菏澤市2015年麻疹疑似病例血清學(xué)和病毒學(xué)檢測分析

賀旭英 馬敬倉

山東省菏澤市疾病預(yù)防控制中心免疫規(guī)劃科，山東菏澤274010

菏澤市2015年麻疹疑似病例血清學(xué)和病毒學(xué)檢測分析

賀旭英 馬敬倉▲

山東省菏澤市疾病預(yù)防控制中心免疫規(guī)劃科，山東菏澤274010

目的分析2015年本地麻疹疑似病例實(shí)驗(yàn)室檢測特點(diǎn)，提高應(yīng)對麻疹疫情的能力，為消除麻疹工作提供技術(shù)支持。方法對2015年1～12月報(bào)告的麻疹疑似病例采集血清學(xué)和病毒學(xué)標(biāo)本，采用ELISA法檢測血清標(biāo)本麻疹I(lǐng)gM抗體，采用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR法檢測麻疹病毒核酸，核酸檢測陽性的標(biāo)本進(jìn)行病毒分離。結(jié)果2015年報(bào)告MLI 400例，血清標(biāo)本、病毒學(xué)標(biāo)本采集率分別為86.25%，8.75%；血清標(biāo)本檢測麻疹I(lǐng)gM陽性率為50.61%（166/328）；風(fēng)疹I(lǐng)gM陽性率為4.60%（15/326）；不同縣區(qū)麻疹I(lǐng)gM陽性率在34.44%～92.96%之間，不同縣區(qū)風(fēng)疹I(lǐng)gM陽性率在0.00%～33.33%之間。病毒學(xué)標(biāo)本中，麻疹病毒核酸檢出率為65.52%，分離1株麻疹病毒，為H1a型；各縣區(qū)均有麻疹發(fā)?。徊煌路萋檎領(lǐng)gM陽性率在0.00%～75.00%之間，陽性率高峰在4月份。結(jié)論為控制麻疹病毒流行，仍要繼續(xù)落實(shí)以提高麻疹疫苗接種率為重點(diǎn)的技術(shù)措施。

麻疹；血清；病毒；消除；基因

麻疹是最具有傳染性的人類疾病之一，可常年發(fā)生，但正常的峰值時(shí)間是發(fā)生在干燥季節(jié)或晚冬、早春，大的流行間隔為2～4年，無動物宿主以及無癥狀攜帶者，麻疹病毒為單一類型，基因型穩(wěn)定，并且無基因重組的證據(jù)。在1963年麻疹減毒活疫苗取得許可證以前，據(jù)估計(jì)，每年全球因麻疹導(dǎo)致死亡的人數(shù)超過200萬人，隨著疫苗覆蓋率不斷增長，因麻疹發(fā)病而導(dǎo)致的死亡下降，在2000～2014年間，常規(guī)疫苗覆蓋率從72%增加到85%，對應(yīng)的死亡病例從55萬人下降到12萬人。在2000年，聯(lián)合國大會通過了“千年發(fā)展目標(biāo)”，其中第四個(gè)目標(biāo)是在2015年前，降低兒童死亡率2/3，而麻疹疫苗覆蓋率為評價(jià)這個(gè)進(jìn)展的3個(gè)指標(biāo)之一；同年，世界衛(wèi)生大會確定了2015年前的3個(gè)里程碑控制目標(biāo)，2012年又通過了“全球疫苗行動計(jì)劃”，目標(biāo)是在2015年前在世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）的四個(gè)區(qū)域中實(shí)現(xiàn)消除麻疹［1，2］。隨著消除麻疹工作的不斷進(jìn)展，WHO提出了消除麻疹工作的驗(yàn)證原則、程序和三條驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)，突顯了麻疹實(shí)驗(yàn)室檢測在麻疹監(jiān)測系統(tǒng)（Measles Surveillance System，MSS）中的基礎(chǔ)作用［3］。2015年，菏澤市麻疹病例出現(xiàn)上升趨勢，為提高麻疹診斷的特異性，掌握麻疹病毒學(xué)特點(diǎn)，提高應(yīng)對麻疹疫情的能力，對全市400例麻疹疑似病例（measles-like illnesses，MLI）標(biāo)本的血清學(xué)檢測、病毒學(xué)檢測結(jié)果進(jìn)行了分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

菏澤市2015年MSS數(shù)據(jù)庫來自中國疾病預(yù)防控制系統(tǒng)/麻疹監(jiān)測信息報(bào)告管理系統(tǒng)；各縣區(qū)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)免疫規(guī)劃專業(yè)人員通過該系統(tǒng)用戶端口將個(gè)案調(diào)查信息、實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果錄入，最終形成當(dāng)年數(shù)據(jù)庫。

1.2 病例調(diào)查依據(jù)及診斷分類

依據(jù)《全國麻疹監(jiān)測方案（2014）》工作要求，對報(bào)告的MLI開展調(diào)查；根據(jù)免疫史、臨床表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果，對MLI分類為實(shí)驗(yàn)室確診病例、臨床診斷病例、排除麻疹風(fēng)疹病例。

1.3 標(biāo)本采集

各縣區(qū)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)免疫規(guī)劃專業(yè)人員對2015年報(bào)告的MLI進(jìn)行調(diào)查，并采集標(biāo)本，采集時(shí)間要求在MLI病例出疹后4～28 d內(nèi)，標(biāo)本包括靜脈血和（或）咽拭子。負(fù)責(zé)標(biāo)本采集，采集靜脈血約2mL，常規(guī)分離血清量后約0.5～1.0 mL，咽拭子采集后保存在3 mL麻疹病毒保存液中，均在-20℃保存，并及時(shí)運(yùn)送至市級麻疹實(shí)驗(yàn)室。其中，病毒保存液配制與分裝：5%牛血清的MEM維持液（pH7.0）：200 mL；Eagl ME溶液（無菌）165.5mL；3%谷氨酰胺（無菌）2.0mL；1萬單位的青鏈霉素20.0 mL；7.5%碳酸氫鈉（無菌）約2.5mL（至pH7.0為止）；新生小牛血清（無菌）10.0mL；將以上配制好的液體用帶外螺旋蓋的無菌4.0 mL的血清管分裝成20mL/支。儲存：將分裝好的病毒保存液置-20℃，臨用前解凍。

1.4 檢測方法

分別采用ELISA法、實(shí)時(shí)熒光RT-PCR法檢測麻疹/風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體、病毒核酸；對病毒核酸陽性標(biāo)本，及時(shí)送山東省疾病預(yù)防控制中心麻疹實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病毒分離、鑒定，操作過程參見WS296-2008麻疹診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］。

1.5 實(shí)驗(yàn)室檢測儀器與試劑

Stepone-PlusTM Real-Time PCR System（美國ABI公司），Anthos 2010酶標(biāo)儀（奧地利Anthos儀器公司）。麻疹/風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體檢測試劑盒由珠海海泰公司生產(chǎn)；麻疹病毒RNA提取試劑盒為QIAGEN公司生產(chǎn)，麻疹病毒核酸檢測試劑盒為江蘇碩世生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

樣本率的χ2分析采用PASW Statistics 18處理，雙側(cè)檢測水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 麻疹、風(fēng)疹實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)比例

在全市400例MLI中，麻疹236例，風(fēng)疹16例，排除病例148例。在麻疹病例中，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室確診的病例的百分構(gòu)成比為70.76%（167/236）；在風(fēng)疹病例中，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室確診的病例的百分構(gòu)成比為81.25%（13/16）。

2.2 全市及縣區(qū)標(biāo)本采集

全市血清標(biāo)本、病毒學(xué)標(biāo)本采集率分別為86.25%、8.75%；各縣區(qū)血清標(biāo)本采集率在72.22%～100.00%之間，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=30.89，v=8，P＜0.05）；各縣區(qū)病毒學(xué)標(biāo)本采集率在0.00%～23.08%之間，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=30.89，v=8，P＜0.05）。經(jīng)核查，328例MLI采集到合格的血清標(biāo)本，29例MLI采集到合格的病毒學(xué)標(biāo)本。見表1。

表1 菏澤市各縣區(qū)標(biāo)本采集情況統(tǒng)計(jì)

2.3 麻疹/風(fēng)疹I(lǐng)gM檢測

對328例血清標(biāo)本開展麻疹I(lǐng)gM檢測，陽性率為50.61%（166/328）；對326例血清標(biāo)本檢測風(fēng)疹I(lǐng)gM，陽性率為4.60%（15/326）；不同縣區(qū)麻疹I(lǐng)gM陽性率在34.41%～92.96%之間（χ2=69.31，v=8，P＜0.05），不同縣區(qū)風(fēng)疹I(lǐng)gM陽性率在0.00%～33.33%之間（χ2= 54.96，v=8，P＜0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 菏澤市2015年各縣區(qū)血清學(xué)檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)

2.4 麻疹/風(fēng)疹病毒核酸檢測與病毒分離

共有5個(gè)縣區(qū)采集到29例合格病毒學(xué)標(biāo)本，分別為曹縣、單縣各1例，巨野縣17例，鄄城縣7例，東明縣3例，經(jīng)檢測，麻疹核酸陽性19例，陽性率為65.52%（19/29），其中曹縣標(biāo)本中未檢出，單縣陽性1例，巨野縣陽性8例，鄄城縣陽性7例，東明縣陽性3例；省級麻疹實(shí)驗(yàn)室在陽性標(biāo)本中，只分到麻疹病毒1株，證實(shí)為H1a型。風(fēng)疹核酸陽性0例，陽性率為0（0/19），無風(fēng)疹病毒分離結(jié)果。

2.5 不同月份麻疹/風(fēng)疹I(lǐng)gM檢測情況

不同月份麻疹I(lǐng)gM陽性率在0.00%～75.00%之間（χ2=16.43，v=11，P=0.126），陽性率高峰在4月份；不同月份風(fēng)疹I(lǐng)gM率在0.00%～50.00%之間（χ2=98.12，v=11，P=0.000），陽性檢出率分布于2～6月份，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 菏澤市2015年不同月份麻疹/風(fēng)疹I(lǐng)gM檢測分布

2.6 不同年齡組麻疹I(lǐng)gM檢測情況

MLI病例年齡在5個(gè)月～45歲。不同年齡組麻疹I(lǐng)gM陽性率在13.79%～86.96%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=27.63，v=1，P=0.000）。低年齡組如＜8月齡、8月齡、9～11月齡、1歲的陽性數(shù)構(gòu)成比較多，而20歲以上成人組的陽性數(shù)構(gòu)成比相對也較高。見表4。

表4 不同年齡組麻疹I(lǐng)gM檢測結(jié)果

2.7 全市及不同縣區(qū)排除病例報(bào)告發(fā)病率

根據(jù)麻疹/風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體、病毒核酸檢測結(jié)果，在400例MLI中，共排除148例，報(bào)告發(fā)病率為1.79/10萬；各縣區(qū)排除病例在3～60例之間，報(bào)告發(fā)病率在0.28/ 10萬～8.26/10萬之間，見表5。

表5 菏澤市2015年排除病例報(bào)告發(fā)病率統(tǒng)計(jì)

3 討論

3.1 全球2010～2015年血清、病毒序列檢測及排除病例概況［5-7］

在2000年，為了對麻疹監(jiān)測提供高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)室支持，WHO建立了“全球麻疹風(fēng)疹實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)（Global Measles and Rubella Laboratory Network，GMRLN）”，其在證實(shí)消除麻疹的過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。WHO提出的實(shí)驗(yàn)室操作指標(biāo)有四個(gè)方面：在國家層面上，排除的非麻疹/非風(fēng)疹的病例發(fā)病率；為開展實(shí)驗(yàn)室證實(shí)而采集血清標(biāo)本的疑似病例的百分構(gòu)成比；經(jīng)實(shí)驗(yàn)室證實(shí)的病毒傳播鏈條的百分構(gòu)成比，要求有充足的病毒學(xué)標(biāo)本（即：充足的病毒學(xué)監(jiān)測）；血清檢測結(jié)果在4 d內(nèi)報(bào)告的百分構(gòu)成比。根據(jù)每月度報(bào)告的基于病例監(jiān)測的數(shù)據(jù)，在2010～2015年度，全球血清標(biāo)本檢測數(shù)量穩(wěn)定上升，共有742 187個(gè)標(biāo)本開展了麻疹I(lǐng)gM檢測，并報(bào)告了27 832個(gè)病毒序列。在2015年，有160個(gè)國家報(bào)告了基于病例監(jiān)測的數(shù)據(jù)，采集了160 644個(gè)血清標(biāo)本，其中有146 625個(gè)標(biāo)本開展了麻疹I(lǐng)gM檢測，陽性率為31%，有112 461個(gè)標(biāo)本開展了風(fēng)疹I(lǐng)gM檢測，陽性率為12%。

為支持病毒學(xué)監(jiān)測，WHO建立了標(biāo)準(zhǔn)方案，用以監(jiān)測全球基因型分布和跟蹤麻疹病毒、風(fēng)疹病毒傳播。在2010～2015年度，共有27 023個(gè)麻疹病毒序列提交到WHO麻疹核酸數(shù)據(jù)庫。在目前已知麻疹病毒共有24個(gè)基因型中，全球范圍內(nèi)2005～2014年間僅檢測到13個(gè)基因型，而在2010～2015年度，檢測到8個(gè)基因型，分別是B3、D3、D4、D6、D8、D9、G3、H1，最近5年發(fā)生傳播的麻疹病毒的基因型數(shù)量進(jìn)一步減少。

從總體上看，全球大部分實(shí)驗(yàn)室的基于病例證實(shí)的標(biāo)本采集運(yùn)行指標(biāo)、實(shí)驗(yàn)室結(jié)果報(bào)告的及時(shí)性滿足要求，但在2015年，排除病例的報(bào)告發(fā)病率存在不足，有62個(gè)（32%）國家沒有能力報(bào)告排除病例的發(fā)病率，有46個(gè)（24%）國家報(bào)告的排除病例的發(fā)病率＜1/10萬，有20個(gè)（10%）國家報(bào)告的排除病例的發(fā)病率在1/10萬～2/10萬之間，有67個(gè)（34%）國家報(bào)告的排除病例的發(fā)病率＞2/10萬。

3.2 國內(nèi)麻疹血清學(xué)、病毒學(xué)檢測現(xiàn)狀與菏澤市實(shí)驗(yàn)室檢測評價(jià)

國內(nèi)MLI標(biāo)本類型主要以血清標(biāo)本為主，病毒學(xué)標(biāo)本相對較少。在2011～2013年，我國每年報(bào)告的MLI數(shù)量約在3.46萬人～7.84萬人，血清標(biāo)本采集率達(dá)到90.37%～97.30%，在麻疹病毒分子水平監(jiān)測方面，H1a基因亞型所占的比例在98.92%～97.28%，其他類型極少［8-11］。國內(nèi)不同地區(qū)報(bào)告的麻疹和風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體陽性率差別較大，劉剛等［12］報(bào)道2013年4～7月深圳市檢測血清標(biāo)本210份，麻疹I(lǐng)gM抗體陽性率為73.33%，檢測咽拭子標(biāo)本217份，麻疹病毒核酸陽性率為82.03%；單竹周等［13］報(bào)道2011～2014年黔東南州檢測血清標(biāo)本705例，麻疹I(lǐng)gM陽性率為1.99%，風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體陽性率為4.68%，各年齡組分布差異；呂燕等［14］報(bào)道2013年濟(jì)南市檢測血清樣本817例，麻疹I(lǐng)gM陽性率為54.71%，在21份麻疹核酸陽性病毒學(xué)檢出本土流行野毒株H1a基因型。樊亞麗［15］報(bào)道2011～2013年駐馬店市檢測血清標(biāo)本680份，麻疹I(lǐng)gM抗體陽性率為4.12%，風(fēng)疹I(lǐng)gM陽性率為2.06%。張偉宏等［16］報(bào)道2014年銀川市麻疹I(lǐng)gM抗體陽性率為25.1%（53/211），麻疹病毒核酸陽性率為30.3%（64/ 211），并分離到11株麻疹病毒，為H1a。與上述地區(qū)相比較，菏澤市2015年血清標(biāo)本麻疹I(lǐng)gM陽性陽性率為50.61%，風(fēng)疹I(lǐng)gM陽性率為4.60%，病毒學(xué)標(biāo)本有19例麻疹核酸陽性，并檢出麻疹病毒H1a基因型，表明，全市麻疹流行強(qiáng)度要高于風(fēng)疹流行強(qiáng)度，這一特點(diǎn)也與全球2010～2015年間麻疹I(lǐng)gM陽性率高于風(fēng)疹I(lǐng)gM陽性率相一致［7］。

從不同月份的檢測結(jié)果分析，菏澤市幾乎全年都有麻疹病例出現(xiàn)，但5～9月份為發(fā)病高峰期，病例數(shù)急劇增加，10月份發(fā)病逐漸下降；在地域分布方面，麻疹病毒在九縣區(qū)都存在傳播，其中巨野縣檢出最高。這種檢測結(jié)果差異可能與當(dāng)?shù)芈檎?、風(fēng)疹流行強(qiáng)度、標(biāo)本質(zhì)量等因素有關(guān)，反映了不同縣區(qū)的麻疹控制工作的不平衡性。

在全市排除病例的報(bào)告發(fā)病率方面，2015年報(bào)告發(fā)病率為1.79/10萬，仍不足2/10萬，不同縣區(qū)的報(bào)告發(fā)病率在0.28/10萬～8.26/10萬，提示，全市麻疹監(jiān)測的質(zhì)量仍有待提高，各縣區(qū)的監(jiān)測能力不平衡，應(yīng)予以改善。

3.3 菏澤市麻疹控制工作的重點(diǎn)探討

本調(diào)查研究表明，2015年菏澤市全年麻疹繼續(xù)發(fā)生，但各縣區(qū)發(fā)病率各不相同，低年齡組和成人均有發(fā)病人群。根據(jù)麻疹控制工作現(xiàn)狀，加強(qiáng)麻疹疫苗預(yù)防接種工作仍是重點(diǎn)，要繼續(xù)落實(shí)國家有關(guān)的消除麻疹的技術(shù)策略，在借鑒外地經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，通過建立完善預(yù)約、提醒機(jī)制，增加服務(wù)頻次等方式方法，重點(diǎn)提高麻疹疫苗及時(shí)接種率，加強(qiáng)免疫規(guī)劃政策的宣傳力度，提高社會公眾參與免疫規(guī)劃的積極性、主動性［17］。

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Analysis on the serological and viral detection of measles-like illnesses of Heze City in 2015

HE Xuying MA Jingcang
Department of Enlarged Program on Immunization，Heze Center for Disease Control and Prevention in Shandong Province，Heze 274010，China

Objective To analyze the characteristics of laboratory testing ofmeasles-like illnesses，to improve the ability in dealingwithmeasles epidemic，and to provide technical support for the elimination ofmeasles.M ethods The MLI serological and virological specimenswere tested respectively formeasles IgM antibody through ELISA method，and for measles virus nucleic acid through real-time fluorescence RT-PCRmethod，nucleic acid detection of positive samples for virus isolation.Results 400 cases ofMLIwere reported in 2015.With the collecting rates of blood serum specimens and pathogen specimen of the MLIwas 86.25%and 8.75%，measles IgM positive rate in detection of serum specimens was 50.61%（166/328），and rubella IgM positive rate was 4.60%（15/326）.Themeasles IgM positive rates in different counties were between 34.44%and 92.96%，the rubella IgM positive rates in different counties between 0.00%and 33.33%.In the pathogenic samples，themeasles virus nucleic acid detection rate was 65.52%，1 strain ofmeasles virus was isolated，H1a conformed；There weremeasles reported in all counties and districts.Themeasles IgM positive rates in differentmonthswere between 0.00%and 75.00%with the peak of positive rate in April.Conclusion To control the prevalence ofmeasles virus，we still need to continue to implement the technicalmeasures to improve the vaccination rate ofmeasles vaccine.

Measles；Serum；Virus；Elimination；Gene

R511；R181.3

B

1673-9701（2016）18-0116-05

2016-04-12）

▲通訊作者