射干合劑的定性及定量質(zhì)量控制標準研究

朱鵬程　　吳　敏　　唐躍年　　林　鋆　　趙　欣

射干合劑的定性及定量質(zhì)量控制標準研究

朱鵬程1吳敏1唐躍年2林鋆3趙欣1

［Abstract］Objective To exp1ore new methods for improving the qua1ity standards of Shegan Mixture.Methods Shegan was qua1itative1y identified by TLC using Ch1oroform-Butanone-Methano1（3∶1∶1）as deve1oping so1vent on si1ica ge1 G p1ate，Qianhu was qua1itative1y identified by TLC using Ch1oroform-Methano1（8∶2）as deve1oping so1vent on si1ica ge1 G p1ate，Baibu was qua1itative1y identified by TLC using Methy1benzene-Trich1oromethane-Acetone-Methano1（3∶7∶2∶1）as deve1oping so1vent on si1ica ge1 G p1ate.Tectoridin in Shegan Mixture was quantified by HPLC with ODS-Ⅱco1umn （4.6 mm×250 mm，5 μm），f1ow ve1ocity was 1.0 mL/min.The moving phase was Acetonitri1e-G1acia1 acetic acid-Water （18∶1.37∶82）and determining wave 1ength was 266 nm.Results Shegan，Qianhu and Baibu were identified in Shegan Mixture.F1uorescent spots were c1ear and stab1e.HPLC method was stab1e and re1iab1e.The Tectoridin，s content in Shegan Mixture was 0.0982 mg/mL.Conclusion Those methods in this study can be used as addition of qua1ity contro1 standard of Shegan Mixture，which provide scientific basis to improve qua1ity and efficacy of Shegan Mixture.

［Key words］Shegan mixture；Qua1ity contro1；Qua1itative ana1ysis；Quantitative ana1ysis

射干合劑是新華醫(yī)院的院內(nèi)制劑，是著名兒科名家時毓民的經(jīng)驗方，由炙麻黃、射干、黃芩、前胡、杏仁、僵蠶、蔊菜、蟬蛻、炙百部組成，具有宣肺祛痰止咳、降氣平喘的功效。常用于感冒、急性支氣管炎及哮喘性支氣管炎引起的咳喘、多痰等癥狀。多年臨床應(yīng)用，臨床療效確切［1］。目前其質(zhì)量標準只采用TLC法鑒別了黃芩和麻黃兩味藥材，沒有含量測定項目，質(zhì)量標準控制標準有待提高。本研究旨在報道其制備工藝，并通過研究相關(guān)成分的薄層色譜和高效液相色譜的色譜條件，進一步完善其質(zhì)量控制要求。

1　儀器及試劑

1.1儀器

高效液相色譜儀（Agi1ent LC1200，美國安捷倫科技有限公司）；電子分析天平（Mett1er-To1edo XS，德國梅特勒公司）；明澈TM-D24UV純水系統(tǒng)（Merck Mi1-1ipore）；超聲波清洗器（UP600YHE，南京壘君達超聲電子設(shè)備有限公司）。

1.2試藥

射干合劑（本品，新華醫(yī)院中藥房，批號：20141224）；射干、前胡、百部對照藥材（新華醫(yī)院中藥房）；射干苷（中國藥品生物制品檢定所，110715-200815，含量95.2%）；射干合劑（上海靜安制藥有限公司，141224）；甲醇（上海振興化工廠一廠，AR，201309201）；乙醇（AR）；氯仿（AR）；三氯甲烷（江蘇強盛功能化學(xué)股份有限公司，AR，20110901）；丁酮、丙酮（南京化學(xué)試劑有限公司，AR，080410235）；三氯化鋁（江蘇強盛功能化學(xué)股份有限公司，AR，20101011）；甲苯（上海振興化工廠一廠，AR，201111202）；水為自制高純水。

2　方法與結(jié)果

2.1處方及其制備

以1000 mL量射干合劑制備工藝報道如下：

2.1.1處方

炙麻黃75 g、射干75 g、黃芩200 g、前胡150 g、杏仁75 g、僵蠶150 g、蔊菜300 g、蟬蛻75 g、炙百部150 g、蔗糖100 g、甜菊素5 g和苯甲酸1 g。

2.1.2制備工藝

麻黃加水浸泡1 h，煎煮兩次，每次加10倍量水，第一次0.5 h，第二次1.5 h，合并煎液，濾過，濃縮至相對密度1.16，濃縮液備用。麻黃藥渣與其余8味煎煮兩次，第一次加10倍量水，煎煮1.5 h，第二次加8倍量水，煎煮40 min，合并煎液，過濾，濃縮濾液至相對密度1.08～1.10（80～85℃）。加2倍量乙醇攪勻沉降24 h，取上清，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度約為1.16（80～85℃）。加麻黃濃縮液共煮沸10 min，靜置24 h，取上清過濾備用。取蔗糖加水煮沸制成糖液，加入甜菊素5 g和苯甲酸1 g，與上述藥液合并，加水至總量1000 mL，攪拌均勻，過濾即得。

2.2射干、前胡和百部的薄層板鑒別

2.2.1射干的TLC鑒別

2.2.1.1供試液的制備取本品60 mL蒸干，加甲醇20 mL，超聲處理30 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解作為供試液。

2.2.1.2對照液的制備 取射干對照藥材5 g，加水50 mL煮沸30 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加甲醇20 mL，同法制得對照液。

2.2.1.3TLC操作參照薄層色譜法［2］（《中國藥典》2015年版一部附錄ⅥB）。毛細定量管分別吸取供試液和對照液各2 μL條狀上樣，供試液從左向右上樣5次，對照液右側(cè)上樣1次。薄層板選用硅膠G板，展開劑為氯仿-丁酮-甲醇 （3∶1∶1）。展開箱中預(yù)飽和30 min，上行展開8 cm。取出晾干，噴三氯化鋁，置紫外燈（365 nm）下檢視、拍照。本實驗下射干供試液在紫外燈下TLC譜圖中在與各自對照液譜圖相應(yīng)的位置上顯相同的熒光斑點。見圖1（封三）。

2.2.2前胡的TLC鑒別

2.2.2.1供試液的制備取本品35 mL蒸干，加乙醇10 mL，超聲處理15 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解作為供試液。

2.2.2.2對照液的制備 取前胡對照藥材2 g，加水50 mL煮沸30 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加乙醇10 mL，同法制得對照液。

2.2.2.3TLC操作參照薄層色譜法［2］（《中國藥典》2015年版一部附錄ⅥB）。毛細定量管分別吸取供試液和對照液各5 μL點樣，供試液從左向右上樣5次，對照液右側(cè)上樣1次。薄層板選用硅膠G板，展開劑為氯仿-甲醇（8∶2）。展開箱中預(yù)飽和15 min，上行展開8 cm，置紫外燈（365 nm）下檢視、拍照［3-4］。本實驗下前胡供試液在紫外燈下TLC譜圖中在與各自對照液譜圖相應(yīng)的位置上顯相同的熒光斑點。見圖2（封三）。

2.2.3百部的TLC鑒別

2.2.3.1供試液的制備 取本品20 mL蒸干，加80%乙醇30 mL加熱回流1 h，過濾，濾液揮干乙醇，殘留液加1%鹽酸10 mL稀釋，過濾，濾液用三氯甲烷提取2次，每次10 mL，合并三氯甲烷，蒸干，殘渣加甲醇1 mL溶解，即得供試液［5］。

2.2.3.2對照液的制備 取百部對照藥材2g，加水50mL煮沸30min，過濾，濾液蒸干，殘渣加80%乙醇30 mL，同法制得對照液。

2.2.3.3TLC操作參照薄層色譜法［6］（《中國藥典》2015年版一部附錄ⅥB）。毛細定量管分別吸取供試液和對照液各6 μL點樣，供試液從左向右上樣5次，對照液右側(cè)上樣1次。薄層板選用硅膠G板，展開劑為甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲醇（3∶7∶2∶1）。展開箱中預(yù)飽和30 min，上行展開8 cm。晾干噴改良碘化鉍鉀試液顯色，日光下檢視，拍照。百部供試液日光下TLC譜圖中在與各自對照液譜圖相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點。薄層色譜圖見圖3（封三）。

2.3射干合劑中射干苷的HPLC測定

2.3.1色譜條件

ODS-Ⅱ色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈-冰醋酸-水（18∶1.37∶82）；檢測波長：266 nm；流速：1.0 mL/min；進樣量：20 μL，室溫［7-8］。

2.3.2對照品溶液的制備

精密稱量射干苷的對照品0.1 mg，用甲醇制成0.1 mg/mL的對照品母液，再用甲醇稀釋為0.01 mg/mL的對照品溶液。

2.3.3供試品的制備

精密量取射干合劑1 mL，甲醇定容至10 mL，超聲，離心，取上清液備用。

2.3.4檢測波長的確定

用紫外分光光度計將射干苷對照品溶液在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果表明其在274 nm波長處有最大紫外吸收，故選擇274 nm作為射干苷的檢測波長。

2.3.5系統(tǒng)適應(yīng)性實驗

按“2.3.1”項下色譜條件，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μL進樣測定，記錄色譜圖。HPLC色譜圖見圖4～5。

圖4　射干苷樣品的HPLC色譜圖

圖5　射干苷對照品HPLC色譜圖

2.3.6線性關(guān)系考察

精密吸取對照品溶液（0.023 mg/mL）2、4、8、16、24 μL按“2.3.1”項下色譜條件進樣，以進樣量（X）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標繪制標準曲線圖，計算得回歸方程：Y=4349.7X+23.662，r=0.999。表明射干苷在0.0208～0.2496 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.3.7空白干擾試驗

取除射干外處方中中藥飲片，按處方制備成陰性對照糖漿劑，按“2.3.1”項下色譜條件進樣分析，陰性對照色譜圖中在射干苷的保留時間位置上無峰出現(xiàn)，表明陰性對照溶液在本色譜條件下無干擾。射干合劑射干陰性對照品HPLC色譜圖見圖6。

圖6　射干合劑射干陰性對照品HPLC色譜圖

2.3.8精密度試驗

精密吸取射干合劑對照品溶液（0.0104 mg/mL），重復(fù)進樣5次，進樣量10 μL，計算射干苷峰面積的相對標準偏差（RSD）=1.10%（n=5），表明精密度良好。

2.3.9穩(wěn)定性試驗

精密吸取對照品溶液20 μL，于制備后0、2、4、6、8、12 h分別進樣測定。計算射干苷峰面積RSD= 1.1%，表明供試品穩(wěn)定性良好。

2.3.10重現(xiàn)性試驗

精密量取射干合劑1 mL（批號：141224），共6份，制備供試品溶液，在本色譜條件下進樣測定，測得樣品中射干苷含量為0.0985 mg/mL，RSD=0.88%，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.3.11加樣回收率試驗

精密稱取已知射干苷含量的射干合劑1 mL（批號：141224），精密加入不同量的射干苷對照品，制備6份供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件進行測定，計算射干苷的含量。結(jié)果見表2。

表2　加樣回收率實驗結(jié)果（n=6）

2.3.12樣品含量測定

精密吸取供試品溶液各20 μL，按本色譜條件測定射干苷含量，結(jié)果表明射干合劑中射干苷平均含量為0.0982 mg/mL。

3　討論

射干合劑是新華醫(yī)院院內(nèi)制劑，化裁于《金匱要略》中射干麻黃湯，組方包括射干、麻黃、前胡、黃芩、杏仁、江剪刀草、百部等中藥。治療感冒咳嗽、急性支氣管炎及哮喘性支氣管炎療效確切。但目前其質(zhì)控標準中僅關(guān)注麻黃和黃芩兩味藥物的定性或定量研究［9］。射干麻黃湯中，麻黃與射干共同作為君藥［10］，射干功善清熱化痰，可治痰熱壅肺，與麻黃、黃芩合用，有止咳化痰平喘之功效，臨床應(yīng)用效果良好。前胡降氣化痰，白前潤肺下氣止咳，對于新咳久咳均有療效［11］，因此對射干、前胡、白前三藥嚴格的質(zhì)量控制是射干合劑發(fā)揮良好臨床療效的重要保障。

本研究采用薄層色譜法對射干合劑中射干、前胡、白前的成分與各生藥飲片進行了初步鑒別對比，結(jié)果顯示本試驗中的薄層色譜條件下射干合劑中均檢出了射干、前胡、白前的相應(yīng)成分，本試驗條件可以作為射干合劑中射干、前胡、白前定性鑒別的質(zhì)量控制方法。

射干是常用中藥，其生藥是鳶尾科植物射干，主要產(chǎn)自于湖北、河南、江蘇、安徽等地，近幾版《中國藥典》均有收載。射干味苦性寒，入肝、肺經(jīng)。具有清熱解毒、利咽、消痰之功效［12］。主治咽喉腫痛、痰盛咳喘的方劑中多以射干為君藥，有很好的療效。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)射干含有豐富的異黃酮類化合物［13-14］，具有明顯的抗炎、抗病毒作用。其主要成分在體外也有抗透明質(zhì)酸酶的作用［15］，對透明質(zhì)酸酶所致大鼠足浮腫有明顯抑制作用。射干苷為其主要成分之一，可用作射干合劑的質(zhì)量控制指標。

射干苷又名鳶尾苷［16］，具有一定的抗炎、抗氧化［17］、抑菌［18-19］、抗病毒［20］的作用，對本研究還采用HPLC法測定了射干合劑中射干苷的含量，初步建立起了測定射干合劑中射干苷的HPLC方法和條件，方法學(xué)實驗表明本方法和條件穩(wěn)定可靠，可以作為射干合劑中測定射干苷的質(zhì)量標準。

綜上所述，本研究方法可以作為射干合劑質(zhì)控標準的補充，對于保障射干合劑質(zhì)量安全和療效具有意義。

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1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院中醫(yī)科，上海200092；2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院藥劑科，上海200092；3.上海靜安制藥有限公司上海 200120

目的研究完善射干合劑的質(zhì)量標準。 方法以氯仿-丁酮-甲醇（3∶1∶1）為展開劑在硅膠G板上定性鑒別射干合劑中射干成分，以氯仿-甲醇（8∶2）為展開劑再硅膠G板上定性鑒別射干合劑中前胡成分，以甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲醇（3∶7∶2∶1）為展開劑在硅膠G板上定性鑒別射干合劑中百部成分；建立HPLC法，采用ODS-Ⅱ色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-冰醋酸-水（18∶1.37∶82）為流動相，檢測波長266 nm，流速1.0 mL/min，進樣量20 μL，測定射干合劑中射干苷的含量。結(jié)果射干合劑中均檢出了射干、前胡、白前的相應(yīng)成分，斑點或熒光清晰穩(wěn)定。此HPLC法穩(wěn)定可靠，射干合劑中射干苷的平均含量為0.0982 mg/mL。結(jié)論本研究使用的方法條件可以作為射干合劑指控標準的補充，為提高射干合劑質(zhì)量和療效提供科學(xué)依據(jù)。

射干合劑；質(zhì)量控制；定性；定量

R927

A

1673-7210（2016）04（c）-0020-05

Qualitative and quantitative quality control study of Shegan Mixture

ZHU Pengcheng1WU Min1TANG Yaonian2LIN Jun3ZHAO Xin1
1.Department of TCM，Xinhua Hospita1 Affi1iated to Medicine Schoo1 of Shanghai Jiaotong University，ShangHai200092，China；2.Department of Pharmacy，Xinhua Hospita1 Affi1iated to Medicine Schoo1 of Shanghai Jiaotong University，ShangHai200092，China；3.Shanghai Jing'an Pharmaceutica1 Co.LTD，ShangHai200120，China

上海市科學(xué)技術(shù)委員會科研計劃項目課題（134 01902700）。

朱鵬程 （1990.11-），男，上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2014級中西醫(yī)結(jié)合臨床專業(yè)在讀碩士研究生，主要從事中西醫(yī)結(jié)合防治小兒呼吸系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)類疾病的研究。

吳敏（1960.3-），女，碩士，博士生導(dǎo)師，上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院中醫(yī)科主任，主任醫(yī)師，主要從事中西醫(yī)結(jié)合防治小兒呼吸系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)類疾病的研究。

2016-01-22本文編輯：趙魯楓）