物理化學(xué)因素對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)影響的試驗(yàn)

王慧琴，李　萍

(鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 鄭州　450064)

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物理化學(xué)因素對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)影響的試驗(yàn)

王慧琴，李萍

(鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 鄭州450064)

摘要：紫外線殺菌實(shí)驗(yàn)和藥敏實(shí)驗(yàn)是醫(yī)學(xué)生要求熟悉并掌握的實(shí)驗(yàn)。紫外線殺菌實(shí)驗(yàn)證實(shí)了紫外線的殺菌作用；但隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，紫外線照射形成的細(xì)菌邊界不明顯，并且在紫外線照射區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)了菌落。在消毒劑試驗(yàn)中，酒精在高溫下?lián)]發(fā)過(guò)快，導(dǎo)致無(wú)透明圈出現(xiàn)或者透明圈上依然有薄層細(xì)菌生長(zhǎng)。在藥敏實(shí)驗(yàn)中，不同的藥敏片形成了邊緣清晰和邊緣模糊的抑菌環(huán)，這是不同藥物作用于細(xì)菌的機(jī)理不同導(dǎo)致的。

關(guān)鍵詞：藥敏試驗(yàn)；紫外線；抑菌環(huán)

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)對(duì)醫(yī)學(xué)生來(lái)說(shuō)是一門非常重要的專業(yè)基礎(chǔ)課，也是一門實(shí)用性很強(qiáng)的工具課。物理化學(xué)因素對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響是我們開(kāi)設(shè)的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)之一，目的是希望學(xué)生掌握物理因素如紫外線、化學(xué)因素如各種消毒劑和藥物對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響，為以后學(xué)習(xí)細(xì)菌的消毒滅菌打下基礎(chǔ)。試驗(yàn)在教學(xué)中取得了良好的實(shí)驗(yàn)效果。同時(shí)，我們也發(fā)現(xiàn)了一些特殊的現(xiàn)象，并進(jìn)行了初步探索。

1試驗(yàn)方法

1.1物理因素對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)影響試驗(yàn)

用紫外線照射細(xì)菌的方法進(jìn)行物理因素對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)影響試驗(yàn)，詳細(xì)操作方法如下：用無(wú)菌棉簽蘸取金黃色葡萄球菌菌液少許，輕輕地在無(wú)菌的瓊脂平板上均勻涂布，涂滿整個(gè)平板；把瓊脂平板放在無(wú)菌超凈臺(tái)中，打開(kāi)三分之二皿蓋，開(kāi)啟紫外燈管照射30 min;30 min后，將培養(yǎng)皿皿蓋蓋好，從無(wú)菌超凈臺(tái)中取出放入37 ℃溫箱中培養(yǎng)18～24 h后觀察結(jié)果。

1.2化學(xué)因素對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)影響試驗(yàn)

化學(xué)因素對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)影響試驗(yàn)，用各種消毒劑和藥敏片作為試劑進(jìn)行試驗(yàn)。用消毒劑對(duì)細(xì)菌影響的試驗(yàn),操作方法如下：①制作濾紙片。取濾紙一張，用打孔器打孔，制備成干燥濾紙片備用。②浸取消毒劑。把濾紙片浸入各種消毒劑中。③涂菌。在無(wú)菌超凈工作臺(tái)中，在培養(yǎng)基中加入1 ml金黃色葡萄菌培養(yǎng)物，用無(wú)菌涂棒均勻涂布。要求涂布均勻致密。④放入蘸取消毒劑的濾紙片。用無(wú)菌鑷子夾取浸有消毒劑的濾紙片，放于培養(yǎng)基中。⑤記錄。記錄各種消毒劑名稱。⑥溫箱培養(yǎng)。將貼好消毒劑片的培養(yǎng)皿置于37 ℃溫箱中培養(yǎng)18～24 h。

各種藥敏片對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)影響實(shí)驗(yàn)，是消毒劑對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步延伸。消毒劑影響試驗(yàn)中，只能看到各種消毒液對(duì)細(xì)菌的殺傷作用；而藥敏試驗(yàn)中，根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)能判斷出敏感和耐藥。具體操作如下：涂菌;放入藥敏片;涂菌;放藥敏片。為了避免抑菌圈互相重疊，影響測(cè)量抑菌圈直徑，需要將藥敏片均勻分布于培養(yǎng)基表面，記錄并放溫箱培養(yǎng)。

2試驗(yàn)結(jié)果

在紫外線殺菌試驗(yàn)中，經(jīng)紫外線照射30 min、培養(yǎng)24 h后，被皿蓋遮住的瓊脂表面菌苔呈半圓形生長(zhǎng)，暴露于紫外燈下的部分無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，界限較為清晰。隨著對(duì)菌液的繼續(xù)培養(yǎng)，界限開(kāi)始不太清楚，有些照射過(guò)紫外線的地方也開(kāi)始有細(xì)菌菌落，而且菌落相對(duì)較大，見(jiàn)圖1。

在消毒劑對(duì)細(xì)菌影響試驗(yàn)中，不同的消毒劑作用于細(xì)菌產(chǎn)生的透明圈大小不一。學(xué)生在第二天觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)發(fā)現(xiàn)，其他消毒劑都有明顯的透明圈，但酒精濾紙片沒(méi)有透明圈或是透明圈上明顯有一層細(xì)菌生長(zhǎng)。

圖1　紫外線對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在各種藥敏片對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)影響試驗(yàn)中，各類藥敏片上的藥物對(duì)金黃色葡萄球菌的殺傷力有差異，從而出現(xiàn)大小不一的透明圈。在多次試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)一種現(xiàn)象：不同藥物形成不同大小的透明圈，但是透明圈的邊緣有的清晰有的模糊，見(jiàn)圖2。

圖2　不同的抑菌環(huán)

3分析與討論

紫外線殺菌[1-2]主要是作用于細(xì)菌的DNA，使DNA雙鏈中一條鏈上相鄰的兩個(gè)嘧啶形成二聚體。形成的二聚體干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄過(guò)程[3]，由于抑制了細(xì)菌的復(fù)制，較輕的后果是使微生物發(fā)生突變，嚴(yán)重的情況會(huì)造成微生物死亡。生物體為對(duì)抗這種紫外線的輻射損傷,其細(xì)胞內(nèi)存在著各種各樣的修復(fù)和保護(hù)機(jī)制，如：把放線菌放到紫外燈下照射，然后再置于強(qiáng)烈的可見(jiàn)光下培養(yǎng)，可以使更多菌株存活。菌株經(jīng)過(guò)強(qiáng)光照射后，可產(chǎn)生一種酶，幫助修復(fù)菌株受損的DNA[4]。而且紫外線滅菌的效果和菌液的薄厚、時(shí)間的長(zhǎng)短、燈管距離的遠(yuǎn)近都有關(guān)系[5]。

在消毒劑對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)影響試驗(yàn)中，消毒劑對(duì)細(xì)菌有殺傷作用，所以形成不同的透明圈。酒精浸泡的濾紙片沒(méi)有透明圈，或者透明圈上有一薄層細(xì)菌生長(zhǎng)，原因是：培養(yǎng)基上放置各個(gè)消毒劑濾紙片后,要放到溫箱培養(yǎng)，而培養(yǎng)箱溫度為37 ℃，酒精本來(lái)就容易揮發(fā)，在如此高溫下，揮發(fā)的速度加快，還沒(méi)有損傷到細(xì)菌之前已經(jīng)揮發(fā)殆盡，對(duì)細(xì)菌不能造成損傷，導(dǎo)致無(wú)透明圈出現(xiàn)，或者透明圈照樣有細(xì)菌生長(zhǎng)。

在藥敏試驗(yàn)中，不同藥物形成不同的透明圈，有的透明圈邊緣整齊，有的透明圈邊緣模糊，沒(méi)有明顯的界限，見(jiàn)表1。

表1　不同藥物形成的透明圈特點(diǎn)

殺菌藥物沿培養(yǎng)基擴(kuò)散后直接將處于靜止期和生長(zhǎng)期的細(xì)菌殺死，細(xì)菌不能再通過(guò)自我修復(fù)存活，所以產(chǎn)生的透明圈邊緣清楚。抑菌藥物沿培養(yǎng)基擴(kuò)散后對(duì)生長(zhǎng)的細(xì)菌有很大的殺傷作用，但是對(duì)于靜止期的細(xì)菌而言，只起到抑菌的作用，細(xì)菌還有一定的生命力，還可以小量生長(zhǎng)繁殖，這樣，透明圈的邊緣就會(huì)有小部分細(xì)菌生長(zhǎng)，從而形成模糊的邊緣。

對(duì)不同區(qū)域內(nèi)金黃色葡萄球菌進(jìn)行革蘭氏染色[8]并用油鏡觀察，模糊邊緣處的細(xì)菌一部分已經(jīng)恢復(fù)到正常狀態(tài)，呈典型細(xì)菌性狀，染色陽(yáng)性；有一部分染色呈陰性，推想細(xì)菌細(xì)胞壁已經(jīng)被藥物破壞；透明區(qū)內(nèi)沒(méi)有觀察到典型細(xì)胞形態(tài)，說(shuō)明細(xì)菌已經(jīng)死亡崩解。

參考文獻(xiàn)

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[8]周德慶.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程，2版[M].北京:高等教育出版社,2006：163-166.

[責(zé)任編輯：方艷]

收稿日期：2016 - 04 - 01

作者簡(jiǎn)介：王慧琴(1981—)，女，河南商丘人，鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校講師，碩士，研究方向?yàn)槲⑸飳W(xué)。

中圖分類號(hào):Q939.93

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào)：1008-6811(2016)02-0051-03

A Study on the effect of physical and chemical factors on bacterial growth

WANG Huiqin，LI Ping

(Zhengzhou Shu Qing Medical College, Zhengzhou 450064, China)

Abstract:A medical student is required to be familiar with and master ultraviolet germicidal test and drug sensitivity test. The ultraviolet sterilization experiments confirmed the bactericidal effect of ultraviolet light, but with prolongation of culture time, boundary of bacteria formed by ultraviolet irradiation was not obvious and bacterial colonies appeared in the UV irradiated region . In the disinfectant experiment, the alcohol volatilized too fast at high temperature, resulting in no transparent circle or transparent circle with growth of little bacteria. In drug sensitive test different drug sensitivity around the sheets formed sharp edges or fuzzy edges of bacteriostatic ring, that's because the mechanism of different drugs acting on bacteria was different.

Key words:drug sensitivity test; ultraviolet; bacteriostasis ring