• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    戴氏綠僵菌多糖對衰老小鼠免疫功能的影響

    2016-06-29 09:41:28肖代敏張志敏呂純莉易禎禛
    中國老年學(xué)雜志 2016年11期
    關(guān)鍵詞:衰老免疫功能半乳糖

    肖代敏 張志敏 呂純莉 曹 喻 易禎禛

    (遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗科,貴州 遵義 563099)

    戴氏綠僵菌多糖對衰老小鼠免疫功能的影響

    肖代敏張志敏1呂純莉曹喻易禎禛

    (遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗科,貴州遵義563099)

    〔摘要〕目的探討戴氏綠僵菌多糖對衰老模型小鼠免疫功能的影響。方法建立D-半乳糖誘導(dǎo)的亞急性衰老模型小鼠,同時灌胃不同劑量的戴氏綠僵菌多糖,6 w后,觀察模型小鼠體重變化,免疫器官(胸腺、脾臟)指數(shù),腹腔巨噬細(xì)胞吞噬及血清中IgG含量等免疫功能的影響。結(jié)果戴氏綠僵菌多糖能夠改善模型小鼠體重;3種不同劑量的多糖均能提高模型小鼠T淋巴細(xì)胞的增殖能力,高劑量蟲草多糖能提高B淋巴細(xì)胞增殖能力;同時能夠顯著提高小鼠脾臟、胸腺指數(shù)及腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力及顯著提高血清中IgG的含量。結(jié)論戴氏綠僵菌多糖可增強亞急性衰老模型小鼠的細(xì)胞和體液免疫功能。

    〔關(guān)鍵詞〕戴氏綠僵菌;多糖 D-半乳糖;衰老;免疫功能

    蟲草(Cordyceps)是一種特殊類型的藥用真菌,屬真菌門(Eulnycota),子囊菌亞門(Aseomyeotina),在生物醫(yī)藥領(lǐng)域具有重要應(yīng)用價值的真菌資源。我國蟲草資源分布是世界上最多最廣的國家。研究表明,蟲草及其發(fā)酵菌絲體具有抗腫瘤、抗氧化、抗突變、降血糖、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛等廣泛的藥理作用〔1~3〕,其中多糖是目前最具開發(fā)利用的活性成分之一。戴氏蟲草及其無性型-戴氏綠僵菌是由我國學(xué)者梁宗琦等在貴州省首次發(fā)現(xiàn)〔4〕。前期研究表明具有抗腫瘤、抗氧化及抗突變活性,作為新種的戴氏綠僵菌,其胞內(nèi)多糖的免疫調(diào)節(jié)活性研究還鮮見報道。衰老是由多方面因素造成的,本實驗以小劑量連續(xù)多次注射D-半乳糖誘導(dǎo)亞急性衰老模型〔5〕,并從衰老發(fā)生的免疫學(xué)角度探討戴氏綠僵菌多糖的抗衰老的免疫學(xué)活性。

    1材料與方法

    1.1藥品及器材蟲草多糖由本實驗室提取、分離,并經(jīng)紫外、紅外光譜、葡聚糖凝膠柱和GC-MS聯(lián)用儀分析鑒定〔6〕。全自動生化分析儀(日本,Olympus,AU2700);CO2培養(yǎng)箱、全自動酶標(biāo)儀、MTS細(xì)胞繁殖定量檢測試劑盒(上海杰美基因醫(yī)藥科技有限公司 GMS10043);EZ-SepTMMouse 1X 淋巴細(xì)胞分離液(深圳,達(dá)科為生物技術(shù)有限公司);刀豆蛋白(美國Sigma公司),脂多糖(LPS,美國Sigma公司),胎牛血清(杭州四季清生物公司);5%雞紅細(xì)胞混懸液(自制)。

    1.2樣品配制D-半乳糖:0.9%NS 200 ml、D半乳糖0.96 g、配制成4.8 mg/ml溶液。多糖溶液:按400 mg·kg·d劑量,灌胃0.5 ml/只計算(高劑量)。按200 mg·kg·d劑量,灌胃0.5 ml/只計算(中劑量)。按100 mg·kg·d劑量,灌胃0.5 ml/只計算(低劑量)。3種濃度的多糖液用生理鹽水配制,1次/w,4℃保存。

    1.3實驗動物SPF級昆明種小鼠,4~6周齡,18~22 g,雄性。由第三軍醫(yī)大學(xué)大平醫(yī)院動物中心提供。許可證號:scxk(渝)20070003。

    1.4實驗方法

    1.4.1動物分組及建模將小鼠隨機分為五組:空白組、模型組、多糖高劑量組、多糖中劑量組、多糖低劑量組,每組10只,適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w,除空白組外,其他每組每日頸部皮下注射D-半乳糖溶液120 mg·kg-1·d-1,空白組注射同劑量的生理鹽水,為期6 w,從注射第2周開始,多糖3個劑量組每日灌胃相應(yīng)劑量的多糖液進(jìn)行干預(yù),連續(xù)4 w。測定各生化指標(biāo)和計算脾臟、胸腺指數(shù)。并于開始灌胃前及灌胃后每隔3 d稱量1次各組小鼠體重。

    1.4.2小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力的實驗〔7〕模型建成后,小鼠處理前30 min注射5%雞紅細(xì)胞生理鹽水懸液0.8 ml,0.5 h后,用乙醚將老鼠麻醉至昏迷,摘除眼球取血于2 ml的EP管中,備用。頸椎脫臼處死,經(jīng)腹腔注射生理鹽水2 ml,吸出腹腔洗液0.5~1 ml,滴于載玻片上,于37℃孵化箱中溫孵30 min,然后用生理鹽水漂洗、晾干,用甲醛溶液固定,瑞氏染液染色5 min,用蒸餾水漂洗、晾干,在顯微鏡下鏡檢,計數(shù)。記錄100個巨噬細(xì)胞中吞噬了雞紅細(xì)胞的數(shù)量和吞有雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)目,并按下式求出巨噬細(xì)胞吞噬率及吞噬指數(shù):吞噬百分率(%)= 吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/計數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)× 100%。

    1.4.3小鼠脾臟、胸腺的稱量方法小鼠末次給藥24 h后,將小鼠頸椎脫臼處死,解剖小鼠,取其脾臟、胸腺,吸干表面血污,精密稱量,將稱量所得的質(zhì)量換算成各臟器對應(yīng)的指數(shù),脾臟(胸腺)指數(shù)=脾臟(胸腺)重量(mg)/體重(g)。

    1.4.4小鼠淋巴細(xì)胞增殖實驗斷頸處死小鼠,浸入75%的乙醇中浸泡5~10 min。在超凈臺中無菌取出小鼠脾臟。放入裝有5 ml EZ-SepTMMouse 1×淋巴細(xì)胞分離液的一次性平皿中。用鑷子固定尼龍網(wǎng),然后用注射器活塞輕輕研磨小鼠脾臟,使得分散的單細(xì)胞透過尼龍網(wǎng)(200目)進(jìn)入淋巴細(xì)胞分離液中。把懸有脾臟細(xì)胞的分離液立即轉(zhuǎn)移到離心管中,離心前再覆蓋上大約 200 μl的1640培養(yǎng)基。2 500 r/min離心30 min。吸出淋巴細(xì)胞層(培養(yǎng)基層下,分離液上),用10 mlPBS洗滌2 500 r/min離心10 min。傾倒上清液,加入1 ml完全1640懸液,計數(shù)調(diào)節(jié)制成1.0×107/ml的脾細(xì)胞懸液,細(xì)胞培養(yǎng)采用96孔培養(yǎng)板,每孔加入脾細(xì)胞懸液100 μl,平行3個復(fù)孔,然后加入使得孔最終濃度為5 μlg/ml的LPS和刀豆蛋白液10 μl,同時做不加刀豆蛋白和LPS的陰性對照孔(用10 μl 1640代替),空白對照只加完全1640,37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h,于培養(yǎng)結(jié)束前4 h加入MTS,每孔10 μl(按MTS使用說明書進(jìn)行),在490 nm處測OD值。

    1.4.5血清IgG的測定小鼠眼眶取血,離心取血清,用全自動生化分析儀對血清IgG含量進(jìn)行測定。

    1.5統(tǒng)計學(xué)方法組間比較行t檢驗。

    2結(jié)果

    2.1衰老模型小鼠體重變化在灌胃的前3 d,體重均有下降趨勢,尤其以高劑量組較為明顯,其原因可能是開始灌胃后,各組小鼠適應(yīng)性問題導(dǎo)致食欲減退,體重下降。之后各組小鼠體重均逐漸增加,但模型組小鼠體重增加的程度明顯低于其他各組。體重增長最快的是高劑量組。其他各組與空白組基本一致。見圖1。

    圖1 衰老模型各組小鼠體重隨時間變化

    2.2腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力實驗 模型組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力較低,給予不同劑量的多糖后,各組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬百分?jǐn)?shù)和吞噬指數(shù)均高于模型組,其中高劑量組與模型組比較有顯著差異(P<0.05)。見表1。

    表1 多糖對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響±s)

    與模型組比較:1)P<0.05,下表同

    2.3衰老模型各組脾臟和胸腺指數(shù)結(jié)果高劑量組和中劑量組脾臟指數(shù)顯著高于模型組(P<0.05)。其他兩組脾臟指數(shù)也較模型組高,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),其可能原因是樣本例數(shù)較少或者是實驗時間較短所致。除高劑量組和的中劑量組胸腺指數(shù)與模型組比較有顯著差異外(P<0.05),其余兩組均無顯著差異(P>0.05),但胸腺指數(shù)均較模型組高。見表2。

    表2 衰老模型各組小鼠脾臟、胸腺指數(shù)比較±s)

    2.4淋巴細(xì)胞增殖實驗3種不同劑量的多糖均能提高模型小鼠T淋巴細(xì)胞的增殖能力,呈梯度增加(P<0.05,P<0.01)。而對B淋巴細(xì)胞的影響,只有高劑量組與模型組相比有顯著差異(P<0.05),中劑量組和高劑量組無明顯影響。見表3。

    2.5血清IgG含量通過測定小鼠血清中IgG的含量,各多糖劑量組小鼠的血清IgG含量與模型組相比,其值表現(xiàn)出非常明顯的差異,隨劑量的增加含量呈梯度增加(P<0.05,P<0.01),見表3。

    表3 多糖對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖及

    與模型組比較:1)P<0.05,2)P<0.01

    3討論

    隨著年齡的增長,機體的免疫器官逐漸萎縮,免疫細(xì)胞及亞細(xì)胞因子降低,機體的免疫功能逐漸減弱,對外界病原體的抵抗能力明顯減弱〔8〕。隨著年齡的增長,免疫器官老化,感染性疾病、癌癥等發(fā)病率、死亡率逐漸增高。免疫衰老與個體壽命之間的聯(lián)系也得到了證據(jù)支持〔9〕。

    D-半乳糖致衰老模型是基于衰老的代謝學(xué)說而復(fù)制的一種衰老模型,具有與自然衰老相似的自由基代謝紊亂特征,其衰老反應(yīng)接近或相當(dāng)于自然衰老。本實驗建模成功,所測的實驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定、可靠。機體中的免疫系統(tǒng)是由免疫器官和免疫細(xì)胞組成,免疫器官有許多,如:胸腺、脾臟、肝臟等,這些免疫器官的重量,尤其是免疫器官的重量指數(shù)可比較客觀地反映機體免疫器官的發(fā)育情況,當(dāng)機體的免疫功能增強時,其重量有所增加。本研究中的高劑量多糖組和中劑量多糖組的小鼠的脾臟和胸腺重量較空白組都明顯增加,故戴氏綠僵菌多糖達(dá)到一定劑量就能夠?qū)μ悄虿⌒∈蟮拿庖吖δ苓M(jìn)行提高。

    本研究結(jié)果表明戴氏綠僵菌多糖能夠?qū)喖毙运ダ闲∈篌w重的保護及免疫器官的老化具有一定的緩解作用,且隨著劑量的增加而增加,并能明顯改善衰老模型小鼠T細(xì)胞和B細(xì)胞的增殖能力,增強其對外來抗原的反映性,提高模型小鼠血清中IgG含量,在一定程度上反映了機體體液免疫的調(diào)節(jié)能力。同時具有增強小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力,從而增強機體的細(xì)胞及體液免疫功能。但它增強衰老機體免疫功能發(fā)生的分子機制還有待于進(jìn)一步研究探討。

    4參考文獻(xiàn)

    1Xiao JH,Zhong JJ.Secondary metabolites from Cordyceps species and their antitumor activity studies 〔J〕.Recent Patents Biotechnol,2007;1(2):123-7.

    2Li SP,Zhang GH,Zeng Q,etal.Hypoglycemic activity of polysaccharide,with antioxidation,isolated from cultured Cordyceps mycelia 〔J〕.Phytomed,2006;13(6):428-33.

    3Xiao JH,Liang ZQ,Liu AY,etal.Immunosuppressive activity of polysaccharides from Cordye- ps gunnii mycelia in mice in vivo/vitro〔J〕.J Food Agric Environ,2004;2(3&4):69-74.

    4梁宗琦,劉愛英,劉杰麟.蟲草一新種及其綠僵菌無性型〔J〕.真菌學(xué)報,1991;10(4):257-64.

    5秦紅兵,楊朝曄,范憶江,等.D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠模型的建立與評價〔J〕.中國組織工程研究與臨床康復(fù),2009;7(13):1275-8.

    6肖代敏.戴氏綠僵菌多糖的抗氧化功能及化學(xué)組成〔D〕.遵義:遵義醫(yī)學(xué)院,2010.

    7付潤芳,馮國清,呂文戈,等.高本底放射性飲水對小鼠免疫功能的影響〔J〕.河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,1998;9(4):189-91.

    8單穎,姜東,潘興瑜,等.玉竹多糖對衰老模型鼠免疫功能的影響〔J〕.中國老年醫(yī)學(xué)雜志,2007;27(1):20-2.

    9Ginali L,De Martinis M,D’ Ostilio A,etal.The immune system in the elderly〔J〕.Immunol Res,1999;20(2):101-8.

    〔2014-12-31修回〕

    (編輯趙慧玲/曹夢園)

    基金項目:貴州省科技廳基金(黔科合J字〔2009〕2148號);貴州省科技廳聯(lián)合基金(黔科合J字LKZ〔2011〕35號)

    通訊作者:張志敏(1979-),女,碩士,教授,主要從事分子生物學(xué)研究。

    〔中圖分類號〕R285.5

    〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A

    〔文章編號〕1005-9202(2016)11-2625-03;

    doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.026

    1遵義醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)教研室

    第一作者:肖代敏(1975-),男,碩士,副教授,主要從事藥用真菌與生化藥學(xué)研究。

    猜你喜歡
    衰老免疫功能半乳糖
    澤蘭多糖對D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用
    中成藥(2018年8期)2018-08-29 01:28:24
    黃芩-黃連藥對防治D-半乳糖癡呆小鼠的作用機制
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:11
    右美托咪定聯(lián)合舒芬太尼鎮(zhèn)靜對顱腦損傷患者免疫功能的影響
    全腸外營養(yǎng)對早產(chǎn)兒營養(yǎng)、免疫功能及行為發(fā)育的影響分析
    CT引導(dǎo)下射頻消融聯(lián)合靶向治療對中晚期非小細(xì)胞肺癌患者免疫功能的影響
    重度燒傷患者不同階段營養(yǎng)支持效果探討
    香煙煙霧提取物對外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞衰老的影響及其機制研究
    衰老與運動
    體育時空(2016年8期)2016-10-25 20:40:30
    物理學(xué)使“衰老”變得不可避免
    飛碟探索(2016年8期)2016-09-06 10:26:12
    亞精胺誘導(dǎo)自噬在衰老相關(guān)疾病中的作用
    科技視界(2016年11期)2016-05-23 08:10:09
    亚洲精品第二区| 一个人免费看片子| 免费人妻精品一区二区三区视频| 涩涩av久久男人的天堂| 欧美一级a爱片免费观看看| 99精国产麻豆久久婷婷| 观看av在线不卡| a级毛片免费高清观看在线播放| 少妇的逼好多水| 国产精品免费大片| 在线观看免费高清a一片| 丝袜脚勾引网站| 韩国高清视频一区二区三区| 极品少妇高潮喷水抽搐| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲五月色婷婷综合| 精品一区二区三区视频在线| 91久久精品国产一区二区三区| 免费看光身美女| 国产在线一区二区三区精| 大香蕉97超碰在线| 午夜免费鲁丝| 久久久精品94久久精品| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲av男天堂| 亚洲熟女精品中文字幕| 午夜日本视频在线| 男女边摸边吃奶| 我的老师免费观看完整版| 精品久久久久久电影网| 丰满少妇做爰视频| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产成人精品福利久久| 又大又黄又爽视频免费| 一区二区三区四区激情视频| 免费观看无遮挡的男女| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产亚洲最大av| 777米奇影视久久| 亚洲欧洲国产日韩| 91精品三级在线观看| 乱人伦中国视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久精品久久精品一区二区三区| 久久久精品94久久精品| 亚洲综合色惰| 日本wwww免费看| 观看av在线不卡| 在线观看免费日韩欧美大片 | 国产成人免费无遮挡视频| 国产精品女同一区二区软件| 久久久精品区二区三区| 欧美人与善性xxx| 亚洲性久久影院| 国产精品一区www在线观看| 久久久午夜欧美精品| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 人妻人人澡人人爽人人| 精品少妇内射三级| 黄色怎么调成土黄色| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲av男天堂| 色婷婷av一区二区三区视频| 日韩中字成人| 精品久久久久久久久亚洲| 国产精品一国产av| 午夜福利网站1000一区二区三区| 91国产中文字幕| 波野结衣二区三区在线| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 波野结衣二区三区在线| 99精国产麻豆久久婷婷| 午夜免费观看性视频| 国产一级毛片在线| 美女内射精品一级片tv| 欧美少妇被猛烈插入视频| 777米奇影视久久| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲成人一二三区av| 在线观看www视频免费| 久久99热6这里只有精品| 99热这里只有是精品在线观看| 久久久久精品性色| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 永久免费av网站大全| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲国产精品国产精品| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 最近最新中文字幕免费大全7| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 97在线人人人人妻| 亚洲av日韩在线播放| 国产男人的电影天堂91| 51国产日韩欧美| 18+在线观看网站| 国产一区二区三区av在线| 最近中文字幕高清免费大全6| 中文字幕亚洲精品专区| 波野结衣二区三区在线| 国国产精品蜜臀av免费| 中文字幕亚洲精品专区| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 精品少妇黑人巨大在线播放| 日韩精品有码人妻一区| 美女国产高潮福利片在线看| 伦精品一区二区三区| 五月伊人婷婷丁香| 日韩亚洲欧美综合| 伦精品一区二区三区| 又大又黄又爽视频免费| 国产精品一区www在线观看| 国产不卡av网站在线观看| 日本与韩国留学比较| 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲不卡免费看| av.在线天堂| 久久久国产一区二区| 99热6这里只有精品| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 色吧在线观看| 九色亚洲精品在线播放| 高清视频免费观看一区二区| 最近最新中文字幕免费大全7| 久久久久网色| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 欧美bdsm另类| 精品一区二区三区视频在线| 久久鲁丝午夜福利片| 精品久久久久久电影网| 美女国产高潮福利片在线看| 岛国毛片在线播放| 大片电影免费在线观看免费| 飞空精品影院首页| 交换朋友夫妻互换小说| 国产黄片视频在线免费观看| 午夜影院在线不卡| 婷婷色麻豆天堂久久| 免费观看性生交大片5| 伊人久久国产一区二区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 一区二区三区免费毛片| av视频免费观看在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 女性被躁到高潮视频| kizo精华| 国产成人免费观看mmmm| 国产精品国产三级国产专区5o| 十八禁网站网址无遮挡| 国产男人的电影天堂91| 亚洲精品国产av蜜桃| 色网站视频免费| 高清av免费在线| 超碰97精品在线观看| 波野结衣二区三区在线| 久久影院123| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 午夜久久久在线观看| 妹子高潮喷水视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 丰满迷人的少妇在线观看| 高清毛片免费看| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 亚洲美女黄色视频免费看| 一区二区三区免费毛片| 日韩成人伦理影院| 大码成人一级视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 人人澡人人妻人| 高清在线视频一区二区三区| 国产黄频视频在线观看| 在现免费观看毛片| 久久久久久久久久久免费av| 中国国产av一级| 亚洲不卡免费看| 中文天堂在线官网| 日韩欧美精品免费久久| 国产一区二区三区综合在线观看 | 色婷婷久久久亚洲欧美| 九草在线视频观看| 国产视频首页在线观看| 高清毛片免费看| 久久久久久久久久久久大奶| 99久久综合免费| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 国产成人精品婷婷| av线在线观看网站| 国产精品无大码| 高清欧美精品videossex| 国产伦理片在线播放av一区| 欧美精品国产亚洲| 内地一区二区视频在线| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 久久午夜福利片| 日韩欧美一区视频在线观看| 久久久久久久久大av| 我的女老师完整版在线观看| 插阴视频在线观看视频| av在线老鸭窝| 国产免费一级a男人的天堂| 有码 亚洲区| 亚洲国产成人一精品久久久| videosex国产| 桃花免费在线播放| 亚洲高清免费不卡视频| 妹子高潮喷水视频| 亚洲无线观看免费| 美女大奶头黄色视频| 日韩av免费高清视频| 99久久精品国产国产毛片| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲人成77777在线视频| 看非洲黑人一级黄片| 婷婷色av中文字幕| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 免费看光身美女| 午夜av观看不卡| 亚洲情色 制服丝袜| 久久人人爽人人片av| 国产精品不卡视频一区二区| av播播在线观看一区| 男男h啪啪无遮挡| 国产成人午夜福利电影在线观看| 成人手机av| av国产精品久久久久影院| 中文字幕亚洲精品专区| 久久国产精品大桥未久av| 十分钟在线观看高清视频www| 一级毛片我不卡| 午夜福利,免费看| 女人精品久久久久毛片| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 日韩av不卡免费在线播放| 国产精品久久久久久av不卡| 精品视频人人做人人爽| 亚洲av.av天堂| 啦啦啦啦在线视频资源| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 精品少妇内射三级| 久久av网站| 一级片'在线观看视频| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲精品自拍成人| 下体分泌物呈黄色| 欧美xxⅹ黑人| 午夜福利影视在线免费观看| 国产免费现黄频在线看| 国产高清有码在线观看视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 精品久久久久久久久av| 免费少妇av软件| 少妇人妻 视频| 人妻系列 视频| 免费观看在线日韩| 成人无遮挡网站| 欧美+日韩+精品| 久久人人爽人人爽人人片va| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 3wmmmm亚洲av在线观看| 美女视频免费永久观看网站| 久久99精品国语久久久| 午夜激情福利司机影院| 边亲边吃奶的免费视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 黄色一级大片看看| 久久久久久久精品精品| 国产成人一区二区在线| av天堂久久9| 中文字幕久久专区| 久久久久视频综合| 久久久a久久爽久久v久久| 欧美bdsm另类| 欧美日韩亚洲高清精品| 全区人妻精品视频| 激情五月婷婷亚洲| 亚洲精品成人av观看孕妇| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 激情五月婷婷亚洲| 久久精品久久久久久久性| 黄色一级大片看看| 桃花免费在线播放| 欧美日韩av久久| 国产av一区二区精品久久| 日韩一本色道免费dvd| 夫妻午夜视频| 最近2019中文字幕mv第一页| 考比视频在线观看| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲,一卡二卡三卡| 中文字幕制服av| 亚洲人成77777在线视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 一区二区三区四区激情视频| 久久久久久久久久久丰满| 在线天堂最新版资源| 精品午夜福利在线看| 亚洲精品第二区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 午夜激情久久久久久久| 久久久精品区二区三区| 久久精品人人爽人人爽视色| 最近最新中文字幕免费大全7| a 毛片基地| 亚洲精品一二三| 国产精品一国产av| 天美传媒精品一区二区| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 成人亚洲欧美一区二区av| 最近最新中文字幕免费大全7| 日本欧美国产在线视频| 考比视频在线观看| 国产精品偷伦视频观看了| 日日爽夜夜爽网站| 老女人水多毛片| 欧美精品一区二区大全| 男女国产视频网站| 自线自在国产av| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国产男人的电影天堂91| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产女主播在线喷水免费视频网站| 成人影院久久| 久久精品久久久久久久性| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲欧洲国产日韩| 99久国产av精品国产电影| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 啦啦啦视频在线资源免费观看| 在线观看人妻少妇| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产高清有码在线观看视频| 日日啪夜夜爽| 午夜福利网站1000一区二区三区| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久久a久久爽久久v久久| 成人手机av| 国产乱来视频区| 最新的欧美精品一区二区| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲精品一区蜜桃| 女人精品久久久久毛片| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 大片电影免费在线观看免费| 久久这里有精品视频免费| 少妇的逼好多水| 久久狼人影院| 97在线视频观看| 午夜免费观看性视频| 国产精品免费大片| 国产又色又爽无遮挡免| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 少妇的逼水好多| 精品一区二区免费观看| av卡一久久| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产精品三级大全| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 日日爽夜夜爽网站| 欧美+日韩+精品| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲av成人精品一区久久| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产精品久久久久久久电影| 97在线视频观看| 18禁观看日本| 高清黄色对白视频在线免费看| xxxhd国产人妻xxx| av专区在线播放| 极品人妻少妇av视频| 久久人人爽人人片av| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲精品乱久久久久久| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 大片电影免费在线观看免费| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 久久99一区二区三区| 欧美性感艳星| 亚洲人成网站在线播| 久久免费观看电影| 亚洲国产最新在线播放| 久久精品国产亚洲av涩爱| 久久久国产一区二区| 超碰97精品在线观看| 插逼视频在线观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 好男人视频免费观看在线| 免费观看无遮挡的男女| 高清在线视频一区二区三区| a级毛片在线看网站| 国产综合精华液| 一个人免费看片子| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 秋霞在线观看毛片| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 午夜日本视频在线| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 少妇高潮的动态图| 一级毛片电影观看| 久久久a久久爽久久v久久| 婷婷色综合大香蕉| 一本一本综合久久| 国产男女超爽视频在线观看| 天堂8中文在线网| 亚洲精品国产av蜜桃| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | www.色视频.com| 最近的中文字幕免费完整| 欧美日韩综合久久久久久| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲美女搞黄在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 午夜福利视频精品| 亚洲,欧美,日韩| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 少妇人妻 视频| 三级国产精品片| 国产成人精品无人区| 午夜91福利影院| 日韩,欧美,国产一区二区三区| av一本久久久久| 久久狼人影院| 国产成人免费观看mmmm| 999精品在线视频| 国产精品国产三级专区第一集| 最后的刺客免费高清国语| av有码第一页| xxxhd国产人妻xxx| 国产av精品麻豆| 久久久久网色| 久久99蜜桃精品久久| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 99久久精品一区二区三区| 久久久久人妻精品一区果冻| 伦理电影大哥的女人| 婷婷色综合www| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲成人一二三区av| 日本wwww免费看| 天天影视国产精品| 18禁在线播放成人免费| 免费av不卡在线播放| 成年人午夜在线观看视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 97超视频在线观看视频| 在线播放无遮挡| 国产成人免费无遮挡视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 韩国av在线不卡| 26uuu在线亚洲综合色| 丝袜喷水一区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产男女超爽视频在线观看| 水蜜桃什么品种好| 少妇被粗大猛烈的视频| 日本欧美视频一区| 人人澡人人妻人| 老司机影院毛片| 下体分泌物呈黄色| 69精品国产乱码久久久| 亚洲欧美色中文字幕在线| 成人影院久久| 欧美最新免费一区二区三区| 九色亚洲精品在线播放| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产一区有黄有色的免费视频| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产成人a∨麻豆精品| 寂寞人妻少妇视频99o| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 少妇被粗大猛烈的视频| 成人综合一区亚洲| 久久久久久久精品精品| av.在线天堂| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 欧美一级a爱片免费观看看| 丰满迷人的少妇在线观看| 免费av不卡在线播放| 国产 精品1| av福利片在线| 亚洲三级黄色毛片| av国产精品久久久久影院| 久久人妻熟女aⅴ| 久久99热6这里只有精品| 极品人妻少妇av视频| 精品人妻在线不人妻| 国产黄片视频在线免费观看| 永久网站在线| 999精品在线视频| 各种免费的搞黄视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 人人妻人人澡人人看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 日本av手机在线免费观看| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 久久久久国产精品人妻一区二区| 搡女人真爽免费视频火全软件| h视频一区二区三区| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产精品久久久久久久电影| 99热全是精品| 国产成人免费观看mmmm| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产免费一区二区三区四区乱码| 久久久久久久久久久久大奶| 免费黄网站久久成人精品| 九色成人免费人妻av| 亚洲久久久国产精品| 一级毛片我不卡| 这个男人来自地球电影免费观看 | 亚洲欧洲日产国产| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 黄色视频在线播放观看不卡| 日韩伦理黄色片| 日本欧美视频一区| 国产综合精华液| 国产有黄有色有爽视频| 欧美丝袜亚洲另类| 亚洲国产欧美在线一区| 国产一区二区三区综合在线观看 | 日韩精品免费视频一区二区三区 | 国内精品宾馆在线| 国产精品无大码| 午夜福利视频在线观看免费| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 国产黄频视频在线观看| 超碰97精品在线观看| 免费观看a级毛片全部| 亚洲不卡免费看| 十分钟在线观看高清视频www| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲美女视频黄频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产在视频线精品| 欧美精品一区二区免费开放| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲,一卡二卡三卡| 22中文网久久字幕| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产成人91sexporn| 黄色欧美视频在线观看| 一级毛片电影观看| 伦理电影大哥的女人| 51国产日韩欧美| 成人国产麻豆网| 少妇精品久久久久久久| 国产精品免费大片| 国产成人精品福利久久| 久久精品夜色国产| 我的女老师完整版在线观看| 国产探花极品一区二区| 亚洲精品日本国产第一区| 久久久久精品久久久久真实原创| 欧美变态另类bdsm刘玥| 日韩欧美精品免费久久| 制服诱惑二区| 青春草视频在线免费观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 亚洲精品视频女| 国产日韩欧美亚洲二区| 日本av手机在线免费观看| 国产熟女欧美一区二区| 精品一区二区三区视频在线| 国产精品偷伦视频观看了| 十八禁高潮呻吟视频| 9色porny在线观看| 精品熟女少妇av免费看| 中文字幕免费在线视频6| 久久久精品94久久精品| 国产熟女欧美一区二区| 欧美日韩亚洲高清精品| 一级毛片电影观看| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 晚上一个人看的免费电影| 免费av中文字幕在线| 高清午夜精品一区二区三区| 久热久热在线精品观看| 黑人猛操日本美女一级片| 在线天堂最新版资源| 国产精品久久久久久久久免| 丰满乱子伦码专区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 最近手机中文字幕大全| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 三上悠亚av全集在线观看| 多毛熟女@视频| 九九在线视频观看精品| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 精品久久国产蜜桃| 插逼视频在线观看| 午夜精品国产一区二区电影| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | videossex国产| 午夜av观看不卡| 亚洲人成网站在线观看播放| 大香蕉97超碰在线| 一区二区av电影网|