畜禽產(chǎn)品獸藥殘留的免疫學(xué)檢測(cè)方法探討

蘇茂

摘 要 隨著人們對(duì)畜禽產(chǎn)品獸藥殘留問(wèn)題的日益重視，獸藥殘留檢測(cè)方法逐漸增多。介紹畜禽產(chǎn)品中獸藥殘留的主要免疫學(xué)檢測(cè)方法，包括酶聯(lián)免疫法、膠體金檢測(cè)技術(shù)、熒光定量檢測(cè)、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)、放射免疫分析法及生物芯片檢測(cè)技術(shù)，對(duì)每種方法特點(diǎn)及應(yīng)用現(xiàn)狀做一簡(jiǎn)介。希望為獸藥殘留檢測(cè)的深入研究提供一些參考。

關(guān)鍵詞 畜禽產(chǎn)品；獸藥殘留；免疫學(xué)檢測(cè)方法

中圖分類號(hào)：S859.84 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號(hào)：1673-890X（2016）12--02

獸藥是畜禽生成中必不可少的一部分，能夠降低發(fā)病及死亡率，提高養(yǎng)殖效益。但隨著獸藥種類及數(shù)量的持續(xù)上升，獸藥濫用現(xiàn)象日趨嚴(yán)重。獸藥在畜禽體內(nèi)持續(xù)積累造成了獸藥殘留，殘留超標(biāo)會(huì)使消費(fèi)人群中毒、過(guò)敏等；同時(shí)，也會(huì)引起耐藥性、生態(tài)環(huán)境毒性等其他問(wèn)題[1]。近年來(lái)，因獸藥殘留問(wèn)題導(dǎo)致的食品安全信任危機(jī)逐步加劇，使之成為制約畜牧業(yè)發(fā)展的重要因素。獸藥殘留的控制離不開檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的制定及檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)以抗原抗體的結(jié)合為基礎(chǔ)，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、篩選速度快、操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)。隨著免疫學(xué)技術(shù)的日趨完善，免疫學(xué)檢測(cè)方法在眾多獸藥殘留檢測(cè)手段中脫穎而出，其應(yīng)用越來(lái)越廣泛。本文就近年來(lái)用于獸藥殘留的免疫學(xué)手段做一簡(jiǎn)要綜述，以期為獸藥殘留檢測(cè)提供參考。

1 酶聯(lián)免疫測(cè)定法（ELISA）

ELISA方法是一種將抗原-抗體特異性反應(yīng)與酶高效催化反應(yīng)相結(jié)合的檢測(cè)方法，是酶免疫測(cè)定法中應(yīng)用最廣的一種方法，具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、批量檢測(cè)等優(yōu)勢(shì)。檢測(cè)時(shí)首先將抗原或抗體吸附于固相載體表面，后加入待測(cè)抗體或抗原，再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，最后通過(guò)底物顯色生成有色物質(zhì)，根據(jù)吸光值對(duì)樣品進(jìn)行定性及定量分析。該方法對(duì)動(dòng)物產(chǎn)品中的磺胺類、四環(huán)素類、己烯雌酚、苯巴比妥、氯霉素和黃曲霉素等獸藥殘留具有高靈敏度及準(zhǔn)確度[2]。自ELISA方法首次用于獸藥殘留檢測(cè)至今幾乎所有常用獸藥均建立了酶聯(lián)免疫檢測(cè)系統(tǒng)，大部分已應(yīng)用于獸藥殘留的快速檢測(cè)中。

2 膠體金免疫層析測(cè)定法（CGIA）

膠體金法將膠體金顆粒作為標(biāo)記物，通過(guò)金標(biāo)顆粒顏色的直觀讀取，定量定性的顯示檢測(cè)結(jié)果。該方法具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、快速有效和成本低廉等特點(diǎn)。膠體金法將抗原或抗體以條帶狀預(yù)先固定于條狀纖維層析材料上，金標(biāo)抗體（單抗或多抗）固定于樣本墊上，樣品加入后在毛細(xì)作用推動(dòng)下于層析試紙中泳動(dòng)，與樣本墊上金標(biāo)抗體發(fā)生免疫反應(yīng)，形成聚合物。當(dāng)聚合物移動(dòng)至預(yù)固定條帶時(shí)被截留，聚集于條帶處而呈色[3]。膠體金法用于定性檢測(cè)時(shí)不需儀器可直觀讀取且試紙條攜帶方便，因此該方法適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。目前已有多種試紙條經(jīng)農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)投入使用，應(yīng)用于獸藥殘留檢測(cè)。

3 熒光免疫測(cè)定法（FIA）

熒光免疫法是在抗原-抗體結(jié)合原理基礎(chǔ)上使用熒光物質(zhì)作為標(biāo)記及檢測(cè)依據(jù)的一種方法。熒光物質(zhì)的選擇是該方法的重點(diǎn)，也是限制其發(fā)展的主要因素。傳統(tǒng)熒光物質(zhì)干擾大、靈敏度低。時(shí)間分辨熒光免疫法、量子點(diǎn)熒光免疫法及熒光偏振免疫測(cè)定法等的出現(xiàn)使得FIA的靈敏度得到大幅提升，從而在獸藥殘留分析中得以迅速發(fā)展。FIA主要的優(yōu)勢(shì)是可進(jìn)行全自動(dòng)大批量檢測(cè)[4]，相信在獸藥殘留檢測(cè)中具有很好的推廣前景。

4 化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法

化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法包括兩個(gè)部分，以抗原-抗體結(jié)合為基礎(chǔ)的免疫反應(yīng)部分和以化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)為基礎(chǔ)的分析部分。該方法具有靈敏度高、特異性好、可全自動(dòng)檢測(cè)、有效期長(zhǎng)且無(wú)輻射等優(yōu)點(diǎn)[5]。研究顯示，化學(xué)發(fā)光法與ELISA檢測(cè)法符合率極高。目前，化學(xué)發(fā)光法已成為獸藥殘留免疫學(xué)檢測(cè)的一個(gè)重要發(fā)展方向，未來(lái)可能取代放射免疫和ELISA。

5 放射免疫測(cè)定法

放射性免疫測(cè)定法是用同位素標(biāo)記的抗原以及機(jī)體中抗原共同與抗體發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性的免疫反應(yīng)的原理，根據(jù)競(jìng)爭(zhēng)效應(yīng)的強(qiáng)弱程度來(lái)判斷抗原的含量。這種方法具有成本低，操作簡(jiǎn)便，耗時(shí)較短等的特點(diǎn)，非常適合大量樣本的檢測(cè)鑒定。但這種測(cè)定試劑盒在制備及使用過(guò)程中會(huì)對(duì)環(huán)境造成一定的污染[6]，危害著人及動(dòng)物的健康；同時(shí)還存在放射性試劑壽命較短的問(wèn)題，因此，逐漸被非放射性測(cè)定方法所取代。

6 生物芯片檢測(cè)

生物芯片技術(shù)的原理是將蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子密集有序的固定于經(jīng)特殊處理的基片表面，然后與標(biāo)記的樣本進(jìn)行雜交，然后洗去未結(jié)合的目標(biāo)分子，使用特定的儀器對(duì)結(jié)果信號(hào)進(jìn)行掃描讀取，通過(guò)抗原抗體的親和原理以及核酸序列的互補(bǔ)親和原理來(lái)判斷檢測(cè)結(jié)果，達(dá)到檢測(cè)的目的[7]。這種方法具有高效，高通量等其他方法所沒(méi)有的優(yōu)勢(shì)。近年來(lái)，我國(guó)生物芯片技術(shù)領(lǐng)域取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步，生物芯片技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于獸藥殘留的檢測(cè)，并具有越來(lái)越廣的應(yīng)用前景。

7 結(jié)語(yǔ)

畜禽產(chǎn)品中獸藥殘留問(wèn)題與人民群眾健康息息相關(guān)，控制獸藥殘留、保證食品安全是一項(xiàng)持久而艱巨的任務(wù)。近些年獸藥殘留的免疫學(xué)檢測(cè)手段獲得了快速發(fā)展，在眾多免疫方法中脫穎而出。免疫學(xué)檢測(cè)方法具有操作簡(jiǎn)單快速、高通量、準(zhǔn)確和靈敏度高等優(yōu)勢(shì)，適合基層工作者現(xiàn)場(chǎng)篩查使用。隨著獸藥總類的增多、藥物結(jié)構(gòu)的日益復(fù)雜，多組分同時(shí)、快速檢測(cè)將成為未來(lái)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)。相信通過(guò)不斷改進(jìn)及應(yīng)用，免疫學(xué)檢測(cè)手段將具有更廣闊的應(yīng)用前景，成為獸藥殘留檢測(cè)的主要方法。

參考文獻(xiàn)

[1]岳振峰.食品中獸藥殘留檢測(cè)指南[M].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010.

[2]徐偉，程鳳科，孟銀，等.酶聯(lián)免疫吸附法在獸藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用[J].中國(guó)家禽，2013，35（12）：49-52.

[3]薛曉，榮霞，葉自霞，等.膠體金免疫層析法在畜禽產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，34（12）：179-182.

[4]李麗華，白瑞櫻，孫遠(yuǎn)明，等.環(huán)丙沙星時(shí)間分辨熒光免疫分析方法的建立與應(yīng)用[J].食品科學(xué)，2012，33（8）：216-220.

[5]馬玲，韋建興，陸忠礎(chǔ)，等.磺胺二甲嘧啶間競(jìng)爭(zhēng)化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法的建立及應(yīng)用[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2014，26（5）：455-460.

[6]江秀紅.獸藥殘留的快速檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[A].中國(guó)獸藥大會(huì)暨中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物藥品學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)[C].2008：386-388.

[7]程景，李英杰，張易，等.畜禽產(chǎn)品中獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2009（10）：8-9.

（責(zé)任編輯：劉昀）