液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)技術(shù)在胸水診斷中的應(yīng)用

聶贛娟 雷戰(zhàn)平

[摘要] 目的 探討液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)技術(shù)在胸水診斷和鑒別診斷中的意義。 方法 隨機(jī)收集該院2010年1月—2014年12月肺腺癌和反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞胸水病例各30例，通過(guò)液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)制片，免疫細(xì)胞化學(xué)染色，檢測(cè)胸水細(xì)胞中細(xì)胞角蛋白-7、甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1、間皮細(xì)胞蛋白、鈣結(jié)合蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果 肺腺癌和反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞胸水中4種抗體的表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其敏感性分別為93.3%、83.3%、83.3%、86.7%，特異性分別為90%、100%、93.3%、90%。結(jié)論 液基細(xì)胞學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)技術(shù)的聯(lián)合使用對(duì)胸水中肺腺癌和反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞診斷和鑒別診斷具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

[Abstract] Objective To discuss the significance of liquid based cytology combined with immunocytochemical technique in diagnosis and differentiation of hydrothorax. Methods 30 cases of patients with lung adenocarcinoma and 30 cases of patients with reactive hyperplasia mesothelial cell？hydrothorax treated from January 2010 to December 2014 were collected， the expression of cytokeratin -7， thyroid transcription factor-1， mesothelial cell？protein and calcium binding protein was detected by liquid based cytology preparation technique and imunocytochemical stain. Results The difference in the expression of four kinds of antibodies in the lung adenocarcinoma and reactive hyperplasia mesothelial cell hydrothorax was statistically significant， the sensitivity was respectively 93.3%， 83.3%， 83.3% and 86.7%， and the specificity was respectively 90%， 100%， 93.3% and 90%. Conclusion The combined application of liquid based cytology combined with immunocytochemical technique is of important clinical application value to the diagnosis and differentiation of lung adenocarcinoma and reactive hyperplasia？mesothelial cell in hydrothorax.

[Key words] Hydrothorax； Liquid based cytology； Immunocytochemical

胸水是肺部病變常見(jiàn)的并發(fā)癥，脫落細(xì)胞學(xué)檢查是判斷胸水良惡性最簡(jiǎn)單易行的檢測(cè)方法。常規(guī)胸水涂片中細(xì)胞少、分布不均勻、背景不清晰，增生的間皮細(xì)胞和腺癌細(xì)胞有時(shí)難以鑒別[1]。與傳統(tǒng)的脫落細(xì)胞學(xué)涂片檢查相比，液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)在標(biāo)本保存、制片、染色和診斷等方面都有顯著優(yōu)勢(shì)，是提高標(biāo)本檢測(cè)準(zhǔn)確率和檢出率的一種新技術(shù)[2]。該研究隨機(jī)收集該院2010年1月—2014年12月臨床送檢的肺腺癌和反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞胸水病例各30例，通過(guò)聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)技術(shù)，檢測(cè)甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1（TTF-1）、細(xì)胞角蛋白-7（CK7）和間皮細(xì)胞蛋白 （MC）、鈣結(jié)合蛋白（CR）在胸水細(xì)胞中的表達(dá)，探討其在胸水細(xì)胞學(xué)診斷和鑒別診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)收集該院2010年1月—2014年12月臨床送檢的肺腺癌和反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞胸水病例各30例，其中肺腺癌胸水病例男性13例，女性17例，平均年齡（53.7±14.441）歲，反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞胸水病例男性14例，女性16例，平均年齡（46.2.±10.829）歲。所選病例診斷依據(jù)臨床資料、影像學(xué)檢查及病理組織學(xué)結(jié)果。

1.2 儀器

低速離心機(jī)（SC3612 安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）、調(diào)速多用振蕩器（HY-2 常州市華普達(dá)教學(xué)儀器有限公司）、液基自動(dòng)染色機(jī)（Tib AutoPrep1800泰普生物科學(xué)有限公司）、光學(xué)顯微鏡（Olympus BX41）。

1.3 試劑

液基細(xì)胞學(xué)試劑由泰普生物科學(xué)有限公司提供，免疫細(xì)胞化學(xué)抗體（TTF-1、CK7、CR、MC）、S-P超敏試劑盒（鼠/兔）、DAB顯色試劑盒由福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司提供。

1.4 方法

1.4.1 液基細(xì)胞學(xué)制片 臨床送檢的新鮮胸水標(biāo)本取50 mL，離心機(jī)2 000 r/min離心5 min，去上清，加入細(xì)胞保存液，靜置5 min。取離心靜置后的標(biāo)本進(jìn)行過(guò)濾處理，去除血液、蛋白液、細(xì)胞碎片等成分。加入梯度離心液進(jìn)行梯度離心，去上清、震蕩，使離心管底部沉積的細(xì)胞處于懸浮狀態(tài)。將處理好的標(biāo)本放入液基自動(dòng)染色機(jī)中進(jìn)行染色。

1.4.2 疫細(xì)胞化學(xué)染色 將剩余的胸水標(biāo)本離心過(guò)濾制成細(xì)胞懸浮液（處理過(guò)程同上）。將處理好的標(biāo)本移入染色槽中沉降 10 min。倒出剩余的標(biāo)本，經(jīng)過(guò)固定、沖洗、風(fēng)干處理后用于免疫細(xì)胞化學(xué)染色。免疫細(xì)胞化學(xué)步驟按S-P超敏試劑盒及DAB顯色試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

1.5 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

由兩名病理醫(yī)師閱片鏡檢進(jìn)行結(jié)果判定。陽(yáng)性表達(dá)為著色定位準(zhǔn)確并呈明顯棕黃色或棕褐色顆粒。CK7陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞膜著色；TTF-1陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞核著色；MC陽(yáng)性表達(dá)為腫瘤細(xì)胞漿或間皮細(xì)胞的胞膜著色；CR陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)著色。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料采用n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，以 P <0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 液基細(xì)胞學(xué)鏡檢

腺癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征為：細(xì)胞緊密排列呈腺腔樣、乳頭狀、團(tuán)狀，三維立體結(jié)構(gòu)明顯。細(xì)胞核大、深染，染色質(zhì)粗，核仁明顯，核膜厚，核漿比大。胞漿內(nèi)可見(jiàn)粘液性空泡，核偏位呈印戒樣。反應(yīng)性增生的間皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征為：細(xì)胞單個(gè)散在或成片排列，平鋪狀，無(wú)明顯的三維立體結(jié)構(gòu)，部分細(xì)胞核大、深染，可見(jiàn)1～2個(gè)核仁，但胞漿豐富，染色質(zhì)細(xì)膩。

2.2 免疫細(xì)胞化學(xué)

CK7、TTF-1 、MC、CR在胸水腺癌細(xì)胞和反應(yīng)性增生的間皮細(xì)胞表達(dá)陽(yáng)性結(jié)果見(jiàn)表1。

3 討論

液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)是近年來(lái)出現(xiàn)的一種新的細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)，在臨床婦科和非婦科細(xì)胞學(xué)檢查中都得到了廣泛應(yīng)用。與傳統(tǒng)的胸水細(xì)胞涂片方法相比其優(yōu)勢(shì)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：（1）制片 自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化程度高，減少了手工操作的誤差。細(xì)胞分布均勻，厚薄一致，不易掉片。去除了紅細(xì)胞和蛋白等的干擾，使背景清楚，細(xì)胞學(xué)形態(tài)清晰可見(jiàn)，三維立體效果明顯易于診斷[3]。（2）診斷 細(xì)胞集中沉降于直徑15 mm的面積中，縮減了鏡檢范圍，減少閱片時(shí)間，使誤診率和漏診率大大降低，提高了診斷的準(zhǔn)確性和可靠性[4]。（3）鑒別診斷 保存了細(xì)胞抗原的生物特性，對(duì)細(xì)胞免疫化學(xué)檢測(cè)無(wú)影響，兩者聯(lián)合可用于胸水細(xì)胞學(xué)的鑒別診斷。

增生的間皮細(xì)胞和腺癌細(xì)胞受到胸水的刺激會(huì)發(fā)生形態(tài)學(xué)上的改變，因而單純使用細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒別兩者有時(shí)會(huì)存在一些診斷困難[5]。免疫細(xì)胞化學(xué)染色是胸水細(xì)胞學(xué)診斷的重要手段，液基細(xì)胞學(xué)與免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)技術(shù)聯(lián)合使用有助于提高胸水的診斷率。CK7是分子量為54 Kda的細(xì)胞角蛋白，常表達(dá)于卵巢、肺、乳腺的上皮細(xì)胞質(zhì)中，可作為肺腺癌分化的客觀指標(biāo)[6-7]。侯興華等[8]研究報(bào)道CK7在胸水診斷中的靈敏性為85.7%，特異性為96%。TTF-1是分子量為38～40 Kda的核蛋白，在甲狀腺上皮、胎兒肺組織和成人Ⅱ型肺泡上皮中存在，除外甲狀腺來(lái)源的腫瘤后可作為肺腺癌較為特異的腫瘤標(biāo)記物[9-10]。Ng WK等[11]研究報(bào)道TTF-1在胸水診斷中的靈敏性為88.2%，特異性為100%， Ye J等[12]研究顯示TTF-1在胸水中表達(dá)的靈敏性為80%，特異性為100%。該研究中CK7和TTF-1在胸水腺癌細(xì)胞診斷中的靈敏性分別為93.3、83.3%%，特異性分別為90%、100%，與研究結(jié)果較為相符。MC是一種酸性氨基多聚糖蛋白，陽(yáng)性表達(dá)部位為腫瘤細(xì)胞漿或間皮細(xì)胞的胞膜著色，在鑒別腺癌及間皮細(xì)胞中具有較好的靈敏性和特異性[13-14]。崔彬等[15]研究結(jié)果顯示MC在間皮細(xì)胞中表達(dá)的靈敏性為91.3%，特異性為95.2%。CR是一種相對(duì)分子質(zhì)量為29 Kda的鈣結(jié)合蛋白，是鑒別胸水非腫瘤性間皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞較好的標(biāo)記物[16]。研究顯示[17-19]，CR在間皮細(xì)胞中表達(dá)的靈敏性為81.6%～100%，特異性87.2%～97.1%。該研究中MC和CR在胸水增生的間皮細(xì)胞診斷中的靈敏性分別為83.3%、86.7%，特異性分別為93.3%、90%，與文獻(xiàn)研究結(jié)果較為一致。單個(gè)抗體對(duì)不同腫瘤的特異性和敏感性不同，該文聯(lián)合使用TTF-1、CK7、MC、CR四種免疫組化染色指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的方法，對(duì)增生的間皮細(xì)胞和腺癌細(xì)胞進(jìn)行診斷和鑒別診斷，相互補(bǔ)充，能有效地提高診斷的靈敏度和特異度。

胸腔積液良惡性的診斷和鑒別診斷對(duì)于疾病的診斷、治療和預(yù)后具有重要意義。該文聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)兩種方法對(duì)胸水進(jìn)行檢測(cè)，顯著提高了胸水細(xì)胞學(xué)檢查的制片質(zhì)量和診斷能力，細(xì)胞形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)結(jié)合為胸水腺癌和增生的間皮細(xì)胞診斷和鑒別診斷奠定了良好的基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2015-12-08）