芯片技術(shù)在菌陰肺結(jié)核診斷中臨床應(yīng)用

謝良冬 王昱云 曾忠 王艷

芯片技術(shù)在菌陰肺結(jié)核診斷中臨床應(yīng)用

謝良冬 王昱云 曾忠 王艷

目的 探究芯片技術(shù)在菌陰肺結(jié)核診斷中的臨床價(jià)值。方法 選取肺結(jié)核患者90例作為本次的研究對(duì)象，按照隨機(jī)數(shù)字法分為2組，分別為觀察組和對(duì)照組，觀察組患者50例，對(duì)照組患者40例。觀察組采用芯片技術(shù)進(jìn)行診斷，對(duì)照組采用結(jié)核菌素純蛋白衍生物實(shí)驗(yàn)（PPD）進(jìn)行診斷，比較2組診斷方式的應(yīng)用價(jià)值。結(jié)果 經(jīng)過(guò)臨床診斷后，觀察組診斷方式的敏感性明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；比較2組診斷方式的特異性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；采用兩種方式聯(lián)合檢測(cè)出的陽(yáng)性者有79例，說(shuō)明其敏感性為87.8%，明顯高于單純采用蛋白芯片或PPD診斷的結(jié)果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 對(duì)菌陰肺結(jié)核患者采用結(jié)核蛋白芯片進(jìn)行檢測(cè)的臨床價(jià)值較高，與PDD檢測(cè)方式聯(lián)用可以明顯提高患者的陽(yáng)性檢出率，值得進(jìn)一步推廣并應(yīng)用。

菌陰肺結(jié)核；診斷；芯片技術(shù)

結(jié)核病是臨床上對(duì)患者威脅較大的一類感染性疾病，約有65%～75%的肺結(jié)核患者存在痰結(jié)核分枝桿菌涂片陰性肺結(jié)核，且該類病菌的培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)、陽(yáng)性率較低，臨床上多采用X線胸片、臨床癥狀[1]等作為檢測(cè)依據(jù)，診斷特異性不高，因此，對(duì)該類結(jié)核病的臨床治療較為困難。為了尋求更好的臨床診斷方法，本次研究對(duì)90例肺結(jié)核患者的臨床資料進(jìn)行了回顧性的分析，并對(duì)其中的50例患者采取芯片技術(shù)進(jìn)行臨床診斷，旨在探究該診斷技術(shù)在菌陰肺結(jié)核患者中的臨床應(yīng)用價(jià)值，并為疾病研究提供相關(guān)的參考依據(jù)，現(xiàn)將統(tǒng)計(jì)資料報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取贛州市第五人民醫(yī)院2013年5月～2014年12月呼吸科門診收治的肺結(jié)核患者90例作為本次的研究對(duì)象，所有患者均符合《肺結(jié)核診斷和治療指南》[2]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。按照隨機(jī)數(shù)字法分為2組，分別為觀察組和對(duì)照組，觀察組患者50例，對(duì)照組患者40例。觀察組患者男女比例為29∶21，年齡20～69歲，平均年齡（46.2±5.8）歲；對(duì)照組患者男女比例為24∶16，年齡19～68歲，平均年齡（45.6±5.2）歲。比較2組肺結(jié)核患者的性別、年齡、臨床癥狀等基本資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，2組之間的可比性良好。

1.2 臨床診斷方法 觀察組：采用結(jié)核蛋白芯片進(jìn)行臨床診斷。主要步驟為：取患者靜脈血，將血清進(jìn)行分離，并采用南京大淵生物技術(shù)工程有限公司生產(chǎn)[3]的結(jié)核芯片系統(tǒng)與蛋白芯片閱讀儀進(jìn)行操作，并根據(jù)生產(chǎn)廠家規(guī)定的參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判別，結(jié)核桿菌陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)：16Kd、LAM、38kD中的任意一項(xiàng)指標(biāo)[4]。

對(duì)照組：采用結(jié)核菌素純蛋白衍生物實(shí)驗(yàn)（PPD）進(jìn)行診斷，行PPD皮試，給予相應(yīng)規(guī)格的PPD稀釋液于患者皮內(nèi)注入，注入部位為患者左前臂下1/3掌側(cè)處[5]，注入劑量為0.1mL，注入后的72h左右檢測(cè)患者局部硬結(jié)，若其直徑在5mm以上則判定為陽(yáng)性。

1.3 臨床觀察指標(biāo) 觀察并比較兩種檢測(cè)方式的敏感性、特異性、陽(yáng)性檢出率等。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 將所有數(shù)據(jù)結(jié)果錄入到SPSS18.0軟件中，以95%作為可信區(qū)，錄入過(guò)程中確保真實(shí)客觀，計(jì)數(shù)資料用百分比、率表示，組間比較用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料用“x±s”表示，組間比較用t檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測(cè)方式的檢測(cè)結(jié)果分析 采用蛋白芯片檢測(cè)的敏感性與特異性分別為62.0%與87.5%，采用PPD檢測(cè)的敏感性與特異性分別為40.0%與85.0%，說(shuō)明觀察組診斷方式的敏感性明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；比較2組診斷方式的特異性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

表1 2組檢測(cè)方式的檢測(cè)結(jié)果分析（n）

2.2 分析結(jié)核蛋白芯片檢測(cè)方式中陽(yáng)性患者的各指標(biāo)所占百分比 抗體陽(yáng)性率中所占百分比最高的為抗38kD，占據(jù)29.0%，接下來(lái)為L(zhǎng)AM抗體，為19.4%，所占百分比最低的為抗16kD，為12.9%。見(jiàn)表2。

表2 分析結(jié)核蛋白芯片檢測(cè)方式中陽(yáng)性患者的各指標(biāo)所占百分比

2.3 比較兩種方式聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率 90例肺結(jié)核患者中，采用兩種方式聯(lián)合檢測(cè)出的陽(yáng)性者有79例，說(shuō)明其敏感性為87.8%，明顯高于單純采用蛋白芯片或PPD診斷的結(jié)果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

雖然痰涂片檢查是臨床上對(duì)肺結(jié)核疾病進(jìn)行確診的主要診斷方式，但是檢測(cè)方式的陽(yáng)性率約為25%～35%之間[6]，陽(yáng)性率較低，還存在大量的呈陰性涂片的可疑性肺結(jié)核病例需要進(jìn)行更為準(zhǔn)確的臨床診斷。所以說(shuō)，對(duì)菌陰性肺結(jié)核患者進(jìn)行科學(xué)有效的診斷是臨床較為重視的一類問(wèn)題。

近年來(lái)，蛋白質(zhì)芯片是蛋白質(zhì)組學(xué)臨床研究中的一類新型的研究方向，該芯片與基因芯片較為類似，主要檢測(cè)方法是將蛋白質(zhì)與固相物質(zhì)相結(jié)合，后與檢測(cè)組織（細(xì)胞）進(jìn)行“雜交”[7]，最后在自動(dòng)化儀器的檢測(cè)下得出結(jié)果。該項(xiàng)系統(tǒng)將微孔濾膜作為檢測(cè)載體，利用結(jié)核菌脂阿拉伯甘露糖、蛋白38kD、蛋白16kD等抗原體將其固相于同一張膜片中，根據(jù)微孔濾膜的濃縮、滲濾、凝集作用快速進(jìn)行抗原體反應(yīng)[8]，并直接在固相膜上顯色。將顯色后的芯片放置于閱讀儀中進(jìn)行分析，并采用專門的軟件得出檢測(cè)結(jié)果。本次中采用的結(jié)核蛋白芯片檢測(cè)技術(shù)可以對(duì)上述三種抗原體進(jìn)行同步檢測(cè)，并根據(jù)結(jié)核的感染情況進(jìn)行臨床診斷。

LAM是屬特異性抗原，其免疫原性較強(qiáng)，臨床檢測(cè)后的靈敏度較高，但是其他種類的分枝桿菌也同樣含有LAM成分，所以，其特異性較低。

本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用蛋白芯片診斷與PPD診斷的敏感性均較高，但是比較兩種檢測(cè)方式的特異性差異不大，且兩種檢測(cè)方式聯(lián)合診斷后可以較為準(zhǔn)確的對(duì)肺結(jié)核疑似人群進(jìn)行判定，其敏感性高達(dá)87.8%，明顯高于單純采用蛋白芯片或PPD診斷的結(jié)果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。除此之外，PPD檢測(cè)的費(fèi)用較低，但檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，約為72h，臨床測(cè)量時(shí)會(huì)產(chǎn)生一定的誤差，且檢測(cè)結(jié)果容易受到諸多因素的影響；而蛋白芯片檢測(cè)所需時(shí)間大大縮短，只需10分鐘便可檢測(cè)出結(jié)果，但是花費(fèi)較高。若兩者聯(lián)用可為菌陰性肺結(jié)核患者的臨床診斷與鑒別提供有效的參考意見(jiàn)[9]。其中結(jié)合蛋白芯片作為臨床上對(duì)肺結(jié)核診斷的一種新型的檢測(cè)方式，需經(jīng)過(guò)大量的臨床實(shí)驗(yàn)對(duì)其檢測(cè)價(jià)值進(jìn)行進(jìn)一步的研究與驗(yàn)證。

綜上所述，對(duì)菌陰肺結(jié)核患者采用結(jié)核蛋白芯片進(jìn)行檢測(cè)的臨床價(jià)值較高，與PDD檢測(cè)方式聯(lián)用可以明顯提高患者的陽(yáng)性檢出率，值得進(jìn)一步推廣并應(yīng)用。

[1] 白廣紅,李耀軍.結(jié)核生物蛋白芯片技術(shù)在結(jié)核病臨床診斷中的價(jià)值探討[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,32(5):597-599.

[2] 楊曉燕,呂紹敏,岳晨莉，等.結(jié)核桿菌蛋白芯片檢測(cè)對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志,2012,12(7):1564.

[3] 劉志輝,譚守勇,劉玉美，等.結(jié)核病患者與健康人血清蛋白質(zhì)譜的比較研究[J].國(guó)際結(jié)核病與肺部疾病雜志（中文版）,2012,1(3):159-162.

[4] 李衛(wèi)彬,李新旭,張彤群，等.基因芯片檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌異煙肼和利福平耐藥的實(shí)際應(yīng)用效果評(píng)價(jià)[J].中華臨床醫(yī)師雜志（電子版）,2012,6(16):4666-4670.

[5] 高純,翟菊萍,公艷蕾，等.微陣列酶聯(lián)免疫技術(shù)診斷肺結(jié)核的臨床應(yīng)用[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2012,39(17):4488-4490,4493.

[6] 姜洪斌,汪浩,姜格寧，等.超聲支氣管鏡引導(dǎo)下的經(jīng)支氣管針吸活檢術(shù)診斷菌陰肺結(jié)核[J].中華胸心血管外科雜志,2011,27(9):526-528.

[7] 遲晶宇,胡華,楊燕，等.菌陰肺結(jié)核患者血清SP-A檢測(cè)及其相關(guān)因素分析[J].山東醫(yī)藥,2011,51(31):7-9.

[8] 曾誼,馮梟,宋梅梅，等.酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)在菌陰肺結(jié)核診斷中的價(jià)值[J].中國(guó)防癆雜志,2012,34(2):100-102.

[9] 楊新婷,賈紅彥,李琦，等.全血γ干擾素釋放試驗(yàn)在菌陰肺結(jié)核中診斷價(jià)值的臨床觀察[J].中國(guó)臨床醫(yī)生,2013,41(3):42-45.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.29.039

江西 341000 贛州市第五人民醫(yī)院 （謝良冬 王昱云 曾忠 王艷）