• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    針刺預(yù)處理對大鼠小腦浦肯野細(xì)胞缺血性損傷的影響

    2016-05-11 08:25:49趙士弟
    關(guān)鍵詞:超氧化物歧化酶百會穴丙二醛

    黃 麗,王 春,趙士弟

    ?

    針刺預(yù)處理對大鼠小腦浦肯野細(xì)胞缺血性損傷的影響

    黃麗1,王春2,趙士弟1

    [摘要]目的:研究針刺預(yù)處理百會穴+雙側(cè)足三里穴對腦缺血誘導(dǎo)的大鼠小腦浦肯野細(xì)胞損傷的影響。方法:將雄性SD大鼠30只隨機(jī)分為正常對照組、針刺百會穴+雙側(cè)足三里穴組(針刺穴位組)和針刺非穴位組,各10只。采用糖氧剝奪的腦缺血模型,觀察針刺預(yù)處理治療后大鼠小腦浦肯野細(xì)胞的存活率,檢測小腦組織中丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。結(jié)果:與正常對照組比較,針刺非穴位組大鼠腦缺血后浦肯野細(xì)胞死亡率明顯增加,MDA水平明顯增高,SOD活性明顯降低(P<0.01) ;與針刺非穴位組比較,針刺穴位組大鼠小腦浦肯野細(xì)胞存活率明顯增加,小腦組織中MDA含量明顯降低,SOD活性明顯增加(P<0.01)。結(jié)論:針刺百會穴+雙側(cè)足三里穴對大鼠小腦浦肯野細(xì)胞缺血性損傷具有一定的保護(hù)作用,其機(jī)制可能與小腦組織中活性氧的生成減少和清除增加有關(guān)。

    [關(guān)鍵詞]腦缺血;百會穴;足三里穴;浦肯野細(xì)胞;丙二醛;超氧化物歧化酶;大鼠

    [作者單位]1.蚌埠醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室,安徽蚌埠233030; 2.蚌埠醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科,安徽蚌埠233040

    缺血性腦血管疾病(ischemic cerebrovascular disease,ICVD)是嚴(yán)重危害人類健康的常見病和多發(fā)病。臨床上采取的很多治療措施如應(yīng)用谷氨酸受體阻斷劑、低溫療法等,雖然有一定的神經(jīng)保護(hù)作用,但均不能完全改善由腦缺血導(dǎo)致的共濟(jì)失調(diào)和震顫等癥狀[1]。小腦性共濟(jì)失調(diào)和震顫與浦肯野細(xì)胞密切相關(guān)[2-3]。臨床研究[4-5]表明,針刺療法在治療ICVD方面發(fā)揮著越來越重要的作用。針刺預(yù)處理是指在腦缺血前給予針刺,從而對缺血后的腦組織產(chǎn)生保護(hù)作用的現(xiàn)象。研究[6-7]表明,針刺預(yù)處理可以明顯地改善腦血液循環(huán),增加腦血流量,減輕腦細(xì)胞水腫,但其具體機(jī)制尚未完全明確。本實驗采用糖氧剝奪(oxygen-glucose deprivation,OGD)的腦缺血模型,觀察針刺預(yù)處理百會穴+雙側(cè)足三里穴對大鼠小腦浦肯野細(xì)胞存活率、小腦組織中丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影響,從自由基的角度探討針刺預(yù)處理對大鼠小腦浦肯野細(xì)胞缺血性損傷的保護(hù)機(jī)制,為改善ICVD患者的預(yù)后提供一定的實驗和理論參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1實驗動物雄性SD大鼠30只,由安徽醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供,體質(zhì)量(240±10) g,實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)觀察1周。

    1.2試劑與設(shè)備MDA、SOD測定試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。NaCl、KCl、NaH2PO4、CaCl2、MgSO4、dextrose、HEPES、KOH、EGTA、Mg2 +-ATP、Tris-GTP、葡萄糖酸鉀、NaOH均為Sigma公司產(chǎn)品; 95% O2和5% CO2購自合肥巨網(wǎng)氣體有限公司;振蕩切片機(jī)(美國VIBRATOME公司)。

    1.3溶液配制[8]人工腦脊液A組成(mmol/L) : 124 NaCl,3 KCl,1.3 NaH2PO4,26 NaHCO3,10 dextrose,5 HEPES,0.5 CaCl2和4 MgSO4; pH 7.35~7.45(1 mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH)。人工腦脊液B組成(mmol/L) : 124 NaCl,3 KCl,1.3 NaH2PO4,26 NaHCO3,10 dextrose,5 HEPES,2.4 CaCl2和1.3 MgSO4,pH 7.35~7.45 (1 mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH)。

    1.4腦片制備大鼠腹腔注射20 g/L戊巴比妥0.1 mL麻醉,斷頭取出小腦,在充分氧合(通95% O2和5% CO2混合氣體)的冰水混合的人工腦脊液A中將小腦蚓部制備成400 μm腦片,然后迅速轉(zhuǎn)移至充分氧合的人工腦脊液B,在31°C條件下孵育[8]。

    1.5體外OGD腦缺血模型制備[9-10]將大鼠小腦腦片轉(zhuǎn)移至無氧(通95% N2和5% CO2混合氣體)無糖的人工腦脊液B培養(yǎng)液中培養(yǎng)0.5 h模擬缺血,制備OGD腦缺血模型。

    1.6實驗分組30只大鼠隨機(jī)分為正常對照組、針刺百會穴+雙側(cè)足三里穴組(針刺穴位組)和針刺非穴位組各10只。

    1.6.1正常對照組未作針刺預(yù)處理的大鼠。腦片以充分氧合的人工腦脊液B培養(yǎng)2 h。

    1.6.2針刺穴位組針刺部位選擇百會穴和足三里穴[11]。大鼠于適應(yīng)性飼養(yǎng)觀察1周后給予針刺預(yù)處理。兩人配合操作,一人抓取活體大鼠以固定,另一人以0.25 mm×25 mm毫針向百會穴平刺約3 mm,同時用0.25 mm×40 mm毫針向雙側(cè)足三里穴直刺約5 mm,每天2次,間歇5 min捻轉(zhuǎn)1次,每次持續(xù)30 min,連續(xù)刺激7 d后大鼠被斷頭取腦,制備成腦片。腦片先以充分氧合的人工腦脊液B培養(yǎng)1.5 h,再轉(zhuǎn)移至OGD液培養(yǎng)0.5 h。

    1.6.3針刺非穴位組針刺部位選擇頭部與腿部的各1個非穴位點。針刺方法、持續(xù)時間、腦片處理與針刺穴位組一致。

    1.7檢測指標(biāo)

    1.7.1形態(tài)學(xué)指標(biāo)缺血后的腦片置于4 %甲醛溶液中4℃保存24 h,常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋,取腦片內(nèi)部組織做病理切片(距邊緣約100 μm組織以排除在腦片制備中直接受損的區(qū)域),并進(jìn)行蘇木精-伊紅(HE)染色,檢測浦肯野細(xì)胞存活率(即其未受損細(xì)胞百分比)。有下列特征之一則視為受損:細(xì)胞腫脹、空泡化或細(xì)胞固縮核深染[12]。腦片的每個區(qū)域至少有50個浦肯野細(xì)胞被計數(shù)或3個區(qū)域總計數(shù)>150個[9]。

    1.7.2生化檢測MDA含量及SOD活性取上述實驗各組大鼠小腦組織,勻漿后按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

    1.8統(tǒng)計學(xué)方法采用方差分析和q檢驗。

    2 結(jié)果

    2.1針刺百會穴+雙側(cè)足三里穴對小腦浦肯野細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響正常對照組小腦浦肯野細(xì)胞胞膜清晰完整,無腫脹,無變性壞死,核仁清晰;針刺非穴位組可見浦肯野細(xì)胞及膠質(zhì)細(xì)胞腫脹、變性壞死,細(xì)胞核固縮,細(xì)胞體皺縮變形,間質(zhì)水腫明顯;而針刺穴位組細(xì)胞損傷則較針刺非穴位組明顯減輕,僅有輕度水腫,細(xì)胞膜完整清晰,核仁明顯(見圖1~3)。2.2 3組大鼠小腦浦肯野細(xì)胞存活率、小腦組織中MDA和SOD活性比較與正常對照組比較,針刺非穴位組大鼠腦缺血后浦肯野細(xì)胞的存活率明顯降低(P<0.01) ;與針刺非穴位組比較,針刺穴位組浦肯野細(xì)胞的存活率明顯增加(P<0.01) ;與正常對照組比較,針刺非穴位組大鼠腦缺血后可使小腦組織中MDA水平明顯增高,SOD活性明顯降低(P<0.01) ;與針刺非穴位組比較,針刺穴位組大鼠小腦組織中MDA含量明顯降低,SOD活性明顯增加(P<0.01) (見表1)。

    表1 3組大鼠小腦浦肯野細(xì)胞存活率和小腦組織中MDA及SOD活性比較(±s)

    表1 3組大鼠小腦浦肯野細(xì)胞存活率和小腦組織中MDA及SOD活性比較(±s)

    q檢驗:與正常對照組比較**P<0.01;與針刺非穴位組比較▲▲P<0.01

    分組 n  細(xì)胞存活率/% MDA/ (mmol/100 mg prot) SOD/ (U/mg prot)正常對照組10  83.89±4.51  3.64±0.29  38.21±3.04針刺非穴位組 10  37.20±3.24** 6.28±0.34** 21.57±2.05**針刺穴位組 10  64.14±3.60**▲▲ 3.87±0.40▲▲ 33.05±2.60**▲▲F  — 376.25 178.35 107.73 P  — ?。?.01  <0.01 ?。?.01 MS組內(nèi)  —14.599 0.120 6.735

    3 討論

    ICVD是危害人類健康的常見病和多發(fā)病,具有發(fā)病率高、致殘率高和死亡率高的特點,給社會和家庭帶來極大的負(fù)擔(dān),其預(yù)防與治療一直是醫(yī)學(xué)界的重要課題之一。目前對于ICVD臨床上尚無十分有效的方法。近年來國外[13]研究的焦點集中在盡早恢復(fù)和改善缺血腦組織的血供以及保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的功能等方面。

    自1990年KITAGWA等[14]提出腦缺血預(yù)處理的概念以來,缺血預(yù)處理理論得到了學(xué)者的廣泛關(guān)注。缺血預(yù)處理可以通過激發(fā)機(jī)體自身的機(jī)制減輕一次或多次腦缺血所產(chǎn)生的損傷。近年來的研究[15]表明,缺血、缺氧、亞低溫甚至某些藥物均可作為預(yù)處理的手段,誘導(dǎo)腦缺血耐受的發(fā)生。但是由于大多數(shù)預(yù)處理手段的損傷性較大,因此決定了它們只能作為機(jī)制探討的手段而無法作為一種腦缺血前的預(yù)防措施直接應(yīng)用于臨床。針刺療法作為中醫(yī)學(xué)的重要組成部分之一,在古代就有了防止腦中風(fēng)的相關(guān)記載。中醫(yī)針刺療法具有相對安全、損傷小和操作簡單方便等優(yōu)點。近年研究[4-5]表明,中醫(yī)針刺療法在治療ICVD方面發(fā)揮著越來越重要的作用。因此,研究針刺預(yù)處理特定穴位對增加腦細(xì)胞對缺血的耐受機(jī)制可能具有非常重要的臨床應(yīng)用價值。

    本實驗以百會、足三里為針刺預(yù)處理用穴。百會穴位居顛頂,其深處即為腦,且為督脈經(jīng)穴,督脈也歸屬于腦,可見百會穴與腦聯(lián)系密切,是調(diào)節(jié)大腦功能的重要穴位。足三里穴位是“足陽明胃經(jīng)”的主要穴位之一,有學(xué)者[6-7]研究證實,針刺足三里穴可以促進(jìn)腦細(xì)胞功能的恢復(fù),提高神經(jīng)細(xì)胞的工作能力。因此,本實驗針刺預(yù)處理的主穴選擇百會穴和雙側(cè)足三里穴。實驗采用OGD的缺血模型,通過移除培養(yǎng)液中的葡萄糖和氧氣模擬腦缺血,其實驗結(jié)果類似在體動物模型,并可選擇特定類型的細(xì)胞進(jìn)行研究,是神經(jīng)科學(xué)研究中常用的腦缺血實驗?zāi)P停?-10]。

    研究[15]表明,細(xì)胞內(nèi)自由基損害是腦缺血損傷的重要發(fā)病機(jī)制之一。本實驗通過觀察針刺百會穴+雙側(cè)足三里穴對大鼠小腦浦肯野細(xì)胞存活率、小腦組織中MDA的含量和SOD活性的影響,從自由基的角度對針刺預(yù)處理后缺血性小腦浦肯野細(xì)胞損傷的保護(hù)機(jī)制進(jìn)行探討。SOD是機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化酶,是清除自由基的首要物質(zhì),它可對抗因氧自由基對細(xì)胞造成的損傷,修復(fù)受損細(xì)胞,在機(jī)體的氧化與抗氧化平衡中起著極其重要的作用,其活性的高低也間接反映了機(jī)體清除氧自由基的能力。腦組織中富含脂質(zhì),當(dāng)腦缺血性損傷時,機(jī)體產(chǎn)生大量的氧自由基,后者使脂質(zhì)過氧化,產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物,如MDA等。因此,測定小腦組織中MDA含量可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度,間接反映腦細(xì)胞損傷的程度。

    本實驗結(jié)果顯示,與正常對照組比較,針刺非穴位組的大鼠腦缺血后可使小腦浦肯野細(xì)胞的死亡數(shù)明顯增加,細(xì)胞存活率降低,MDA水平明顯增高,SOD活性明顯降低(P<0.01) ;與針刺非穴位組相比,針刺穴位組大鼠小腦浦肯野細(xì)胞存活數(shù)明顯增加,細(xì)胞存活率增加,小腦組織中MDA含量明顯降低,SOD活性明顯增加(P<0.01),表明針刺預(yù)處理百會穴+足三里穴可以通過減少神經(jīng)細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化的程度,減輕腦缺血導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境的紊亂,穩(wěn)定細(xì)胞膜、細(xì)胞器膜及其功能,使神經(jīng)細(xì)胞的功能得以維持,同時可以提高機(jī)體酶促抗氧化防御系統(tǒng)的功能,增加其清除氧自由基的能力來保護(hù)腦缺血導(dǎo)致的小腦浦肯野細(xì)胞的損傷。

    綜上所述,針刺百會穴+雙側(cè)足三里穴對大鼠小腦浦肯野細(xì)胞的缺血性損傷具有一定的保護(hù)作用,其機(jī)制可能與小腦組織中活性氧的生成減少和清除增加有關(guān)。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1]TAOUFIK E,PROBERT L.Ischemic neuronal damage[J].Curr Pharm Des,2008,14(33) : 3565.

    [2]KOSCHNITZKY JE,QUINLAN KA,LUKAS TJ,et al.Effect of fluoxetine on disease progression in a mouse model of ALS[J].J Neurophysiol,2014,111(11) : 2164.

    [3]GAO Z,TODOROV B,BARRETT CF,et al.Cerebellar ataxia by enhanced Ca(V) 2.1 currents is alleviated by Ca2 +-dependent K+-channel activators in Cacna1a(S218L) mutant mice[J].J Neurosci,2012,32(44) : 15533.

    [4]梁暉,張益?zhèn)ィ槾虒毙阅X梗死患者血漿腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子及神經(jīng)生長因子水平的影響[J].中醫(yī)雜志,2010,51 (10) : 912.

    [5]趙巍,付霞,張志剛,等.針刺治療中風(fēng)偏癱106例[J].中國傷殘醫(yī)學(xué),2011,19(1) : 70.

    [6]錢宇斐,樊小農(nóng),李雅潔,等.針刺不同穴位對腦缺血模型大鼠腦血流量的影響[J].中國針灸,2009,29(3) : 213.

    [7]唐偉,王威,白鷹,等.針刺預(yù)處理對全腦缺血大鼠微血管損傷及腦水腫的保護(hù)作用[J].大連大學(xué)學(xué)報,2007,28(3) : 65.

    [8]HUANG L,CHEN N,GE M,et al.Ca2 +and acidosis synergistically lead to the dysfunction of cortical GABAergic neurons during ischemia[J].Biochem Biophys Res Commun,2010,394 (3) : 709.

    [9]CHEN Z,LI T,ZHANG B.Morphine postconditioning protects against reperfusion injury in the isolated rat hearts[J].J Surg Res,2008,145(2) : 287.

    [10]KIM HA,LEE KH,LEE BH.Neuroprotective effect of melatonin against kainic acid-induced oxidative injury in hippocampal slice culture of rats[J].Int J Mol Sci,2014,15(4) : 5940.

    [11]HWANG IK,CHUNG JY,YOO DY,et al.Comparing the effects of acupuncture and electroacupuncture at Zusanli and Baihui on cell proliferation and neuroblast differentiation in the rat hippocampus[J].Vet Med Sci,2010,72(3) : 279.

    [12]BAK IJ,MISGELD U,WEILER M,et al.The preservation of nerve cells in rat neostriatal slices maintained in vitro: a morphological study[J].Brain Res,1980,197(2) : 341.

    [13]PIAO H,TAKAHASHI K,YAMAGUCHI Y,et al.Transient receptor potential melastatin-4 is involved in hypoxiareoxygenation injury in the cardiomyocytes[J].PLoS One,2015,10(4) : e0121703.

    [14]KITAGWA K,MATSUMOTO M,TAGAYA M,et al.Ischemic tolerance phenomenon found in the brain[J].Brain Res,1990,528(1) : 21.

    [15]LIU C,WU J,XU K,et al.Neuroprotection by baicalein in ischemic brain injury involves PTEN/AKT pathway[J].J Neurochem,2010,112(6) : 1500.

    (本文編輯馬啟)

    ·基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)·

    Influence of acupuncture pretreatment on ischemia-induced functional impairment of cerebellar Purkenje cells in rats

    HUANG Li1,WANG Chun2,ZHAO Shi-di1

    (1.Department of Pathophysiology,Bengbu Medical College,Bengbu Anhui 233030; 2.Department of Endocrinology,The Second Affiliated Hospital of Bengbu Medical College,Bengbu Anhui 233040,China)

    [Abstract]Objective: To investigate the influence of acupuncture pretreatment Baihui-point and bilateral Zusanli-point on ischemiainduced impairment of cerebellar Purkenje cells.Methods: Thirty male SD rats were randomly divided into three groups: control group,acupuncture pretreatment in Baihui-point and bilateral Zusanli-point group and pretreatment in non acupuncture point group,10 rats in each group.The oxygen-glucose deprivation model was established,the survival rate of Purkinje cells,malondiadehyde(MDA) content and superoxide dismutase(SOD) activity were detected during the ischemia period after the rats were acupunctured.Results: Compared with the control,the survival rate of Purkinje cells was lower,MDA content was increased and SOD activity was decreased significantly in non-acupuncture pretreatment group(P<0.01).Compared with the non-acupuncture pretreatment group,the survival rate of Purkinje cells was increased,MDA content was decreased,and SOD activity was increased in the acupuncture pretreatment in Baihui-point and bilateral Zusanli-point group(P<0.01).Conclusions: Acupuncture pretreatment to Baihui-point and bilateral Zusanli-point prevented ischemia-induced functional impairment of cerebellar Purkenje cells,the protective mechanism may be related to reduce the production of reactive oxygen species and promote the clearance in cerebellar Purkenje cells.

    [Key words]ischemia; Baihui-point; Zusanli-point; Purkenje cells; malondiadehyde; superoxide dismutase; rat

    [通信作者]趙士弟,碩士研究生導(dǎo)師,教授.E-mail: zhsdi@126.com

    [作者簡介]黃麗(1982-),女,碩士,講師.

    [基金項目]安徽省科技廳自然科學(xué)基金項目(1308085QH147; 1408085MH185) ;蚌埠醫(yī)學(xué)院自然科學(xué)研究項目(Byky1252)

    [收稿日期]2014-11-26

    [文章編號]1000-2200(2016) 01-0007-04

    [中圖法分類號]R 743.31

    [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

    DOI:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.01.002

    猜你喜歡
    超氧化物歧化酶百會穴丙二醛
    不同施肥對岷山紅三葉中丙二醛(MDA)含量的影響
    利培酮和氯氮平對精神分裂癥患者PRL和SOD的影響探討
    白花敗醬草乙醇提取物對小鼠抗氧化作用的影響
    婦科腹腔鏡手術(shù)不同氣腹壓力時超氧化物歧化酶、TNF—α的動態(tài)變化及意義
    點穴祛疾:頭痛(頭頂)
    祝您健康(2015年3期)2015-06-10 05:16:55
    精喹禾靈對板藍(lán)根SOD、POD酶活性的影響
    丙二醛對離體草魚腸道黏膜細(xì)胞的損傷作用
    油炸食品還能吃嗎?
    八小時以外(2014年2期)2014-04-29 00:44:03
    針灸穴位保健——百會穴
    巔頂之上百會穴
    健康管理(2012年6期)2012-04-29 02:59:53
    亚洲国产欧洲综合997久久,| 日韩成人在线观看一区二区三区| 欧美精品国产亚洲| 禁无遮挡网站| 国产在视频线在精品| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | av国产免费在线观看| 久久精品综合一区二区三区| 国产成人aa在线观看| 高清在线国产一区| 国产免费男女视频| 欧美bdsm另类| 一区二区三区四区激情视频 | 日韩欧美一区二区三区在线观看| 一区二区三区四区激情视频 | 久久久久久久久久黄片| 亚洲精品影视一区二区三区av| 免费在线观看亚洲国产| 中文字幕av在线有码专区| 三级国产精品欧美在线观看| 国产精品三级大全| 亚洲国产色片| 看片在线看免费视频| 亚洲一区二区三区色噜噜| 我的女老师完整版在线观看| 毛片女人毛片| 精品国内亚洲2022精品成人| 久久热精品热| 色综合站精品国产| 无人区码免费观看不卡| 欧美日本视频| 精品人妻视频免费看| 久久久精品欧美日韩精品| 国产人妻一区二区三区在| 久久久久久久亚洲中文字幕 | bbb黄色大片| 欧美一级a爱片免费观看看| 精品不卡国产一区二区三区| 久久久久久久久久黄片| 久99久视频精品免费| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲第一区二区三区不卡| 一进一出好大好爽视频| 亚洲最大成人手机在线| 国产 一区 欧美 日韩| 免费av不卡在线播放| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | aaaaa片日本免费| 国产伦精品一区二区三区四那| 一级黄色大片毛片| 亚洲美女视频黄频| www.www免费av| 亚洲第一电影网av| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 久久人人爽人人爽人人片va | av天堂中文字幕网| 亚洲av.av天堂| 精品久久久久久久末码| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 国产一区二区在线av高清观看| 欧美色视频一区免费| 老女人水多毛片| 波野结衣二区三区在线| 国产主播在线观看一区二区| 毛片女人毛片| 免费av观看视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 一个人免费在线观看电影| 久久性视频一级片| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 特大巨黑吊av在线直播| 免费av不卡在线播放| 久久久久久久久大av| 国模一区二区三区四区视频| 怎么达到女性高潮| 久久欧美精品欧美久久欧美| 最近中文字幕高清免费大全6 | 日韩大尺度精品在线看网址| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 午夜福利免费观看在线| 亚洲欧美精品综合久久99| 少妇高潮的动态图| 国产主播在线观看一区二区| 久久性视频一级片| 国产精品不卡视频一区二区 | 在线播放国产精品三级| 波野结衣二区三区在线| 有码 亚洲区| 国产美女午夜福利| 免费看光身美女| av欧美777| 毛片一级片免费看久久久久 | 国产伦精品一区二区三区四那| 好男人电影高清在线观看| 色综合站精品国产| 99热这里只有精品一区| 欧美最新免费一区二区三区 | 精品午夜福利视频在线观看一区| 精品不卡国产一区二区三区| a级毛片免费高清观看在线播放| 三级毛片av免费| 日韩欧美在线乱码| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 在线国产一区二区在线| 国产伦精品一区二区三区视频9| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产精品野战在线观看| 搡老岳熟女国产| 嫩草影院新地址| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 精品福利观看| АⅤ资源中文在线天堂| 熟女人妻精品中文字幕| 欧美+日韩+精品| 婷婷色综合大香蕉| 免费观看的影片在线观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产精品影院久久| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 欧美3d第一页| 午夜两性在线视频| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 很黄的视频免费| 成人永久免费在线观看视频| 久久亚洲精品不卡| 亚洲成av人片免费观看| 色5月婷婷丁香| 久久精品国产自在天天线| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲午夜理论影院| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 午夜免费激情av| 亚洲三级黄色毛片| 丁香欧美五月| 久久久色成人| 黄色一级大片看看| 国产av不卡久久| 亚洲人成伊人成综合网2020| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 五月伊人婷婷丁香| 简卡轻食公司| 成人永久免费在线观看视频| 国产免费av片在线观看野外av| 在现免费观看毛片| 国产成+人综合+亚洲专区| 欧美bdsm另类| 亚洲av免费高清在线观看| 国产精品野战在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 成年人黄色毛片网站| 午夜日韩欧美国产| 他把我摸到了高潮在线观看| 99热6这里只有精品| 一个人看视频在线观看www免费| 色综合亚洲欧美另类图片| 亚洲国产色片| 黄色日韩在线| 综合色av麻豆| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 免费在线观看日本一区| 少妇被粗大猛烈的视频| 久久午夜亚洲精品久久| 少妇高潮的动态图| 一二三四社区在线视频社区8| 在线免费观看不下载黄p国产 | 91字幕亚洲| 国产欧美日韩一区二区三| 成人av在线播放网站| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 成人三级黄色视频| 国产淫片久久久久久久久 | 国产国拍精品亚洲av在线观看| 99热6这里只有精品| 亚洲色图av天堂| 少妇的逼好多水| 国产视频内射| av福利片在线观看| 亚洲最大成人av| 亚洲avbb在线观看| 好男人电影高清在线观看| 一区二区三区四区激情视频 | 在线观看美女被高潮喷水网站 | 久久亚洲精品不卡| 免费在线观看亚洲国产| 999久久久精品免费观看国产| a级毛片a级免费在线| 色av中文字幕| 中文字幕av成人在线电影| 成人午夜高清在线视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 精品人妻视频免费看| 午夜福利视频1000在线观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产精品久久久久久久久免 | 欧美最新免费一区二区三区 | 夜夜躁狠狠躁天天躁| 免费看a级黄色片| www.www免费av| 赤兔流量卡办理| 国产野战对白在线观看| 一本一本综合久久| 伦理电影大哥的女人| 亚洲av成人av| 99热这里只有精品一区| 亚洲精品亚洲一区二区| 高清毛片免费观看视频网站| 国产探花极品一区二区| 天堂√8在线中文| 国产精品伦人一区二区| 日韩免费av在线播放| 岛国在线免费视频观看| netflix在线观看网站| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 麻豆成人午夜福利视频| 午夜两性在线视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲在线自拍视频| 午夜a级毛片| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| а√天堂www在线а√下载| 亚洲在线观看片| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲五月婷婷丁香| 99久久九九国产精品国产免费| 长腿黑丝高跟| 国产精品伦人一区二区| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产成人影院久久av| 91九色精品人成在线观看| 亚洲av.av天堂| 久久久国产成人精品二区| 亚洲成人免费电影在线观看| 欧美成人性av电影在线观看| 日韩欧美在线乱码| 欧美黄色片欧美黄色片| 欧美国产日韩亚洲一区| eeuss影院久久| 热99re8久久精品国产| 国产精品1区2区在线观看.| 九九热线精品视视频播放| 亚洲第一电影网av| 色噜噜av男人的天堂激情| 简卡轻食公司| 不卡一级毛片| 久久久久国内视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲男人的天堂狠狠| 91字幕亚洲| 99riav亚洲国产免费| 搞女人的毛片| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 观看免费一级毛片| 精品国产三级普通话版| 免费看日本二区| 在线观看av片永久免费下载| 久久九九热精品免费| 99国产精品一区二区三区| 长腿黑丝高跟| 亚洲在线观看片| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 免费看美女性在线毛片视频| 国产激情偷乱视频一区二区| 深夜精品福利| or卡值多少钱| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 最新中文字幕久久久久| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲精品一区av在线观看| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲国产精品合色在线| 欧美性猛交黑人性爽| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产乱人视频| 精品一区二区三区视频在线| 日本黄色视频三级网站网址| 午夜福利在线观看吧| 国产成+人综合+亚洲专区| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| www.熟女人妻精品国产| 草草在线视频免费看| 桃色一区二区三区在线观看| ponron亚洲| 性色avwww在线观看| 少妇高潮的动态图| 69av精品久久久久久| 亚洲一区二区三区不卡视频| a级毛片a级免费在线| 国产色婷婷99| 久久久久久久久久黄片| 九色国产91popny在线| www日本黄色视频网| 无人区码免费观看不卡| 嫩草影视91久久| 免费观看的影片在线观看| 亚洲经典国产精华液单 | 国产视频一区二区在线看| 性色av乱码一区二区三区2| 欧美高清成人免费视频www| 天堂√8在线中文| 九色国产91popny在线| 亚洲美女视频黄频| 亚洲不卡免费看| 亚洲自拍偷在线| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 欧美三级亚洲精品| 久久九九热精品免费| 麻豆成人av在线观看| 国产高清有码在线观看视频| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 激情在线观看视频在线高清| 69人妻影院| 国产亚洲精品av在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 看免费av毛片| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲三级黄色毛片| 有码 亚洲区| 国内精品久久久久精免费| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 91麻豆av在线| 人人妻人人澡欧美一区二区| 最新在线观看一区二区三区| 最好的美女福利视频网| 国产精品亚洲av一区麻豆| av中文乱码字幕在线| 可以在线观看的亚洲视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 一本一本综合久久| 成人av一区二区三区在线看| 国产欧美日韩一区二区精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 免费看a级黄色片| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 久久热精品热| 免费在线观看成人毛片| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产成人av教育| 成人毛片a级毛片在线播放| 最近在线观看免费完整版| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 高清毛片免费观看视频网站| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 欧美色视频一区免费| 不卡一级毛片| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产成人av教育| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 国产亚洲精品av在线| 综合色av麻豆| 国产伦在线观看视频一区| 欧美一区二区亚洲| 国产免费男女视频| 欧美在线一区亚洲| 亚洲av二区三区四区| 亚洲国产精品成人综合色| 欧美潮喷喷水| 欧美一区二区国产精品久久精品| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 九色成人免费人妻av| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美潮喷喷水| 最近视频中文字幕2019在线8| 成人精品一区二区免费| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 韩国av一区二区三区四区| 亚洲av电影在线进入| 国产在线男女| 我要看日韩黄色一级片| 99国产精品一区二区三区| 91在线精品国自产拍蜜月| 又黄又爽又免费观看的视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲精品在线美女| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产高清视频在线播放一区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲片人在线观看| 又爽又黄a免费视频| 久久中文看片网| 久久久精品大字幕| 有码 亚洲区| 中文字幕高清在线视频| 日韩欧美免费精品| 亚洲欧美日韩东京热| 99国产精品一区二区蜜桃av| 精品不卡国产一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区精品| 波多野结衣高清无吗| 国内精品久久久久久久电影| 亚洲美女黄片视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 天堂网av新在线| 欧美精品国产亚洲| 免费av观看视频| 免费看美女性在线毛片视频| 欧美不卡视频在线免费观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 悠悠久久av| 51国产日韩欧美| 神马国产精品三级电影在线观看| 首页视频小说图片口味搜索| 男人舔女人下体高潮全视频| 真实男女啪啪啪动态图| 哪里可以看免费的av片| 18+在线观看网站| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 精品一区二区三区视频在线| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产成人欧美在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 国产高清三级在线| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 亚洲,欧美,日韩| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 午夜福利视频1000在线观看| 成人国产一区最新在线观看| 中出人妻视频一区二区| 亚洲av.av天堂| 免费观看精品视频网站| or卡值多少钱| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 日韩免费av在线播放| 国产高清视频在线播放一区| 中国美女看黄片| 欧美三级亚洲精品| 国内精品久久久久久久电影| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲在线自拍视频| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲国产精品合色在线| 禁无遮挡网站| 神马国产精品三级电影在线观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产91精品成人一区二区三区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 日韩免费av在线播放| 精品人妻熟女av久视频| 色在线成人网| 级片在线观看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲国产高清在线一区二区三| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| av在线老鸭窝| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 黄色一级大片看看| 亚洲成av人片免费观看| 最好的美女福利视频网| 欧美高清性xxxxhd video| 男女床上黄色一级片免费看| 搡老熟女国产l中国老女人| 免费搜索国产男女视频| 亚洲成人久久性| 三级毛片av免费| eeuss影院久久| 国产精品一区二区免费欧美| 久久久久久大精品| 天天一区二区日本电影三级| 国产亚洲精品久久久com| 久久欧美精品欧美久久欧美| 免费黄网站久久成人精品 | 国产免费男女视频| 桃红色精品国产亚洲av| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲久久久久久中文字幕| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产成+人综合+亚洲专区| 国模一区二区三区四区视频| 成人国产一区最新在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| x7x7x7水蜜桃| 亚洲片人在线观看| 丁香六月欧美| 免费人成视频x8x8入口观看| 91久久精品电影网| 国产单亲对白刺激| 亚洲精品色激情综合| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 神马国产精品三级电影在线观看| 直男gayav资源| 国产精品日韩av在线免费观看| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲成av人片免费观看| 色在线成人网| 日本一本二区三区精品| 超碰av人人做人人爽久久| 国产精品98久久久久久宅男小说| 简卡轻食公司| avwww免费| 国产精品电影一区二区三区| 99国产精品一区二区蜜桃av| 精品一区二区三区人妻视频| 女人被狂操c到高潮| 他把我摸到了高潮在线观看| 欧美高清成人免费视频www| 日本 欧美在线| 国产高清视频在线播放一区| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 精品久久久久久,| 真实男女啪啪啪动态图| 国产精品女同一区二区软件 | eeuss影院久久| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 女同久久另类99精品国产91| 午夜激情福利司机影院| 免费av毛片视频| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲黑人精品在线| 国产高潮美女av| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲,欧美精品.| 国产午夜精品论理片| 成人无遮挡网站| av中文乱码字幕在线| 乱码一卡2卡4卡精品| 18禁在线播放成人免费| 在线观看免费视频日本深夜| 精品无人区乱码1区二区| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 成年人黄色毛片网站| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲三级黄色毛片| 国产高清有码在线观看视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 精品久久久久久成人av| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 波野结衣二区三区在线| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产在线男女| 免费人成视频x8x8入口观看| 999久久久精品免费观看国产| 国产v大片淫在线免费观看| 波多野结衣高清作品| 99国产精品一区二区三区| 成年人黄色毛片网站| 黄片小视频在线播放| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 欧美中文日本在线观看视频| 国产精品一区二区三区四区久久| 日本熟妇午夜| 亚洲人与动物交配视频| avwww免费| 欧美高清成人免费视频www| 男插女下体视频免费在线播放| 久久人人精品亚洲av| 国产在线精品亚洲第一网站| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 亚洲欧美激情综合另类| 亚州av有码| 99国产精品一区二区三区| 日韩有码中文字幕| 久久精品国产自在天天线| 脱女人内裤的视频| 最近最新免费中文字幕在线| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产在线精品亚洲第一网站| 69av精品久久久久久| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲第一电影网av| 免费观看人在逋| 身体一侧抽搐| 欧美黄色淫秽网站| 免费高清视频大片| 白带黄色成豆腐渣| 成年免费大片在线观看| 国产av不卡久久| 在线观看66精品国产| 久久久国产成人精品二区| 有码 亚洲区| 久久香蕉精品热| 一级av片app| 国产成人福利小说| 国产精品亚洲一级av第二区| 欧美色欧美亚洲另类二区| 久久久久久久久久黄片| 婷婷亚洲欧美| 成年免费大片在线观看| 变态另类丝袜制服| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲欧美精品综合久久99| a级毛片a级免费在线| 国产一区二区三区视频了| 国产久久久一区二区三区|