首烏補腎膠囊對糖皮質(zhì)激素致腎陽虛模型小鼠的影響*

王粉俠　郭　冬　杜　霞　孟　雪　任　慧　李彤暉

陜西省友誼醫(yī)院(西安 710068)

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首烏補腎膠囊對糖皮質(zhì)激素致腎陽虛模型小鼠的影響*

王粉俠郭冬△▲杜霞△孟雪△任慧△李彤暉△

陜西省友誼醫(yī)院(西安 710068)

摘要目的：探討首烏補腎膠囊治療腎陽虛的中藥藥理學(xué)基礎(chǔ)。方法：采用糖皮質(zhì)激素制作“陽虛”動物模型，觀察該藥對此模型小鼠一般體征、體重、體溫、自主活動、低溫游泳存活時間、胸腺指數(shù)、睪丸指數(shù)和附睪指數(shù)等指標的影響。結(jié)果：劑量為2.28、1.14g生藥/kg能緩解模型小鼠的體重下降，提高體溫；增加自主活動，延長低溫游泳存活時間，增強耐寒耐疲勞能力；能升高胸腺指數(shù)；增加睪丸指數(shù)和附睪指數(shù)。結(jié)論：此藥對糖皮質(zhì)激素陽虛模型小鼠有治療作用，能明顯改善氫化可的松致腎陽虛模型小鼠的陽虛體征，增強機體生理功能，提高對外界不良刺激的耐受力，這些藥理作用可能與其補腎壯陽功效有關(guān)。

主題詞腎陽虛@首烏補腎膠囊動物，實驗小鼠

首烏補腎膠囊為我院院內(nèi)制劑，已在臨床使用十年，療效好，副作用小，生物利用度高，治愈了許多患者。目前已完成該制劑制備工藝、質(zhì)量標準及中試生產(chǎn)研究工作。處方由何首烏、山茱萸、女貞子等組成，具有滋補肝腎，填精生子功能，用于腰膝酸軟，眼目干澀，情志抑郁，性功能差，精液量少，精子活動力差。本文報道為該制劑藥效學(xué)研究部分，為申報新藥奠定基礎(chǔ)。

1材料1.1實驗動物KM種小鼠，雄性，體重18～22g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，實驗動物質(zhì)量許可證號：SCXK(陜)2007-001。

1.2儀器與材料 首烏補腎膠囊，我院自制(批號：20150101)；氫化可的松注射液(批號：120426)。精子固定液(碳酸氫鈉5g，福爾馬林1mL，蒸餾水加至100mL，4℃保存)。甲睪酮片(批號110802)。AL104型-電子天平，METTLER TOLEDO生產(chǎn)；MC-106B-電子體溫計；普通光學(xué)顯微鏡，olympus；YLS-1A-多功能小鼠自主活動記錄儀。

2實驗方法取KM種小鼠60只，除空白對照組(去離子水10mL/kg)10只小鼠肌注生理鹽水外，其余小鼠按參考文獻[1-2]方法，每天肌注氫化可的松0.25mg/10g，連續(xù)10d，復(fù)制“陽虛證”動物模型。將成模動物隨機分為模型組(去離子水10mL/kg)、首烏補腎膠囊大、中、小劑量組(2.28、1.14、0.57g生藥/kg)和甲睪酮組(1mg/kg)，每組10只。其余各組造模第11天各組動物灌胃給藥，每天1次，給藥容積10ml/kg，連續(xù)10d，觀察動物一般狀態(tài)。給藥第9天，于給藥后0.5h將各組小鼠置于YLS-1A型-多功能小鼠自主活動記錄儀中先適應(yīng)15min，再按說明書方法計10min內(nèi)的自主活動次數(shù)。末次給藥前禁食12h，末次給藥后0.5h，各組小鼠分別依次稱取體重，用歐姆龍電子體溫計測量肛溫，測冰水游泳時間。處死動物，摘取胸腺、脾臟、腎臟、睪丸、附睪、精囊腺、前列腺等器官，稱重，計算臟器系數(shù)。

統(tǒng)計學(xué)方法 統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS11.0進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均值±標準差表示，采用t值法檢驗。以P<0.05為差異有顯著性意義，結(jié)果如下。

3結(jié)果3.1一般狀態(tài)的影響小鼠肌注氫化可的松造模10d，小鼠出現(xiàn)體重下降，活動減少，反應(yīng)遲鈍，瞇眼，拱背少動，豎毛少澤、消瘦畏寒、顫抖蜷縮，尾冷肢涼，肛溫降低，少飲少食等類似臨床“腎陽虛”狀態(tài)，與空白對照組有明顯差異，說明造模成功。首烏補腎膠囊大、中、小劑量組動物一般狀態(tài)較模型組明顯改善。

3.2體重的影響結(jié)果表明，造模后動物體重較空白對照組降低(P<0.01)，用藥治療后，首烏補腎膠囊2.28、1.14g生藥/kg劑量組體重高于模型組(P<0.01，P<0.05)，見表1。

3.3首烏補腎膠囊對腎陽虛模型小鼠體溫和小鼠自主活動的影響結(jié)果表明，模型組小鼠體溫明顯低于空白對照組(P<0.01)，自發(fā)活動少于空白對照組(P<0.01)。治療后首烏補腎膠囊2.28g生藥/kg、1.14g生藥/kg組小鼠體溫均顯著高于模型組 (P<0.05)，自發(fā)活動多于空白對照組(P<0.05)。提示：首烏補腎膠囊可明顯提高腎陽虛小鼠體溫，增加腎陽虛小鼠的自發(fā)活動,見表2。

3.4對腎陽虛小鼠低溫低溫游泳存活時間的影響通過對腎陽虛小鼠進行低溫游泳存活時間實驗，結(jié)果對照組為12.86±2.79min；模型組為9.09±2.44min；甲睪酮組(藥量1mg/kg)為12.55±2.10min；首烏補腎組三個劑量(2.28g、1.14g、0.57g生藥/ kg)分別為12.75±2.86min、12.41±3.59min、11.77±3.03min。表明模型組小鼠低溫游泳存活時間較空白對照組明顯縮短(P<0.01)，首烏補腎膠囊2.28g生藥/kg、1.14g生藥/kg、0.57g生藥/kg組及甲睪酮組能明顯延長陽虛證小鼠低溫游泳存活時間，與陽虛模型組比較差異有顯著性意義(P<0.05)。提示，首烏補腎膠囊能增強陽虛證小鼠的耐寒耐疲勞能力。

3.5對腎陽虛小鼠免疫器官臟器指數(shù)的影響模型組胸腺指數(shù)與空白對照組比較顯著降低(P<0.01)，首烏補腎膠囊2.28g生藥/kg、1.14g生藥/kg能顯著升高陽虛小鼠胸腺指數(shù) (P<0.05)。首烏補腎膠囊2.28g生藥/kg、1.14g生藥/kg、0.57g生藥/kg能提高腎陽虛模型小鼠睪丸指數(shù)和附睪指數(shù)，與模型組比較差異有顯著性意義(P<0.05)，但對陽虛模型小鼠的脾指數(shù)、腎臟指數(shù)和前列腺+精囊腺指數(shù)無明顯影響。見表3、4。

4討論腎陽虛與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的神經(jīng)內(nèi)分泌免疫系統(tǒng)有關(guān)，表現(xiàn)為不同程度的下丘腦-垂體-靶腺軸功能紊亂[1]。本文采用氫化考的松復(fù)制小鼠“陽虛證”動物模型，表現(xiàn)為體重下降、自發(fā)活動減少、肛溫降低以及低溫游泳時間縮短、胸腺指數(shù)、睪丸指數(shù)和附睪指數(shù)降低，與臨床“腎陽虛”的部分癥狀相似，與文獻報道結(jié)果基本一致[2-4]。

本文觀察了首烏補腎膠囊對糖皮質(zhì)激素致腎陽虛模型小鼠一般體征、體重、體溫、自主活動、低溫游泳存活時間、胸腺指數(shù)、睪丸指數(shù)和附睪指數(shù)等指標的影響。結(jié)果表明本品可明顯改善氫化可的松致小鼠腎陽虛證體征，增強機體生理功能，提高對外界不良刺激的耐受力。首烏補腎膠囊對小鼠的起效劑量約為1.14g生藥/kg，是臨床人日用劑量的15倍。驗證了該制劑的功能，也為開發(fā)此制劑為新藥奠定了基礎(chǔ)。

具文獻報道TGFβR1在睪丸表達異常與腎陽虛不育模型大鼠精子質(zhì)量提高和血清性激素水平改變有關(guān)[5]。因此下一步計劃觀察首烏補腎膠囊對腎陽虛不育模型大鼠血清性激素水平、精子質(zhì)量以及細胞色素P-19表達的影響。

參考文獻

[1] 陳棟煒，蒙一純，方湘娟，等.腎陽虛證本質(zhì)的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究進展和展望[J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2005，14(23)：3175-3177.

[2] 劉欣，張冰，劉小青，等.氫化可的松誘導(dǎo)大鼠類陽虛狀態(tài)的動態(tài)觀察[J].中華中醫(yī)藥雜志，2011，26(1)：126-128.

[3] 何幫劍，肖魯偉，童培建.腎陽虛證動物模型的研究進展[J].中國中醫(yī)急癥，2012，21(8)：95-96.

[4] 惠愛武，董銀蘭，趙崗，等. 骨質(zhì)糖漿對腎陽虛模型小鼠的實驗研究[J].陜西中醫(yī)，2010，31(11)：1547-1549.

[5] 李浩, 趙嬌, 宋歡歡, 等. TGFβR1對腎陽虛不育大鼠睪丸精子及CYP1表達的影響[J]. 陜西中醫(yī)，2014，35(6)：758-759.

(收稿2015-12-20；修回2016-02-20)

Effects of Shouwu Bushen capsule on kidney-yang deficiency mice induced by glucocorticoids

Shaanxi Province Friendship Hospital (Xi’an 710068)

Wang FenxiaGuo DongDu Xiaet al

KEY WORDSKidney-yang deficiency@Shouwu Bushen capsuleAnimal experimentationRats

ABSTRACTObjective: To discuss the pharmacology foundation of Shouwu Bushen capsule against kidney-yang deficiency. Methods: Making the yang deficiency animal model with glucocorticoids. Observing the effects of this drug on the models, including signs, body weight, body temperature, locomotor activity, swimming in cold water survival, thymus index, testis and epididymis index and so on. Results: The drug can relieve weight loss of models, increase body temperature, increase locomotor activity, prolong the survival time of swimming in cold water, enhance the cold and fatigue resistances, increase the thymus index, testicular index and epididymal index, when the dose was 2.28, 1.14g crude drug/kg. Conclusion: The drug can treat the glucocorticoid yang deficiency mice, improve the model’s signs of kidney-yang deficiency induced by the hydrocortisone, enhance the body’s physiological function and improve tolerance to adverse external stimuli. These pharmacological effects may be related with the function of reinforcing kidney-yang.

通訊作者▲

【中圖分類號】R563

【文獻標識碼】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.06.048

*西安市科技計劃項目[2012-SF1205-(5)]

△陜西省中醫(yī)藥研究院(西安710003)