• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    戴氏綠僵菌多糖對衰老小鼠免疫功能的影響

    2016-06-29 09:41:28肖代敏張志敏呂純莉易禎禛
    中國老年學(xué)雜志 2016年11期
    關(guān)鍵詞:衰老免疫功能半乳糖

    肖代敏 張志敏 呂純莉 曹 喻 易禎禛

    (遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗科,貴州 遵義 563099)

    戴氏綠僵菌多糖對衰老小鼠免疫功能的影響

    肖代敏張志敏1呂純莉曹喻易禎禛

    (遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗科,貴州遵義563099)

    〔摘要〕目的探討戴氏綠僵菌多糖對衰老模型小鼠免疫功能的影響。方法建立D-半乳糖誘導(dǎo)的亞急性衰老模型小鼠,同時灌胃不同劑量的戴氏綠僵菌多糖,6 w后,觀察模型小鼠體重變化,免疫器官(胸腺、脾臟)指數(shù),腹腔巨噬細(xì)胞吞噬及血清中IgG含量等免疫功能的影響。結(jié)果戴氏綠僵菌多糖能夠改善模型小鼠體重;3種不同劑量的多糖均能提高模型小鼠T淋巴細(xì)胞的增殖能力,高劑量蟲草多糖能提高B淋巴細(xì)胞增殖能力;同時能夠顯著提高小鼠脾臟、胸腺指數(shù)及腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力及顯著提高血清中IgG的含量。結(jié)論戴氏綠僵菌多糖可增強亞急性衰老模型小鼠的細(xì)胞和體液免疫功能。

    〔關(guān)鍵詞〕戴氏綠僵菌;多糖 D-半乳糖;衰老;免疫功能

    蟲草(Cordyceps)是一種特殊類型的藥用真菌,屬真菌門(Eulnycota),子囊菌亞門(Aseomyeotina),在生物醫(yī)藥領(lǐng)域具有重要應(yīng)用價值的真菌資源。我國蟲草資源分布是世界上最多最廣的國家。研究表明,蟲草及其發(fā)酵菌絲體具有抗腫瘤、抗氧化、抗突變、降血糖、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛等廣泛的藥理作用〔1~3〕,其中多糖是目前最具開發(fā)利用的活性成分之一。戴氏蟲草及其無性型-戴氏綠僵菌是由我國學(xué)者梁宗琦等在貴州省首次發(fā)現(xiàn)〔4〕。前期研究表明具有抗腫瘤、抗氧化及抗突變活性,作為新種的戴氏綠僵菌,其胞內(nèi)多糖的免疫調(diào)節(jié)活性研究還鮮見報道。衰老是由多方面因素造成的,本實驗以小劑量連續(xù)多次注射D-半乳糖誘導(dǎo)亞急性衰老模型〔5〕,并從衰老發(fā)生的免疫學(xué)角度探討戴氏綠僵菌多糖的抗衰老的免疫學(xué)活性。

    1材料與方法

    1.1藥品及器材蟲草多糖由本實驗室提取、分離,并經(jīng)紫外、紅外光譜、葡聚糖凝膠柱和GC-MS聯(lián)用儀分析鑒定〔6〕。全自動生化分析儀(日本,Olympus,AU2700);CO2培養(yǎng)箱、全自動酶標(biāo)儀、MTS細(xì)胞繁殖定量檢測試劑盒(上海杰美基因醫(yī)藥科技有限公司 GMS10043);EZ-SepTMMouse 1X 淋巴細(xì)胞分離液(深圳,達(dá)科為生物技術(shù)有限公司);刀豆蛋白(美國Sigma公司),脂多糖(LPS,美國Sigma公司),胎牛血清(杭州四季清生物公司);5%雞紅細(xì)胞混懸液(自制)。

    1.2樣品配制D-半乳糖:0.9%NS 200 ml、D半乳糖0.96 g、配制成4.8 mg/ml溶液。多糖溶液:按400 mg·kg·d劑量,灌胃0.5 ml/只計算(高劑量)。按200 mg·kg·d劑量,灌胃0.5 ml/只計算(中劑量)。按100 mg·kg·d劑量,灌胃0.5 ml/只計算(低劑量)。3種濃度的多糖液用生理鹽水配制,1次/w,4℃保存。

    1.3實驗動物SPF級昆明種小鼠,4~6周齡,18~22 g,雄性。由第三軍醫(yī)大學(xué)大平醫(yī)院動物中心提供。許可證號:scxk(渝)20070003。

    1.4實驗方法

    1.4.1動物分組及建模將小鼠隨機分為五組:空白組、模型組、多糖高劑量組、多糖中劑量組、多糖低劑量組,每組10只,適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w,除空白組外,其他每組每日頸部皮下注射D-半乳糖溶液120 mg·kg-1·d-1,空白組注射同劑量的生理鹽水,為期6 w,從注射第2周開始,多糖3個劑量組每日灌胃相應(yīng)劑量的多糖液進(jìn)行干預(yù),連續(xù)4 w。測定各生化指標(biāo)和計算脾臟、胸腺指數(shù)。并于開始灌胃前及灌胃后每隔3 d稱量1次各組小鼠體重。

    1.4.2小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力的實驗〔7〕模型建成后,小鼠處理前30 min注射5%雞紅細(xì)胞生理鹽水懸液0.8 ml,0.5 h后,用乙醚將老鼠麻醉至昏迷,摘除眼球取血于2 ml的EP管中,備用。頸椎脫臼處死,經(jīng)腹腔注射生理鹽水2 ml,吸出腹腔洗液0.5~1 ml,滴于載玻片上,于37℃孵化箱中溫孵30 min,然后用生理鹽水漂洗、晾干,用甲醛溶液固定,瑞氏染液染色5 min,用蒸餾水漂洗、晾干,在顯微鏡下鏡檢,計數(shù)。記錄100個巨噬細(xì)胞中吞噬了雞紅細(xì)胞的數(shù)量和吞有雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)目,并按下式求出巨噬細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù):吞噬百分率(%)= 吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/計數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)× 100%。

    1.4.3小鼠脾臟、胸腺的稱量方法小鼠末次給藥24 h后,將小鼠頸椎脫臼處死,解剖小鼠,取其脾臟、胸腺,吸干表面血污,精密稱量,將稱量所得的質(zhì)量換算成各臟器對應(yīng)的指數(shù),脾臟(胸腺)指數(shù)=脾臟(胸腺)重量(mg)/體重(g)。

    1.4.4小鼠淋巴細(xì)胞增殖實驗斷頸處死小鼠,浸入75%的乙醇中浸泡5~10 min。在超凈臺中無菌取出小鼠脾臟。放入裝有5 ml EZ-SepTMMouse 1×淋巴細(xì)胞分離液的一次性平皿中。用鑷子固定尼龍網(wǎng),然后用注射器活塞輕輕研磨小鼠脾臟,使得分散的單細(xì)胞透過尼龍網(wǎng)(200目)進(jìn)入淋巴細(xì)胞分離液中。把懸有脾臟細(xì)胞的分離液立即轉(zhuǎn)移到離心管中,離心前再覆蓋上大約 200 μl的1640培養(yǎng)基。2 500 r/min離心30 min。吸出淋巴細(xì)胞層(培養(yǎng)基層下,分離液上),用10 mlPBS洗滌2 500 r/min離心10 min。傾倒上清液,加入1 ml完全1640懸液,計數(shù)調(diào)節(jié)制成1.0×107/ml的脾細(xì)胞懸液,細(xì)胞培養(yǎng)采用96孔培養(yǎng)板,每孔加入脾細(xì)胞懸液100 μl,平行3個復(fù)孔,然后加入使得孔最終濃度為5 μlg/ml的LPS和刀豆蛋白液10 μl,同時做不加刀豆蛋白和LPS的陰性對照孔(用10 μl 1640代替),空白對照只加完全1640,37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h,于培養(yǎng)結(jié)束前4 h加入MTS,每孔10 μl(按MTS使用說明書進(jìn)行),在490 nm處測OD值。

    1.4.5血清IgG的測定小鼠眼眶取血,離心取血清,用全自動生化分析儀對血清IgG含量進(jìn)行測定。

    1.5統(tǒng)計學(xué)方法組間比較行t檢驗。

    2結(jié)果

    2.1衰老模型小鼠體重變化在灌胃的前3 d,體重均有下降趨勢,尤其以高劑量組較為明顯,其原因可能是開始灌胃后,各組小鼠適應(yīng)性問題導(dǎo)致食欲減退,體重下降。之后各組小鼠體重均逐漸增加,但模型組小鼠體重增加的程度明顯低于其他各組。體重增長最快的是高劑量組。其他各組與空白組基本一致。見圖1。

    圖1 衰老模型各組小鼠體重隨時間變化

    2.2腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力實驗 模型組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力較低,給予不同劑量的多糖后,各組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬百分?jǐn)?shù)和吞噬指數(shù)均高于模型組,其中高劑量組與模型組比較有顯著差異(P<0.05)。見表1。

    表1 多糖對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響±s)

    與模型組比較:1)P<0.05,下表同

    2.3衰老模型各組脾臟和胸腺指數(shù)結(jié)果高劑量組和中劑量組脾臟指數(shù)顯著高于模型組(P<0.05)。其他兩組脾臟指數(shù)也較模型組高,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),其可能原因是樣本例數(shù)較少或者是實驗時間較短所致。除高劑量組和的中劑量組胸腺指數(shù)與模型組比較有顯著差異外(P<0.05),其余兩組均無顯著差異(P>0.05),但胸腺指數(shù)均較模型組高。見表2。

    表2 衰老模型各組小鼠脾臟、胸腺指數(shù)比較±s)

    2.4淋巴細(xì)胞增殖實驗3種不同劑量的多糖均能提高模型小鼠T淋巴細(xì)胞的增殖能力,呈梯度增加(P<0.05,P<0.01)。而對B淋巴細(xì)胞的影響,只有高劑量組與模型組相比有顯著差異(P<0.05),中劑量組和高劑量組無明顯影響。見表3。

    2.5血清IgG含量通過測定小鼠血清中IgG的含量,各多糖劑量組小鼠的血清IgG含量與模型組相比,其值表現(xiàn)出非常明顯的差異,隨劑量的增加含量呈梯度增加(P<0.05,P<0.01),見表3。

    表3 多糖對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖及

    與模型組比較:1)P<0.05,2)P<0.01

    3討論

    隨著年齡的增長,機體的免疫器官逐漸萎縮,免疫細(xì)胞及亞細(xì)胞因子降低,機體的免疫功能逐漸減弱,對外界病原體的抵抗能力明顯減弱〔8〕。隨著年齡的增長,免疫器官老化,感染性疾病、癌癥等發(fā)病率、死亡率逐漸增高。免疫衰老與個體壽命之間的聯(lián)系也得到了證據(jù)支持〔9〕。

    D-半乳糖致衰老模型是基于衰老的代謝學(xué)說而復(fù)制的一種衰老模型,具有與自然衰老相似的自由基代謝紊亂特征,其衰老反應(yīng)接近或相當(dāng)于自然衰老。本實驗建模成功,所測的實驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定、可靠。機體中的免疫系統(tǒng)是由免疫器官和免疫細(xì)胞組成,免疫器官有許多,如:胸腺、脾臟、肝臟等,這些免疫器官的重量,尤其是免疫器官的重量指數(shù)可比較客觀地反映機體免疫器官的發(fā)育情況,當(dāng)機體的免疫功能增強時,其重量有所增加。本研究中的高劑量多糖組和中劑量多糖組的小鼠的脾臟和胸腺重量較空白組都明顯增加,故戴氏綠僵菌多糖達(dá)到一定劑量就能夠?qū)μ悄虿⌒∈蟮拿庖吖δ苓M(jìn)行提高。

    本研究結(jié)果表明戴氏綠僵菌多糖能夠?qū)喖毙运ダ闲∈篌w重的保護及免疫器官的老化具有一定的緩解作用,且隨著劑量的增加而增加,并能明顯改善衰老模型小鼠T細(xì)胞和B細(xì)胞的增殖能力,增強其對外來抗原的反映性,提高模型小鼠血清中IgG含量,在一定程度上反映了機體體液免疫的調(diào)節(jié)能力。同時具有增強小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力,從而增強機體的細(xì)胞及體液免疫功能。但它增強衰老機體免疫功能發(fā)生的分子機制還有待于進(jìn)一步研究探討。

    4參考文獻(xiàn)

    1Xiao JH,Zhong JJ.Secondary metabolites from Cordyceps species and their antitumor activity studies 〔J〕.Recent Patents Biotechnol,2007;1(2):123-7.

    2Li SP,Zhang GH,Zeng Q,etal.Hypoglycemic activity of polysaccharide,with antioxidation,isolated from cultured Cordyceps mycelia 〔J〕.Phytomed,2006;13(6):428-33.

    3Xiao JH,Liang ZQ,Liu AY,etal.Immunosuppressive activity of polysaccharides from Cordye- ps gunnii mycelia in mice in vivo/vitro〔J〕.J Food Agric Environ,2004;2(3&4):69-74.

    4梁宗琦,劉愛英,劉杰麟.蟲草一新種及其綠僵菌無性型〔J〕.真菌學(xué)報,1991;10(4):257-64.

    5秦紅兵,楊朝曄,范憶江,等.D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠模型的建立與評價〔J〕.中國組織工程研究與臨床康復(fù),2009;7(13):1275-8.

    6肖代敏.戴氏綠僵菌多糖的抗氧化功能及化學(xué)組成〔D〕.遵義:遵義醫(yī)學(xué)院,2010.

    7付潤芳,馮國清,呂文戈,等.高本底放射性飲水對小鼠免疫功能的影響〔J〕.河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,1998;9(4):189-91.

    8單穎,姜東,潘興瑜,等.玉竹多糖對衰老模型鼠免疫功能的影響〔J〕.中國老年醫(yī)學(xué)雜志,2007;27(1):20-2.

    9Ginali L,De Martinis M,D’ Ostilio A,etal.The immune system in the elderly〔J〕.Immunol Res,1999;20(2):101-8.

    〔2014-12-31修回〕

    (編輯趙慧玲/曹夢園)

    基金項目:貴州省科技廳基金(黔科合J字〔2009〕2148號);貴州省科技廳聯(lián)合基金(黔科合J字LKZ〔2011〕35號)

    通訊作者:張志敏(1979-),女,碩士,教授,主要從事分子生物學(xué)研究。

    〔中圖分類號〕R285.5

    〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A

    〔文章編號〕1005-9202(2016)11-2625-03;

    doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.026

    1遵義醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)教研室

    第一作者:肖代敏(1975-),男,碩士,副教授,主要從事藥用真菌與生化藥學(xué)研究。

    猜你喜歡
    衰老免疫功能半乳糖
    澤蘭多糖對D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用
    中成藥(2018年8期)2018-08-29 01:28:24
    黃芩-黃連藥對防治D-半乳糖癡呆小鼠的作用機制
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:11
    右美托咪定聯(lián)合舒芬太尼鎮(zhèn)靜對顱腦損傷患者免疫功能的影響
    全腸外營養(yǎng)對早產(chǎn)兒營養(yǎng)、免疫功能及行為發(fā)育的影響分析
    CT引導(dǎo)下射頻消融聯(lián)合靶向治療對中晚期非小細(xì)胞肺癌患者免疫功能的影響
    重度燒傷患者不同階段營養(yǎng)支持效果探討
    香煙煙霧提取物對外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞衰老的影響及其機制研究
    衰老與運動
    體育時空(2016年8期)2016-10-25 20:40:30
    物理學(xué)使“衰老”變得不可避免
    飛碟探索(2016年8期)2016-09-06 10:26:12
    亞精胺誘導(dǎo)自噬在衰老相關(guān)疾病中的作用
    科技視界(2016年11期)2016-05-23 08:10:09
    精品免费久久久久久久清纯| 日本与韩国留学比较| 日韩在线高清观看一区二区三区| 成人美女网站在线观看视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲精品456在线播放app| 午夜激情欧美在线| 国产日本99.免费观看| 国产精品精品国产色婷婷| 国产精品永久免费网站| 日韩精品中文字幕看吧| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 在线天堂最新版资源| 天天一区二区日本电影三级| av在线亚洲专区| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 赤兔流量卡办理| 十八禁国产超污无遮挡网站| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲精品456在线播放app| 少妇人妻精品综合一区二区 | 国产爱豆传媒在线观看| 国语自产精品视频在线第100页| 在线天堂最新版资源| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 精华霜和精华液先用哪个| 乱人视频在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美高清成人免费视频www| 国产精品综合久久久久久久免费| 国产av不卡久久| 午夜福利视频1000在线观看| 日韩大尺度精品在线看网址| 22中文网久久字幕| 久久久精品欧美日韩精品| 久久精品夜色国产| 亚洲性久久影院| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲内射少妇av| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲在线观看片| 亚洲电影在线观看av| 国产精品一及| 99在线视频只有这里精品首页| 精品久久久噜噜| 亚洲电影在线观看av| 久久久久久久久久黄片| 最近在线观看免费完整版| 亚洲在线观看片| 精品一区二区三区人妻视频| 久久久久久大精品| 少妇人妻精品综合一区二区 | 一个人看视频在线观看www免费| 免费看a级黄色片| 九色成人免费人妻av| 在现免费观看毛片| 麻豆一二三区av精品| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 久久久久久久午夜电影| 美女高潮的动态| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲精品在线观看二区| 国产黄色小视频在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 97碰自拍视频| 深爱激情五月婷婷| 亚洲久久久久久中文字幕| 日韩精品中文字幕看吧| 一进一出好大好爽视频| 1024手机看黄色片| 午夜日韩欧美国产| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲av一区综合| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲av二区三区四区| 久久99热这里只有精品18| 中国美女看黄片| 级片在线观看| 全区人妻精品视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 中文资源天堂在线| av在线蜜桃| 日本 av在线| 亚洲精品色激情综合| 成人特级av手机在线观看| 日本a在线网址| 精品久久久久久久末码| 欧美高清性xxxxhd video| 一个人看的www免费观看视频| 午夜a级毛片| 久久6这里有精品| 少妇熟女欧美另类| 免费黄网站久久成人精品| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产久久久一区二区三区| 免费人成在线观看视频色| 免费无遮挡裸体视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 无遮挡黄片免费观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 青春草视频在线免费观看| 亚洲在线观看片| 人人妻人人看人人澡| 国产色爽女视频免费观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 一本一本综合久久| 日韩高清综合在线| 精品无人区乱码1区二区| 国产精品久久电影中文字幕| 内射极品少妇av片p| 婷婷精品国产亚洲av在线| 我的女老师完整版在线观看| 我要搜黄色片| 成人性生交大片免费视频hd| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产视频一区二区在线看| 高清日韩中文字幕在线| 午夜福利在线观看吧| 给我免费播放毛片高清在线观看| 男插女下体视频免费在线播放| 极品教师在线视频| 天堂网av新在线| 婷婷精品国产亚洲av| av中文乱码字幕在线| 亚洲av.av天堂| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 观看美女的网站| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 日韩高清综合在线| 久久国内精品自在自线图片| 成人性生交大片免费视频hd| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲三级黄色毛片| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 成人永久免费在线观看视频| 色5月婷婷丁香| 婷婷亚洲欧美| 麻豆久久精品国产亚洲av| 最好的美女福利视频网| 少妇被粗大猛烈的视频| 天堂√8在线中文| 九九热线精品视视频播放| 我要搜黄色片| 综合色丁香网| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 内地一区二区视频在线| 亚洲av成人精品一区久久| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 在线国产一区二区在线| 久久精品91蜜桃| 国产三级中文精品| 国产伦精品一区二区三区视频9| www.色视频.com| av在线天堂中文字幕| 国产人妻一区二区三区在| 丝袜喷水一区| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲国产精品sss在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久九九热精品免费| 久久精品国产亚洲av天美| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 精品久久久久久久久久免费视频| 女同久久另类99精品国产91| 国内揄拍国产精品人妻在线| 观看美女的网站| 久久久久精品国产欧美久久久| 老熟妇仑乱视频hdxx| 69人妻影院| 久久人妻av系列| 久久欧美精品欧美久久欧美| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产精品国产高清国产av| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 99久国产av精品| 可以在线观看毛片的网站| 国产爱豆传媒在线观看| av在线播放精品| 麻豆乱淫一区二区| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | av在线播放精品| 久久久精品大字幕| 日日啪夜夜撸| 春色校园在线视频观看| 亚洲无线观看免费| 欧美精品国产亚洲| 精品久久久久久成人av| 波多野结衣高清无吗| 亚洲七黄色美女视频| 国产精品一区二区免费欧美| 日本 av在线| 亚洲人与动物交配视频| 在线观看66精品国产| a级毛片a级免费在线| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲精品一区av在线观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 午夜视频国产福利| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 亚洲无线在线观看| 国产单亲对白刺激| 成人高潮视频无遮挡免费网站| avwww免费| 欧美成人a在线观看| 日韩欧美国产在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 久久人人爽人人片av| 精品不卡国产一区二区三区| 最近中文字幕高清免费大全6| 黄色欧美视频在线观看| 免费av毛片视频| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产精品1区2区在线观看.| 国产一区二区激情短视频| 91精品国产九色| 成人av一区二区三区在线看| 在线观看66精品国产| 久久久久久国产a免费观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产精品一区二区免费欧美| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 热99re8久久精品国产| av天堂中文字幕网| 两个人视频免费观看高清| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 婷婷色综合大香蕉| 国产精品一区www在线观看| 亚洲av二区三区四区| 国产精品人妻久久久影院| 久久草成人影院| 一进一出抽搐gif免费好疼| 99国产精品一区二区蜜桃av| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久久午夜欧美精品| 一级毛片我不卡| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 一级av片app| 国产爱豆传媒在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲欧美日韩东京热| 九色成人免费人妻av| 亚洲国产精品久久男人天堂| av中文乱码字幕在线| 在现免费观看毛片| 婷婷精品国产亚洲av| 欧美一区二区亚洲| 麻豆一二三区av精品| 我的女老师完整版在线观看| 免费看av在线观看网站| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 久久人人爽人人片av| 国产亚洲精品av在线| 午夜福利高清视频| 日本爱情动作片www.在线观看 | 观看美女的网站| 99久久精品一区二区三区| 精品国产三级普通话版| 成年女人毛片免费观看观看9| 久久久久久九九精品二区国产| 99久久无色码亚洲精品果冻| 又黄又爽又免费观看的视频| 日本爱情动作片www.在线观看 | 免费看美女性在线毛片视频| 中文字幕久久专区| 国产高清视频在线观看网站| 男女那种视频在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 干丝袜人妻中文字幕| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国内精品宾馆在线| 亚洲中文字幕日韩| 日韩高清综合在线| av福利片在线观看| 国产成人a∨麻豆精品| 国产成人一区二区在线| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲在线观看片| 男人舔女人下体高潮全视频| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲美女黄片视频| 精品无人区乱码1区二区| 欧美三级亚洲精品| 午夜福利在线观看吧| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 综合色丁香网| 久久亚洲国产成人精品v| 有码 亚洲区| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 日韩精品有码人妻一区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲成人中文字幕在线播放| 成年女人毛片免费观看观看9| 欧美又色又爽又黄视频| 一进一出抽搐动态| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲成人av在线免费| 卡戴珊不雅视频在线播放| 青春草视频在线免费观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 久久久久性生活片| 在线观看av片永久免费下载| 在线免费十八禁| 日本-黄色视频高清免费观看| 69av精品久久久久久| 亚洲成av人片在线播放无| 国产精品一区二区三区四区久久| av黄色大香蕉| 香蕉av资源在线| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产三级中文精品| 熟女人妻精品中文字幕| 日本免费一区二区三区高清不卡| 简卡轻食公司| 两个人的视频大全免费| 国内精品宾馆在线| 亚洲欧美精品自产自拍| 最近手机中文字幕大全| 在线观看免费视频日本深夜| 俺也久久电影网| 白带黄色成豆腐渣| 卡戴珊不雅视频在线播放| 免费看光身美女| 国产精品精品国产色婷婷| 看片在线看免费视频| 五月玫瑰六月丁香| 啦啦啦韩国在线观看视频| 日韩三级伦理在线观看| 天堂网av新在线| 日韩三级伦理在线观看| 亚洲在线观看片| 我的女老师完整版在线观看| 国产大屁股一区二区在线视频| 男女下面进入的视频免费午夜| 女人被狂操c到高潮| 久久久午夜欧美精品| 少妇人妻精品综合一区二区 | 日本色播在线视频| 99久国产av精品| 日本色播在线视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 此物有八面人人有两片| 久久精品夜色国产| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| aaaaa片日本免费| 22中文网久久字幕| 午夜激情欧美在线| 午夜福利在线在线| 最新在线观看一区二区三区| 国产 一区精品| 欧美中文日本在线观看视频| 久久人人精品亚洲av| 午夜激情福利司机影院| 欧美+亚洲+日韩+国产| 午夜激情福利司机影院| 国产精品福利在线免费观看| 精品日产1卡2卡| 美女免费视频网站| 别揉我奶头 嗯啊视频| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 色av中文字幕| 99热网站在线观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 精品国内亚洲2022精品成人| a级毛片a级免费在线| 97超碰精品成人国产| 黄色视频,在线免费观看| 免费av观看视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产精品亚洲美女久久久| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产免费男女视频| 毛片一级片免费看久久久久| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲va在线va天堂va国产| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲成人久久爱视频| 欧美又色又爽又黄视频| 中出人妻视频一区二区| 日韩精品有码人妻一区| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 欧美精品国产亚洲| 18+在线观看网站| 我要看日韩黄色一级片| 看免费成人av毛片| 国产成人a∨麻豆精品| 一级黄色大片毛片| 免费看美女性在线毛片视频| 91在线观看av| 亚洲av熟女| 亚洲色图av天堂| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲电影在线观看av| 亚洲欧美日韩高清专用| 又粗又爽又猛毛片免费看| 韩国av在线不卡| 深夜a级毛片| 成年av动漫网址| 香蕉av资源在线| 免费黄网站久久成人精品| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲av美国av| 麻豆一二三区av精品| 国产成人福利小说| 亚洲在线自拍视频| 日本 av在线| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 悠悠久久av| 禁无遮挡网站| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 男女啪啪激烈高潮av片| 欧美中文日本在线观看视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国内精品久久久久精免费| 变态另类丝袜制服| 色5月婷婷丁香| 日韩av在线大香蕉| 在线天堂最新版资源| 亚洲国产色片| 亚洲成人精品中文字幕电影| 直男gayav资源| 精品乱码久久久久久99久播| av专区在线播放| 18禁在线播放成人免费| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 亚洲av二区三区四区| 亚洲欧美清纯卡通| 22中文网久久字幕| 91精品国产九色| 国产成人91sexporn| 国产成人a区在线观看| 久久久精品94久久精品| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 男插女下体视频免费在线播放| 午夜福利高清视频| 如何舔出高潮| 在线免费观看的www视频| a级一级毛片免费在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 日本一二三区视频观看| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲美女搞黄在线观看 | 91狼人影院| 99久久无色码亚洲精品果冻| av在线蜜桃| 99热这里只有是精品在线观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 成人午夜高清在线视频| 插逼视频在线观看| 美女 人体艺术 gogo| www日本黄色视频网| 午夜久久久久精精品| 少妇的逼好多水| 日韩成人伦理影院| 舔av片在线| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲无线在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲自偷自拍三级| 国产 一区 欧美 日韩| 在线观看一区二区三区| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲欧美日韩无卡精品| 韩国av在线不卡| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲中文字幕日韩| aaaaa片日本免费| 热99在线观看视频| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 偷拍熟女少妇极品色| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产人妻一区二区三区在| 成人三级黄色视频| 老女人水多毛片| 亚洲最大成人av| 国产黄片美女视频| 精品人妻熟女av久视频| 少妇丰满av| 中文字幕久久专区| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 秋霞在线观看毛片| 色综合亚洲欧美另类图片| 看片在线看免费视频| 亚洲av熟女| av在线蜜桃| 国产精品伦人一区二区| 亚洲自偷自拍三级| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国内精品宾馆在线| 国产 一区精品| 日本一本二区三区精品| 免费观看人在逋| 亚洲国产高清在线一区二区三| 欧美色欧美亚洲另类二区| 色综合亚洲欧美另类图片| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 日韩av在线大香蕉| 午夜福利高清视频| 内地一区二区视频在线| 97在线视频观看| 精品福利观看| 热99re8久久精品国产| 国产高清激情床上av| 国产激情偷乱视频一区二区| 男女视频在线观看网站免费| 又粗又爽又猛毛片免费看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 丰满乱子伦码专区| 亚洲专区国产一区二区| 最近的中文字幕免费完整| 在线观看一区二区三区| 免费一级毛片在线播放高清视频| av视频在线观看入口| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 老司机福利观看| 床上黄色一级片| 婷婷亚洲欧美| 最近2019中文字幕mv第一页| 精品国产三级普通话版| 看黄色毛片网站| 天天躁日日操中文字幕| 日韩人妻高清精品专区| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲最大成人av| 欧美区成人在线视频| 国产日本99.免费观看| 色吧在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 亚洲欧美日韩高清在线视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 身体一侧抽搐| 校园春色视频在线观看| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲成人av在线免费| 桃色一区二区三区在线观看| 日韩欧美三级三区| 免费看光身美女| av女优亚洲男人天堂| 精品国产三级普通话版| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产成人影院久久av| 国产真实伦视频高清在线观看| 日韩大尺度精品在线看网址| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 一级毛片久久久久久久久女| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 亚洲第一电影网av| 成人漫画全彩无遮挡| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲欧美精品综合久久99| 精品久久国产蜜桃| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲一区高清亚洲精品| 哪里可以看免费的av片| 99久久九九国产精品国产免费| 少妇人妻精品综合一区二区 | 国产精品精品国产色婷婷| 免费观看在线日韩| 国产精品伦人一区二区| 麻豆国产97在线/欧美| 在线观看66精品国产| 啦啦啦啦在线视频资源| 99在线人妻在线中文字幕| 色综合色国产| 午夜激情福利司机影院| 亚洲av美国av| 白带黄色成豆腐渣| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产精品人妻久久久影院| 99久久九九国产精品国产免费| 秋霞在线观看毛片| 国产一区亚洲一区在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲,欧美,日韩| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲av.av天堂| 天天一区二区日本电影三级| 最近的中文字幕免费完整| 日韩欧美三级三区| 色综合色国产| 夜夜夜夜夜久久久久| 哪里可以看免费的av片| 成人亚洲欧美一区二区av| 欧美丝袜亚洲另类| 久久久久久久久久黄片| 99久久九九国产精品国产免费| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲自偷自拍三级| 国产黄片美女视频| 免费看av在线观看网站| 久久精品综合一区二区三区|