CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白在小鼠肺缺血再灌注損傷中的作用機(jī)制

王真真，戴新建，鄭紀(jì)陽，王萬鐵

(1.溫州市中心醫(yī)院 呼吸科，浙江 溫州 325000；2.溫州醫(yī)科大學(xué)病理生理學(xué)系缺血/再灌注研究室，浙江 溫州 325035)

CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白在小鼠肺缺血再灌注損傷中的作用機(jī)制

王真真1Δ，戴新建1，鄭紀(jì)陽1，王萬鐵2

(1.溫州市中心醫(yī)院 呼吸科，浙江 溫州 325000；2.溫州醫(yī)科大學(xué)病理生理學(xué)系缺血/再灌注研究室，浙江 溫州 325035)

目的 本研究旨在探討CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CHOP)在小鼠缺血再灌注損傷時(shí)的作用，并分析其可能機(jī)制。 方法 50只C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只：假手術(shù)組(Sham組)、缺血再灌注組(I/R組)、PBS+LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑組(I/R+PBS+Lipo組)、陰性對(duì)照組(I/R+siRNASCR組)、I/R+siRNACHOP組。各組檢測(cè)總肺水含量(TLW)、肺濕干重比(W/D)和肺泡細(xì)胞損傷定量指標(biāo)(IQA)，分別用半定量RT-PCR和Western blot檢測(cè)CHOPmRNA及CHOP蛋白的表達(dá)。結(jié)果 與Sham組相比，I/R組、I/R+PBS+Lipo組和I/R+siRNASCR組W/D、TLW及IQA值升高 (P<0.05)；經(jīng)CHOP-siRNA干預(yù)后，I/R+siRNACHOP組W/D、TLW及IQA值下降(P<0.01)；與Sham組相比，I/R組、I/R+PBS+Lipo組和I/R+siRNASCR組CHOPmRNA及CHOP蛋白水平均表達(dá)增加(P<0.01)，經(jīng)CHOP-siRNA干預(yù)后，I/R+siRNACHOP組CHOPmRNA及CHOP蛋白水平均下降(P<0.01)。結(jié)論 I/R引起小鼠肺組織細(xì)胞發(fā)生過度的未折疊蛋白反應(yīng)，并通過CHOP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，損傷肺組織；抑制CHOP凋亡途徑可減輕肺缺血再灌注損傷。

肺；再灌注損傷；CHOP；凋亡

缺血再灌注損傷是指組織缺血后，突然恢復(fù)血液供應(yīng)導(dǎo)致的組織損傷。在多種肺臟疾病中，肺缺血再灌注損傷(pulmonary ischemia reperfusion injury，PIRI)產(chǎn)生至關(guān)重要的作用，尤其肺移植術(shù)作為許多晚期肺部疾病的治療手段，在臨床上仍具有較大的局限性，因此深入探討PIRI的發(fā)生機(jī)制，盡可能在術(shù)后保護(hù)肺組織，改善疾病預(yù)后顯得十分迫切而且重要。研究表明，細(xì)胞凋亡在肺缺血/再灌注損傷的發(fā)生機(jī)制中起關(guān)鍵作用[1]。研究證明[2]，I/R通過多種途徑引起細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致組織損傷，其中，CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein，CHOP)是重要的促凋亡信號(hào)分子，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中起重要作用。本研究旨在探討CCATT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白途徑在肺缺血再灌注細(xì)胞凋亡中的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康SPF級(jí)C57BL/6雄性小鼠50只，體質(zhì)量(20±2 g)，6～8周，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(浙2010-0150)，由溫州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。本實(shí)驗(yàn)過程均遵循《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)條例》。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器：小動(dòng)物呼吸機(jī)(型號(hào)：HX-100E，中國成都泰盟科技有限公司)，紫外分光光度計(jì)(型號(hào)：UV2450，日本島津公司)，蛋白電泳儀系統(tǒng)(美國 BIO-RAD 公司)，AL204 電子秤(美國METTLER TOLEDO公司)，梯度PCR儀(日本 Bioer公司)，BA-200光學(xué)顯微鏡(日本 Motic公司)。

1.1.3 主要試劑：原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(LOT:13022000,德國Roche公司)， siRNASCR試劑(編號(hào)：SS110422004，invitrogen,US)，LipofectamineRTM2000試劑(invitrogen,US)，Trizol試劑(ambion/RNA,Life technologies,US)，PCR試劑盒(Fermentas Life Science,US)，BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(中國碧云天生物技術(shù)研究所)， 脫氧核糖核酸酶(Sigma，US)， DMEM/ F12培養(yǎng)基( Gibico公司)，預(yù)染蛋白Maker(Fermentas Life Science,US)，麗春紅染色液(中國碧云天生物技術(shù)研究所)，其余均為市售分析純。

siRNACHOP的設(shè)計(jì)合成：從Genbank 數(shù)據(jù)庫檢索CHOP基因序列為：GADD153 genelID:13198。使用Ambion公司的siRNA設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)siRNACHOP序列。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型復(fù)制和分組:參考文獻(xiàn)[3]的方法制作小鼠模型。設(shè)置小動(dòng)物呼吸機(jī)參數(shù)，潮氣量0.6 mL，吸呼比3:2，呼吸頻率120次/min。小鼠腹腔內(nèi)注射氯胺酮(0.1 mg/g)+塞拉嗪(0.01 mg/g)，成功麻醉小鼠后，氣管插管接呼吸機(jī)，打開左側(cè)胸腔，暴露左肺門，用動(dòng)脈夾夾閉30 min，造成缺血期，然后松開，為再灌注期。松開3 h后，取左肺組織。本實(shí)驗(yàn)采用夾閉肺門的方法建立模型，使實(shí)驗(yàn)肺完全處于缺血并且不通氣的狀態(tài)，在I/R 組中1只小鼠因開胸?fù)p傷動(dòng)脈，出血死亡，其余順利造模，成功率98%。

隨機(jī)將實(shí)驗(yàn)小鼠分5組，每組10只： Sham組：假手術(shù)組，暴露左肺后，不夾閉肺門，3.5 h后取出左肺；I/R組：缺血再灌注組，夾閉肺門30 min，松開動(dòng)脈夾3 h，取出肺組織；I/R+PBS+Lipo組：給予小鼠LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑和PBS溶液，其余處理同缺血再灌注組；I/R+siRNACHOP組：予LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑及其包裹的siRNACHOP和PBS溶液，其余處理同缺血再灌注組。I/R+siRNASCR組：給予LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑和其包裹的無關(guān)序列的siRNA(能進(jìn)入RNAi途徑，但無干擾作用)和PBS溶液，其余處理同缺血再灌注組；實(shí)驗(yàn)前2 d通過一次性鼻飼法干擾小鼠基因。其中siRNA 試劑配置：250 μL PBS液加至150 μg siRNA混勻稀釋，200 μL PBS加至50 μL LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑混勻稀釋，然后將250 μL 轉(zhuǎn)染試劑稀釋液加至250 μL siRNA中混勻，孵育15 min，穩(wěn)定后可使用。每只小鼠鼻飼總量50 μL，siRNA給予量15 μg。

1.2.2 肺水含量(total lung water，TLW)和肺濕干重比(Wet/Dry，W/D)：濕重(W)：取左肺上葉組織經(jīng)過漂洗，吸干表面水分后的重量；干重(D)：70 ℃下24 h烘干后的重量，2者之比為肺濕干重比(W/D)。TLW=(W-D)/D。

1.2.3 肺泡損傷數(shù)定量評(píng)價(jià)指標(biāo)(index of quantitative assessment of histologic lung injury，IQA)檢測(cè):各組獲取左肺下葉組織，大小0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm，予切片，在BA-200光學(xué)顯微鏡下觀察每組小鼠肺組織標(biāo)本，隨機(jī)連續(xù)觀察50個(gè)視野，計(jì)數(shù)損傷肺泡數(shù)與總肺泡數(shù)，其中損傷肺泡數(shù)所占的比值就是肺泡損傷數(shù)定量評(píng)價(jià)指標(biāo) (IQA)。

1.2.4 半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)分別檢測(cè)CHOP水平：取得保存的左肺組織中，取其90～100 mg，加入Trizol 1 mL混勻離心，繼而將200 μL氯仿加入取得的上清液中，震蕩30 s，室溫靜置10 min，高速離心15 min，倒入1.5 mL RNase-free離心管，加入異丙醇，在-20 ℃溫度下靜置30 min，高速離心15 min， 倒去上清液后，加入1 mL用DEPC-H2O稀釋的75%酒精，充分混勻，靜置沉淀后，高速離心5 min，移去上清液，真空離心干燥5～10 min，溶于10 μL DEPC-H2O中； 將99 μl DEPC-H2O加入上述提取的RNA 1 μL，測(cè)定RNA濃度；將RNase Free dH2O 10 μL，Oligo dT Primer 1 μL和RNA溶液1 μL在Microtube管中配制成混合液，加入反應(yīng)試劑，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA ；PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系進(jìn)行cDNA擴(kuò)增，PCR反應(yīng)條件為：變性溫度和時(shí)間為94 ℃，1 min；退火溫度和時(shí)間為 59.1 ℃，30 s；延伸反應(yīng)溫度72 ℃，時(shí)間10 min，循環(huán)次數(shù)33次。計(jì)算CHOP mRNA的相對(duì)含量。

1.2.5 蛋白免疫印跡法檢測(cè)肺組織中CHOP蛋白含量：取左肺組織100 mg，充分裂解肺組織，BCA蛋白濃度測(cè)定試劑中的試劑A和試劑B按50:1的比例，均勻混合，配制成適量工作液，BSA標(biāo)準(zhǔn)品濃度稀釋成0.5 mg/mL，稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品分別以0、1、2、4、8、12、16、20 μL加到各EP管中，用PBS液定容至20 μL，每管取出2 μL，再用PBS補(bǔ)到20 μL，將工作液200 μL分別加至各管，混合后使用紫外可見分光光度儀測(cè)定A562nm，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算CHOP蛋白濃度。

1.2.6 Western blot檢測(cè)肺組織中CHOP蛋白含量：將5 μL 四甲基乙二胺、10%過硫酸銨100 μL和10 ml 10%分離膠混勻后，灌膠，倒入異丙醇。將50 μL 10%過硫酸銨 、四甲基乙二胺5 μL 和配制好的5%濃縮膠5 mL混勻，立即灌膠至頂部，將聚四氟乙烯齒梳垂直插入，膠完全聚合后拔出梳子，并把凝膠置入電泳槽。將電泳緩沖液倒入電泳槽。制備上樣液，用100 ℃沸水煮沸，5 min后冷卻，隨后進(jìn)行離心1 min，加入電泳槽上樣孔，約20 min 80 V恒壓電泳后，當(dāng)溴酚藍(lán)指示劑進(jìn)入后將電壓改為100 V，溴酚藍(lán)遷移至離凝膠最下緣約0.5 cm處時(shí)結(jié)束電泳。經(jīng)過轉(zhuǎn)膜，洗膜和孵育后，將膜置入化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑中反應(yīng)，在暗室中進(jìn)行感光、顯影、定影。使用Quantity One凝膠軟件分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，以目的蛋白CHOP條帶吸光度和GAPDH吸光度比值代表CHOP含量。

2 結(jié)果

2.1 各組肺組織總肺含水量(TLW)、濕干重比(W/D)及肺泡損傷評(píng)估(IQA)的變化 5組間W/D、TLW及IQA比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=28.27，P=0.00；F=26.87，P=0.00；F=169.4，P=0.00)。與其他組相比，Sham組 TLW、W/D及IQA值最低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。經(jīng)CHOP-siRNA干預(yù)后，I/R+siRNACHOP組TLW、W/D及IQA值均下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1 各組肺組織W/D、TLW及IQA的比較

*P<0.05，**P<0.01，與Sham組比較，compared with Sham group；△P<0.05，△△P<0.01，與I/R組比較，compared with I/R group

2.2 各組CHOP基因表達(dá)水平的變化 5組間CHOP mRNA比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=163.8，P=0.00)。與其他組比較，Sham組CHOP mRNA表達(dá)最低，在I/R組、I/R+PBS+Lipo組和I/R+ siRNASCR組中均表達(dá)顯著增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。經(jīng)CHOP-siRNA干預(yù)后，CHOP mRNA在I/R+siRNACHOP組中表達(dá)量顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表2、圖1。

圖1 RT-PCR法檢測(cè)各組肺組織CHOPmRNA表達(dá)水平變化A：Sham組；B：I/R組；C：I/R+PBS+Lipo組；D：I/R+siRNASCR組；E：I/R+siRNACHOP組*P<0.05，**P<0.01，與Sham組比較；△△P<0.01，與I/R組比較Fig.1 Expression of CHOPmRNA in lung tissue in each group by RT-PCRA: Sham group; B：I/R group；C：I/R+PBS+Lipo group；D：I/R+siRNASCR group；E：I/R+siRNACHOP group*P<0.05，**P<0.01， compared with Sham group；△△P<0.01， compared with I/R group

組別只數(shù)CHOPmRNASham100.395±0.026I/R100.811±0.031**I/R+PBS+Lipo100.817±0.022**I/R+siRNASCR100.855±0.060**I/R+siRNA-CHOP100.497±0.090*△△

*P<0.05，**P<0.01，與Sham組比較，compared with Sham group；△△P<0.01，與I/R組比較，compared with I/R group

2.3 各組CHOP 蛋白表達(dá)水平的變化 5組間CHOP蛋白表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1071，P=0.00)。與其他組比較，Sham組CHOP蛋白表達(dá)最低，在I/R組、II/R+PBS+Lipo組和I/R+siRNASCR組中表達(dá)顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。經(jīng)CHOP-siRNA干預(yù)后，CHOP蛋白在I/R+siRNACHOP組中表達(dá)量顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表3、圖2。

表3 各組CHOP蛋白含量變化比較

*P<0.05，**P<0.01，與Sham組比較，compared with Sham group；△△P<0.01，與I/R組比較，compared with I/R group

圖2 Western blot法檢測(cè)各組肺組織CHOP蛋白含量A：Sham組；B：I/R組；C：I/R+PBS+Lipo組；D：I/R+siRNASCR組；E：I/R+siRNACHOP組*P<0.05，**P<0.01，與Sham組比較；△△P<0.01，與I/R組比較Fig.2 Expression of CHOP protein in lung tissue in each group by Western blotA: Sham group; B：I/R group；C：I/R+PBS+Lipo group；D：I/R+siRNASCR group；E：I/R+siRNACHOP group*P<0.05，**P<0.01， compared with Sham group；△△P<0.01， compared with I/R group

3 討論

上世紀(jì)開始，許多學(xué)者對(duì)肺缺血再灌注損傷進(jìn)行了大量的臨床探索和實(shí)驗(yàn)研究，認(rèn)為它與大量氧自由基的生成及其引發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、肺泡-毛細(xì)血管屏障滲透性增高、炎性介質(zhì)的釋放、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、中性粒細(xì)胞滲出等多種因素有關(guān)[4]。隨著對(duì)PIRI逐步深入地了解，其損傷過程中的細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制引起學(xué)者們的關(guān)注。近年發(fā)現(xiàn)，在肺缺血再灌注損傷中，細(xì)胞凋亡起重要作用[5]。

目前，小鼠在體單側(cè)肺原位缺血再灌注損傷模式夾閉肺門，斷開了支氣管血供，使實(shí)驗(yàn)肺處于無通氣并且完全缺血的狀態(tài)，該模型在實(shí)驗(yàn)中使用廣泛。為進(jìn)一步探討肺I/R損傷相關(guān)機(jī)制打好基礎(chǔ)，并且通過W/D、光鏡、電鏡和RT-PCR等技術(shù)證實(shí)了模型的穩(wěn)定可靠性。

細(xì)胞凋亡能維持組織結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，并在細(xì)胞增殖和死亡中起到關(guān)鍵的作用，研究表明，PIRI造成了肺組織中許多細(xì)胞的凋亡[6]。有學(xué)者在臨床實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)在急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)早期患者的肺組織中，細(xì)胞凋亡明顯增加[7]。也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)燙傷后大鼠肺組織存在著細(xì)胞凋亡[8]。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasmic reticulum，ER)應(yīng)激由于導(dǎo)致未折疊蛋白的增多和蛋白質(zhì)合成錯(cuò)誤[9]，而產(chǎn)生未折疊蛋白反應(yīng)(unfolded protein，UPR)。在ERS初期，UPR對(duì)機(jī)體發(fā)揮保護(hù)作用，一方面增加ER容量，提高ER對(duì)蛋白折疊的能力，另一方面分解減少細(xì)胞內(nèi)錯(cuò)誤折疊蛋白，并減少進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的新合成蛋白數(shù)量[10]，減少未折疊蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的堆積，重建細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定狀態(tài)。而當(dāng)非折疊以及錯(cuò)誤折疊蛋白數(shù)量過多，穩(wěn)態(tài)重建失敗時(shí)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激持續(xù)增強(qiáng)，從而觸發(fā)了細(xì)胞凋亡。

CHOP屬于 C/EBP轉(zhuǎn)錄因子家族，是ERS誘導(dǎo)凋亡下游信號(hào)傳導(dǎo)道路的一個(gè)關(guān)鍵特異性轉(zhuǎn)錄因子，CHOP是ERS的經(jīng)典標(biāo)志物[11]。正常情況下，細(xì)胞內(nèi)CHOP表達(dá)很低，當(dāng)ERS時(shí)，其表達(dá)明顯增加[12]。CHOP在哺乳動(dòng)物組織細(xì)胞中廣泛存在，與多種細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等功能相關(guān)[13]。ATF6、PERK及IRE1三條途徑都能夠誘導(dǎo)CHOP的轉(zhuǎn)錄。此外，PERK通路激活，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子ATF4表達(dá)，并與啟動(dòng)子氨基酸反應(yīng)元件位點(diǎn)結(jié)合， CHOP被激活[14]。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激初期，蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)減少新合成蛋白的數(shù)量，維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)，隨著穩(wěn)態(tài)重建失敗，PERK信號(hào)持續(xù)增強(qiáng)，CHOP的表達(dá)增多，引起細(xì)胞死亡[15]。

本實(shí)驗(yàn)依據(jù)RNAi原理[16]，體外化學(xué)合成siRNA并加以修飾，采用陽離子脂質(zhì)體載體LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑包裹CHOP-siRNA，通過鼻飼法干擾實(shí)驗(yàn)小鼠，沉默CHOP基因。RNA干擾是序列特異的轉(zhuǎn)錄后基因沉默機(jī)制，是阻抑基因表達(dá)的一種新方法，是將一段與目的基因同源的dsRNA序列，人工導(dǎo)入后引起其mRNA表達(dá)缺失，實(shí)現(xiàn)基因沉默。

本研究顯示，CHOP在Sham組中低表達(dá)，在I/R組中表達(dá)明顯，說明肺I/R成功誘導(dǎo)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。在I/R組、I/R+PBS+Lipo組和I/R+siRNASCR組中CHOPmRNA和CHOP蛋白表達(dá)顯著增加(P<0.01)，經(jīng)CHOP-siRNA干預(yù)后，CHOP mRNA及CHOP蛋白在I/R+siRNACHOP組中表達(dá)量均下降(P<0.01)，表明I/R引發(fā)了小鼠肺組織細(xì)胞過度的未折疊蛋白反應(yīng)，引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激持續(xù)增強(qiáng)，并通過CHOP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，最終引起細(xì)胞凋亡以及肺組織損傷；抑制CHOP凋亡途徑將會(huì)明顯減輕PIRI。

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(編校：王儼儼)

Role of CHOP pathway in ischemia-reperfusion induced lung injury in mice and its molecular mechanism

WANG Zhen-zhen1Δ, DAI Xin-jian1, ZHENG Ji-yang1, WANG Wan-tie2

(1.Department of Pneumology, Wenzhou Central Hospital, Wenzhou 325000, China;2.Department of Pathophysiology， Wenzhou Medical University， Wenzhou 325000， China)

ObjectiveTo evaluate the role of CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein (CHOP) in ischemia-reperfusion induced lung injury, and clarify the potential molecular mechanism. MethodsFifty mice of C57BL/6J were randomly divided into five groups, 10 mice in each group, including Sham operation group(sham group)，ischemia/reperfusion group (I/R group), I/R+PBS+Lipofectamine group(I/R+PBS+Lipo group), I/R+scramble siRNA group(I/R+siRNASCR group), I/R+CHOPsiRNA group(I/R+siRNACHOP group). The content of total lung water (TLW), wet-to-dry weight ratio (W/D) of lung and index of quantitative assessment of histologic lung injury (IQA) were detected, CHOP mRNA and protein expression were detected by RT-PCR and Western blot. ResultsCompared with Sham group, W/D, TLW and IQA were significantly elevated in I/R group,I/R+PBS+Lipo group and I/R+siRNASCR group (P<0.05). Moreover, the W/D,TLW and IQA reduced with CHOP-siRNA treatment, respectively(P<0.01). Compared with Sham group, CHOP mRNA and protein expressions were significantly elevated in I/R group,I/R+PBS+Lipo group and I/R+siRNASCR group, Moreover, the CHOP mRNA and protein expressions reduced with CHOP-siRNA treatment, respectively(P<0.01). ConclusionI/R could cause excessive unfolded protein response in lung tissue, and induce apoptosis by CHOP signal pathway, damage lung tissue. The inhibition of CHOP pathway could alleviate lung ischemia-reperfusion injury.

lung； reperfusion injury； CHOP； apoptosis

溫州市科技局課題(Y20140060)

王真真，通信作者，女，碩士，研究方向：呼吸科臨床醫(yī)學(xué)，E-mail：wangzhz@yeah.net。

R363.2

A

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.04.11