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    丹參對于急性微循環(huán)障礙大鼠血管內(nèi)皮細胞的保護作用*

    2016-06-06 11:18:40王勝娟李朝玲
    陜西中醫(yī) 2016年4期
    關(guān)鍵詞:丹參肺泡內(nèi)皮

    陳 瑤 王勝娟 李朝玲 李 鋒

    第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院中醫(yī)科(西安 710032)

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    丹參對于急性微循環(huán)障礙大鼠血管內(nèi)皮細胞的保護作用*

    陳瑤王勝娟李朝玲李鋒△

    第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院中醫(yī)科(西安 710032)

    摘要目的:研究丹參對鹽酸腎上腺素及冰水刺激造成急性微循環(huán)障礙大鼠模型的保護作用及分子機制。方法: 用鹽酸腎上腺素皮下注射和冰水游泳刺激大鼠,使內(nèi)源性和外源性腎上腺素共同作用構(gòu)建大鼠急性微循環(huán)障礙模型。ELISA法檢測大鼠血清中血管內(nèi)皮素(ET-1)、P-選擇素(P-Selection)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)含量,HE染色法觀察肺病理形態(tài)學變化。結(jié)果: 病理形態(tài)學顯示丹參可以明顯改善大鼠微循環(huán)障礙及減輕肺部急性損傷,顯著減少ET-1、P-Selection、VEGF的含量。結(jié)論: 丹參可以改善由鹽酸腎上腺素及冰水刺激造成大鼠急性微循環(huán)障礙以及減輕肺損傷與通過保護內(nèi)皮細胞有關(guān)。

    主題詞丹參微循環(huán)障礙血管內(nèi)皮素 P-擇素動物,實驗大鼠

    臨床常見疾病可伴發(fā)有微循環(huán)障礙,其炎癥反應及血管內(nèi)皮損傷引起的微循環(huán)障礙已成為肺、肝 、心 、腎等器官功能障礙或結(jié)構(gòu)損傷的重要因素,繼而成為患者死亡的重要原因[1-2],急性微循環(huán)障礙發(fā)生后,組織細胞會發(fā)生多種病理變化,如缺血、缺氧等,其中微血管內(nèi)皮細胞(VEC)損傷,會改變血液成分與管壁間的關(guān)系,使白細胞、血小板等成分黏貼微血管壁[3],改變微血流狀態(tài)微血栓形成等一系列后果。對于微循環(huán)障礙缺乏特異有效藥物治療。丹參被稱為中國紅圣人,是唇形科的一員,作為傳統(tǒng)中藥已廣泛用于臨床并取得較好療效,丹參具有“養(yǎng)血活血、活血利水”功效,其有效水溶性成分丹參素與原兒茶醛,丹參素多分布于血液供應豐富的腎、肝、心、腦組織,丹參的藥理作用較為廣泛,具有利尿、抗炎與抗氧化、降壓、降低血黏度作用,實驗證明,丹參有增加微循環(huán)血流的作用,并能使流動緩慢或瘀滯的血細胞加速流動[4-5]。本文以待探討丹參改善微循環(huán)障礙的效應靶點和效應位點。

    1材料與方法

    1.1動物及實驗方法SD大鼠由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供。4周齡雄性,SPF級飼養(yǎng),共50只,體質(zhì)量(180±30) g,將50只SD大鼠隨機分為兩組,正常組10只,模型組40只,模型組采用腹部皮下注射 0 .1%鹽酸腎上腺素0.8 mL /kg。注射完2 h后將大鼠浸入準備好的0 ℃冰水中游泳5 min,連續(xù)7 d,觀察大鼠精神、毛發(fā)、舌質(zhì)顏色等基本狀態(tài),剃耳部毛在微循環(huán)儀器檢測耳部微小血管血液循環(huán)狀態(tài)確認微循環(huán)障礙即血瘀證模型造模成功。其中造模成功的有32只,將造模成功的大鼠隨機分為4組,每組8只,即模型組和丹參高、中、低劑量組,正常對照組:生理鹽水2 mL/(kg·d),模型組:生理鹽水2 mL/(kg·d),丹參低、中、高劑量組分別:0.54 g/(kg·d)、1.08 g/(kg·d)、2.16 g/(kg·d)。每日灌胃,連續(xù)7 d。

    本實驗經(jīng)過第四軍醫(yī)大學道德和倫理委員會批準,符合道德和倫理準則。

    1.2藥物丹參產(chǎn)自陜西商洛天士力丹參種植GAP基地產(chǎn)唇科植物丹參的根及根莖50kg,加90%乙醇回流1.5 h,濾過,濾液回收乙醇至稠膏;藥渣加水煎煮1h,濾過,濾液與上述稠膏合并,減壓濃縮濾液至相對密度1.20~1.25,噴霧干燥成粉,蒸餾水溶解,1 g/mL備用,1 g丹參提取0.6 g丹參提取物,提取率為60 %。鹽酸腎上腺素注射液由上海喬豐制藥有限公司提供。

    1.3標本采集與檢測給藥期滿后,予3%苯巴比妥鈉腹腔注射麻醉后取靜脈血,并取肺組織以備后續(xù)實驗進行。取左肺的一葉肺組織放入新配4%的多聚甲醛溶液中,石蠟包埋、切片、HE染色,并在光學顯微鏡下對肺組織病理學改變進行觀察并拍照;采用酶聯(lián)免疫吸附方法(ELISA檢測試劑盒,Elabscience)檢測ET-1、P-Selection、VEGF的含量評價血管內(nèi)皮細胞損傷的嚴重程度。

    2結(jié)果

    2.1肺組織形態(tài)學評價正常組肺組織結(jié)構(gòu)正常,肺泡可見肺泡囊結(jié)構(gòu)。與正常組相比較,模型組肺泡壁廣泛出現(xiàn)增厚,部分肺泡出現(xiàn)有擴張的現(xiàn)象、坍塌、萎縮,組織血管內(nèi)有淤血現(xiàn)象。丹參低劑量組與正常組相比較,肺泡壁廣泛出現(xiàn)增厚,肺泡間質(zhì)毛細血管擴張,部分肺泡出現(xiàn)坍塌、萎縮,見有炎性細胞灶性浸潤。丹參中劑量組與正常組相比較,肺泡壁廣泛出現(xiàn)增厚,部分肺泡擴張、坍塌、萎縮,未見有炎性細胞浸潤及毛細血管擴張充血和淤血。丹參高劑量組與正常組相比較,肺泡結(jié)構(gòu)正常,肺泡壁部分出現(xiàn)增厚,肺間質(zhì)無水腫(圖1)。

    2.2丹參對微循環(huán)障礙大鼠血清ET-1、P-Selection和VEGF含量的影響模型組與正常組比較,ET-1、P-Selection、VEGF含量表達明顯增高(P<0.05),具有統(tǒng)計學意義,與模型組比較丹參低、中、高劑量組各組血清ET-1表達量明顯降低(P<0.05)。與模型組比較丹參低劑量血清P-Selection、VEGF表達量未見明顯變化,丹參中、高劑量組均可減低P-Selection、VEGF的表達量,在丹參高劑量組中VEGF的表達量下降較其他組更為明顯(P<0.05)。(圖2-4)。

    3討論微循環(huán)對臟器血供與代謝保障、功能維持與協(xié)調(diào)至關(guān)重要。微循環(huán)不同程度地參與臟器特殊功能完成,VEC是構(gòu)成微血管管壁的基本成分之一,具有傳遞運輸、攝取吸附、合成、防栓以及再生功能,VEC結(jié)構(gòu)和功能的完整性是保證血液流動性和物質(zhì)順利進行的關(guān)鍵。小動脈、微動脈和毛細血管的結(jié)構(gòu)與功能改變是心血管等疾病形成靶器官損害的重要基礎(chǔ)。微循環(huán)障礙體現(xiàn)微血管病變、血液流動性改變與血流動力學異常,其中微循環(huán)障礙的內(nèi)皮細胞損傷可改變微血流狀態(tài),微血栓形成,使血液“粘稠”而呈現(xiàn)“血瘀證”證的病理表現(xiàn)。

    微循環(huán)既是控制循環(huán)阻力的主要場所,也是高血壓形成靶器官損害的主要靶點。由于微循環(huán)是高血壓病理生理機制的重要基礎(chǔ),故本實驗采用了鹽酸腎上腺素和冰水泳來復制了物理損傷血管內(nèi)皮的模型。同時研究也證明,血管內(nèi)皮功能障礙、血管結(jié)構(gòu)異常是原發(fā)性高血壓致病的主要因素,微循環(huán)障礙既是高血壓發(fā)病的原因也是結(jié)果[6]。本實驗中,造模成功后大鼠和未用藥模型組肺組織明顯損傷,可能與損傷肺部微循環(huán)系統(tǒng)的內(nèi)皮細胞有關(guān),而丹參處理后可以明顯減輕肺組織結(jié)構(gòu)的損傷,減輕肺部炎癥和瘀血情況,并且隨著劑量增加效果尤甚。ET-1主要由血管內(nèi)皮細胞合成,是一種炎癥因子,是目前發(fā)現(xiàn)的活性最強的內(nèi)源性血管收縮肽,有強烈收縮血管的作用[7],可以作為反映血管損傷程度的一項有力指標,ET-1隨著分泌增多而加重血管內(nèi)皮的損傷,在微循環(huán)障礙發(fā)展過程中非常重要[8];P - selection是黏附分子選擇素家族主要成員之一,是內(nèi)皮細胞和血小板活化的重要標志[9],參與機體炎癥反應及血栓形成等多種病理過程,的高表達反映血管內(nèi)皮細胞被激活或損傷[10-11]; VEGF對于肺臟的生長發(fā)育和正常生理功能的維持以及抗損傷修復具有重要作用,微循環(huán)障礙時內(nèi)皮細胞損傷分泌大量VEGF[12]。本實驗研究證實丹參可減少ET-1含量,調(diào)節(jié)血管舒縮平衡;丹參減少P-Selection的表達,減少炎癥介質(zhì)對內(nèi)皮細胞的黏附以及減少VEGF的表達,在減輕肺部炎癥細胞浸潤的同時可保護肺組織結(jié)構(gòu)完整性。

    活血化瘀利水藥物丹參除改善血液循環(huán)異常外,還可通過保護血管內(nèi)皮細胞改善微循環(huán)循環(huán)障礙來完成其活血化瘀作用。其“養(yǎng)血活血利水”功效體現(xiàn)于減輕VEC損傷,保護VEC并改善微血管功能,從保護微血管、改善微循環(huán)、治療急性肺損傷等角度提供了新的思路并揭示了丹參保護內(nèi)皮細胞可能是減輕急性肺損傷的機制之一,同時也為丹參的臨床應用奠定了理論基礎(chǔ)。

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    (收稿2015-10-17;修回2015-11-08)

    The protective effect of Salvia miltiorrhiza on the acute microcirculation disturbance mice vascular endothelial cells

    Xijing Hospital,Forth Military Medical University(Xi'an 710032)

    Chen YaoWang ShengjuanLi Chaolinget al

    ABSTRACTObjective: Research the protective effect and molecular mechanism of Salvia miltiorrhiza on the acute microcirculation disturbance mice, which caused by epinephrine hydrochloride and Ice water stimulation. Methods: With hydrochloride adrenaline subcutaneous injection to the mice and ice water swimming stimulation to the mice, mice acute microcirculation disturbance model can be built by Endogenous and exogenous adrenaline work together. The method of ELISA detected the content of ET-1. P-Selection and VEGF in the serum of mice. Lung tissue was stains with Hematoxylin-eosin to observe the Pathomorphology. Results: Pathomorphology showed that Salvia miltiorrhiza can improve microcirculation disturbance mice and relieve Acute lung injury obviously, and highly reduce the content of ET-1、P-Selection、VEGF. Conclusion:It has the connection with protecting the endothelial cells that salvia miltiorrhiza can improve the mice acute microcirculation disturbance and reduce lung injury, which caused by epinephrine hydrochloride and Ice water stimulation.

    KEY WORDSSalvia miltiorrhiza Microcirculation disturbance Endothelin P-SelectionVascular endothelial growth factorExperiments AnimalsRats

    【中圖分類號】R331.35

    【文獻標識碼】A

    doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.04.061

    *國家自然科學基金項目(81273622)

    △通訊作者

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