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    PAQR3及與其相關(guān)疾病關(guān)系研究進(jìn)展

    2016-06-29 09:41:31吳水梅劉茂生李騰政張吉翔
    中國(guó)老年學(xué)雜志 2016年11期
    關(guān)鍵詞:高爾基體腫瘤

    吳水梅 鄭 燕 劉茂生 李騰政 萬(wàn) 倩 張吉翔

    (南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化內(nèi)科,江西 南昌 330006)

    PAQR3及與其相關(guān)疾病關(guān)系研究進(jìn)展

    吳水梅鄭燕劉茂生李騰政萬(wàn)倩張吉翔

    (南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化內(nèi)科,江西南昌330006)

    〔關(guān)鍵詞〕PAQR3;Raf;高爾基體;腫瘤

    Tang等〔1〕第一次描述了PAQR3基因,它位于染色體4q21.21上,在大多數(shù)物種中編碼一種蛋白質(zhì),具有高度保守性。雖然PAQR3基因在原核生物中首次發(fā)現(xiàn),但已被證實(shí)存在于真核生物中〔2〕。與其他PAQR家庭成員不同,PAQR3相當(dāng)早從家庭中發(fā)脫離出來(lái)并顯示出相對(duì)獨(dú)立的分化〔1,2〕。人類PAQR3蛋白含有311個(gè)氨基酸殘基。RT-PCR評(píng)估人體組織PAQR3的mRNA表達(dá)水平顯示,在人的腦、睪丸、小腸、皮膚、胸腺中高表達(dá),而小鼠的腎臟、腦、睪丸和肝中PAQR3 mRNA的表達(dá)量更高〔1,3〕。

    內(nèi)源性和異位表達(dá)的PAQR3免疫熒光分析表明其定位與高爾基標(biāo)記物Golgin-97和GM130重疊,因此確認(rèn)PAQR3定位于高爾基體〔3〕。類似于PAQR家族的其他成員,PAQR3最初預(yù)測(cè)具有七次跨膜結(jié)構(gòu)域(7-TMDS),包含位于高爾基體膜內(nèi)N末端和高爾基體膜外C末端〔1,3〕,其中第一、三、五環(huán)面向高爾基腔,第二、四、六環(huán)朝向胞質(zhì)〔4〕。Luo等〔4〕進(jìn)行的研究還發(fā)現(xiàn),至少有4個(gè)獨(dú)立片段與PAQR3的高爾基體定位有關(guān),包括TMDS之間的第一個(gè)及第三個(gè)環(huán)和位于N末端的膜近端10個(gè)氨基酸(氨基酸61-71),位于C-末端的膜近端5個(gè)氨基酸(氨基酸299-303)。由于Raf-1激酶在高爾基體上的空間調(diào)控作用,PAQR3又獲得了新的名字——RKTG,而N-末端序列和第三個(gè)環(huán)對(duì)于PAQR3與Raf-1之間的相互作用都是必需的〔5〕。

    1PAQR3參與的信號(hào)通路

    PAQR3主要調(diào)控細(xì)胞增生的Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路,通過(guò)與該通路成員Raf的相互結(jié)合將胞質(zhì)中分布的Raf錨定在高爾基體上,削弱Raf激酶的活化,干擾了Raf與其上游的Ras以及下游的MEK蛋白的結(jié)合,從而阻礙了Ras將信號(hào)向下游分子傳遞,最終抑制ERK信號(hào)。在PAQR3敲除小鼠中ERK活性增強(qiáng),并且在受到生長(zhǎng)因子刺激時(shí)表現(xiàn)出更強(qiáng)、持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)的ERK激活〔3,6,7〕。在HEK293T細(xì)胞中,PAQR3的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致Raf-1的絲氨酸338明顯減少,在表皮生長(zhǎng)因子(EGF)誘導(dǎo)下ERK和P90RSK(細(xì)胞質(zhì)中ERK的基板)發(fā)生磷酸化;此外,PAQR3過(guò)表達(dá)阻滯了Ras和Raf-1刺激的ELK-1(ERK的核目標(biāo))反式激活,并強(qiáng)烈地抑制刺了PC12細(xì)胞神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)誘導(dǎo)的分化〔3〕。B-Raf是Raf激酶家族中最頻繁突變的基因,腫瘤的發(fā)展過(guò)程中PAQR3也與降低缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1α的反式激活活性,負(fù)向調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá),因此阻斷了自分泌VEGF信號(hào),見(jiàn)圖1〔8〕。

    PAQR3也可以通過(guò)將GPCR Gβγ亞基螯合至高爾基體調(diào)節(jié)GPCR信號(hào),從而抑制Gβγ功能和阻斷Gβγ與下游靶蛋白的相互作用,如GRK2和AKT(圖1)〔9〕。有證據(jù)表明,腫瘤的發(fā)生和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)期間PAQR3和p53之間存在功能上的相互作用。在生理?xiàng)l件下,PAQR3的缺少,通過(guò)改善PAQR3依賴的GPCR的Gβγ亞基信號(hào),增強(qiáng)了GPCR介導(dǎo)的AKT和其基板糖原合成酶激酶-3(GSK3β)的激活,并伴隨的p53 Ser15磷酸化增加和p53及其靶基因的積累,p21和p16。在病理生理?xiàng)l件下,PAQR3和p53的損失會(huì)導(dǎo)致EMT和腫瘤〔10〕。在最近的一項(xiàng)研究中,發(fā)現(xiàn)PAQR3通過(guò)分流磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的P110α亞基至高爾基體和改變PI3K活性從而負(fù)向調(diào)節(jié)胰島素信號(hào)〔11〕。PAQR3與p110α的p85結(jié)合域相互作用,過(guò)表達(dá)PAQR3劑量依賴性地降低PI3K調(diào)節(jié)亞基p85α和p110α的結(jié)合,從而進(jìn)一步調(diào)節(jié)下游通路〔12〕。

    圖1 PAQR3參與的信號(hào)通路

    2與PAQR3相關(guān)的疾病

    2.1消化系統(tǒng)腫瘤

    2.1.1結(jié)直腸癌大腸癌是男性中第三個(gè)大最常見(jiàn)的癌癥,女性中排名第二,2008年新發(fā)生的病例超過(guò)1 200 000例,估計(jì)死亡的有608 700例〔13〕。雖然在一些西方國(guó)家,大腸癌的死亡率一直在下降,但在許多國(guó)家,由于資源和健康基礎(chǔ)設(shè)施有限,大腸癌的死亡率仍然在繼續(xù)增加〔14〕。王笑等〔12,15〕對(duì)PAQR3在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)PAQR3在人結(jié)腸直腸癌患者樣本的癌組織中表達(dá)量顯著低于癌旁組織。PAQR3敲除后的ApcMin/+小鼠生存時(shí)間縮短,小腸中腺瘤數(shù)目和負(fù)荷增加。此外,在結(jié)腸癌細(xì)胞系SW-480中,過(guò)表達(dá)PAQR3抑制細(xì)胞的增殖。相反,敲減內(nèi)源性的PAQR3促進(jìn)SW-480細(xì)胞增殖和克隆形成。首次揭示了PAQR3具有抑制結(jié)腸直腸癌發(fā)生發(fā)展的作用,這或許給結(jié)直腸癌的靶向治療帶來(lái)了新的方向和策略。

    2.1.2胃癌胃癌是最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率高,5年生存率低〔16,17〕。胃癌的特點(diǎn)是不同的地理分布,70%以上的情況下發(fā)生在某些發(fā)展中國(guó)家和東亞,如中國(guó),日本和韓國(guó)〔16〕。最近的一項(xiàng)研究顯示,在胃癌患者中存在五個(gè)特征性的基因改變,包括FGFR2(9%的腫瘤),KRAS(9%),EGFR(8%),ErBB2(7%)和 MET(4%)〔18〕??偟膩?lái)說(shuō),這項(xiàng)研究顯示,受體酪氨酸激酶家族(RTK)及其下游Ras介導(dǎo)的信號(hào)通路的基因,包括胃癌發(fā)生發(fā)展中相關(guān)的主要基因發(fā)生了改變,表明某些胃癌患者可能可以通過(guò)改善RTK和/或RAS而被治愈〔18〕。而前面我們提到PAQR3主要調(diào)控控制細(xì)胞增生的Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路,通過(guò)與該通路成員Raf的相互結(jié)合將胞質(zhì)中分布的Raf錨定在高爾基體上,削弱Raf激酶的活化,干擾了Raf與其上游的Ras以及下游的MEK蛋白的結(jié)合,從而阻礙了Ras將信號(hào)向下游分子傳遞,最終使ERK信號(hào)受到抑制。Ling等〔19〕則對(duì)PAQR3與胃癌之間的關(guān)系進(jìn)行研究,對(duì)大量的胃癌患者癌及癌旁組織臨床樣本(300對(duì))研究發(fā)現(xiàn),與癌旁組織相比,胃癌組織中PAQR3蛋白及mRNA的表達(dá)量顯著下調(diào),且與胃癌的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。體外實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了PAQR3抑制胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和遷移能力〔20〕。

    2.1.3肝癌Wu等〔21〕采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR、免疫印跡和免疫組化檢測(cè)了原發(fā)性肝癌中 PAQR3的表達(dá)水平,結(jié)果顯示,在大多數(shù)肝癌組織中PAQR3 mRNA和蛋白表達(dá)水平下調(diào),而PAQR3表達(dá)低可能表明HCC患者的預(yù)后較差。臨床病理分析表明,PAQR3的表達(dá)水平與血清α甲胎蛋白(AFP)表達(dá)顯著相關(guān),此外,體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PAQR3抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)和集落形成。PAQR3可能是一種新的HCC預(yù)后的生物標(biāo)志物,也為肝癌的治療提供新的策略。

    2.2其他腫瘤與PAQR3相關(guān)腫瘤中最早被發(fā)現(xiàn)的即是惡性黑色素瘤,F(xiàn)an等〔7〕首次發(fā)現(xiàn)當(dāng)人類惡性黑色素瘤A375細(xì)胞株過(guò)度表達(dá) B-Raf(V600E),PAQR3將B-Raf轉(zhuǎn)運(yùn)至高爾基體,從而阻斷ERK信號(hào)通路,抑制了 ERK激活、細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)化,此外,表達(dá)PAQR3 的A375細(xì)胞抑制了裸鼠成瘤性,這些結(jié)果說(shuō)明,PAQR3通過(guò)拮抗B-Raf,負(fù)向調(diào)節(jié)ERK信號(hào),在致癌基因B-Raf突變的人惡性黑色素瘤中起著抑癌作用。當(dāng)然,之后Jiang等〔10〕發(fā)現(xiàn)PAQR3缺陷小鼠皮膚腫瘤的發(fā)生率也遠(yuǎn)高于PAQR3正常的小鼠,但不同的是,他們認(rèn)為這是因?yàn)镻AQR3缺少,改善了PAQR3依賴的GPCR Gβγ亞基信號(hào),增強(qiáng)了GPCR介導(dǎo)的AKT和其基板GSK3β的激活,這種改善伴隨的p53 Ser15磷酸化增加和p53及其靶基因的積累,p21和p16,在病理生理?xiàng)l件下,PAQR3和p53的損失會(huì)導(dǎo)致EMT和腫瘤。

    自分泌VEGF信號(hào)用于維持血管的動(dòng)態(tài)平衡。失調(diào)的血管生成牽涉到許多人類癌癥的發(fā)展,特別是在富含血管的腎透明細(xì)胞癌(RCC)。同時(shí),抗血管生成治療已成為治療人類癌癥的一種有效策略。姜曉萌和 Zhang等〔8,22〕通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)PAQR3對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移、和血管的生成起負(fù)調(diào)控作用,通過(guò)抑制絲裂原活化蛋白激酶信號(hào),進(jìn)而抑制HIF-1α/P300復(fù)合體的形成和抑制VEGF的轉(zhuǎn)錄負(fù)調(diào)控轉(zhuǎn)錄激活HIF-1α,從而減少缺氧誘導(dǎo)的VEGF生成。臨床樣本結(jié)果分析顯示腎透明細(xì)胞癌較癌旁組織PAQR3表達(dá)水平顯著下調(diào),并且與VEGF表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。這些研究結(jié)果說(shuō)明,PAQR3抑制腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展。

    近年來(lái),越來(lái)越多的證據(jù)表明PAQR3與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān),包括膀胱癌〔23〕、喉鱗狀細(xì)胞癌〔24〕、乳腺癌病〔25〕、骨肉瘤〔26〕,且目前傾向認(rèn)為PAQR3是腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的抑制基因,這對(duì)于多種腫瘤的靶向治療提供了一個(gè)新的思路。

    2.3肥胖胰島素抵抗和代謝性疾病的發(fā)病密切相關(guān),尤其是2型糖尿病〔27〕。磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/Akt通路是胰島素代謝行動(dòng)中心。研究發(fā)現(xiàn),PAQR3能夠與PI3K的催化亞基p110α相互作用將p110α錨定在高基體上從而影響其活性。過(guò)表達(dá)PAQR3抑制胰島素刺激的PI3K的活性以及下游靶基因AKT和GSK3β的活化;而缺失PAQR3增加PI3K的活性和下游基因的磷酸化水平〔11,28〕。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,敲除PAQR3的小鼠能夠增加胰島素刺激的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(GLUT4)向細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)運(yùn)和葡萄糖吸收,增加胰島素的敏感性。此外,PAQR3還可以通過(guò)調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,影響瘦素信號(hào)通路,從而影響肥胖〔11,28〕。

    3展望

    近年來(lái),PAQR3成了研究熱點(diǎn),因?yàn)樗粌H與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展之間存在聯(lián)系,還與糖尿病引起的肥胖相關(guān)〔11,28〕,那么PAQR3到底參與了哪些信號(hào)通路調(diào)節(jié)了這些病理生理過(guò)程?位于高爾基體膜上的七次跨膜蛋白PAQR3主要通過(guò)捕獲Raf激酶調(diào)控Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路,當(dāng)然,它也可以通過(guò)將GPCR Gβγ亞基螯合至高爾基體調(diào)節(jié)GPCR信號(hào),從而負(fù)調(diào)節(jié)Gβγ功能和阻斷Gβγ與下游靶蛋白的相互作用及與PI3K的催化亞基p110α相互作用將p110α錨定在高基體上從而影響其活性,但是PAQR3是否還參與其他的通路還不是很清楚。目前大量腫瘤研究都顯示PAQR3是一個(gè)抑癌基因,該基因是否能成為腫瘤治療的靶點(diǎn),仍需要未來(lái)進(jìn)一步的研究。

    4參考文獻(xiàn)

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    〔2016-01-27修回〕

    (編輯李相軍)

    基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81360074)

    通訊作者:張吉翔(1950-),男,教授,主要從事消化系統(tǒng)方面的研究。

    〔中圖分類號(hào)〕R-1

    〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

    〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)11-2784-03;

    doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.105

    第一作者:吳水梅(1989-),女,碩士,主要從事消化系統(tǒng)方面的研究。

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