傳統(tǒng)推拿“束悗療法”防治糖尿病周圍神經(jīng)病變的實(shí)驗(yàn)研究

尚　坤　劉明軍　陳飛騰　李　波　王　蕾　陳林青　李躍宗　張　欣

長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林　長(zhǎng)春　130117

?

傳統(tǒng)推拿“束悗療法”防治糖尿病周圍神經(jīng)病變的實(shí)驗(yàn)研究

尚坤劉明軍陳飛騰李波王蕾陳林青李躍宗張欣

長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林長(zhǎng)春130117

【摘要】目的：觀察傳統(tǒng)推拿“束悗療法”防治糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變的效果。方法：將80只大鼠隨機(jī)平均分為對(duì)照組、模型組、推拿組和藥物組，采用腹腔注射鏈脈佐菌素的方法造模，觀察各組動(dòng)物坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度(SNVC)和坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)的變化情況。結(jié)果：對(duì)各組動(dòng)物坐骨神經(jīng)SNVC檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，模型組與對(duì)照組比較，SNVC差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，推拿組與模型組比較，SNVC差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，藥物組與模型組比較，SNVC差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，推拿組與藥物組比較，SNVC差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；對(duì)各組動(dòng)物坐骨神經(jīng)VEGF檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，模型組與對(duì)照組比較，VEGF表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，推拿組與模型組比較VEGF表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，藥物組與模型組比較，VEGF表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，推拿組與藥物組比較，VEGF表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論：傳統(tǒng)推拿“束悗療法”能夠有效改善DPN實(shí)驗(yàn)大鼠下肢坐骨神經(jīng)SNVC，提高坐骨神經(jīng)VEGF含量，從而對(duì)DPN大鼠的周圍神經(jīng)功能恢復(fù)起到有效的治療作用且療效與注射藥物彌可保相持平?！笆鴲幆煼ā本哂胁僮骱?jiǎn)便、安全、無(wú)毒副作用等其他任何藥物無(wú)法具備的臨床優(yōu)勢(shì)，值得臨床推廣和普及。

【關(guān)鍵詞】推拿；束悗；糖尿病周圍神經(jīng)病變

束悗療法是中醫(yī)的傳統(tǒng)推拿操作手法[1]，施術(shù)部位常選擇四肢大血管或大神經(jīng)干走行線路，操作時(shí)以手指或手掌采用“緩按快放”或“快按緩放”的手法，按壓局部并停留一定時(shí)間，然后突然放開以推動(dòng)局部氣血運(yùn)行，達(dá)到疏通經(jīng)絡(luò)、活血止痛的治療目的。糖尿病性周圍神經(jīng)病變(DPN)是糖尿病的主要并發(fā)癥和致殘的主要因素之一，主要臨床表現(xiàn)是周圍神經(jīng)的功能出現(xiàn)障礙。研究傳統(tǒng)推拿“束悗療法”干預(yù)糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變的治療，獲得比較滿意的效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1儀器與材料

1.1動(dòng)物與分組選取雄性清潔級(jí)wistar大鼠80只，鼠齡8周，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK-(吉)2014-0003。分籠飼養(yǎng)，每籠10只，食用標(biāo)準(zhǔn)顆粒鼠糧。隨機(jī)將大鼠分為空白對(duì)照組(簡(jiǎn)稱對(duì)照組)、模型組、模型+推拿干預(yù)組(簡(jiǎn)稱推拿組)、模型+藥物干預(yù)組(簡(jiǎn)稱藥物組)，每組動(dòng)物20只。

1.2藥品與試劑鏈脈佐菌素(美國(guó)sigma公司，1g/瓶)；彌可保(甲鈷胺注射液，衛(wèi)材中國(guó)藥業(yè)有限公司，500μg/支)；考馬司亮蘭測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所)。

1.3儀器TAP-Ⅱ型推拿手法測(cè)定儀(上海益聯(lián)醫(yī)學(xué)發(fā)展有限公司)；Medlab-u/4cs生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)(南京美易科技有限公司)；光學(xué)顯微鏡及圖像分析系統(tǒng)(德國(guó)Leica公司)；自動(dòng)電泳凝膠成像分析儀(Chemi Imager 5500,美國(guó))。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1動(dòng)物模型的制備取實(shí)驗(yàn)大鼠60只，將鏈脈佐菌素臨用前用pH值4.2～4.5的0.lmol/l檸檬酸鈉—檸檬酸緩沖液避光條件下配成1%濃度溶液，按劑量50mg/kg于實(shí)驗(yàn)大鼠左下腹腔內(nèi)單次注射，72h后取尾血測(cè)血糖，血糖>16.7mmol/l作為糖尿病大鼠。血糖未達(dá)標(biāo)的造模大鼠，補(bǔ)打30mg/kg 0.1%鏈脲佐菌素，72h后測(cè)血糖，不足要求則棄去。如此在1周后血糖仍>16.7mmol/l，且從形態(tài)上有周圍神經(jīng)病變出現(xiàn)，坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度(SNCV)明顯降低時(shí)，即制成周圍神經(jīng)病變模型大鼠。另取實(shí)驗(yàn)大鼠20只，用0.1mol/l檸檬酸鈉—檸檬酸緩沖液(pH4.2，4℃)按同體積左下腹腔內(nèi)單次注射，72h后取尾血測(cè)血糖，作為正常對(duì)照組。

2.2干預(yù)方法

2.2.1推拿組將實(shí)驗(yàn)大鼠仰臥，固定其頭部與上肢。施術(shù)者以左手牽拉大鼠一側(cè)下肢，使下肢伸直呈水平位，以右手拇指指腹緩慢按壓于大鼠腹股溝處，力量經(jīng)推拿手法測(cè)試儀測(cè)定約為1kg，持續(xù)30s左右，然后突然抬手，停止按壓，即“緩按快放”；間隔60s左右，再次以右手拇指指腹快速按壓于大鼠腹股溝處，力量經(jīng)推拿手法測(cè)試儀測(cè)定約為1kg，持續(xù)30s左右，然后緩慢抬手，停止按壓，即“快按緩放”。如此操作3次。以上治療方法每日早晚操作2次，共治療8周。

2.2.2藥物組將實(shí)驗(yàn)大鼠仰臥，捆綁固定，每日1次，每次10min。根據(jù)人與動(dòng)物體表面積計(jì)算法換算注射彌可保，大鼠用藥量為50μg/kg，隔日注射于下肢肌肉，左右腿交替注射，以利于吸收，共治療8周。

2.2.3對(duì)照組和模型組將實(shí)驗(yàn)大鼠仰臥，捆綁固定，每日1次，每次10min，共8周。

2.3檢測(cè)指標(biāo)及方法將實(shí)驗(yàn)大鼠治療8周后尾靜脈取血以檢測(cè)血糖。以電子秤稱取每只大鼠體重后，腹腔注射10%水合氯醛(350mg/kg)進(jìn)行麻醉，將大鼠俯臥固定于固定架上，暴露出坐骨神經(jīng)，用無(wú)菌玻璃剝離器輕輕剝離坐骨神經(jīng)并游離下來，應(yīng)用生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，測(cè)得坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度，然后迅速將坐骨神經(jīng)放入液氮中，放入-70℃冰箱中存放，以備勻漿使用。

2.4數(shù)據(jù)整理分析數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件包統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組均數(shù)之間的比較應(yīng)用方差分析，等級(jí)資料組間比較應(yīng)用秩和檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果

3.1大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度(SNCV)由表1可知，模型組與對(duì)照組比較，坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，證明實(shí)驗(yàn)造模成功。推拿組與模型組比較，坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，藥物組與模型組比較，坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，提示推拿“束悗療法”和藥物療法能夠有效改善DPN大鼠的坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度；推拿組與藥物組比較，坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1　束悗療法對(duì)坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度的影響　±s)

注：與對(duì)照組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與模型組比較，★★P<0.01。

3.2大鼠坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)由表2可知，模型組與對(duì)照組比較，坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，證明實(shí)驗(yàn)造模成功。推拿組與模型組比較，坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，藥物組與模型組比較，坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，提示推拿療法和藥物療法能夠有效提高坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)；推拿組與藥物組比較，坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2　束悗療法對(duì)坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮

注：與對(duì)照組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與模型組比較，★★P<0.01。

4討論

束悗療法是傳統(tǒng)的推拿操作手法[1]，其最早記載見于《內(nèi)經(jīng)》，在《靈樞·雜病篇》中記載：“痿厥為四末束悗，乃疾解之，日二，不仁者，十日而知，無(wú)休，病已止”。主要的意思是在治療痿厥癥病人時(shí)，將患者四肢捆綁起來，待其產(chǎn)生憋悶脹痛感覺后，迅速解開，每天治療兩次，原本四肢沒有知覺的患者在治療十天之后就會(huì)產(chǎn)生知覺，這種治療方法不要停止，直到患者痊愈為止?？梢姡鴲幆煼ㄖ械摹笆?，意為約束，束縛；“悗”，《辭?！方忉尀椤盁灐?，《靈樞·五亂》中記載有“清濁相干，亂于胸中，是謂大悗”。由此引申束悗具有約束阻滯之意?！鹅`樞集注》中曾批注“夫按之束之，皆導(dǎo)引之法，猶尺蠖之欲伸而先屈也”?？梢姡谥委煔鈾C(jī)不暢、麻痹不仁的病癥時(shí)，可以在四肢脈位運(yùn)用束悗按抑的手法，達(dá)到通郁開閉、導(dǎo)氣通達(dá)的治療目的。然而，現(xiàn)代推拿臨床中，源于中醫(yī)傳統(tǒng)古籍的束悗療法卻鮮有應(yīng)用，僅散見于個(gè)別理論性的文獻(xiàn)探討中[2]。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，糖尿病性周圍神經(jīng)病變(DPN)的病理表現(xiàn)一是營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)的血管出現(xiàn)病變，表現(xiàn)為毛細(xì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞增生或基底膜增厚；二是神經(jīng)本身出現(xiàn)病變，主要表現(xiàn)為神經(jīng)纖維軸索的損傷或構(gòu)成髓鞘或神經(jīng)內(nèi)膜的施萬(wàn)細(xì)胞的變性壞死[3-4]。中醫(yī)則認(rèn)為，DPN屬于“痹證”、“痿證”之范疇，多由于氣虛失運(yùn)、血虛不榮、痰瘀阻滯或風(fēng)濕痹阻等原因?qū)е戮植垦骶徛鲎杳}道，皮肉經(jīng)脈失去氣血濡養(yǎng)而痿廢不用[5-6]。這與糖尿病性周圍神經(jīng)病變(DPN)所表現(xiàn)出來的臨床癥狀是相吻合的。課題組曾在臨床上以“束悗療法”輔助治療糖尿病性周圍神經(jīng)病變并取得滿意療效[1]。

鏈脲佐菌素(STZ)是一種廣譜抗菌素，具有抗菌、抗腫瘤的功效，還對(duì)胰島β細(xì)胞高度選擇性的毒性而具有致糖尿病的副作用[7-9]。同時(shí)，由于STZ對(duì)組織毒性相對(duì)較小，動(dòng)物存活率高，是國(guó)內(nèi)外經(jīng)常使用的制備糖尿病動(dòng)物模型的成熟方法。神經(jīng)電生理檢查是早期診斷糖尿病并發(fā)周圍神經(jīng)病變的敏感指標(biāo)，神經(jīng)傳導(dǎo)速度減慢是糖尿病出現(xiàn)神經(jīng)病變的一個(gè)先兆，常常用于評(píng)價(jià)臨床療效與預(yù)后情況。運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度(SNVC)反映坐骨神經(jīng)運(yùn)動(dòng)的功能狀態(tài)，是DPN最常用的觀察指標(biāo)。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)是本來血管新生的主要調(diào)控因子，并具有神經(jīng)方面的作用[10-11]，主要表現(xiàn)為延伸軸突、增加神經(jīng)元、促進(jìn)神經(jīng)再生、促進(jìn)神經(jīng)內(nèi)血管形成、提高衛(wèi)星細(xì)胞及雪旺氏細(xì)胞的存活率等[12-14]。因此，神經(jīng)組織內(nèi)VEGF含量的多少能夠直接反應(yīng)神經(jīng)組織的微循環(huán)與損傷修復(fù)狀態(tài)。基于此，課題組采用腹腔注射STZ的方法制備DPN大鼠模型并觀測(cè)坐骨神經(jīng)SNVC和VEGF作為療效判定指標(biāo)。

研究結(jié)果表明，傳統(tǒng)推拿“束悗療法”能夠有效改善DPN實(shí)驗(yàn)大鼠下肢坐骨神經(jīng)的神經(jīng)傳導(dǎo)速度(SNVC)，提高坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)的含量，從而對(duì)DPN大鼠的周圍神經(jīng)功能恢復(fù)起到有效的治療作用且療效與注射藥物彌可保相持平。然而“束悗療法”具有操作簡(jiǎn)便、安全、無(wú)毒副作用等其他任何藥物無(wú)法具備的臨床優(yōu)勢(shì)，為傳統(tǒng)推拿“束悗療法”的推廣普及奠定實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉鵬,張燕,李躍宗. “束悗療法”治療糖尿病性周圍神經(jīng)病變[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2013,29(5):880-881.

[2] 曠時(shí)恩,曠晉.束悗療法在傷病治療的臨床應(yīng)用[J].中華推拿療法雜志,2004,2(4):15-16.

[3]沈薇,董繼宏,汪聽.糖尿病周圍神經(jīng)病的發(fā)病機(jī)制及治療展望[J].中國(guó)臨床神經(jīng)科學(xué),2008,16(2):204-207.

[4]L aybutt DR, Kaneto H, HasenkamP W, et al.Inereased expression of antioxidant and antiapoptotic genes in islets that may contribute top-cell survival during chronic hyperglycemia[J]. Diabetes,2002,51(2):413-423.

[5 ] 逄紫千,謝占峰,閻慧.針刺對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠尾神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)的影響[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2011,27(4):523-525.

[6]逄紫千,閻慧,解占峰.針刺對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠坐骨神經(jīng)組織病理學(xué)的影響[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012,28(4):594-596.

[7] Raekietan N, Raekietan ML, Nadkarni MR. Studies on diabetogenic action of Stre-Ptozotoein(NSC-37917)[J].Caneer ChemotheraPy RePorts,1963, 29:91-98.

[8] 于德民,吳銳,尹雑,等.實(shí)驗(yàn)性鏈脲佐菌素糖尿病動(dòng)物模型的研究[J].中國(guó)糖尿病雜志,1995,3( 2 ):105-109.

[9] 黃繼漢,黃曉陣,陳志揚(yáng),等.藥理試驗(yàn)中動(dòng)物間和動(dòng)物與人體間的等效劑量換算[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2004,9(9):1069-1072.

[10] Meirer R, Gonluoglu R, Siemionow M.Neurogenic perspective on vaseular endothelial growth factor:review of the literature[J].J Reconstruetive Mierosurgery,2001,17(8):625-629.

[11] Sondell M, Lundborg G, Kanje M. Vaseula rendothelial growth factor(VEGF) has neurotrophic activity and stimulates axonal outgrowth, enhancing cell survival and Schwann cell proliferation in the peripheral nervous system[J].J Neurosci,1999,19:5731-5740.

[12] Sondell M, Sundler F, Kanjie M.Vasclar endothelial growth factor is a neurotrophic factor which stimulates axonal outgrowth through the flk-1 receptor[J]. Eur J Neurosci 2000,12(12):4243-4254.

[13] JinK L, Mao XO, Greenberg DA. Vascular endothelial growth factor: Direct neuroprotective effect in in vitro isehemia[J]. Proe. Natl. Aead. Sei.,2000,97(18):10242-10247.

[14] Hobson Ml, Green CJ, Terenghi G. VEGF enhances intraneural angiogenesis and improves nerve regeneration after axotomy[J].J Anat,2000,197(4):591-605.

Experimental study on the traditional Tuina therapy of ShuMan in the prevention and treatment of diabetic peripheral neuropathy

SHANG KunLIU MingjunCHEN FeitengLI BoWANG LeiCHEN LinqingLI YuezongZHANG Xin

Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130117,China

Abstract:Objective Observation the effect on the traditional Tuina therapy of ShuMan in the prevention and treatment of the rats of diabetic peripheral neuropathy. Method 80 rats were randomly divided into the control group, model group, Tuina group and drug group. The peritoneal injection of STC was used to prepare the rats of diabetic peripheral neuropathy. The SNCV of the sciatic nerve and the VEGF in the sciatic nerve were observed．Results In the SNVC detection, The control group compared with the model group, SNVC showed a significant difference(P<0.01), the tuina group compared with the model group, SNVC showed a significant difference(P<0.01), the drug group compared with the model group, SNVC showed a significant difference(P<0.01), the tuina group compared with the drug group, there was no significant difference in SNVC (P>0.05); in the VEGF detection, The control group compared with the model group, VEGF showed a significant difference(P<0.01), the tuina group compared with the model group, VEGF showed a significant difference(P<0.01), the drug group compared with the model group, VEGF showed a significant difference(P<0.01), the tuina group compared with the drug group, there was no significant difference in VEGF (P>0.05). Conclusion The traditional Tuina therapy of ShuMan can effectively improve the SNVC and the content of VEGF of lower limb sciatic nerve of DPN rats and plays a role in the treatment of the rats of diabetic peripheral neuropathy. The tuina therapy and the drug therapy has the same effect. But the the traditional Tuina therapy of ShuMan is safe, simple, no side effects, is worth popularizing in clinic.

Key words:Tuina; ShuMan; Diabetic peripheral neuropathy; Experimental; Research

(收稿日期：2016.01.09)

【中圖分類號(hào)】R244.1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2016)06-0037-03

作者簡(jiǎn)介：尚坤(1978-)，女，吉林延吉人，博士，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事神經(jīng)系統(tǒng)疾病的中醫(yī)藥治療。通信作者：張欣(1976-)，男，吉林長(zhǎng)春人，博士，在站博士后，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事中醫(yī)手法治未病的臨床與機(jī)理研究。E-mail：1147346490@qq.com

基金項(xiàng)目：吉林省中醫(yī)藥管理局科學(xué)技術(shù)基金項(xiàng)目(2014-Q31)；吉林省教育廳高?？茖W(xué)技術(shù)研究規(guī)劃項(xiàng)目。