山豆根中總黃酮的含量測(cè)定

鄒玉龍 張穎 徐丹 李海燕

【摘要】目的：測(cè)定山豆根中總黃酮的含量。方法： 采用超聲波提取法提取山豆根中的總黃酮，并以A1（ NO3） 3、NaNO2、及NaOH為顯色劑，蘆丁為對(duì)照品，分光光度法測(cè)定其含量。結(jié)果：山豆根中總黃酮含量為57mg/g 。結(jié)論：該方法可用于測(cè)定山豆根中的總黃酮。

【關(guān)鍵詞】山豆根；總黃酮；超聲波提取

【中圖分類號(hào)】R2841【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2016）09-0013-01

山豆根為豆科植物越南槐（Vietnamese sophora Root）的干燥根及根莖。山豆根味極苦，微有豆腥氣，具有清熱解毒，消腫止痛的功效，常用于咽喉牙齦腫痛、肺熱咳嗽煩渴、熱解便秘等癥。山豆根含有黃酮類、有機(jī)酸、植物色素、脂肪、水分及灰分等成分[1]，而黃酮類化合物具有心血管系統(tǒng)維護(hù)、抗菌及抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、抗炎、鎮(zhèn)痛、保肝等多種生物活性[2-4]。實(shí)驗(yàn)采用超聲波提取法提取山豆根中的總黃酮，以蘆丁為對(duì)照品，采用紫外可見分光光度法測(cè)定其總黃酮的含量。

1儀器與材料

1.1儀器RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；AS3120B超聲波清洗儀（北京卓川電子科技有限公司）；722-型分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）；BSA223S分析天平（上海賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

1. 2材料乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉均為分析純；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；山豆根為市售。

2方法與結(jié)果

2. 1樣品溶液的制備山豆根干燥后打粉過(guò)40目篩，精確稱取5.0000g于錐形瓶中，加入80ml 60%乙醇溶液，超聲提取60min，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，定容至250ml。

2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制精確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10mg，用60%的乙醇溶液定容至100ml容量瓶中，冷藏放置于冰箱。

2.3測(cè)定波長(zhǎng)的選擇取標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml ，置于25ml容量瓶中，加入0. 6ml5% NaNO2，搖勻，放置6 min后加入 1 ml 10 % A1（NO3）3 ，放置6 min，再加入10ml 4% NaOH溶液，混勻，用60%乙醇稀釋至刻度。同時(shí)作空白對(duì)照，15min后測(cè)定波長(zhǎng)420～700nm區(qū)段的吸光度，得知最大吸收在510 nm，因此選定波長(zhǎng)為510 nm 。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立分別取0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml標(biāo)準(zhǔn)溶液于25ml容量瓶中，各加入0.6ml 5% NaNO2，搖勻，放置6min后加入1ml 10% A1（NO3）3，放置6min，再加入10ml 4 % NaOH溶液，混勻，用60%乙醇稀釋至刻度，靜置15min，以試劑空白為參比于510nm處測(cè)其吸光度，以吸光度A縱坐標(biāo)，蘆丁的濃度c為橫坐標(biāo)，得到回歸方程： A=11.83c+0.0169（r=0.9994），表明樣品在4～20μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5精密度考察精密移取標(biāo)準(zhǔn)溶液5份1ml，按“2.4”測(cè)定其吸光度，RSD為0.82 %（n=5），說(shuō)明精密度良好。

2. 6重現(xiàn)性考察精密移取樣品溶液5份1ml，按“2.4”測(cè)定其吸光度， RSD為1.19%（n=5），說(shuō)明重現(xiàn)性良好。

2.7回收率實(shí)驗(yàn)移取已知總黃酮含量的樣品溶液1ml，加入標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“2.4”測(cè)定吸光度，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果平均回收率為101.26%，RSD為2.71%（n=5）。

2.8總黃酮含量測(cè)定準(zhǔn)確吸取樣品溶液1ml，共5份，測(cè)定樣品溶液中總黃酮的濃度為0.114 mg/ml，RSD為 0.15%（n=5），并通過(guò)計(jì)算得出山豆根中總黃酮含量為5.7mg/g 。

3討論

天然產(chǎn)物有效成分含量較低，難于富集，分離難度大，不同的提取方法對(duì)不同藥物有效成分的提取率存在差異。黃酮的主要提取方法有：溶劑法（水提法、堿性稀醇和堿性水提、有機(jī)溶劑提取法）、超聲波提取法 、微波提取法、酶解法、超臨界流體萃取法、雙水相萃取分離法。實(shí)驗(yàn)采用超聲波法提取總黃酮，利用分光光度計(jì)測(cè)定了總黃酮的含量，該工藝簡(jiǎn)單無(wú)污染、成本較低，是一條理想的提取黃酮的途徑。

參考文獻(xiàn)

[1] 王君明，崔瑛.山豆根化學(xué)成分、藥理作用及毒性研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（4）：229-232.

[2] 嚴(yán)振宇，張秋菊.黃酮類化合物提取分離方法簡(jiǎn)介[J].微量元素與健康研究，2012，29（3）：55-57.

[3] 沈廣志，郭強(qiáng)，何志鵬.分光光度法測(cè)定大棗中總黃酮含量[J].微量元素與健康研究，2011，28（4）：26-27.

[4] 李春華. 山豆根的研究進(jìn)展[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2012（19）：26.

（收稿日期：2016.03.16）