總丹參酮中丹參酮ⅡA的提取分離

周少麗（陜西能源職業(yè)技術(shù)學(xué)院化學(xué)工程系，陜西咸陽712000）

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總丹參酮中丹參酮ⅡA的提取分離

周少麗
（陜西能源職業(yè)技術(shù)學(xué)院化學(xué)工程系，陜西咸陽712000）

摘要：目的：以丹參酮ⅡA含量為跟蹤指標(biāo)，建立一個適合工廠化生產(chǎn)的丹參酮ⅡA分離純化工藝。方法：先對提取溶劑、提取方法、提取溶劑用量和提取時間進(jìn)行比較篩選，再利用硅膠柱層析進(jìn)行分離純化。結(jié)果：先用60倍的甲醇超聲提取2.5h，再進(jìn)過硅膠柱層析，以氯仿：石油醚（4∶1）為洗脫劑的提取純化方法為最佳的工廠化生產(chǎn)工藝。結(jié)論：該工藝不僅提取率高，收率較高、成本低、合理，而且簡便、實用。

關(guān)鍵詞：丹參酮ⅡA；提??；柱層析

唇形科植物丹參［1］Salvia miltior- rhiza Bge為多年草本植物?？筛纳菩呐K功能、調(diào)節(jié)組織的修復(fù)與再生、用于治療丹參治療冠心病心絞痛、心肌梗塞、減輕慢性肝炎和早期肝硬化癥狀、治療由于心血不足所致的心悸、失眠等［2-4］。

丹參中含有兩大類物質(zhì)：脂溶性物質(zhì)、水溶性物質(zhì)，脂溶性物質(zhì)為其主要成份［5］，它主要包含以下4個單體：丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、隱丹參酮。丹參酮ⅡA（TanshinoneⅡA）：異名丹參醌ⅡA，C19H18O3，M=294.33，櫻紅色針狀結(jié)晶（甲醇），熔點209～210℃。

丹參的主要藥理成分是丹參酮ⅡA，但以前主要注重丹參中化學(xué)成分和其藥理作用的研究，對工藝流程的研究較少，鑒于丹參酮ⅡA的良好的藥理作用，對其進(jìn)行大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)已經(jīng)成為一種必然的要求。由于丹參酮ⅡA遇光、熱等易變質(zhì)的特性［6］，要對其進(jìn)行大量而又穩(wěn)定的工業(yè)生產(chǎn)較為困難，本實驗就是針對這一狀況進(jìn)行的，通過實驗可以生產(chǎn)出純品丹參酮ⅡA，為丹參制劑的生產(chǎn)打下基礎(chǔ)。

1　實驗部分

1.1原料、試劑與儀器

丹參酮粗粉（含丹參酮ⅡA27%西安鴻生生物技術(shù)有限公司）；

丹參酮ⅡA標(biāo)樣（含量為95%中國藥品生物制品檢定所）；

甲醇、乙酸乙酯等試劑（AR）；薄層層析硅膠GF254；柱層析硅膠（青島裕民源硅膠試劑廠）；薄層板自制（0.5%CMC鋪板）；濾紙（杭州新華濾紙廠）。

高效液相色譜儀（美國Spectra physics公司）；高效液相色譜儀；色譜泵SP1000，色譜柱（ODS，5μm，4.6mm×220mm），積分儀SP4290，紫外檢測器SP100。

1.2色譜條件

色譜柱：C18ODS（4.6mm×220mm，5μm）；流動相為：甲醇∶水（85∶15）；柱溫：30℃；檢測波長：270nm；流速：0.8mL·min-1。

1.3公式計算

HPLC檢測丹參酮ⅡA含量并計算溶出率。

式中溶出率（%）：溶出的丹參酮ⅡA占原來總丹參酮中丹參酮ⅡA的比例；Sn/So（%）：所測物的峰面積跟標(biāo)樣的峰面積的比值。

2　各因素對丹參酮ⅡA含量的影響

2.1標(biāo)樣制取

準(zhǔn)確稱取標(biāo)樣0.0035g，先稀釋2倍，再取1mL放入10mL容量瓶中，用無水乙醇定容至10mL，其濃度為0.175mg·mL-1。將其放入冰箱中，以后每次都以此標(biāo)樣為標(biāo)準(zhǔn)。

2.2溶劑的選擇

分別向5個三角瓶中稱取5.0g丹參酮粗粉，向每個三角瓶中分別加入100mL氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，超聲提取1h，靜置；取其上清液1mL，再用相應(yīng)溶劑稀釋30倍，過濾；取上清液測其中丹參酮ⅡA的含量，確定最佳溶劑。

表1　不同溶劑的檢測結(jié)果Tab.1 Test results of different solvent

由表1可以看出，甲醇是比較合適的溶劑。氯仿提取的溶出率雖較高，但是提取物中丹參酮ⅡA含量增加太少，氯仿沒有選擇性的將所有物質(zhì)都提取了出來，故不適合；而乙醇提取物中丹參酮ⅡA的含量雖較高，但溶出率太低，也不適合；其余二者對丹參酮ⅡA提取的相對含量和溶出率均不如甲醇好，故甲醇是較為理想的提取溶劑。

2.3提取方法的選擇

分別向2個三角瓶中加入2.5g丹參酮粗粉和100mL溶劑甲醇，各自采用超聲常溫提取1h和常溫攪拌提取1h，后靜置；取其清液用甲醇稀釋30倍，過濾，取上清液測其中丹參酮ⅡA的含量，確定最佳提取方法。

表2　不同提取方法的檢測結(jié)果Tab.2 Test results of different extraction method

由表2可以看出，超聲提取的甲醇溶出物中丹參酮ⅡA的含量和溶出率均高于攪拌提取，故超聲常溫提取是比較合適的。

2.4溶劑用量的選擇

向八個三角瓶中分別加入2.5g丹參酮粗粉，后依次加入25、50、75、100、125、150、175、200mL甲醇，利用超聲提取1h，靜置；取其清液用甲醇稀釋20倍，過濾，取上清液測其中丹參酮ⅡA的含量，確定最佳溶劑用量。

圖1　溶劑用量對丹參酮ⅡA含量的影響Fig.1 Influence of solvent dosage on tanshinoneⅡA content

因為當(dāng)溶劑用量繼續(xù)增多時，提取物的含量和溶出率和60倍量是相差不大；故用60倍量的溶劑提取是最為合適的。

2.4提取時間的選擇

向8個三角瓶中分別加入2.5g丹參酮粗粉，后分別加入150mL甲醇，采用超聲常溫提取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0h，靜置；取其清液用甲醇稀釋20倍，過濾，取上清液測其中丹參酮ⅡA的含量，確定最佳提取時間。

圖2　提取時間的對丹參酮ⅡA含量的影響Fig.2 Influence of extraction time on tanshinoneⅡA content

因為當(dāng)時間繼續(xù)增加時，提取物的溶出率和2.5h時相差不大；但含量相對減少，故時間不合適，提取時間為2.5h時，故提取2.5h是較為合適的。

3　上柱分離純化工藝的確定

（1）取2.5g丹參酮粗粉用60倍量的甲醇超聲提取2.5h，提取液濃縮，拌樣上硅膠柱，洗脫劑為氯仿-石油醚（4∶1），用每50mL收集，濃縮點板，展開劑為環(huán)己烷-乙酸乙酯（4∶1）根據(jù)點板合并洗脫液得a1、a2、a33個餾份，濃縮，稱重，測定丹參酮ⅡA含量，并計算收率。

表3　一次柱分離檢測結(jié)果Tab.3 Test results of once column separation

（2）將含量高的流份a2用氯仿溶解后繼續(xù)上柱，洗脫液為氯仿-石油醚（4∶1），收集洗脫液，展開劑為環(huán)己烷-乙酸乙酯（3∶1），進(jìn)行TLC，根據(jù)點板合并洗脫液，收集流份b1、流份b2、流份b3，稱重，測含量，計算收率。

表4　二次柱分離檢測結(jié)果Tab.4 Test results of twice column separation

由表4得出，流份b2的含量最高，且收集量也大，溶出率也較高，故選流份b2進(jìn)行下一步的重結(jié)晶。

（3）將含量高的流份b2用適量的甲醇熱溶解，重結(jié)晶，稱重，測含量，計算收率。

表5　重結(jié)晶結(jié)果Tab.5 Recrystallization results

由表5可見：經(jīng)重結(jié)晶后，得到了含量為94.0765%的丹參酮ⅡA。

圖3　重結(jié)晶產(chǎn)物高效液相圖譜Fig.3 The HPLC atlas of Recrystallization product

4　結(jié)論

（1）以甲醇為提取劑，溶劑/溶質(zhì)為60，超聲常溫2.5h，為丹參酮ⅡA的最佳提取工藝；

（2）根據(jù)工藝分析結(jié)果確定丹參酮ⅡA的較優(yōu)工藝生產(chǎn)路線為60倍量甲醇常溫超聲提取2.5h，后以氯仿-石油醚（4∶1）為洗脫液進(jìn)行柱色譜分離，收集中間流份，并繼續(xù)以氯仿-石油醚（4∶1）為洗脫液進(jìn)行柱色譜分離，收集中間流分，后經(jīng)甲醇熱解，重結(jié)晶，得到含量為94.0765%的丹參酮ⅡA。

參考文獻(xiàn)

［1］云南省植物研究所，南京藥學(xué)院.中國植物志［M］.科學(xué)出版社，2004.66：145- 146.

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［5］李倩，劉偉，羅祖良，等.一測多評法測定丹參中丹參酮Ⅱ_A、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮Ⅰ的含量［J］.中國中藥雜志，2012，37（6）：824- 827.

［6］劉梅，夏鑫華.丹參酮ⅡA的化學(xué)穩(wěn)定性研究［J］.中藥材，2010，33（4）：606- 609.

化工設(shè)備

Extraction and purification of tashinon from salvia miltiorrhiza Bge

ZHOU Shao-li
（Dept. of Chemical engineering，Shaanxi Energy Institute，Xianyang 712000，China）

Abstract：Take the salvia miltiorrhiza alkone II A content as the track target，a separation purification craft which is suitable to the factorization production of the TanshinoneⅡA was established. The withdraws solvent，method，solvent amount and time was compared and selected，then using the silicagel column chromatographic analysis to carry on the separation purification. 60 times methyl alcohol supersonic extracted 2.5h first，then entered the silicagel column chromatographic analysis，by chloroform-Benzine（3∶1）for elutes the medicinal preparation to withdraw the purification method for the best factorization production craft. This craft has high extraction rate，and high yield，low cost，Moreover simple and practical

Key words：tanshinoneⅡA；withdraws；column chromatographic analysis

中圖分類號：TQ461

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

DOI：10.16247/j.cnki.23-1171/tq. 20160676

收稿日期：2016- 03- 31

作者簡介：周少麗（1983-），女，碩士，講師，2008年碩士畢業(yè)于沈陽理工大學(xué)應(yīng)用化學(xué)專業(yè)，現(xiàn)主要有機(jī)化學(xué)研究及教學(xué)工作。