不同滅菌工藝銀翹散中指標成分含量的比較

方家悅 徐 劍* 楊立勇 張永萍

（貴陽中醫(yī)學院，貴州 貴陽 550002）

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不同滅菌工藝銀翹散中指標成分含量的比較

方家悅 徐 劍* 楊立勇 張永萍

（貴陽中醫(yī)學院，貴州 貴陽 550002）

【摘要】目的 比較不同滅菌工藝銀翹散中指標成分含量。方法 以滅菌率為指標，采用正交試驗優(yōu)化銀翹散微波滅菌工藝參數(shù)，UPLC法測定其中5種成分含量，并與傳統(tǒng)干熱滅菌方法對比。結(jié)果 微波滅菌工藝下的5種指標性成分的總含量略高于傳統(tǒng)滅菌工藝。結(jié)論 微波滅菌技術(shù)用于銀翹散的干燥，工藝簡單、干燥時間短，且能有效保留各指標成分。

【關(guān)鍵詞】銀翹散；滅菌工藝；含量測定

銀翹散含有大量揮發(fā)油類有效成分，傳統(tǒng)滅菌方法均存在一些不足[1-3]，而微波滅菌是利用微波的介質(zhì)加熱特性，相關(guān)的文獻報道，微波滅菌溫度低、時間短、滅菌效率高，對成分的影響相對較小[4-5]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：ACQUITY 型UPLC（美國 Waters 公司生產(chǎn)，涵蓋Empower3色譜數(shù)據(jù)），鹵素水分測定儀（HG63型，METTLER公司）；微波爐（型號：EM-F2117ES1，合肥榮事達三洋電器股份有限公司）；手提式不銹鋼壓力蒸汽滅菌器（型號：YX280B，上海三申醫(yī)療器械有限公司）。

1.2 試藥：銀翹散，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，玫瑰紅鈉培養(yǎng)基，綠原酸、甘草苷、橙皮苷，連翹苷、牛蒡苷，以上對照品均為20毫克/瓶。甲醇，甲酸，仟凈蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 微波滅菌工藝篩選：選取微波功率、滅菌時間和含水量為考察因素。稱取銀翹散樣品0.1 g，用無菌生理鹽水稀釋10、100、1000 倍3個不同的濃度梯度。移取1∶0000菌液1 mL加入平皿中后傾倒20 mL營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，在30~35 ℃的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，記錄菌落數(shù)；移取1∶100菌液1 mL加入平皿中后傾倒20 mL玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，在23~28 ℃的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)72 h，記錄菌落數(shù)。數(shù)據(jù)顯示微波功率600 W，滅菌時間5 min，含水量15%左右時進行微波滅菌是最佳的工藝條件且所選因素皆無明顯顯著性。

2.2 色譜條件：BEH Shield RP17色譜柱，0.15%甲酸水溶液-甲醇按時間洗脫，流速為每分鐘0.25 mL，柱溫40 ℃，檢測波長279 nm，進樣體積2 μL。

2.3 混合對照品溶液的制備：首先，取適量的綠原酸、甘草苷、橙皮苷、牛蒡子苷和連翹苷對照品并用甲醇溶解至一定刻度后置25 mL量瓶中，每樣對照品都稀釋成一定濃度。其次，分別取不同量的上述對照品溶液置同一25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻后得到混合對照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備：取0.2 g銀翹散粉末放于具塞錐形瓶中，同時加入50 mL濃度為75%的甲醇，稱定質(zhì)量后回流提取1 h并放冷，再稱定質(zhì)量，接著用甲醇溶液補足減失的質(zhì)量，搖勻過濾后，取續(xù)濾液，用0.22 μm微孔濾膜過濾。

2.5 方法學考察：分別精密吸取不同量的上述5種對照品儲備液配成6個不同濃度的對照品混合溶液，注入UPLC測定后得回歸方程（表1）。數(shù)據(jù)表明，5種對照品范圍內(nèi)線性關(guān)系均良好。

表1 5種指標性成分的回歸方程

取同一份供試品溶液，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，計算RSD （n=6）。取6份含量明確的銀翹散各0.1 g加入一定量對照品溶液進行檢測，計算各成分的加樣回收率。結(jié)果見表2。結(jié)果表明：儀器的精密度良好，樣品在24h的穩(wěn)定性良好，能夠準確測定銀翹散中5種指標性成分的含量。

表2 精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性及回收率結(jié)果

2.6 樣品測定：精密吸取各滅菌工藝下的銀翹散供試品溶液，注入UPLC后記錄色譜圖并測定各樣品中5種指標性成分的含量（表3）。結(jié)果表明：兩種滅菌工藝下的銀翹散化學成分類型無差異，但微波滅菌工藝下的5種指標性成分的總含量略高于傳統(tǒng)滅菌工藝。

表3 不同滅菌工藝下的指標性成分含量[（n=3）mg/g]

3 討 論

微波滅菌是在其熱力效應(yīng)與電磁力效應(yīng)共同作用下完成的。熱力效應(yīng)作用下細胞核濃縮、溶解、細胞縮小、解體而達到殺滅細菌的目的，電磁力效應(yīng)作用下細菌電容性結(jié)構(gòu)的細胞膜在微波交變電場中被擊穿破裂，同時，細菌賴以生存的離子通道，出現(xiàn)調(diào)節(jié)功能障礙，從而造成細菌死亡。與其他滅菌方法相比，微波滅菌具有速度快、適用性廣、低溫操作、安全可靠、連續(xù)化操作和滿足環(huán)保等優(yōu)點，本研究確定的銀翹散微波滅菌工藝參數(shù)為：滅菌功率600 W，滅菌時間5 min，含水量15%。在該工藝條件下，滅菌前后銀翹散中指標成分含量無明顯變化，滅菌效果良好。關(guān)于微波對霉菌、大腸菌群等微生物指標的影響有待進一步研究。

參考文獻

[1] 黃玉蘭,李鎮(zhèn)濤,呂謙.中藥制劑微生物污染的因素及對策[J].藥物評價研究,2011,34(3):204-207.

[2] 陳天朝,徐麗軍,宋薇.中藥固體制劑滅菌技術(shù)研究現(xiàn)狀、問題及對策[J].中醫(yī)學報,2013,28(128):1015-1017.

[3] 吳健雄,曹光環(huán),秦建平,等.正交試驗優(yōu)化人參的微波滅菌工藝研究[J].現(xiàn)代藥物與臨床,2012,27(1):27-30.

Comparision of Content of Index Component in Yinqiao Power by Different Sterilization Technologies

FANG Jia-yue, XU Jian, YANG Li-yong, ZHANG Yong-ping
(Guiyang College of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550002, China)

[Abstract] Objective To compare the different sterilization process in Yinqiao Powder content. Methods The sterilization rate as the index, the optimum process parameters of microwave sterilization of Yinqiao Powder by orthogonal test， determination of the 5 components in the UPLC method， and compared with the traditional heat sterilization method. Results The total content of 5 kinds of index components in microwave sterilization process was slightly higher than that of conventional sterilization process. Conclusion The microwave sterilization technology for yinqiao powder drying， simple process， short drying time, and can effectively retain all indexes.

[Key words]Yinqiao power； Sterilization technology； Determination

中圖分類號：R282.710.3

文獻標識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）06-0022-02

*通訊作者