運(yùn)動(dòng)對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠O PG、RA NK L表達(dá)的影響

李麗輝 楊杰 董潔瓊 秦淑娟 董苗淼 張玲莉 鄒軍

1 上海體育學(xué)院運(yùn)動(dòng)科學(xué)學(xué)院（上海200438）

2 上海體育學(xué)院科研處

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥是中老年女性多發(fā)病，運(yùn)動(dòng)防治骨質(zhì)疏松癥的作用越來(lái)越受到關(guān)注。運(yùn)動(dòng)一定程度上可以防治骨質(zhì)疏松癥，作為非藥物療法，運(yùn)動(dòng)有療效可靠、副作用小、開銷節(jié)省等優(yōu)點(diǎn)。而運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度、運(yùn)動(dòng)方式等對(duì)骨量有不同影響，運(yùn)動(dòng)防治骨質(zhì)疏松的機(jī)理及臨床療效仍有待研究。本研究以切除卵巢的大鼠作為骨質(zhì)疏松模型，實(shí)施運(yùn)動(dòng)干預(yù)后，采用骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)的方法，觀察運(yùn)動(dòng)對(duì)骨質(zhì)疏松癥的防治作用；并從破骨細(xì)胞分化通路OPG-RANKL-RANK中OPG、RANKL蛋白及基因表達(dá)的角度，探討運(yùn)動(dòng)防治骨質(zhì)疏松的機(jī)理。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)用清潔級(jí)Wistar雌性大鼠，體重200～220 g，由中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK-（軍）2002-001。本實(shí)驗(yàn)在中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所進(jìn)行，大鼠動(dòng)物室許可證號(hào)為SYXK11-00-0039，為清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑

己烯雌酚購(gòu)自北京益民藥業(yè)有限公司（批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H11020899），配成0.0045 mg/ml的濃度。大鼠OPG和RANKL免疫組化一抗和原位雜交試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司，二抗二步法免疫組化檢測(cè)試劑購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 分組及處理

65只實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)平均分為5組，每組13只，造模使個(gè)別大鼠死亡，有效實(shí)驗(yàn)大鼠分別是正常對(duì)照組12只，假手術(shù)組12只，模型組12只，陽(yáng)性對(duì)照組13只，運(yùn)動(dòng)組11只。

摘除模型組、陽(yáng)性對(duì)照組和運(yùn)動(dòng)組大鼠雙側(cè)卵巢。假手術(shù)組只切除小塊脂肪組織，但不摘除卵巢。術(shù)后1個(gè)月，參照文獻(xiàn)［1］，運(yùn)動(dòng)組大鼠在電動(dòng)跑臺(tái)上進(jìn)行中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)，具體運(yùn)動(dòng)方案見(jiàn)表1。陽(yáng)性對(duì)照組大鼠灌服已烯雌酚（0.045 mg/kg，給藥濃度為0.0045 mg/ml），正常對(duì)照組、假手術(shù)組、模型組和運(yùn)動(dòng)組大鼠同時(shí)灌服等容積蒸餾水。運(yùn)動(dòng)與灌胃均是每周5天，休息2天，持續(xù)3個(gè)月。

表1 大鼠運(yùn)動(dòng)方案

在處死大鼠前16天和前3天，對(duì)各組大鼠腹腔注射鹽酸四環(huán)素（30 mg/kg體重），目的是對(duì)骨進(jìn)行熒光標(biāo)記。將大鼠斷頭處死并剝離脛骨，用中性多聚甲醛固定，左側(cè)脛骨制成脫鈣骨冰凍切片，右側(cè)脛骨制成不脫鈣骨切片，以檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。

1.3.2 指標(biāo)檢測(cè)和方法

1.3.2.1 骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo)檢測(cè)

骨組織形態(tài)檢測(cè)指標(biāo)包括骨小梁體積百分比（TBV%）、骨小梁吸收表面百分比（TRS%）、骨小梁形成表面百分比（TFS%）、活性生成表面百分比（AFS%）、骨小梁礦化率（MAR）、骨小梁骨生成率（BFR）、類骨質(zhì)平均寬度（OSW）和骨皮質(zhì)礦化率（mAR）。

不脫鈣骨切片的制作及染色：取大鼠右側(cè)脛骨近端1/3，去除軟組織，磨去左右兩側(cè)部分皮質(zhì)，乙醇逐級(jí)脫水，二甲苯透明，每級(jí)各兩次，每次24小時(shí)。配制浸透液：Ⅰ液（甲基丙烯酸甲酯75 ml、鄰苯二甲酸二丁酯25 ml）；Ⅱ液（在Ⅰ液的基礎(chǔ)上加過(guò)氧化苯甲酰1g）；Ⅲ液（在Ⅰ液的基礎(chǔ)上加過(guò)氧化苯甲酰2.5 g）。以上三液均用磁力攪拌器充分?jǐn)噭颍瑯?biāo)本在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ液中各浸透36小時(shí)。在青霉素小瓶中注入約5 ml的Ⅲ液（包埋液）后，將標(biāo)本按同一方向放入瓶中，塞緊瓶蓋，置于40℃烘箱中聚合3～4天，變?yōu)闊o(wú)色透明堅(jiān)硬包埋塊。砸碎小瓶，取出包埋塊，用銼刀修塊。在Reicheit-Jung2040切片機(jī)上，用鎢鋼刀分別切出5μm和10μm的縱向不脫鈣骨切片。其中，5μm切片先置于甲基丙烯酸甲酯中2小時(shí)和二甲苯中兩次各1小時(shí)，溶掉樹脂，梯度乙醇至水，甲苯胺藍(lán)染色，采用Leica Qwin圖像分析系統(tǒng)計(jì)量分析。10μm切片則直接用于熒光觀察。

1.3.2.2 成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG和RANKL蛋白表達(dá)檢測(cè)

采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)脛骨OPG和RANKL蛋白表達(dá)。結(jié)果判斷：成骨細(xì)胞（OB）和間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal Stem Cells,MSC）陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞胞漿著色呈棕黃色。采用Leica Qwin圖像分析系統(tǒng)，隨機(jī)檢測(cè)骺板以下髓腔內(nèi)5個(gè)以上高倍視野（×400），計(jì)算每個(gè)視野的陽(yáng)性面積比，取其平均值。OB陽(yáng)性面積比為每個(gè)視野內(nèi)胞漿著色呈棕黃色的OB面積占視野內(nèi)骨小梁面積的百分比，以其作為陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞密度（簡(jiǎn)稱陽(yáng)性密度）；MSC陽(yáng)性面積比為每個(gè)視野內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞面積占視野內(nèi)去除骨小梁的骨髓腔面積的百分比，以其作為陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞密度（簡(jiǎn)稱陽(yáng)性密度）。

1.3.2.3 成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG和RANKLmRNA表達(dá)檢測(cè)

采用原位雜交方法檢測(cè)脛骨OPG和RANKL mRNA表達(dá)。結(jié)果判斷：成骨細(xì)胞、骨髓基質(zhì)細(xì)胞陽(yáng)性反應(yīng)，細(xì)胞胞漿著色呈棕黃色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS17.0軟件包，運(yùn)用單因素方差分析處理數(shù)據(jù)，組間兩兩比較進(jìn)行q檢驗(yàn)。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（± s）表示。

2 結(jié)果

2.1 骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo)

表2顯示：模型組和運(yùn)動(dòng)組大鼠TBV%顯著低于假手術(shù)組，陽(yáng)性對(duì)照組和運(yùn)動(dòng)組顯著高于模型組，且陽(yáng)性對(duì)照組顯著高于運(yùn)動(dòng)組；模型組大鼠TRS%、TFS%、AFS%顯著高于假手術(shù)組，陽(yáng)性對(duì)照組和運(yùn)動(dòng)組顯著低于模型組。

表3顯示：模型組大鼠MAR、BFR、mAR、OSW顯著高于假手術(shù)組，陽(yáng)性對(duì)照組和運(yùn)動(dòng)組顯著低于模型組；且運(yùn)動(dòng)組BFR、mAR顯著高于陽(yáng)性對(duì)照組。

表2 各組大鼠脛骨TBV%、TRS%、TFS%和AFS%比較

表3 各組大鼠脛骨MAR、BFR、mAR和OSW比較

2.2 OPG蛋白和mRNA表達(dá)

表4顯示：模型組大鼠成骨細(xì)胞、骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG蛋白和mRNA表達(dá)顯著低于假手術(shù)組，陽(yáng)性對(duì)照組和運(yùn)動(dòng)組顯著高于模型組；陽(yáng)性對(duì)照組OB OPG蛋白、OB OPG mRNA和MSC OPG mRNA顯著高于運(yùn)動(dòng)組。

2.3 RANKL蛋白和mRNA表達(dá)

表5顯示：模型組大鼠成骨細(xì)胞、骨髓基質(zhì)細(xì)胞RANKL蛋白及mRNA的表達(dá)顯著高于假手術(shù)組，陽(yáng)性對(duì)照組和運(yùn)動(dòng)組顯著低于模型組。

表4 各組大鼠成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG蛋白和mRNA表達(dá)比較

3 討論

3.1 運(yùn)動(dòng)對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的影響

人體及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均表明［2，3］，即使方式不一，只要強(qiáng)度適宜，運(yùn)動(dòng)對(duì)骨組織形態(tài)學(xué)指標(biāo)都有顯著促進(jìn)作用。有研究表明［4］，適宜強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)增加血雌二醇和睪酮分泌，促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖，加快新骨形成，最終增加骨量和骨密度。運(yùn)動(dòng)對(duì)骨質(zhì)疏松的影響受很多因素制約，如運(yùn)動(dòng)方式、強(qiáng)度和頻率以及運(yùn)動(dòng)者的體成分等。有研究［5］發(fā)現(xiàn)，跑步、負(fù)重鍛煉對(duì)持重骨骨密度的影響比游泳或騎自行車等非負(fù)重運(yùn)動(dòng)大些，而非負(fù)重運(yùn)動(dòng)不會(huì)顯著提高持重骨骨密度。王紅升等［6］研究表明，長(zhǎng)時(shí)間適宜強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后，老齡鼠股骨生物力學(xué)性能得到很大改善，長(zhǎng)時(shí)間高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)則會(huì)降低老齡鼠骨組織生物力學(xué)性能，而低強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)對(duì)骨組織生物力學(xué)性能無(wú)明顯影響。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，長(zhǎng)時(shí)間適宜強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)能延緩骨細(xì)胞衰老和骨組織功能衰減。

TBV%是骨小梁體積占被測(cè)骨髓腔總體積的百分比，是衡量骨量水平的主要標(biāo)志；TRS%是不規(guī)則、凹凸不平的骨小梁表面占骨小梁表面的百分比，即有成骨細(xì)胞被覆的類骨質(zhì)表面占骨小梁表面的百分比。它們可以分別評(píng)價(jià)破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞活性。在一定程度上，MAR、OSW和mAR也能反映成骨細(xì)胞的活動(dòng)狀況，因此常常同TFS%一起反映骨形成情況。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大鼠切除卵巢后脛骨TBV%顯著降低，表明大鼠骨量減少，而TRS%、TFS%、MAR、OSW和mAR均顯著升高，則表明大鼠切除卵巢后成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞活性均顯著增強(qiáng)。運(yùn)動(dòng)干預(yù)后，脛骨TBV%顯著升高，TRS%及TFS%、MAR、OSW和mAR均顯著降低，表明運(yùn)動(dòng)增加骨量，降低破骨細(xì)胞活性，對(duì)防治骨質(zhì)疏松有積極作用。

3.2 運(yùn)動(dòng)對(duì)破骨細(xì)胞分化傳導(dǎo)通路OPG-RANKL-RANK的影響

OPG對(duì)骨組織有特異性作用，是影響破骨細(xì)胞分化、成熟，調(diào)節(jié)骨代謝的關(guān)鍵決定性因子。RANKL是破骨細(xì)胞前體細(xì)胞分化為成熟破骨細(xì)胞的必需因子，可促進(jìn)破骨細(xì)胞分化，增強(qiáng)成熟破骨細(xì)胞活力，阻止破骨細(xì)胞凋亡。OPG-RANKL-RANK系統(tǒng)在破骨細(xì)胞激活、生成、分化和成熟的過(guò)程中起著決定性作用，是非常重要的破骨細(xì)胞分化調(diào)節(jié)通路。高麗等［7］觀察了2月齡雌性SD大鼠進(jìn)行10周大強(qiáng)度跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)后出現(xiàn)的運(yùn)動(dòng)性動(dòng)情周期抑制，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，運(yùn)動(dòng)性動(dòng)情周期抑制雌性大鼠顯微結(jié)構(gòu)顯示皮質(zhì)骨變薄，破骨細(xì)胞數(shù)目增多，松質(zhì)骨骨小梁數(shù)目減少、纖細(xì)、排列稀疏，超微結(jié)構(gòu)顯示衰老骨細(xì)胞數(shù)目增多，少數(shù)細(xì)胞呈現(xiàn)凋亡早期特征，同時(shí)骨組織OPG mRNA表達(dá)降低，OPGL mRNA表達(dá)增加。長(zhǎng)期大強(qiáng)度跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)性動(dòng)情周期抑制的機(jī)理可能由于雌激素水平降低，改變了骨組織局部因子水平，這些因子調(diào)節(jié)骨組織OPG/OPGL相對(duì)表達(dá)水平，影響成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞數(shù)目或活性，導(dǎo)致骨結(jié)構(gòu)改變。實(shí)驗(yàn)研究表明［8］，250 km超長(zhǎng)距離跑后第3天，血清破骨細(xì)胞分化因子（RANKL）和OPG水平較運(yùn)動(dòng)前有所上升。另一項(xiàng)研究也顯示［9］，超過(guò)42.195 km的長(zhǎng)距離跑才能引起OPG上升。West等［10］的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，絕經(jīng)運(yùn)動(dòng)組婦女血清OPG水平較正常月經(jīng)運(yùn)動(dòng)組存在顯著性差異，正常月經(jīng)安靜組婦女血清OPG水平最低。有研究報(bào)道［11］，超負(fù)荷運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致心肌細(xì)胞分泌OPG量下降，其與破骨細(xì)胞分化因子的比例也下降，導(dǎo)致破骨細(xì)胞活性增強(qiáng)，骨吸收增加。Tang等［12］研究表明，施加機(jī)械力刺激后，成骨細(xì)胞OPG mRNA和蛋白表達(dá)均上升，而RANKL mRNA和蛋白表達(dá)均下降。劉麗等［13］的體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，機(jī)械力作用下骨髓基質(zhì)細(xì)胞RANKL mRNA表達(dá)減少，OPG mRNA表達(dá)增加，提示生理性應(yīng)力顯著影響大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG/RANKL mRNA表達(dá)變化。研究表明［14］，小鼠去卵巢后骨髓細(xì)胞過(guò)度表達(dá)RANKL而OPG表達(dá)降低，導(dǎo)致骨吸收過(guò)度活躍。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證明了這一點(diǎn)。雌激素對(duì)人成骨細(xì)胞OPG表達(dá)有升調(diào)節(jié)作用，對(duì)RANKL表達(dá)有降調(diào)節(jié)作用。同時(shí)，適量運(yùn)動(dòng)一方面促進(jìn)血液循環(huán)，促進(jìn)神經(jīng)體液調(diào)節(jié)，改善激素調(diào)控過(guò)程，而雌激素直接作用于成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞上的雌激素受體，調(diào)節(jié)骨代謝；另一方面，雌激素等主要影響骨代謝的激素通過(guò)OPG-RANKL-RANK系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)對(duì)骨代謝的調(diào)節(jié)［15］。

我們的前期研究［16，17］結(jié)果表明，運(yùn)動(dòng)對(duì)骨形成有明顯刺激作用，其可能通過(guò)提高去卵巢大鼠血清CT、E2含量，降低BGP含量，使雌激素、IL-1、IL-6和PGE2等細(xì)胞因子達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡，維持骨吸收和形成的正常轉(zhuǎn)換速率。體內(nèi)諸多激素和因子，如性激素、降鈣素（CT）、骨鈣素（BGP）、甲狀旁腺激素（PTH）、1,25-二羥基維生素D3［1，25（OH）2D3］等；白細(xì)胞介素 1（IL-1）、白細(xì)胞介素4（IL-4）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子（TNF）等幾乎均通過(guò)影響OPG-RANKLRANK系統(tǒng)影響骨代謝［18］。本次實(shí)驗(yàn)采用中等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)，觀察其對(duì)OPG和RANKL蛋白及基因的表達(dá)，且運(yùn)動(dòng)干預(yù)從大鼠去卵巢造模后1個(gè)月開始（去卵巢后到骨質(zhì)疏松形成需要的時(shí)間為2～3個(gè)月），持續(xù)3個(gè)月，從預(yù)防與治療兩個(gè)方面探討運(yùn)動(dòng)對(duì)骨質(zhì)疏松的作用效果與機(jī)理。結(jié)果表明，運(yùn)動(dòng)顯著升高切除卵巢大鼠成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG蛋白和mRNA表達(dá)，降低RANKL蛋白和mRNA表達(dá)，而OPG與RANKL結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)性減少RANKL與RANK的結(jié)合，抑制破骨細(xì)胞分化成熟，防止骨過(guò)度吸收，起到一定的骨保護(hù)作用。本研究從破骨細(xì)胞分化調(diào)節(jié)通路OPG-RANKL-RANK的角度，初步揭示了運(yùn)動(dòng)防治骨質(zhì)疏松的機(jī)理。

4 總結(jié)

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，運(yùn)動(dòng)對(duì)去卵巢大鼠骨組織形態(tài)計(jì)量相關(guān)指標(biāo)有一定的改善作用，對(duì)破骨細(xì)胞分化傳導(dǎo)通路OPG-RANKL-RANK中的OPG和RANKL蛋白及基因表達(dá)有一定調(diào)節(jié)作用，對(duì)去卵巢所致的大鼠骨質(zhì)疏松癥有一定的防治作用。

［1］Bedford TG.Maximum oxygen consumption of rats and its changes with various experimental procedures.J Appl Physiol，1979，47（6）：1278-1283.

［2］梁鴻，鄭陸，閻守扶，等.運(yùn)動(dòng)對(duì)骨形態(tài)結(jié)構(gòu)、骨密度和骨生物力學(xué)特征的影響.首都體育學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，21（2）：202-204.

［3］房冬梅，張林.不同模式跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)對(duì)生長(zhǎng)期大鼠長(zhǎng)骨形態(tài)計(jì)量學(xué)參數(shù)的影響.中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志，2009，28（6）：654-656.

［4］王沛，劉春，黃欣加.骨質(zhì)疏松的運(yùn)動(dòng)防治研究.南京體育學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2003，2（4）：30-33.

［5］Evans EM，Racette SB，Van Pelt RE，et al.Effects of soyprote in isolate and moderate exercise on bone turnover and bone mineral density in postmenopausal women.Menopause，2007，14（3 Pt1）：481-488.

［6］王紅升，段濤，杜瑞卿，等.不同強(qiáng)度的跑跳運(yùn)動(dòng)對(duì)老齡大鼠股骨生物力學(xué)特性影響的動(dòng)態(tài)實(shí)驗(yàn)研究.中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2009，24（7）：600-603.

［7］高麗，鄭陸，李曉霞，等.運(yùn)動(dòng)性動(dòng)情周期抑制雌性大鼠的骨結(jié)構(gòu)與骨組織OPG mRNA、OPGL mRNA的表達(dá).天津體育學(xué)報(bào)，2005，20（6）：22-25.

［8］Kerschan-Schindl K，Thalmann M，Sodeck GH，et al.A 246-km continuous running race causes significant changes in bone metabolism.Bone，2009，45（6）：1079-1083.

［9］Ziegler S，Niessner A，Richter B，et al.Endurance running acutely raises plasma osteoprotegerin and lowers plasma receptor activator of nuclear factor kappa B ligand.Metabolism，2005，54（7）：935-938.

［10］West SL，Scheid JL，De Souza MJ.The effect of exercise and estrogen on osteoprotegerin in premenopausal women.Bone，2009，44（1）：137-144.

［11］Lieberman IH，Dudeney S，Reinhardt MK，et al.Initial outcome and efficacy of kyphoplasty in the treatment of painful osteoparotic vertebral compression fractures.Spine，2001，26（14）：1631-1638.

［12］Tang L，Lin Z，Li YM.Effects of different magnitudes of mechanical strain on osteobalsts in vitro.Biochem Biophys Res Commun，2006，344（3）：122-128.

［13］劉麗，張曉聰，鄭茜聰，等.機(jī)械應(yīng)力影響鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞骨保護(hù)素/NF-kB受體活化劑配體mRNA表達(dá)變化.細(xì)胞生物學(xué)雜志，2006，28：747-751.

［14］葛月賓，王麗君.小鼠去卵巢骨質(zhì)疏松模型的建立及OPG/RANKL的表達(dá).中國(guó)中醫(yī)骨傷科雜志，2008，16（12）：33-35.

［15］候穎，鄭陸，朱一力.運(yùn)動(dòng)中雌激素通過(guò)OPG-RANKLRANK系統(tǒng)對(duì)骨代謝的影響.吉林體育學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，26（3）：73-75.

［16］鄒軍，董苗淼，張麗，等.運(yùn)動(dòng)配合左歸丸對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的偶聯(lián)信號(hào)IL-1、IL-6及COX-2傳遞的影響.中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志，2010，16（6）：407-411.

［17］鄒軍，呂爽，屠嘉衡，等.有氧運(yùn)動(dòng)配合左歸丸對(duì)去卵巢所致大鼠骨質(zhì)疏松的影響.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2009，15（4）：272-276.

［18］Gori F，Hofbauer LC，Dunstan CR，et al.The expression of osteoprotegerin and RANK ligand and the support of osteoclast by stromalosteoblast lineage cells are developmentally regulated.Endocrinology，2000，141（12）：4768-4776.