黔產(chǎn)景天三七干·鮮品中沒(méi)食子酸含量比較研究

何晶晶， 杜 江

(貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550002)

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黔產(chǎn)景天三七干·鮮品中沒(méi)食子酸含量比較研究

何晶晶， 杜 江*

(貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550002)

摘要[目的]建立黔產(chǎn)景天三七藥材中沒(méi)食子酸含量的測(cè)定方法，并對(duì)不同采收期、不同部位的干、鮮品藥材中沒(méi)食子酸含量進(jìn)行比較研究。[方法]采用高效液相色譜法。色譜柱為Phenomex Gimini C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相為甲醇：0.05%磷酸水(5∶95)；流速為1 mL/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)為273 nm；柱溫為25 ℃。[結(jié)果]沒(méi)食子酸在0.018～0.570 μg(r=0.999 9)線性關(guān)系良好；平均加樣回收率為100.44%,RSD值為1.63%(n=6)。[結(jié)論]該方法簡(jiǎn)單、快速準(zhǔn)確，可用于景天三七藥材不同采收期、不同部位及干、鮮品的景天三七藥材質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞景天三七；高效液相色譜法；沒(méi)食子酸；含量

AbstractSedumaizoonL.; HPLC; Gallic acid; Content

景天三七又名費(fèi)菜、養(yǎng)心草、土三七、吐血草、血山草、六月淋、見(jiàn)血散、活血丹、蝎子草等，為景天科植物費(fèi)菜(SedumaizoonL.)的根及全草，味甘、微酸、性平，歸心、肝經(jīng)[1]。該藥具有良好的止血活血、解毒消腫、養(yǎng)血安神效果，可用于防治心臟病、降血壓，治療神經(jīng)衰弱、失眠、煩躁不安等臨床常見(jiàn)病癥[2-3]。沒(méi)食子酸是景天三七藥材中具有代表性的活性成分[4-5]，目前尚未見(jiàn)到對(duì)黔產(chǎn)景天三七藥材不同采收期、不同部位及干、鮮品中該成分的含量研究。該試驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)黔產(chǎn)景天三七藥材不同采收期、不同部位的干、鮮品中沒(méi)食子酸含量進(jìn)行測(cè)定，以期為該藥材的質(zhì)量提供一種精密的控制方法。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1藥材。所用藥材采集于貴陽(yáng)市白云區(qū)種植基地及貴陽(yáng)市小河區(qū)，經(jīng)貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院趙俊華老師鑒定為景天科植物費(fèi)菜(SedumaizoonL.)的全草。

1.1.2儀器。Agilent1100高效液相色譜儀(VWD檢測(cè)器)，安捷倫科技有限公司；UV-1800紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，日本島津公司；AR1140電子分析天平，奧豪斯國(guó)際有限公司；KQ5200E型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。

1.1.3試材。甲醇(天津科密歐化學(xué)試劑有限公司，色譜純)；水(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司)；磷酸(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純)；甲醇(上海振興化工一廠，分析純)；乙醇(上海振興化工一廠，分析純)；沒(méi)食子酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110831-200302)。

1.2方法

1.2.1對(duì)照品溶液的制備。精密稱取于五氧化二磷干燥器中干燥12 h以上的沒(méi)食子酸對(duì)照品2.28 mg，置于10 mL容量瓶，以甲醇溶解并定容至刻度，配制成濃度為0.228 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，放入冰箱貯存，備用。

1.2.2供試品溶液的制備。稱取景天三七藥材干品粉末(過(guò)40目篩)約0.5 g(鮮品碎末約1.0 g)于錐形瓶中，精密稱定，加10 mL蒸餾水，稱定重量，水浴回流1 h，放冷，再稱定重量，用蒸餾水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液測(cè)定，即得。

1.2.3色譜分析條件。色譜柱為Phenomex Gemini C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為甲醇:0.05%磷酸水(5∶95)，臨用前以0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)并經(jīng)超聲脫氣處理；流速為1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)273 nm；柱溫25 ℃；進(jìn)樣體積10 μL。

1.2.4方法學(xué)考察。

1.2.4.1系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)。分別吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10 μL，在“1.2.3”色譜條件下，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，考察系統(tǒng)適應(yīng)性。

1.2.4.2線性關(guān)系考察。取一定量對(duì)照品溶液分別制成0.114 0、0.056 9、0.028 5、0.014 2、0.007 1、0.003 6 mg/mL 6個(gè)不同濃度的對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣5 μL，測(cè)定峰面積，以沒(méi)食子酸含量為橫坐標(biāo)(X)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4.3精密度試驗(yàn)。取按“1.2.1”方法制備的對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次,每次進(jìn)樣10 μL，計(jì)算峰面積的RSD值。

1.2.4.4穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一供試樣品溶液，按“1.2.3”色譜分析條件分別于0、4、8、14、20、24 h進(jìn)樣，進(jìn)樣量10 μL，測(cè)定峰面積并計(jì)算RSD值。

1.2.4.5重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批的樣品(水分為8.24%，沒(méi)食子酸含量為1.93 mg/g，過(guò)40目篩)按“1.2.2”方法制備供試品溶液6份，按“1.2.3”色譜分析條件，進(jìn)樣量為10 μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算平均含量和RSD值。

1.2.4.6加樣回收率試驗(yàn)。取景天三七藥材粉末(水分為8.24%，沒(méi)食子酸含量為1.96 mg/g，過(guò)40目篩)共9份，每份0.25 g，精密稱定，隨機(jī)分為3組，每組各3份，各組分別精密加入沒(méi)食子酸對(duì)照品0.36、0.45、0.54 mg，按“1.2.2”方法制備供試品溶液，再按“1.2.3”色譜條件測(cè)定，進(jìn)樣量為10 μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算平均回收率和RSD值。

1.2.5樣品的含量測(cè)定。取不同批次景天三七藥材，按“1.2.2”方法制備供試品溶液各3份，按“1.2.3”色譜分析條件進(jìn)行含量測(cè)定，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各藥材中沒(méi)食子酸的含量。

2結(jié)果與分析

2.1方法學(xué)考察

2.1.1系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。從圖1可以看出，在“1.2.3”色譜分析條件下，沒(méi)食子酸對(duì)照品及樣品譜圖中沒(méi)食子酸的保留時(shí)間為11 min左右，樣品中沒(méi)食子酸峰與其他組分峰分離度>1.5，理論塔板數(shù)按沒(méi)食子酸計(jì)算不低于3 000。

2.1.2線性關(guān)系的考察。按“1.2.4.2”方法操作，以沒(méi)食子酸含量為橫坐標(biāo)(X)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為Y=3 464.731 22X+7.4538 739(r=0.999 9)，表明沒(méi)食子酸在0.018～0.570 μg線性關(guān)系良好。

圖1　沒(méi)食子酸對(duì)照品(a)和樣品(b)HPLC圖Fig 1　Result of HPLC in gallic acid(a: CK and b: sample)

2.1.3精密度試驗(yàn)。按“1.2.4.3”方法操作，計(jì)算得峰面積的RSD值為0.81%，表明此試驗(yàn)條件下精密度良好。

2.1.4穩(wěn)定性試驗(yàn)。按“1.2.4.4”方法操作，計(jì)算得出峰面積積分值的RSD值為0.62%，表明沒(méi)食子酸在24 h內(nèi)比較穩(wěn)定。

2.1.5重復(fù)性試驗(yàn)。按“1.2.4.5”方法操作，分別計(jì)算各供試品中沒(méi)食子酸含量，得RSD為1.65%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.6加樣回收試驗(yàn)。由表1可見(jiàn)，平均回收率為100.44%，RSD值為1.63%，表明該方法準(zhǔn)確、可靠，可用于景天三七藥材中沒(méi)食子酸的含量測(cè)定。

表1　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2含量測(cè)定由表2可見(jiàn)，黔產(chǎn)景天三七不同采收期及不同藥用部位中沒(méi)食子酸的含量有明顯變化，但該藥材干、鮮品中沒(méi)食子酸含量并無(wú)明顯差異；黔產(chǎn)景天三七藥材中沒(méi)食子酸含量以夏季采收的莖葉中最高，各樣品中沒(méi)食子酸含量從大到小依次為夏季莖葉、春季根、夏季根、春季莖葉、秋季莖葉、秋季根；干品藥材中沒(méi)食子酸含量明顯高于陳品。

表2　樣品中沒(méi)食子酸含量測(cè)定結(jié)果

3小結(jié)

該研究采用高效液相色譜法對(duì)黔產(chǎn)景天三七藥材不同采收期、不同部位的干、鮮品中沒(méi)食子酸含量進(jìn)行測(cè)定，得出以下結(jié)論：

(1)沒(méi)食子酸在0.018～0.570 μg線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為100.44%,RSD值為1.63%，表明該方法簡(jiǎn)單、快速準(zhǔn)確，可用于景天三七藥材的質(zhì)量控制。

(2)黔產(chǎn)景天三七不同采收期及不同藥用部位中沒(méi)食子酸的含量有明顯變化，各樣品中沒(méi)食子酸含量從大到小依次為夏季莖葉、春季根、夏季根、春季莖葉、秋季莖葉、秋季根；干品藥材中沒(méi)食子酸含量明顯高于陳品，提示該藥材不宜長(zhǎng)期存放。

(3)黔產(chǎn)景天三七藥材的干、鮮品中沒(méi)食子酸含量無(wú)明顯差異。

參考文獻(xiàn)

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基金項(xiàng)目國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81450657)。

作者簡(jiǎn)介何晶晶(1987- )，女，土家族，貴州鳳岡人，助教，碩士，從事中藥學(xué)研究。*通訊作者，教授，碩士生導(dǎo)師，從事中藥、民族醫(yī)藥的基礎(chǔ)研究與開(kāi)發(fā)工作。

收稿日期2016-03-20

中圖分類號(hào)S 567.23+6

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)0517-6611(2016)14-169-03

Comparative Study on the Content of Gallic Acid in the Fresh and Dried Herb of GuizhouSedumaizoonL.

HE Jing-jing, DU Jiang*

(Guiyang College of Traditional Chinese Medicine, Guiyang, Guizhou 550002 )

Abstract[Objective] The determination method of the content of gallic acid in Guizhou Sedum aizoon L. was established and the method for the comparative analysis of its content in the fresh and dried raw material from different harvest time and different parts was conducted. [Method] HPLC method was adopted and the separation was carried with the column of Phenomex Gimini C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm), the mobile phase of methanol-0.05% phosphoric(5∶95) at the flow rate of 1.0 mL/min, the detection wavelength of 273 nm and column temperature of 25 ℃. [Results] The linear relation(r=0.999 9) of gallic acid was good in the range of 0.018-0.570 μg. The average recovery rate was 100.44%, the value of RSD was 1.63%(n=6). [Conclusion] The method is rapid, simple and accurate, and can be used for the quality control of the fresh and dried medicinal material of Guizhou Sedum aizoon L. from different parts and harvest seasons.