新型豬偽狂犬病流行情況及凈化措施

袁 紅，練斯南，張 衡，白挨泉（.長治職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西長治 046000；.佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣東佛山 5800）

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新型豬偽狂犬病流行情況及凈化措施

袁 紅1，練斯南2，張 衡2，白挨泉2
（1.長治職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西長治 046000；2.佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣東佛山 528200）

摘 要：2011年11月份我國發(fā)生新型豬偽狂犬病疫情，導(dǎo)致中大豬、母豬出現(xiàn)典型的偽狂犬癥狀而死亡。目前，各地分離到的豬偽狂犬病毒（PRV）流行毒株基因組同源性非常接近。通過PCR檢測新分離的偽狂犬病毒，測序后發(fā)現(xiàn)毒株出現(xiàn)基因變異，與Bartha株比較，其毒力相關(guān)基因RR基因第31～36位出現(xiàn)6個(gè)連續(xù)堿基的缺失，免疫原gB基因的第224～232位發(fā)生9個(gè)堿基GCCCCGGCC的缺失。毒力基因的變化導(dǎo)致PRV毒株的毒力明顯增強(qiáng)。針對我國新型豬偽狂犬病的流行情況、發(fā)生原因以及該病對我國養(yǎng)豬業(yè)造成的危害進(jìn)行了分析討論，對新型偽狂犬病的毒株變異現(xiàn)象、臨床新表現(xiàn)、病理新變化以及診斷方法作了闡述，并提出了新型偽狂犬病的防制和凈化措施。

關(guān)鍵詞：新型豬偽狂犬??；變異毒株；凈化措施

豬偽狂犬病毒屬于皰疹病毒科、豬皰疹病毒屬，只有一個(gè)血清型，可致潛伏感染，尤其潛伏在神經(jīng)系統(tǒng)。偽狂犬病自然發(fā)生于豬、牛、綿羊、犬和貓，另有6種野生動物、肉食動物易感。在應(yīng)急狀況下，潛伏感染的病毒將被再活化。關(guān)于人感染偽狂犬病毒的報(bào)道很少，并且都不是以病毒分離為報(bào)道依據(jù)，如土耳其及我國臺灣地區(qū)曾報(bào)道有血清學(xué)反應(yīng)陽性者，歐洲也曾報(bào)道數(shù)例因皮膚傷口接觸病料組織而感染，主要表現(xiàn)為局部發(fā)癢，未曾有死亡報(bào)告。豬是偽狂犬病毒的貯存宿主，病豬、帶毒豬以及帶毒鼠類為本病重要傳染源，不少學(xué)者認(rèn)為，其他動物感染本病與接觸豬、鼠有關(guān)。偽狂犬病毒主要通過已感染豬排毒而傳給健康豬，另外，被偽狂犬病毒污染的工作人員和器具在傳播中起著重要的作用，而空氣傳播則是偽狂犬病毒擴(kuò)散的最主要途徑。

豬發(fā)生經(jīng)典偽狂犬病后，其臨診癥狀因日齡而異。成年豬一般呈隱性感染；對懷孕母豬可導(dǎo)致出現(xiàn)流產(chǎn)，產(chǎn)死胎、木乃伊胎和種豬不育等綜合癥候群；15日齡以內(nèi)仔豬的發(fā)病死亡率可達(dá)100%；對成年肥豬可引起生長停滯、增重緩慢等，但沒有臨床表現(xiàn)的隱性感染豬成為該病的重要的傳染源。但是新型偽狂犬病毒感染母豬、哺乳仔豬、保育豬、小中大豬后全部表現(xiàn)為顯性感染，其中中大豬、母豬都會表現(xiàn)為典型的偽狂犬癥狀而死亡。

新型豬偽狂犬病將是今后幾年內(nèi)我國養(yǎng)豬業(yè)中危害最重要的傳染病之一，對我國養(yǎng)豬生產(chǎn)得危害以及造成的經(jīng)濟(jì)損失巨大，各豬場防控新型偽狂犬病壓力很大，絲毫不能松懈。

1 新型豬偽狂犬病在我國的流行情況

2011年11月份，天津等地區(qū)首先發(fā)現(xiàn)生長育肥豬表現(xiàn)神經(jīng)癥狀而死亡的新型偽狂犬病。2012年，華北、華中、華東等地區(qū)出現(xiàn)同樣的偽狂犬病疫情。2013年，疫情開始擴(kuò)散到南方多省，以廣東、廣西等地區(qū)表現(xiàn)最為明顯。2014年，福建、山西、云南等地豬場也出現(xiàn)新型偽狂犬病毒感染，部分偽狂犬疫苗免疫合格的豬場也出現(xiàn)了典型的偽狂犬病毒感染現(xiàn)象。到目前為止，這種現(xiàn)象已基本遍布我國主要養(yǎng)豬區(qū)域。

新型豬偽狂犬病的主要表現(xiàn)是：在很多偽狂犬病陰性場，gE抗體突然轉(zhuǎn)陽，陽性場比例暴增；豬群突然出現(xiàn)發(fā)燒咳嗽，采食量減少；新型豬偽狂犬流行株較經(jīng)典毒株致病性更強(qiáng)；很多豬場首先發(fā)病的是生長育肥豬，隨后出現(xiàn)母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、產(chǎn)弱仔，哺乳仔豬、保育仔豬、生長育肥豬出現(xiàn)腹瀉、呼吸道癥狀、神經(jīng)癥狀等，病死率很高。

本實(shí)驗(yàn)室對近8年來的豬偽狂犬病gE抗體檢測數(shù)據(jù)做了統(tǒng)計(jì)，從2008年到2014年豬偽狂犬野毒gE抗體陽性率分別為1.92%、2.01%、1.86%、4.73%、14.53%、25.17%、38.46%。2015年 1—9月份，gE抗體陽性率高達(dá)45.52%，呈逐年快速上升趨勢。

在2011年之前，我國豬偽狂犬病的防控已經(jīng)做得相當(dāng)不錯(cuò)，臨床上很少有豬場發(fā)病，很多規(guī)?；B(yǎng)豬場中的豬偽狂犬病野毒感染已經(jīng)凈化為豬偽狂犬病陰性場。但2011年后很多豬偽狂犬病陰性豬場突然轉(zhuǎn)陽，2013年以后豬偽狂犬病陽性豬場數(shù)和豬場內(nèi)陽性率大幅度上升。這值得養(yǎng)豬業(yè)者以及相關(guān)行業(yè)人員反思。為何我國會出現(xiàn)新型偽狂犬病毒？為何豬場偽狂犬病野毒陽性感染還在持續(xù)上升？

導(dǎo)致目前豬偽狂犬病流行的主要原因是新型豬偽狂犬病毒毒株的出現(xiàn)。目前各地分離到的豬偽狂犬流行毒株基因組同源性非常接近。通過PCR檢測后測序發(fā)現(xiàn)，新分離的偽狂犬病毒毒株出現(xiàn)基因變異，與Bartha株比較，其毒力相關(guān)基因RR基因第31位至36位出現(xiàn)6個(gè)連續(xù)堿基（第11位和第12位氨基酸）的缺失，免疫原gB基因的第224～232位發(fā)生9個(gè)堿基GCCCCGGCC的缺失，也就是3個(gè)AA缺失；在肺臟、扁桃體、肝臟等組織內(nèi)抗原檢出率很高?；驕y序發(fā)現(xiàn)，新型豬偽狂犬病毒流行毒株和經(jīng)典野毒株在致病力上有差異。毒力基因的變化導(dǎo)致豬偽狂犬毒株的毒力明顯增強(qiáng)。有攻毒實(shí)驗(yàn)表明，用分離到的變異毒株在實(shí)驗(yàn)室攻毒感染10頭90公斤育肥豬，滴鼻攻毒5頭，5頭均表現(xiàn)典型的偽狂犬癥狀而死亡；肌注5頭，有4頭出現(xiàn)典型的偽狂犬癥狀而死亡。在生產(chǎn)中很多豬偽狂犬病陰性豬群、免疫合格豬群快速轉(zhuǎn)陽，臨床上出現(xiàn)典型的偽狂犬病癥狀。有的豬場母豬群流產(chǎn)率高達(dá)10%，哺乳仔豬的死亡率在10%～40%，育肥豬的死亡率高達(dá)50%以上。新型豬偽狂犬病給養(yǎng)豬企業(yè)帶來很大的經(jīng)濟(jì)損失，已嚴(yán)重危害到我國養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。

2 新型豬偽狂犬病的臨床癥狀及病理變化

2.1 臨床癥狀

經(jīng)典偽狂犬病毒感染的臨診表現(xiàn)主要取決于感染病毒的毒力和感染量，以及感染豬的年齡。其中，感染豬的年齡是最重要的。與其他動物的皰疹病毒一樣，幼齡豬感染偽狂犬病毒后病情最嚴(yán)重，新生仔豬感染偽狂犬病毒會引起大量死亡。臨診上新生仔豬第1天表現(xiàn)正常，從第2天開始發(fā)病，3～5天是死亡高峰期，有的整窩死亡。同時(shí)，發(fā)病仔豬表現(xiàn)出明顯的神經(jīng)癥狀，以及昏睡、尖叫、嘔吐、呼吸困難、腹瀉等癥狀；15日齡以內(nèi)的仔豬感染本病后，病情極嚴(yán)重，病死率可達(dá)100%。偽狂犬病的另一發(fā)病特點(diǎn)是種豬不育癥，返情率高達(dá)90%，有反復(fù)配種數(shù)次不孕的。成年豬一般為隱性感染，若有癥狀也很輕微，易于恢復(fù)，主要表現(xiàn)為發(fā)熱、精神沉郁，有些病豬出現(xiàn)嘔吐、咳嗽，一般于4～8天內(nèi)完全恢復(fù)。

新型豬偽狂犬病毒株的毒力明顯增強(qiáng)，臨床癥狀也出現(xiàn)一些新的變化，主要表現(xiàn)在：發(fā)病情況與豬的日齡關(guān)系表現(xiàn)不明顯，不同日齡豬只的發(fā)病率、死亡率均很高；妊娠母豬出現(xiàn)流產(chǎn)，產(chǎn)死胎、弱仔，母豬產(chǎn)仔數(shù)減少，哺乳仔豬腹瀉非常嚴(yán)重；保育豬、生長育肥豬出現(xiàn)莫名發(fā)熱和呼吸道病狀，表現(xiàn)為神經(jīng)癥狀，口吐白沫，眼腫，同時(shí)繼發(fā)傳染性胸膜肺炎引起急性死亡；各個(gè)階段的發(fā)病率、病死率均很高。

2.2 病理變化

新型偽狂犬病毒株感染豬群后，哺乳仔豬、保育豬、生長育肥豬都有非常典型的豬偽狂犬病的病變。主要表現(xiàn)為扁桃體水腫、化膿、出血、潰瘍甚至形成偽膜，肝臟、脾臟形成非常典型的黃白色壞死點(diǎn)或白色壞死結(jié)節(jié)病變，肺臟彌漫性點(diǎn)狀出血，腸道出血，腎出血，腦出血、水腫等特別典型的病理變化。尤其以臨床上發(fā)現(xiàn)哺乳仔豬發(fā)生病毒性心肌炎為主要特征，心肌呈白色條紋狀壞死。這在以前的臨床上沒有發(fā)生過，也未見資料有報(bào)道。

3 新型豬偽狂犬病的診斷

根據(jù)疾病的臨診癥狀、病理變化，結(jié)合流行病學(xué)，可做出初步診斷，確診必須進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查。

3.1 病毒分離鑒定

病毒的分離是診斷偽狂犬病的最可靠方法?；疾游锏亩喾N病料組織如腦、心、肝、脾、肺、腎、扁桃體等均可用于病毒的分離，但以腦組織和扁桃體最為理想。另外，鼻咽分泌物也可用于病毒的分離。病料處理后可直接接種敏感細(xì)胞，如豬腎傳代細(xì)胞（PK-15和IBRS-2）、倉鼠腎傳代細(xì)胞 （BHK-21）或雞胚成纖維細(xì)胞（CEF）。在接種后24～72小時(shí)內(nèi)可出現(xiàn)典型的細(xì)胞病變，若初次接種無細(xì)胞病變，可盲傳3代。不具備細(xì)胞培養(yǎng)條件時(shí)，可將處理的病料接種家兔或小鼠，根據(jù)家兔或小鼠的臨診表現(xiàn)做出判定，但小鼠不如家兔敏感。分離到病毒后再用標(biāo)準(zhǔn)陽性血清做中和試驗(yàn)以確診本病。

3.2 血清學(xué)診斷

多種血清學(xué)方法可用于偽狂犬病的診斷，其中g(shù)E-ELISA法具有特異性強(qiáng)、敏感性高的特點(diǎn)，3～4 h內(nèi)可得出試驗(yàn)結(jié)果，并可同時(shí)檢測大批量樣品，并可以用于鑒別偽狂犬野毒感染，該方法已廣泛用于偽狂犬病的臨床診斷。

3.3 雙聯(lián)PCR法

肺臟、扁桃體、肝臟等組織的抗原檢出率更高。臨床檢測案例見圖1、圖2。

圖1 gE基因條帶明顯

圖2 gB、 gE基因條帶明顯

4 新型豬偽狂犬病的防治

疫苗免疫接種是預(yù)防和控制豬偽狂犬病的根本措施。目前國內(nèi)外主要使用的Bartha株基因缺失活疫苗能有效減輕或防止出現(xiàn)偽狂犬病的臨床癥狀，從而減少該病造成的經(jīng)濟(jì)損失。保證和提高偽狂犬疫苗免疫接種的有效性是控制當(dāng)前豬偽狂犬病暴發(fā)的關(guān)鍵。

4.1 科學(xué)的免疫方案

科學(xué)的疫苗免疫方案配合抗體檢測驗(yàn)證免疫效果。建議公、母豬加強(qiáng)免疫3～4次/年，仔豬出生后1～3天內(nèi)要滴鼻免疫，而不要肌肉注射（避免母源抗體的干擾）。肉豬10周齡基礎(chǔ)免疫，高度污染區(qū)4周后加強(qiáng)免疫一次。

4.2 嚴(yán)格生物安全

采取嚴(yán)格的生物安全措施，消滅豬場的鼠類，對預(yù)防本病有重要意義。同時(shí)，還要嚴(yán)格控制犬、貓、鳥類和其他禽類進(jìn)入豬場，嚴(yán)格控制人員來往，并做好消毒及血清學(xué)監(jiān)測等工作，這對本病的防制也可起到積極的推動作用。

4.3 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

保證各個(gè)階段豬的營養(yǎng)需求。加強(qiáng)豬場飼養(yǎng)管理，科學(xué)預(yù)防當(dāng)前流行的各種免疫抑制性疾病。

5 新型豬偽狂犬病的凈化措施

5.1 陰性場的長期凈化方案

多次的反復(fù)抽血檢測都為陰性，從統(tǒng)計(jì)學(xué)的角度分析可以確定為陰性場，其方案如下：

5.1.1 疫苗免疫。固定使用同種疫苗。因?yàn)椴煌蛉笔б呙缍局曛g可能發(fā)生基因重組和毒力變異，從而導(dǎo)致持續(xù)感染，不能凈化。

5.2.2 制定科學(xué)的免疫程序。種豬群3～4個(gè)月普免一次；子代（仔豬）執(zhí)行“370程序”，即：1～3日齡1頭份滴鼻、70日齡1頭份接種；后備種豬在配種前一個(gè)月和產(chǎn)前一個(gè)月各接種一次，以后按種豬的免疫程序進(jìn)行免疫 ；引進(jìn)種豬執(zhí)行兩免（第一次基礎(chǔ)免疫和第二次加強(qiáng)免疫時(shí)間間隔4周）后按種豬和后備種豬的免疫程序進(jìn)行免疫。禁止在豬場內(nèi)飼養(yǎng)其它動物，并在豬場內(nèi)強(qiáng)化滅鼠措施。

5.2.3 飼養(yǎng)管理。新種豬必須是從偽狂犬病陰性種豬場引進(jìn)。引進(jìn)后經(jīng)血清學(xué)檢查，野毒陽性豬要堅(jiān)決淘汰，陰性種豬須隔離飼養(yǎng)60天后再混群飼養(yǎng)。提高動物機(jī)體的自身免疫力，控制好豬豬繁殖與呼吸障礙綜合癥、豬圓環(huán)病毒-2型、萎縮性鼻炎、喘氣病和氨氣濃度過高等引起呼吸道損傷的相關(guān)因素。

5.2.4 定期血清學(xué)檢查。后備種公、母豬每季度作一次血清普查；種豬場經(jīng)產(chǎn)母豬每一年做一次血清普查 ；商品場經(jīng)產(chǎn)母豬每一年作一次血清學(xué)檢測，抽查比例為5%左右，檢查出野毒陽性豬要堅(jiān)決淘汰；商品子代每半年作一次血清學(xué)檢測，抽查比例1%左右。

5.3 陽性場的控制與凈化方案

對豬群采血做血清中和試驗(yàn)，陽性者先隔離，以后淘汰。以3～4周為間隔，反復(fù)進(jìn)行，一直到兩次試驗(yàn)全部陰性為止。把陰性豬合成較大群，最終建立新的無疫豬群。如果全部采取“檢測淘汰法”的凈化方案，將會嚴(yán)重影響公司的生產(chǎn)規(guī)模和經(jīng)濟(jì)效益。所以，針對實(shí)際情況的可行方案是：種豬群及仔豬群的野毒陽性率為10%以下生產(chǎn)線執(zhí)行“檢測淘汰法”，爭取在1年內(nèi)凈化偽狂犬；種豬群及仔豬群的野毒陽性率為10%以上的生產(chǎn)線執(zhí)行“管理免疫法”，爭取1年內(nèi)野毒陽性率控制在10%以下，第2年完成凈化目標(biāo)。

5.3.1 檢測淘汰法。首先按計(jì)劃完成種豬群及仔豬群的野毒陽性率為10%以下生產(chǎn)線的全部種豬，包括后備和自留培養(yǎng)母豬做好血清學(xué)檢查工作，陽性豬全部淘汰，后備和自留培養(yǎng)母豬轉(zhuǎn)入育肥。如果二檢野毒陽性在5%以下，說明凈化工作取得成效，堅(jiān)決淘汰陽性豬后，執(zhí)行《陰性場的長期凈化方案》。如果二檢野毒陽性在5%以上，說明凈化工作沒有取得成效，需要全面總結(jié)分析凈化方案和執(zhí)行情況。是方案問題，則繼續(xù)討論和完善；是條件問題，比如免疫抑制性疫病的影響等客觀因素，則待條件成熟后實(shí)施凈化方案；是執(zhí)行問題，則追究責(zé)任，保證執(zhí)行效果。

5.3.2 管理免疫法。種豬群及仔豬群的野毒陽性率為10%以上的生產(chǎn)線執(zhí)行管理免疫法。 凈化期內(nèi)實(shí)行后備母豬100日齡到期普查，陽性轉(zhuǎn)入育肥，經(jīng)產(chǎn)和商品子代實(shí)行6個(gè)月一次定期血清學(xué)抽查，比例為千分之五左右，評估凈化效果，全面嚴(yán)格執(zhí)行《陰性場的長期凈化方案》。后備豬的引進(jìn)與管理是凈化工作管理上的關(guān)鍵，也是難點(diǎn)。后備豬必須引進(jìn)經(jīng)過嚴(yán)格消毒的隔離舍二月以上，由專人飼養(yǎng)（嚴(yán)格隔離），引進(jìn)后45天內(nèi)必須加強(qiáng)疫苗免疫，然后執(zhí)行《陰性場的長期凈化方案》中的相關(guān)免疫程序。在隔離舍中對引進(jìn)的種豬群全群采血檢測，豬偽狂犬病毒gE抗體野毒感染陽性者全部剔除，不留作后備種豬。

6 反思

6.1 造成我國豬偽狂犬病疫情再次來襲的原因

造成此現(xiàn)象的主要原因：一是新型豬偽狂犬流行毒株的毒力增強(qiáng)，疫苗產(chǎn)生的保護(hù)力不足以抵抗強(qiáng)毒的入侵，以及新型豬偽狂犬流行毒株抗原發(fā)生變異。二是豬群陽性率居高不下，造成豬場內(nèi)新型豬偽狂犬病毒有循環(huán)傳播的機(jī)會。三是后備種公母豬引種不慎。由于種豬帶毒，引入病原體，導(dǎo)致本病快速傳播。四是免疫程序不合理，疫苗的選擇不科學(xué)，疫苗質(zhì)量較差，以及免疫抑制性疾病的干擾等因素導(dǎo)致免疫效果下降，出現(xiàn)免疫保護(hù)低下。五是很多豬場缺乏免疫監(jiān)測意識，生物安全措施不到位，特別是老鼠傳播等因素，均加大了本病的傳播力度。

6.2 現(xiàn)在的檢測方法需要改進(jìn)

gB抗體雖然不能代表中和抗體，但其滴度的高低與中和抗體保護(hù)效率之間存在良好的相關(guān)性。因此可通過檢測偽狂犬gB抗體間接評價(jià)疫苗的免疫效果，這也是目前比較理想的辦法之一。提高偽狂犬疫苗免疫接種的有效性是控制當(dāng)前偽狂犬病蔓延的首要措施之一。通過本實(shí)驗(yàn)室對近8年的豬偽狂犬病gB抗體檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，從2008年到2014年偽狂犬gB抗體陽性率逐年上升。雖然偽狂犬的疫苗免疫率密度高達(dá)98.21%，其中進(jìn)口疫苗免疫占總免疫疫苗場的70.90%，gB抗體陽性率達(dá)80%左右，但是許多常規(guī)免疫合格的豬偽狂犬陰性豬群在短時(shí)間內(nèi)快速轉(zhuǎn)陽，并發(fā)生非常典型的豬偽狂犬病發(fā)病及死亡，這種現(xiàn)象表明較高的gB抗體陽性率不能說明豬群未受到偽狂犬野毒的感染。這就值得我們思考，現(xiàn)在國內(nèi)外普遍采用的經(jīng)典偽狂犬gE、gB抗體檢測方法是否適用于新型偽狂犬病毒的檢測，因此針對新型豬偽狂犬病毒急需研究新的偽狂犬檢測方法和檢測評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)體系。另外，為何新型偽狂犬病毒在我國首先出現(xiàn)，國外至今仍然沒有發(fā)現(xiàn)，新型豬偽狂犬病是如何形成的等謎團(tuán)，仍然有待科學(xué)研究去探明。

7 結(jié)語

目前豬偽狂犬疫苗主要是基因缺失苗?；蛉笔缑庖咭彩钱?dāng)前豬場根除、凈化偽狂犬病的主要手段?？偟膩碚f，控制和凈化新型豬偽狂犬病，對肥育豬接種活毒疫苗、制定正確的免疫計(jì)劃、確保生物安全措施的嚴(yán)密性是最有效的控制手段。

（責(zé)任編輯：杜憲）

The Epidemic Situation and Purifi cation Measures of the New Swine Pseudorabies

Yuan Hong1，Lian Sinan2，Zhang Heng2，Bai Aiquan2
（1.Changzhi Vocational and Technical College，Changzhi，Shanxi 046000；2.Foshan University，F(xiàn)oshan，Guangdong 528200）

Abstract：Outbreaks of new swine pseudorabies occurred in China in November 2011，which led to some typical pseudorabies symptoms and deaths in growing-fi nishing pigs and sows.Currently the new swine pseudorabies virus strains isolated from different districts are very close in genome homology.The results of PCR showed that the isolates existed genetic mutation.Compared with Bartha strain，there were six consecutive bases missing at 31～36 bits for the virulence related RR gene.There were 9 bases GCCCCGGCC missing at 224～232 bits for immunogen gB.The change of virulence gene led to the increase of virulence of PRV strain，which brought huge economic losses to pig breeding farms in China.In order to study the epidemic situation of the new swine pseudorabies，the reasons and harms of the disease were analyzed，the vibration of the new pseudorabies strain，new clinical manifestations，pathological changes and diagnostic method was described ，and some new preventive and eradicative measures were proposed.

Key words：new swine pseudorabies；variant strain；purifi cation measures

中圖分類號：S851.3

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：1005-944X（2016）03-0058-05

DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2016.03.021

通訊作者：白挨泉