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    MMP及TIMP在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達**?

    2016-05-09 01:43:34范玉香
    關(guān)鍵詞:基質(zhì)金屬蛋白酶子宮內(nèi)膜異位癥體液

    范玉香

    (贊皇縣醫(yī)院,河北贊皇 051230)

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    MMP及TIMP在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達**?

    范玉香

    (贊皇縣醫(yī)院,河北贊皇051230)

    [摘要]目的:探討基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9及組織抑制因子TIMP-1、TIMP-2在子宮內(nèi)膜異位癥(EMT)患者血清及腹腔液中的表達及意義。方法:選取行腹腔鏡術(shù)EMT患者40例及同期行腹腔鏡術(shù)非EMT患者40例作為研究對象,采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測定兩組患者MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2在血清和腹腔液中的表達,同時比較EMT不同分期患者血清及腹腔液中MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2。結(jié)果: EMT組患者血清及腹腔液中MMP-2、MMP-9表達水平顯著高于非EMT組(P<0.05),EMT組TIMP-1、TIMP-2的表達水平顯著低于非EMT組(P<0.05) ;隨臨床EMT分期的增加MMP-2、MMP-9表達水平相應(yīng)升高,Ⅲ~Ⅳ期顯著高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05) ;而TIMP-1、TIMP-2的表達水平隨EMT臨床分期增高而降低,Ⅲ~Ⅳ期顯著低于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05)。結(jié)論: MMP-2、MMP-9的高表達與TIMP-1、TIMP-2的低表達,可能參與EMT的發(fā)生與發(fā)展過程。

    [關(guān)鍵詞]子宮內(nèi)膜異位癥;血清;體液,腹腔;基質(zhì)金屬蛋白酶;組織抑制因子

    網(wǎng)絡(luò)出版時間: 2016-02-23網(wǎng)絡(luò)出版地址: http: / /www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160223.2101.056.html

    子宮內(nèi)膜異位癥(EMT)是指子宮內(nèi)膜組織在子宮腔被覆內(nèi)膜及子宮肌層以外的部位生長、浸潤,導(dǎo)致疼痛、出血、不育等臨床癥狀,是育齡期婦女常見的良性疾病,發(fā)病率達10%~15%,嚴(yán)重影響婦女身心健康及生活質(zhì)量[1-2]。EMT的發(fā)病機制與經(jīng)血逆流種植學(xué)說、靜脈和淋巴播散學(xué)說、免疫學(xué)說等相關(guān)[3]。研究指出,EMT是一種血管生成依賴性疾病,內(nèi)膜的種植過程是免疫應(yīng)答異常、局部炎癥反應(yīng)和血管新生的過程,在這個過程中間基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)及其組織抑制因子(TIMP)起著重要的作用,二者以1∶1的比例形成復(fù)合物,抑制MMP的活性,調(diào)控著對細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)中MMP的降解[4-5]。本研究旨在探討基質(zhì)金屬蛋白酶-2、9(MMP-2、MMP-9)及其組織抑制因子-1、-2(TIMP-1、TIMP-2)在EMT患者血清及腹腔液中的表達及意義。

    1 材料和方法

    1.1一般資料

    選取2014年1月~2015年1月婦科經(jīng)腹腔鏡術(shù)確診為EMT患者40例作為觀察組,符合EMT疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)及分期標(biāo)準(zhǔn)[6],排除有心、腦、腎等器官嚴(yán)重疾病,排除免疫、代謝、內(nèi)分泌等激素依賴性疾病,至少3月內(nèi)未接受過任何激素藥物治療;年齡23~46歲,平均(31.3±6.7)歲;體重指數(shù)(BMI) 16.2~25.2 kg/m2,平均(20.8±3.2) kg/ m2;根據(jù)美國生育協(xié)會評分標(biāo)準(zhǔn)(r-AFS)分期,Ⅰ~Ⅱ期15例,Ⅲ~Ⅳ期25例。選取同期因子宮肌瘤或不孕癥等行腹腔鏡術(shù)的非EMT患者40例作為對照組,其中子宮肌瘤28例,不孕癥12例,引起不孕癥原因為卵巢腫瘤、輸卵管發(fā)育不全或不通等,年齡24~46歲,平均(32.0±5.2)歲; BMI 16.3 ~25.7 kg/m2,平均(21.1±3.5) kg/m2。兩組患者年齡、BMI等資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

    1.2方法

    所有研究對象于入院第2天清晨7時采集外周靜脈血5 mL,常溫靜置1 h,3 500 r/min離心20 min,取上清液置-70℃保存待檢。腹腔液標(biāo)本于手術(shù)時用無菌注射器吸取子宮直腸陷凹和子宮膀胱陷凹處腹腔液5 mL,3 500 r/min離心20 min,取上清液置-70℃條件保存待檢。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測定兩組患者血清及腹腔液MMP-2、 MMP-9和TIMP-1、TIMP-2的水平,試劑盒購自上海西唐生物科技有限公司,由專業(yè)人員按照說明書操作。

    1.3觀察指標(biāo)

    觀察EMT患者與非EMT患者血清及腹腔液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平,并比較EMT不同分期患者血清及腹腔液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2的差異。

    1.4統(tǒng)計學(xué)分析

    應(yīng)用SPSS 18.0軟件分析數(shù)據(jù),計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗,計數(shù)資料用χ2檢驗,P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2

    觀察組血清MMP-2、MMP-9表達水平顯著高于對照組(P<0.05),TIMP-1、TIMP-2的表達水平顯著低于對照組(P<0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義,見表1。

    表1 兩組患者血清中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 及TIMP-2水平(μg/L,±s)Tab.1 The serum levels of MMP-2,MMP-9,TIMP-1 and TIMP-2 in two groups

    表1 兩組患者血清中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 及TIMP-2水平(μg/L,±s)Tab.1 The serum levels of MMP-2,MMP-9,TIMP-1 and TIMP-2 in two groups

    (1)與對照組比較,P<0.05

    指標(biāo)  觀察組(n =40)  對照組(n =40) 155.2±50.3 MMP-9  289.3±62.2(1) 191.1±53.5 TIMP-1  238.7±57.5(1) 401.2±65.5 TIMP-2  205.5±39.7(1)MMP-2  245.8±58.7(1)343.7±41.5

    2.2腹腔液MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2

    觀察組腹腔液中MMP-2、MMP-9表達水平顯著高于對照組(P<0.05),TIMP-1、TIMP-2的表達水平顯著低于對照組(P<0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義,見表2。

    表2 兩組患者腹腔液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 及TIMP-2水平(μg/L,±s)Tab.2 The peritoneal fluid levels of MMP-2,MMP-9,TIMP-1 and TIMP-2 in two groups

    表2 兩組患者腹腔液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 及TIMP-2水平(μg/L,±s)Tab.2 The peritoneal fluid levels of MMP-2,MMP-9,TIMP-1 and TIMP-2 in two groups

    (1)與對照組比較,P<0.05

    指標(biāo)  觀察組(n =40)  對照組(n =40) 15.3±6.2 MMP-9 27.3±4.4(1) 18.3±5.8 TIMP-1  975.7±421.5(1) 1 305.5±437.3 TIMP-2  831.5±305.8(1)MMP-2 25.7±8.5(1)1 131.3±305.7

    2.3不同分期EMT患者血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平

    EMT患者Ⅲ~Ⅳ期血清MMP-2、MMP-9的表達水平顯著高于Ⅰ~Ⅱ期,Ⅲ~Ⅳ期血清TIMP-1、TIMP-2表達水平顯著低于Ⅰ~Ⅱ期,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表3。

    表3 EMT不同分期患者血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平(μg/L,±s)Tab.3 The serum levels of MMP-2,MMP-9,TIMP-1 and TIMP-2 in EMT patients with different clinical staging

    表3 EMT不同分期患者血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平(μg/L,±s)Tab.3 The serum levels of MMP-2,MMP-9,TIMP-1 and TIMP-2 in EMT patients with different clinical staging

    (1)與Ⅰ~Ⅱ期比較,P<0.05

    指標(biāo)  Ⅰ~Ⅱ期(n =25)Ⅲ~Ⅳ期(n =15) MMP-2 179.2±39.5  291.3±54.5(1)MMP-9 210.3±42.2  335.4±69.5(1)TIMP-1 362.7±71.2  158.5±42.3(1)TIMP-2 241.5±32.7  115.7±21.3(1)

    2.4不同分期EMT患者腹腔液MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平

    EMT患者Ⅲ~Ⅳ期腹腔液MMP-2、MMP-9的表達水平顯著高于Ⅰ~Ⅱ期,Ⅲ~Ⅳ期腹腔液TIMP-1、TIMP-2表達水平顯著低于Ⅰ~Ⅱ期,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表4。

    表4 EMT不同分期患者腹腔液MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2水平(μg/L,±s)Tab.4 The peritoneal fluid levels of MMP-2,MMP-9,TIMP-1 and TIMP-2 in EMT patients with different clinical staging

    表4 EMT不同分期患者腹腔液MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2水平(μg/L,±s)Tab.4 The peritoneal fluid levels of MMP-2,MMP-9,TIMP-1 and TIMP-2 in EMT patients with different clinical staging

    (1)與Ⅰ~Ⅱ期比較,P<0.05

    指標(biāo) ?、瘛蚱?n =25)Ⅲ~Ⅳ期(n =15) MMP-2 18.5±6.7  27.1±5.0(1)MMP-9 19.3±5.7  28.9±4.3(1)TIMP-1  1 215.6±502.1  870.3±267.9(1)TIMP-2  1 115.3±375.8  781.6±215.4(1)

    3 討論

    EMT被認(rèn)為是類似癌性浸潤的一種良性疾病,月經(jīng)期脫落的子宮內(nèi)膜細(xì)胞隨經(jīng)血逆流,經(jīng)血管或淋巴管進入腹腔、肝、肺等器官,種植于器官表面并生長。異位內(nèi)膜本身及其周圍組織血液供應(yīng)的建立和維持是EMT的發(fā)病基礎(chǔ),目前已發(fā)現(xiàn)許多肽類生長因子以自分泌或旁分泌形式促進血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖與分化。EMT患者全身及盆腔局部發(fā)生了免疫狀況改變,不能對異位的內(nèi)膜清除,導(dǎo)致機體巨噬細(xì)胞數(shù)量增加,MMP由巨噬細(xì)胞、結(jié)締組織細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、粒細(xì)胞等合成及分泌,是具有高度同源性的內(nèi)肽酶,可以加快血管內(nèi)皮細(xì)胞新生血管的形成,與整合素相互活化增強細(xì)胞間黏附,在內(nèi)膜細(xì)胞的異位種植生長中起促進作用[7-9]。TIMP是MMP的特異性抑制因子,MMP的活性可被TIMP和巨球蛋白所抑制,通過調(diào)節(jié)MMP的活性調(diào)控ECM的更新與破壞[10-11]?;啄さ耐暾允桥袛喈愇粌?nèi)膜浸潤與侵襲的重要標(biāo)志,MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2在這一過程的調(diào)節(jié)中具有特殊意義[12]。MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2主要分布在EMT患者的血管內(nèi)皮細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞,在間質(zhì)細(xì)胞表達相對較低,于EMT在位內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞、腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞中的表達率較低[13]。MMP-2、MMP-9的表達隨EMT臨床分期的升高而增強,提示與EMT患者異位內(nèi)膜的侵襲呈正相關(guān)。由于MMP-2 和MMP-9在EMT患者早期就有表達,在異位組織中明顯增高,臨床可通過檢測MMP-2、MMP-9的水平來判斷愈后情況[14]。本研究表明,EMT患者MMP-2、MMP-9在血清和腹腔液中的表達水平顯著高于對照組,隨著臨床分期的增加MMP-2、MMP-9的表達水平也相應(yīng)升高,本組Ⅲ~Ⅳ期MMP-2、MMP-9的表達水平明顯高于Ⅰ~Ⅱ期,說明MMP-2、MMP-9在異位內(nèi)膜中的過度表達,使得異位內(nèi)膜有很強大的水解能力,降解病變周圍的基底膜,使異位內(nèi)膜在組織內(nèi)種植生長并使病灶不斷擴大。TIMP通過調(diào)解MMP的活性調(diào)控著細(xì)胞外基質(zhì)的合成與降解,MMP與TIMP間的平衡如果失調(diào),會引起多種病理改變,這種現(xiàn)象在EMT的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用,TIMP-1和TIMP-2隨著EMT病情的發(fā)展和r-AFS分期的升高其表達水平逐漸降低,而MMP-2和MMP-9活性反而增強[15]。本研究顯示TIMP-1、TIMP-2在EMT的表達水平低于對照組,且隨臨床分期的增加TIMP-1、TIMP-2的表達水平也相應(yīng)降低,本組Ⅲ~Ⅳ期的TIMP-1、TIMP-2表達水平明顯低于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05),使MMP-2/TIMP-2與MMP-9/TIMP-1間的比值增加,平衡出現(xiàn)失調(diào),使異位內(nèi)膜侵襲力增加,改變了ECM的合成與降解,與文獻[15]報道一致。研究認(rèn)為MMP與TIMP平衡的失調(diào),改變了ECM合成與降解過程,誘發(fā)并促進EMT的發(fā)生與發(fā)展[16]。

    總之,MMP-2、MMP-9的高表達與TIMP-1、TIMP-2的低表達,可能參與EMT的發(fā)生與發(fā)展,臨床通過檢測其表達水平,對預(yù)測疾病的發(fā)生發(fā)展與轉(zhuǎn)歸具有重要意義。

    4 參考文獻

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    (2015-06-23收稿,2015-11-21修回)

    中文編輯:戚璐;英文編輯:劉華

    ·護理學(xué)研究·

    Expression of MMP and TIMP in the Endometriosis

    FAN Yuxiang
    (Zanhuang Hospital of Hebei Province,Zanhuang 051230,Hebei,China)

    [Abstract]Objective: To explore the expressions of MMP-2,MMP-9,TIMP-1,and TIMP-2 in the serum and peritoneal fluid in patients with endometriosis (EMT) and their clinical significance.Methods: A total of 40 patients with EMT for laparoscopy and 40 patients with non-EMT for laparoscopy at the same period were enrolled in the study.The double-antibody sandwich ELISA was used to detect the expressions of MMP-2,MMP-9,TIMP-1,and TIMP-2 in the serum and peritoneal fluid.Meanwhile,the expressions of MMP-2,MMP-9,TIMP-1,and TIMP-2 in the serum and peritoneal fluid in patients with EMT at different stages were compared.Results: The expression levels of MMP-2 and MMP-9 in the serum and peritoneal fluid in EMT group were significantly higher than those in the non-EMT group (P<0.05).The expression levels of TIMP-1 and TIMP-2 in EMT group were significantly lower than those in the non-EMT group (P<0.05).With the increasing clinical staging of EMT,the expression levels of MMP-2 and MMP-9 were correspondingly elevated while the expression levels of TIMP-1 and TIMP-2 were reduced with the increasing clinical staging of EMT.Specifically,the expression levels of MMP-2 and MMP-9 at stageⅢ~Ⅳwere significantly higher than those at stageⅠ~Ⅱ(P<0.05) while the expression levels of TIMP-1 and TIMP-2 at stageⅢ~Ⅳwere significantly lower than those at stageⅠ~Ⅱ(P<0.05).Conclusion: The high expressions of MMP-2 and MMP-9 and low expressions of TIMP-1 and TIMP-2 are probably involved in the genesis and development of EMT.

    [Key words]endometriosis; serum; body fluid,abdominal cavity; matrix metalloproteinaeses; tissue inhibitor

    *[基金項目]河北省科技進步項目(20150261)

    [中圖分類號]R711.2

    [文獻標(biāo)識碼]A

    [文章編號]1000-2707(2016) 02-0238-04

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