通脈舒絡合劑質量標準研究*

王林鳳　康　毅　魏國玲

陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院( 咸陽 712000)

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·方藥縱橫·

通脈舒絡合劑質量標準研究*

王林鳳康毅魏國玲

陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院( 咸陽 712000)

摘要目的：確立通脈舒絡合劑質量控制標準。方法：色譜柱：ThermoC18(250mmX4.6mm,5μm)；流動相：乙腈—0.1%磷酸溶液(14:86)；流速：1.0mL·min-1；柱溫：25℃；檢測波長：230nm；用薄層色譜法(TLC)對黃芪、赤芍、水蛭、當歸、川芎進行鑒別研究；用高效液相色譜法(HPLC)測定通脈舒絡合劑中芍藥苷濃度。結果：TLC和 HPLC中成分無干擾；芍藥苷濃度在0.246μg～1.32μg范圍內有良好線性關系(r=0.999 9)，平均回收率為100.5%，RSD=1.08%。結論：鑒別和含量測定方法可靠、結果準確、專屬性強，能有效控制通脈舒絡合劑質量。

主題詞通脈舒絡合劑芍藥苷色譜法，高壓液相

通脈舒絡合劑是國醫(yī)大師張學文教授治療腦病經驗方，由多味中藥經提取制成的純中藥制劑，具有益氣活血，化瘀通絡功效。該組方在二十世紀七十年代末被制成通脈舒絡輸液劑，應用于臨床，主治腦血栓形成，腦出血恢復期，療效確切。在原輸液劑處方基礎上加味制成了通脈舒絡合劑，運用于臨床，療效滿意，原質量標準只有性狀和檢查項。為更進一步控制其質量，保證療效，對黃芪、赤芍、水蛭、當歸、川芎進行了薄層鑒別研究；對赤芍中主要有效成分芍藥苷進行定量測定研究，建立了通脈舒絡合劑定性和定量標準，為其控制質量提供有效依據。

1材料

1.1儀器設備日本島津LC-2010AHT型高效液相色譜儀(四元泵)；SPD-10A(V)VP紫外檢測器；色譜柱ThermoC18(250mmX4.6mm,5μm)；KQ-3200E超聲清洗儀；METLER AE-240電子分析天平；PHS-3C型PH酸度計。

1.2對照藥材當歸、川芎、赤芍由中國藥品生物制品檢定所提供。

1.3對照品芍藥苷、黃芪甲苷由中國藥品生物制品檢定所提供。

1.4通脈舒絡合劑本院制劑室提供。

1.5試劑乙腈、甲醇為色譜純；水為注射用水；其它為分析純。

2方法

2.1性狀本品為棕褐色液體，氣微腥，味微苦、澀。

2.2檢查

2.2.1 pH值：在室溫下測定，pH值范圍為5.0～7.0 。

2.2.2相對密度：在室溫下測定，相對密度范圍為1.08～1.15 。

2.2.3其它：應符合合劑項下有關各項規(guī)定(《中國藥典》2010年版附錄ID)。

2.3定性鑒別

2.3.1 黃芪的鑒別：取本品30mL，先用水飽和的正丁醇提取3次(30mL/次)，3次正丁醇液合并；然后用氨試液洗2次(30mL/次)；再用正丁醇飽和的水洗滌2次(20mL/次)，蒸干，殘渣加甲醇1mL溶解，制成供試品溶液，并同法制成缺黃芪的溶液。取黃芪甲苷對照品10mg，置10 mL量瓶，用甲醇溶解并稀釋至刻度成為對照品溶液(1mg/mL)。依照薄層色譜法試驗依法操作，見圖1。

1-黃芪甲苷對照品；2、3、4-供試品；5-缺黃芪的陰性對照點樣量：5μL 展開劑：氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置12h以上的下層溶液顯色劑：10%硫酸乙醇溶液結果：陽性對照斑點清晰，陰性無干擾

圖1黃芪TLC圖譜

2.3.2赤芍鑒別:取本品30mL，加水飽和正丁醇萃取2次(20mL/次)，正丁醇用水洗滌2次(20mL/次)，水浴蒸干后用2mL甲醇溶解成供試品溶液，按上述方法制成缺赤芍的對照溶液。取赤芍對照藥材2.4g，用30mL乙醇，浸泡4h，超聲30min，濾液揮干，用甲醇1mL溶解成對照藥材溶液。另取芍藥苷10 mg，置10mL量瓶，用甲醇溶解并稀釋至刻度成對照品溶液(1mg/mL)。依照薄層色譜法試驗依法操作，見圖2。

1、2-供試品；3-赤芍藥材對照；4-芍藥苷對照品；5-缺赤芍的陰性對照點樣量：5μL展開劑：氯仿-乙酸乙酯-甲醇-濃氨溶液(8∶1∶4∶1)顯色劑：5%香草醛硫酸溶液結果：陽性對照斑點清晰，陰性無干擾

圖2赤芍TLC圖譜

2.3.3水蛭鑒別:取本品10mL，加乙醇20mL，超聲30min，過濾液為供試品溶液，按上述方法制成缺水蛭的溶液。取水蛭對照藥材1.0g，按上法制成對照藥材溶液。依照薄層色譜法操作，見圖3。

1-缺水蛭的陰性對照；2-水蛭藥材對照；3、4-供試品點樣量：5μL展開劑：環(huán)己烷-乙酸乙酯(4∶1)顯色劑： 10%的硫酸乙醇溶液結 果：陽性對照斑點清晰，陰性無干擾

圖3水蛭TLC圖譜

2.3.4川芎鑒別[1-2]：取本品30 mL，加乙醚萃取2次(30mL/次)，把乙醚液揮干后用1mL乙酸乙酯溶解成為供試品溶液，同法制成陰性對照溶液。另取川芎對照藥材1g，加乙醚15mL，浸漬4h以上，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗依法操作，見圖4。

1-川芎藥材對照； 2、3、4-供試品；5-缺川芎的陰性對照點樣量：2μL展開劑：石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(9∶1)檢 視：365nm紫外光燈下結 果：陽性對照斑點清晰，陰性無干擾

圖4川芎TLC圖譜

2.3.5 當歸薄層色譜鑒別：取本品30mL，加乙醚萃取2次(25mL/次)，乙醚液蒸干，殘渣加乙醇1mL溶解，制成供試品溶液，按照上述方法制成缺當歸的溶液。取1g當歸對照藥材，用15mL乙醚，超聲15min，依照上法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗依法操作，見圖5。

1、 2-供試品 3-當歸藥材對照 4-缺當歸的陰性對照點樣量：3μL展開劑：環(huán)己烷-乙酸乙酯(4∶1)檢 視：365nm紫外光燈下 結 果：陽性對照斑點清晰，陰性無干擾

圖5當歸TLC圖譜

2.4芍藥苷的含量測定

2.4.1 實驗條件流動相：乙腈—0.1%磷酸溶液(14:86)；流速：1.0mL·min-1；柱溫：25℃；檢測波長：230nm；測定量：10μL；理論板數應不低于3 000。

2.4.2 芍藥苷對照品溶液制備:取芍藥苷對照品66.0 mg，置20 mL量瓶中，加20%甲醇溶解定溶至刻度，再精取1mL置5 0mL量瓶中定溶至刻度制成對照品溶液，即得。

2.4.3 樣品溶液的制備：精取樣品10mL，置有塞子的錐形瓶中，精加50mL甲醇，蓋塞，稱重量，然后超聲20min，取出放冷，再稱定其重量，用稀釋劑補足減少的重量，搖勻后過濾，精取續(xù)濾液10mL，水浴蒸干后用20%甲醇定溶至10mL，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.4.4 陰性溶液制備：精密量取缺赤芍的制劑10mL，按樣品溶液制備方法制得缺赤芍的對照溶液。

2.4.5 分析方法：分別取芍藥苷對照品、樣品和陰性對照溶液，過濾，進樣分析，記錄色譜圖6、7、8。

通過在以上上述色譜條件下實驗，缺赤芍的對照溶液對芍藥苷成分的測定無干擾。

2.4.6 線性考察：吸取芍藥苷對照品溶液進樣，依次進樣4μL，8μL，10μL，12μL，16μL，20μL，測峰面積，以峰面積(A)對濃度(C)進行線性回歸，得方程A=2 124 361.8C+38 609.71(r=0.999 9)。表明樣品溶液在0.264μg～1.32μg范圍內線性關系良好。

2.4.7 精密度考察：吸取對照品溶液連續(xù)進樣6次，測其峰面積,得RSD為1.07%，顯示精密度良好。

2.4.8 穩(wěn)定性考察：取供試品溶液，分別在0，4，6，8，12，16h測定,RSD為0.38%，表明供試品溶液在16h內穩(wěn)定性較好。

2.4.9 回收率試驗：精密量取已知濃度樣品9份，每份1mL，將9分樣品分成3組，每組加入芍藥苷對照品溶液分別為1mL、2mL、3mL，測定回收率，見表1。

表1　芍藥苷加樣回收率測定結果(n=9)

2.4.10 樣品含量：取各批號樣品按“2.4.1”項下條件測定，計算芍藥苷含量。批號20140521,20140522,20140523分別為0.35mg·mL-1, 0.36mg·mL-1,0.34mg·mL-1。

3討論

3.1本品是一個中藥復方制劑，藥味多，化學成分復雜，影響鑒別干擾因素多，要想得到理想的色譜圖譜，需要經過前處理才能實現。本研究通過多次實驗，對方中黃芪、赤芍、水蛭、當歸、川芎得到了較好薄層鑒別；考慮到當歸、川芎含有相同化學成分，為能在一塊板上同時進行展開，曾實驗多種提取方法和展開劑，如石油醚(30～60℃)-三氯甲烷-三乙胺(6∶2∶0.5)[3]、

苯-冰醋酸-甲醇(30∶1∶3)[4]等均未能達到理想效果。

3.2在當歸藥材薄層色譜鑒別時，分別用了正己烷-乙酸乙酯(9∶1)[5]、環(huán)己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，兩者均能分離出清晰斑點，鑒于正己烷比環(huán)己烷毒性大，對人體危害嚴重，故用環(huán)己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑。

3.3在質量濃度測定實驗中，本想測定黃芪甲苷、芍藥苷，但由于黃芪甲苷屬四環(huán)三萜類皂苷，在紫外區(qū)201nm波長處有弱的末端吸收。用UV-HPLC法干擾大，ELSD-HPLC比較適合之，而我們實驗條件達不到，只能測定后者的有效成分作為定量指標。

3.4經3批樣品中芍藥苷測定，芍藥苷濃度在0.34 mg·mL-1～0.36mg·mL-1，考慮到實際生產中通脈舒絡合劑藥材來源，以及提取純化過程、儲藏環(huán)境等因素影響，故暫定本品：每1mL含芍藥苷不得少于0.30mg。

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(收稿2015-11-13；修回2015-12-16)

【中圖分類號】R285.6

【文獻標識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7369.2016.04.055

*陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院科研基金項目(2014-27)