血清RBP、CysC、VEGF在糖尿病腎病中的變化及臨床意義

刁迎斌　高惠娟　袁輝　付鴻玉

[摘要] 目的 探討血清視黃醇結(jié)合蛋白（RBP）、胱抑素C（CysC）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在糖尿病腎?。―N）中的變化及意義。 方法 將124例2型糖尿病患者（DM）根據(jù)24 h尿微量白蛋白排泄率（UAER）隨機分為正常白蛋白尿（NA）組35例，微量白蛋白尿（MA）組45例和臨床白蛋白尿（CP）組44例，另選取35名健康體檢者為對照組，記錄各組臨床資料，測定各組生化指標(biāo)，應(yīng)用ELISA法測定各組血清RBP、CysC、VEGF水平。結(jié)果 NA組、MA組、CP組BMI、腰臀比（WC）、空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（2hFBG）、糖化血紅蛋白（HbAlc）、餐前C肽（CP）、餐后2 h C肽（2hCP）、胰島抵抗指數(shù)（HOMA-IR）、血肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、RBP、CysC、VEGF水平顯著高于對照組（P<0.05）。與NA組比，、MA組、CP組BMI、WC、FPG、2 hFBG、HbAlc、CP、2hCP、HOMA-IR、Cr、BUN、RBP、CysC、VEGF水平較高（P<0.05），而CP組血清RBP、CysC、VEGF水平高于MA組。經(jīng)Spearman單因素分析，RBP與UAER 、BUN、Cr呈正相關(guān)（P<0.05），CysC與UAER、BNU、Cr呈正相關(guān)（P<0.05），VEGF與HbAlc、HOMA-IR、RBP、CysC呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論 血清RBP、CysC、VEGF水平與DN發(fā)生有密切的關(guān)系，血清RBP、CysC、VEGF水平可作為DN早期診斷指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 血清視黃醇結(jié)合蛋白；胱抑素C；血管內(nèi)皮生長因子；糖尿病腎病

[中圖分類號] R587 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1672-4062（2016）03（b）-0131-04

糖尿病腎?。―N）是2型糖尿病（T2DM）常見的并發(fā)癥，目前普遍認(rèn)為炎癥因子與內(nèi)分泌、免疫系統(tǒng)、氧化應(yīng)激、脂肪代謝異常等因素相互作用引起的細(xì)胞結(jié)構(gòu)異常及胰島素抵抗及微血管病變有關(guān)[1-2]。近年研究指出[3]，血清視黃醇結(jié)合蛋白（RBP）、胱抑素（CysC）可作為腎功能損傷的早期評價指標(biāo)。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）與糖尿病微血管病變發(fā)生及進(jìn)展有密切的關(guān)系。該研究將應(yīng)用ELISA法測定DN患者中血清RBP、CysC、VEGF水平，并分析其在DN早期診斷中的變化及意義，旨在為DN早期防治提供指導(dǎo)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院2014年6月—2015年6月收治的124例Ⅱ～Ⅳ期DM患者為研究對象，納入標(biāo)準(zhǔn)：①均美國糖尿病協(xié)會及我國糖尿病協(xié)會2009年制定的DM診斷標(biāo)準(zhǔn)；②均簽署知情同意書；③所有病例均經(jīng)該院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批。排除標(biāo)準(zhǔn)：惡性腫瘤、自身免疫系統(tǒng)性疾病、外傷性感染、心血管疾病、肝腎功能不全的患者。根據(jù)24 h尿微量白蛋白排泄率（UAER）隨機分為正常白蛋白尿（NA）組35例：空腹血糖>8.26 mmol/L，尿蛋白<30 mg/24 h；微量白蛋白尿（MA）組45例：空腹血糖>8.26 mmol/L，尿蛋白32～232 mg/24 h；臨床白蛋白尿（CP）組44例：空腹血糖>8.26 mmol/L，尿蛋白500～658 mg/24 h。另選取35名健康體檢者為對照組，患者入組時均經(jīng)相關(guān)檢查排除腎臟不全者，其余排除標(biāo)準(zhǔn)與DN組相同。

1.2 主要儀器及試劑

標(biāo)準(zhǔn)軟皮尺、水銀液壓計、7600-010型日立全自動生化分析儀、RBP、CysC、VEGF等試劑盒、德國ACCU-CHEK血糖儀、ELISA-STAR全自動酶標(biāo)分析儀。

1.3 測定方法

1.3.1 腰圍、體重、血壓指數(shù)測量 被測量者取垂直站立姿勢，雙足自然分開30 cm左右，使體重均勻分布，平穩(wěn)呼吸；檢查者用一個沒有彈性、最小刻度為1 mm的軟尺，在腋中線髂嵴和第12肋下緣連線的中點，沿水平方向圍繞腹部一周，緊貼而不壓迫皮膚進(jìn)行測量， 松緊以能夠竄動皮尺而皮尺不脫落為準(zhǔn)。測量值精確到1 mm。體重指數(shù)（BMI）=體重（kg）/身高（m2）。血壓測量：采用標(biāo)準(zhǔn)歐姆龍上臂式電子血壓計測量血壓，受試者在安靜狀態(tài)下，取坐位，并連續(xù)測量右上臂動脈血壓3次，取3次平均值。

1.3.2 生化指標(biāo)測定 各組均于清晨空腹抽取靜脈血3 mL，經(jīng)離心處理后留取血清，應(yīng)用7600-010型日立全自動生化分析儀測定甘油三脂（TG）、總膽固醇（TC）、低密度蛋白（LDL-C）、高密度蛋白（HDL-C）水平，應(yīng)用德國ACCU-CHEK血糖儀測定各組空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（2hFBG）。放射免疫法測定空腹胰島素（FINS）水平，計算胰島抵抗指數(shù)（HOMA-IR），HOMA-IR=FINS×FBG/22.5。C肽采用胰島素C肽釋放試驗進(jìn)行測試，毛細(xì)管電泳法測定各組HbA1c。

1.3.3 血清RBP、CysC、VEGF水平測定 空腹抽取各組靜脈血3 mL，以3000 r/min離心處理樣本后留取上清液，應(yīng)用ELISA法測定三組血清RBP、CysC、VEGF水平，RBP試劑盒由上海一研生物科技有限公司提供，CysC試劑盒由上海拜力生物科技提供，VEGF試劑盒由上?；鈱崢I(yè)有限公司提供，操作過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計方法

計量資料指標(biāo)均進(jìn)行正態(tài)性及方差齊性檢驗，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，計數(shù)資料以頻數(shù)和百分?jǐn)?shù)表示。計量資料樣本均數(shù)的比較采用t檢驗，計數(shù)資料樣本采用χ2檢驗，單因素分析采用Pearson相關(guān)分析，多因素分析采用Logistic多因素分析。用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件包進(jìn)行處理，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DN組、DM組及NC組相關(guān)資料對比

MA組、CP組BMI、WC、FPG、2 hFBG、HbAlc、CP、2 hCP、HOMA-IR、Cr、BUN、RBP、CysC、VEGF水平顯著高于NA組及對照組（P<0.05）。MA組、CP組BMI、WC、FPG、2 hFBG、HbAlc、CP、2 hCP、HOMA-IR、Cr、BUN、RBP、CysC、VEGF水平較高NA組（P<0.05），而CP組血清RBP、 CysC、VEGF水平高于MA組，見表1。

2.2 血清RBP、CysC、VEGF與相關(guān)指標(biāo)的的Spearman相關(guān)分析

經(jīng)Spearman單因素分析，RBP與UAER 、BUN、Cr呈正相關(guān)（P<0.05），CysC與UAER、BNU呈正相關(guān)（P<0.05），VEGF與HbAlc、HOMA-IR呈正相關(guān)（P<0.05），見表2。

3 討論

RBP是血液中維生素A轉(zhuǎn)運蛋白，主要由肝臟、脂肪組織合成，廣泛分布在人體腦脊液、體液及血清中。RBP作為小分子蛋白，可自由濾過腎小球，血液中RBP可與甲狀腺素轉(zhuǎn)運蛋白、視黃醇結(jié)合形成聚合物，該聚合物能降低RBP在腎小球的濾過及腎臟的分解[4]。在正常生理狀態(tài)下，腎小球基底膜會自動調(diào)節(jié)血清中RBP水平，使得血清RBP水平穩(wěn)定[5]。DN基本病變?yōu)槟I系膜基質(zhì)增生或腎小球基底膜增厚，使得腎血流量減慢及腎小球濾過率降低，導(dǎo)致RBP在血液中蓄積，使得血清中RBP水平升高[6]。尿液中RBP排出量取決于腎小管重吸收能力，DN患者由于腎小管損傷，重吸收能力下降，腎小管對RBP吸收量減少從而導(dǎo)致尿液中RBP水平升高[7]。該研究中MA組、CP組血清RBP水平高于高于NA組及對照組，而CP組血清RBP水平高于MA組，且RBP與UAER 、BUN、Cr呈正相關(guān)（P<0.05）。Chu等[8]研究指出，RBP可作為糖DN早期病變診斷指標(biāo)。Toruner等[9]也認(rèn)為RBP聯(lián)合腎功能指標(biāo)聯(lián)合檢測可提高早期DN診斷準(zhǔn)確率。這表明RBP水平與腎臟損傷有密切的關(guān)系，且這種損傷可能出現(xiàn)在腎功能病變的早期，并隨著患者病情發(fā)展有密切的關(guān)系。因此血清中RBP水平不僅能有效反映DN患者腎功能損傷程度，同時也可作為DN預(yù)后的評價指標(biāo)。

CysC屬于非糖基化小分子半胱氨酸蛋白酶，是反映腎小球濾過率的理想內(nèi)源性標(biāo)志物[10]。CysC無組織特異性，正常狀態(tài)下血清CysC水平穩(wěn)定，即使在炎癥狀態(tài)下血清中CysC水平不會發(fā)生較大的變化，其生成不受機體急性反應(yīng)、肌肉量、患者性別、年齡、腫瘤、內(nèi)分泌及免疫性疾病影響[11]。腎臟是清除CysC唯一的器官，當(dāng)腎小球濾過功能受損時，CysC在近曲小管中會重吸收及降解功能將受阻，使得CysC不能被排出，導(dǎo)致血液中CysC蓄積，使得血液中CysC水平升高[12]。該研究結(jié)果顯示，該研究中MA組、CP組血清CysC水平高于高于NA組及對照組，而CP組血清CysC水平高于MA組，CysC與UAER、BNU呈正相關(guān)（P<0.05），這提示CysC水平可反映DN患者腎功能病變情況，且隨著DN患者腎功能病程的加重其水平顯著升高，可作為DN早期腎功能損傷及預(yù)后的評價指標(biāo)。

VEGF屬于特異性極強的血管內(nèi)皮生長因子，可刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂及增殖，增加血管內(nèi)皮通透性，促使內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)堆積，從而參與DN生理病理過程[13]。VEGF受體主要表達(dá)于皮質(zhì)間質(zhì)細(xì)胞、腎小球內(nèi)皮細(xì)胞、管旁毛細(xì)血管中。在糖尿病發(fā)病相關(guān)因素如胰島素抵抗、高血糖、炎癥因子等均可上調(diào)VEGF。該研究中MA組、CP組血清VEGF水平高于高于NA組及對照組，而CP組血清VEGF水平高于MA組，且VEGF與HbAlc、HOMA-IR呈正相關(guān)（P<0.05），這提示VEGF水平與糖尿病腎病病情發(fā)生及進(jìn)展有密切的關(guān)系，結(jié)果與Oltean等[14]一致。VEGF水平與HbAlc呈正相關(guān)進(jìn)一步支持了DN患者持續(xù)高血糖狀態(tài)對VEGF有上調(diào)作用的觀點。有研究指出，血液中高濃度VEGF可促進(jìn)腎小球血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖，同時促進(jìn)前列腺素、纖溶酶原釋放，改變內(nèi)皮細(xì)胞窗孔及改變腎臟血流動力學(xué)，增加血管通透性。這也可能是VEGF在DN患者中的作用機制。

綜上所述，血清RBP、CysC、VEGF水平與DN發(fā)生有密切的關(guān)系，血清RBP、CysC、VEGF水平可作為DN早期診斷指標(biāo)。

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（收稿日期：2015-11-27）