光度與O2-的量成正比關(guān)系；而當反應(yīng)液中存在超氧陰離子自由基抑制劑時，O2-將減少，溶液的吸光度將降低[8].從結(jié)果可以看出(見圖3)，F(xiàn)MSC對超氧陰離子自由基有著較強的清除作用，且同等質(zhì)量濃度下FMSC清除超氧陰離子自由基的能力強于Vc，F(xiàn)MSC的IC50值為115.39μg·mL-1.

2.1.4FMSC對金屬離子的螯合力抗氧化物質(zhì)通?？梢宰鳛榻饘匐x子的螯合劑，進而防止金屬離子對細胞或組織造成氧化損傷[4]，螯合率愈大, 表明抗氧化劑潛在的抗氧化能力就愈強.因此，測定抗氧化劑對金屬離子的螯合率就成為評價抗氧化能力常用的方法.由圖4可以看出：EDTA-Na有極強的金屬螯合能力，在質(zhì)量濃度為168μg·mL-1時，其螯合率為98.40 % ；FMSC對Fe2+具有較高的螯合率,在其質(zhì)量濃度為200μg·mL-1時，F(xiàn)MSC對Fe2+的螯合率為89.44 %，相當于EDTA-Na的88.16 %；且在相同質(zhì)量濃度條件下,FMSC對Fe2+的螯合率始終高于Vc.

2.1.5FMSC對Fe3+的還原力還原力是評價物質(zhì)抗氧化能力的重要指標之一, 抗氧化劑的供電子能力越強則還原力越強, 其抗氧化能力也越強.在實驗條件下，越多的Fe3+被還原成Fe2+，溶液的吸光度將越大，則表示抗氧化劑的還原力越強.根據(jù)實驗結(jié)果可知(圖5)：隨質(zhì)量濃度的提高,FMSC和Vc對Fe3+的還原能力均逐漸增加.

2.2FMSC的體內(nèi)抗氧化活性

2.2.1 最佳給藥方式及MTD值2種給藥方式的小鼠均未出現(xiàn)死亡的情況，灌胃組的小鼠在連續(xù)給藥后出現(xiàn)身體消瘦、輕微掉毛、精神萎靡及給藥部位(咽喉)炎癥；而腹腔注射組的小鼠其精神與活動狀態(tài)正常，解剖后其腹腔未出現(xiàn)異常.因此確定腹腔注射為最適宜的給藥方式，且確定小鼠對注射的最大耐受值為2.24g·(kg·d)-1.

2.2.2各組小鼠體重的增長情況 采用D-半乳糖亞急性中毒法建立衰老動物模型是模仿小鼠自然衰老的方法，D-半乳糖亞急性中毒會嚴重干擾小鼠正常的糖代謝，進而造成其進一步的代謝紊亂，導(dǎo)致其代謝能力的不穩(wěn)定或降低，具體表現(xiàn)為生長速度減緩[9].由圖6結(jié)果可以看出，在正常組中，小鼠的體重保持穩(wěn)定且呈較快的增長趨勢；而與正常組的小鼠比較，長期注射D-半乳糖會明顯減緩各組的小鼠的體重增長，且同期體重均偏?。辉诮o予藥物處理后，實驗組小鼠的生長速度開始恢復(fù)(最高達到日增重0.625g)，并逐漸接近正常組水平(最大日增重0.650g).這表明一定劑量的FMSC能改善致衰老小鼠的生長狀況.

2.2.3FMSC對小鼠各臟器系數(shù)的影響 肝臟是體內(nèi)主要的代謝器官，過量的活性氧會造成肝臟細胞的氧化損傷，改變細胞的通透性，從而造成肝細胞腫脹.腎臟則具有過濾體內(nèi)無用或有害代謝產(chǎn)物的功能，血液中過量的活性氧會造成腎細胞的損傷，改變組織結(jié)構(gòu)的通透性[10-11].由結(jié)果可知(見圖7)，與正常組相比, 模型對照組小鼠的肝臟、腎臟系數(shù)升高(P<0 .05)；而胸腺、脾臟系數(shù)降低(P<0 .05).與模型組比較，F(xiàn)MSC藥物組小鼠的肝臟、腎臟系數(shù)升高(P<0 .05)；而胸腺、脾臟系數(shù)變化不明顯，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0 .05)，這表明FMSC能夠降低D-半乳糖的不完全代謝對肝、腎器官的損傷程度，而與免疫調(diào)節(jié)無關(guān).

2.2.4FMSC對小鼠血清T-AOC活性及BUN含量的影響血清中總抗氧化能力(T-AOC)可以反映機體非酶抗氧化劑的活性.本實驗中，F(xiàn)MSC各劑量組均可提高血清T-AOC的活性，其中，高劑量組[(15.87±3.02)U·mL-1]顯示較高水平[正常組水平為(14.21±2.87)U·mL-1]，這表明FMSC能夠直接清除體內(nèi)的ROS，且其抗氧化能力與劑量呈正相關(guān).BUN是蛋白、脂類的代謝產(chǎn)物，與正常組[(167.25±30.82)mg·L-1]比較，模型組小鼠血清中的BUN[(208.85±39.48)mg·L-1]含量明顯升高，這表明大劑量的D-半乳糖加劇了模型小鼠體內(nèi)的脂質(zhì)過氧化水平；在FMSC中劑量組(155.14mg·L-1)、高劑量組(146.96mg·L-1)中小鼠血清中的BUN含量降低，這表明一定劑量的FMSC可減少脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的生成，其作用與抗脂質(zhì)過氧化有關(guān).

2.2.5FMSC對小鼠肝臟中清除氧化自由基的抗氧化酶系的影響T-SOD，GSH-Px，CAT是機體自我產(chǎn)生的重要內(nèi)源性抗氧化劑，又稱細胞抗氧化劑[12].T-SOD能特異性地清除O2-，而GSH-Px和CAT則能夠特異性地清除OH·[13]，它們代表了機體中酶抗氧化劑的活性.由圖9可知：與正常組比較[每毫克Prot的活性為(127.32±5.17)，(68.73±8.50)，(41.49±6.91)U]，在模型對照組中，小鼠肝臟組織中的T-SOD[每毫克Prot的活性為(84.54±6.70)U]、GSH-Px[每毫克Prot的活性為(43.84±5.83)U]及CAT[每毫克Prot的活性為(33.52±12.31)U)]活性均明顯降低(P<0.05)，這表明致衰老小鼠的抗氧化能力被抑制.治療后，陽性對照組和FMSC各劑量組中小鼠肝臟組織中的T-SOD、GSH-Px及CAT活性均有所升高(P<0.05)，表明FMSC能夠通過增強內(nèi)源性抗氧化酶的活性來增強機體整體的抗氧化能力.

2.2.6FMSC對小鼠肝組織中的MDA，GSH含量及NOS分型活性的影響MDA是體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的代謝產(chǎn)物，是評定機體自身脂質(zhì)過氧化程度的重要指標之一；GSH是GSH-Px酶特異性清除OH·自由基的底物，組織中的GSH含量既反映了機體的健康狀態(tài)，又反映了清除OH·自由基的能力[14]；NOS是調(diào)控機體內(nèi)NO合成的關(guān)鍵酶，NO是一種具有氣體分子信使功能的氣體自由基，近年來的研究表明，NO具有生物效應(yīng)雙相性，即既具有抗氧化作用，又具有促氧化作用，NO不足或過量均可引起組織損傷[15].由結(jié)果可知(圖10)：與模型組比較,FMSC各劑量組均使MDA降低36.53%(P<0.05)；使GSH含量升高62.17%(P<0.05)，恢復(fù)到正常水平的90.78%；而對NOS分型的活性則無明顯改變(P>0.05).MDA降低和GSH恢復(fù)到正常水平證實了致衰老小鼠體內(nèi)的抗氧化能力得到增強，這又進一步證實了FMSC具有顯著的抗氧化活性.

3討論

本實驗采取低溫提取、析出重結(jié)晶、全程無強氧化物質(zhì)參與的方法，以期提取到更多抗氧化物質(zhì)，并保證提取物化學(xué)性質(zhì)的穩(wěn)定，經(jīng)蘆丁標定測得總黃酮樣品的純度大于81.24 %.生物體內(nèi)的抗氧化作用主要是通過2條途徑實現(xiàn)，一是抗氧化物質(zhì)直接清除自由基；另一個是提高機體內(nèi)源性抗氧化酶(如T-SOD，GSH-Px，CAT等)的活性[16-17].目前，關(guān)于天然提取物抗氧化能力的研究也主要針對這兩個方面進行.對DPPH，OH·，O2-自由基的清除和對金屬離子的螯合以及還原能力的測定主要是利用了黃酮類物質(zhì)本身的化學(xué)結(jié)構(gòu)(如共軛雙鍵體系，鄰苯二酚結(jié)構(gòu))[18]和特殊的化學(xué)基團(如酚羥基)[19]所表現(xiàn)出化學(xué)性質(zhì)，直接通過氧化還原、合成、催化等反應(yīng)的方式來改變自由基、金屬離子的電化學(xué)性質(zhì)，從而起到轉(zhuǎn)化或減弱自由基氧化能力的目的.在本研究中，F(xiàn)MSC對DPPH，OH·，O2-自由基的清除能力、對鐵離子的還原力以及對金屬離子的螯合能力均表現(xiàn)出較好的抗氧化活性(見圖1—5).

將黃酮類化合物作為天然的抗氧化活性成分進行研究，不僅要研究它的體外抗氧化能力，更重要的是要研究其在進入體內(nèi)后是如何參與抗氧化調(diào)節(jié)和代謝的，它對機體的抗氧化作用能否起到積極作用.本研究在體外部分的結(jié)果表明：牛大力總黃酮在整體上具有強的抗氧化活性，而從體內(nèi)抗氧化部分的結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)MSC在血清中提升T-AOC的(58.89%)活性要高于陽性對照組(56.67%)，這證實了體外抗氧化的結(jié)果；牛大力總黃酮對致衰老小鼠的生長情況雖有一定的積極作用，但均弱于陽性對照組；在升高肝組織中T-SOD(43.99%)，CAT(47.33%)，GSH-Px(40.76%)的酶活性及GSH(62.17%)的含量(P<0.05)和降低MDA(36.53%)的含量(P<0.05)方面，與陽性對照組基本相當，并未表現(xiàn)出在體外實驗中的明顯抗氧化活性.有文章報道過，一些黃酮類化合物在體外實驗中表現(xiàn)出強抗氧化活性，而在體內(nèi)的抗氧化作用卻有所減弱，研究人員推測這可能與黃酮類化合物的體內(nèi)代謝和作用途徑有關(guān)[20]而它是否在進入體循環(huán)后與結(jié)合物和代謝物的性質(zhì)等影響因素有關(guān)，尚無法確定，這尚有待于進一步的研究.

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收稿日期：2015-11-27

基金項目：中西部計劃中的學(xué)科重點領(lǐng)域的建設(shè)項目(ZXBJH-XK002)

作者簡介：曹志方(1989-)，男，安徽安慶人，海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院2013級碩士研究生，E-mail：990038104@qq.com 通信作者： 楊雨輝(1971-)，男，黑龍江綏化人，教授，研究方向：獸醫(yī)藥理與毒理研究，E-mail：yanguniverse@sina.com

文章編號：1004-1729(2016)02-0161-09

中圖分類號：R 285.5

文獻標志碼：ADOl：10.15886/j.cnki.hdxbzkb.2016.0025

Antioxidant Activity of Flavonoids from Millettia specisoa Champ

Cao Zhifang1, Yang Yuhui2, Hao Hexuan1, Jiang Yalei1, Yao Qian1, Chen Tao1

(1.AgriculturalCollege,HainanUniversity,Haikou570228,China;2.HainanKeyLabofReproductionandEpidemicDiseaseResearch,Haikou570228,China)

Abstract：In the study, to analyze the antioxidant activity of the flavonoids from Millettia specisoa Champ (FMSC), the flavonoids from M. specisoa were prepared and its antioxidant activity was determined in vitro and in vivo. The results indicated that FMSC has strong scavenging activity on DPPH·, OH·, O2·free radicals, the value of IC50was 31.50 μg·mL-1, 225.04 μg·mL-1, and 115.39 μg·mL-1, respectively; FMSC has the strong ability of chelating and reduction; FMSC reduce BUN concentration (29.63%) in serum and elevate the activity of T-AOC (58.89%) (P<0.05), improve total superoxide dismutase (T-SOD) (43.99%), the activity of catalase (CAT) (47.33%) and GSH-Px (40.76%) and the content of GSH (62.17%) (P<0.05). FMSC reduce the content of MDA (36.53%) (P<0.01). In summary, the antioxidant activity of FMSC are different in vitro and in vivo, however, the FMSC has strong antioxidant activity, and involve antioxidant process in different pathways.

Keywords：Millettia specisoa Champ; Flavonoids; Anti-oxidation; ROS