探討冷藏期間實(shí)驗(yàn)室反復(fù)使用HIV質(zhì)控血清對(duì)其穩(wěn)定性的影響

謝　明

(廣西醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,廣西南寧 530031)

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·論著·

探討冷藏期間實(shí)驗(yàn)室反復(fù)使用HIV質(zhì)控血清對(duì)其穩(wěn)定性的影響

謝明

(廣西醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,廣西南寧 530031)

摘要:目的基于冷凍質(zhì)控血清復(fù)溶后在冷藏期間多次反復(fù)使用，對(duì)人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體質(zhì)控血清穩(wěn)定性的影響進(jìn)行探討及尋找應(yīng)對(duì)措施。方法將10支HIV質(zhì)控血清從-20 ℃冰柜取出，室溫平衡30 min使其完全融化，隨機(jī)排列到病例樣本之中，按常規(guī)樣本進(jìn)行加樣檢測,加樣完畢后及時(shí)保存至2～8 ℃冰箱；次日起，上述質(zhì)控品從2～8 ℃冰箱取出室溫平衡30 min后，隨機(jī)排列到病患樣本之中，按常規(guī)樣本進(jìn)行加樣檢測，加樣完畢后及時(shí)保存至2～8 ℃冰箱，重復(fù)以上活動(dòng)至第7天；采用單因素重復(fù)測量資料的方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，同時(shí)，把同一天的10支質(zhì)控品檢測值取平均值作為一個(gè)“檢測點(diǎn)”與日常質(zhì)控圖進(jìn)行比較，觀察變化情況。結(jié)果單因素重復(fù)測量資料的方差分析,說明在不同測量天數(shù)上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=48.515,P<0.01),結(jié)合質(zhì)控圖發(fā)現(xiàn),從第4天開始質(zhì)控值開始出現(xiàn)“告警”狀態(tài)，且呈漂移式的下降至失控狀態(tài)。結(jié)論HIV質(zhì)控血清凍溶后置于2～8 ℃冰箱冷藏，期間反復(fù)多次使用，3 d后穩(wěn)定性受到影響，質(zhì)控圖出現(xiàn)漂移、甚至失控的變化。

關(guān)鍵詞:酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；質(zhì)控血清；穩(wěn)定性；人類免疫缺陷病毒；抗體

人類免疫缺陷病毒(HIV)主要經(jīng)血液以及性傳播途徑傳播,其抗體檢測分為篩查試驗(yàn)(包括初篩和復(fù)檢)和確證試驗(yàn)。篩查方法包含酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)、快速檢測(RT)及其他檢測試驗(yàn)。ELISA檢測HIV抗體具有特異度強(qiáng)、靈敏度高、操作方便等優(yōu)點(diǎn)，是篩查常用方法，但易受到多種因素的影響，造成假陽性或假陰性，因此室內(nèi)質(zhì)控對(duì)提高ELISA檢測抗-HIV的準(zhǔn)確度起著關(guān)鍵的作用，每一次實(shí)驗(yàn)必須使用室內(nèi)質(zhì)控品，以便監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性，提高篩查實(shí)驗(yàn)的可靠性[1-3]。全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范(2009修訂版)中規(guī)定，弱陽性質(zhì)控以該試劑盒臨界值(cut-off)的2～3倍為宜，最常用的質(zhì)控圖是Levey-Jennings質(zhì)控圖，該圖使用累計(jì)技術(shù)或趨勢(shì)分析技術(shù)的圖形提供系統(tǒng)偏移和漂移的狀況。本文對(duì)冷藏期間反復(fù)使用對(duì)質(zhì)控血清穩(wěn)定性的影響進(jìn)行研究，為質(zhì)控樣品的正確保存、使用以及質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)分析提供一些數(shù)據(jù)支持，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1材料病例樣本來源于每天門診送檢的標(biāo)本，弱陽性HIV質(zhì)控品10支。

1.2儀器與試劑Rayto酶標(biāo)分析儀(RT-2100C)、手工移液器、水浴箱溫育、洗板機(jī)洗板、振蕩儀、某國產(chǎn)人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)、室內(nèi)質(zhì)控血清、去離子水、量筒、微量加樣器配套吸頭、一次性手套等。

1.3方法

1.3.1實(shí)驗(yàn)前質(zhì)量控制(1)檢測試劑使用前必須經(jīng)過質(zhì)量確認(rèn)，保證符合預(yù)期使用要求；(2)質(zhì)控品使用前必須經(jīng)過質(zhì)量檢查，管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預(yù)期的變異(CV<20%)，弱陽性質(zhì)控以該試劑盒臨界值(cut-off)的2～3倍為宜，并且質(zhì)控品應(yīng)穩(wěn)定、無菌，且不含有影響試劑反應(yīng)的防腐劑；(3)檢測儀器設(shè)備按使用操作規(guī)程規(guī)定進(jìn)行校準(zhǔn)、維護(hù)：保證檢測時(shí)儀器設(shè)備狀態(tài)良好，符合實(shí)驗(yàn)要求；(4)人員經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)，具有醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)知識(shí)和技能，具備檢驗(yàn)技術(shù)人員資格。

1.3.2樣品檢測將10支HIV質(zhì)控血清從-20 ℃冰柜取出，室溫平衡30 min使其完全融化，隨機(jī)排列到病例樣本之中，按常規(guī)樣本進(jìn)行加樣檢測,加樣完畢后及時(shí)保存至2～8 ℃冰箱，次日起，上述質(zhì)控品從2～8 ℃冰箱取出室溫平衡30 min后，隨機(jī)排列到病患樣本之中，按常規(guī)樣本進(jìn)行加樣檢測，加樣完畢后及時(shí)保存至2～8 ℃冰箱，重復(fù)以上活動(dòng)至第7天；采用單因素重復(fù)測量資料的方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，同時(shí)，把同一天的10支質(zhì)控品檢測值取平均值作為一個(gè)“檢測點(diǎn)”與日常質(zhì)控圖進(jìn)行比較，觀察變化情況。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理運(yùn)用MedCalc 11.4.2.0質(zhì)控圖繪制及分析；運(yùn)用SPSS18.0進(jìn)行單因素重復(fù)測量資料的方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，當(dāng)Mauchly檢驗(yàn)P>0.05時(shí)，認(rèn)為協(xié)方差球形性質(zhì)滿足，不需要校準(zhǔn)模式，否則需要Geenhouse-Geisser或Huynh-Feldt調(diào)整系數(shù)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.2不同測量天數(shù)上的差異質(zhì)控品在不同時(shí)間的檢測值通過單因素重復(fù)測量資料的方差分析:球形檢驗(yàn)P=0.042<0.05,Geenhouse-Geisser校正后F=48.515,P<0.01,Huynh-Feldt校正后F=48.515,P<0.01,說明在不同測量天數(shù)上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1　　觀察對(duì)象質(zhì)控品在不同時(shí)間的檢測值S/CO比較

3討論

臨床實(shí)驗(yàn)室，通常在控制圖上畫出單個(gè)控制測定值，并與已確定“控制限”進(jìn)行比較，來判斷分析是“在控”還是“失控”。為質(zhì)控目的而制備的標(biāo)本稱為質(zhì)控物或質(zhì)控品，其本身的性能指標(biāo)、正確使用與保存對(duì)于室內(nèi)質(zhì)控至關(guān)重要[4-6]?？贵w質(zhì)控血清不變化、穩(wěn)定是因?yàn)樵谥苽溥^程添加了防腐劑，好的質(zhì)控品在-20 ℃或在規(guī)定的保存條件下，至少穩(wěn)定1～2年，凍融后置于2～8 ℃冰箱冷藏也可以穩(wěn)定1周，但是“規(guī)定的保存條件”的前提條件應(yīng)該是保存期間不受到額外因素的干擾，有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，連續(xù)凍融7次，OD值下降20%左右，連續(xù)凍融15 次，下降26.1%[8]，按管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預(yù)期的變異(CV<20%)的要求，此質(zhì)控品已經(jīng)是不符合使用的要求；或是結(jié)合Levey-Jennings 質(zhì)控圖進(jìn)行分析，將是出現(xiàn)嚴(yán)重的失控狀態(tài)。因此，反復(fù)凍融、保存條件、運(yùn)輸環(huán)境等因素對(duì)ELISA質(zhì)控血清穩(wěn)定性的影響，歷來受到關(guān)注[7-9],但是，凍融后置于2～8 ℃冰箱冷藏，期間反復(fù)使用對(duì)質(zhì)控血清穩(wěn)定性的影響的觀察或研究并不多見。

本文通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，冷藏的“規(guī)定的保存條件”的前提條件同樣應(yīng)該是保存期間不受到額外因素的干擾。質(zhì)控品凍溶后至2～8 ℃冰箱冷藏并反復(fù)使用，前3 d的穩(wěn)定性上能滿足，其波動(dòng)性較小，均為“在控”狀態(tài)，但是第4天開始就出現(xiàn)“告警”，至第5天質(zhì)控品檢測值S/CO平均下降22%[(2.394-1.861)/2.394×100%]，見表1，呈漂移式的態(tài)急劇下降導(dǎo)致“失控”。筆者認(rèn)為，盡管說明書表明2～8 ℃冰箱冷藏穩(wěn)定一周，但在臨床實(shí)際工作中，室內(nèi)質(zhì)控是一個(gè)連續(xù)性的工作，每次實(shí)驗(yàn)室都必須按要求從2～8 ℃冰箱取出室溫平衡30 min左右，如此反復(fù)平衡，必然導(dǎo)致保存溫度的不穩(wěn)定性；其次在每次加樣過程中都會(huì)增加加樣尖攜帶的細(xì)菌污染質(zhì)控品的機(jī)會(huì)。

質(zhì)控品的穩(wěn)定性好可以減少浪費(fèi)是顯而易見的，假如某批實(shí)驗(yàn)明明是在控的，但卻是因?yàn)槔洳仄陂g反復(fù)多次使用后導(dǎo)致質(zhì)控品的不穩(wěn)定性而導(dǎo)致了實(shí)驗(yàn)的“失控”，按要求，該批實(shí)驗(yàn)屬于 “無效”，必須重新實(shí)驗(yàn)，假設(shè)實(shí)驗(yàn)人員還是認(rèn)為該值質(zhì)控品尚在保存的有效期限內(nèi)，沒有意識(shí)到質(zhì)控本身其實(shí)已經(jīng)失效，那么可以想象到重新實(shí)驗(yàn)還是難于獲得“在控”狀態(tài)。李金明[10]研究員指出,室內(nèi)質(zhì)控(IQC)的目的是確保臨床測定過程及結(jié)果在偏差和精密度方面達(dá)到預(yù)定的標(biāo)準(zhǔn)，IQC主要包括3個(gè)方面，即測定前的質(zhì)量控制、統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)量控制、質(zhì)量控制的評(píng)價(jià)。其中測定前的質(zhì)量控制也包含三方面的內(nèi)容：(1)實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境、設(shè)施和設(shè)備；(2)理想的測定試劑和方法；(3)人員培訓(xùn)。因此就要求臨床實(shí)驗(yàn)室必須制定一個(gè)詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制控規(guī)程，除了明確質(zhì)控品質(zhì)量檢查和確認(rèn)的要求外，對(duì)質(zhì)控品的使用和保存也要非常詳細(xì)的規(guī)定，比如室內(nèi)質(zhì)控品在使用完畢后,應(yīng)即時(shí)放回2～8 ℃冰箱冷藏，至于冷藏期間到底是要求3 d內(nèi)或4 d內(nèi)使用，建議實(shí)驗(yàn)室應(yīng)自行評(píng)估后決定。同時(shí)，本文的觀察結(jié)果也提示,具有自動(dòng)化霜功能的冰箱或低溫冰柜對(duì)質(zhì)控品的穩(wěn)定性是否影響，有待進(jìn)一步研究。

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Discussed the influence of the stability that laboratory repeated use the HIV quality control serum during the cold storage

XieMing

(DepartmentofClinicalLaboratory，theThirdAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning,Guangxi530031,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the effect of repeated use on the stability of HIV quality control serum during cold storage,and put forward measures to deal with.MethodsTen HIV serum from -20 degrees celsius freezer room temperature balance out,30 minutes to make it completely melted,randomly arranged in the patient sample,added sample testing according to the normal sample,after the end of time to save 2 to 8 degrees celsius refrigerator.The next day,the above quality control products from 2 to 8 degrees celsius refrigerator,after 30 minutes at room temperature,randomly arranged in the patient sample,add sample testing according to the normal sample,after the end of time to save 2 to 8 degrees celsius refrigerator,repeat the above activities to seventh days.Using repeated measure，at the same time,took the average 10 quality control of product values on the same day as a "checkpoint" compared with daily quality control chart,observe changes.ResultsIt suggested that in different measurement on the number of days the difference was statistically significant(F=48.515,P<0.01),combined with the quality control chart found,which was starting from the fourth day quality value "warning" status,began to appear and the drift of fell out of control.ConclusionHIV quality-control serum at 2 to 8 degrees celsius refrigerator,used repeatedly during 3 days late stability is affected,the change of quality control diagram appear drift,even is out of control.

Key words:enzyme-linked immunosorbent assay;quality control serum;stability;human immunodeficiency virus;antibody

(收稿日期：2015-10-08)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.028

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)04-0499-03

作者簡介：謝明，女，主治醫(yī)師，主要從事免疫檢驗(yàn)研究。