威靈仙不同炮制品抗炎鎮(zhèn)痛作用的研究

劉仕琦，李 菲，李俊蓮，羅秀夏

（山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024）

威靈仙不同炮制品抗炎鎮(zhèn)痛作用的研究

劉仕琦，李 菲，李俊蓮，羅秀夏

（山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024）

●“實(shí)驗(yàn)”雖然是現(xiàn)代科學(xué)研究常用的方法，然在我國(guó)卻自古有之。古代學(xué)者王沖說(shuō)“等類眾多，行事比肩，略舉較著，以定實(shí)驗(yàn)也”，顏之推說(shuō)“昔在江南，不信有千人帳，及來(lái)河北，不信有二萬(wàn)斛船，皆實(shí)驗(yàn)也”，大凡此義均與現(xiàn)代科學(xué)意義上的experiment相通。照此，傳統(tǒng)中醫(yī)藥學(xué)并非只是經(jīng)驗(yàn)之學(xué)，而更充滿實(shí)驗(yàn)的思想和方法。實(shí)驗(yàn)中醫(yī)藥學(xué)，將現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)科學(xué)的方法和傳統(tǒng)中醫(yī)藥學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法融合起來(lái)，開(kāi)拓現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥物科學(xué)的新領(lǐng)域。

目的：研究威靈仙生品及不同炮制品的抗炎鎮(zhèn)痛作用。方法：選用醋酸扭體實(shí)驗(yàn)、二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)和蛋清致大鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)，觀察威靈仙生品及不同炮制品的抗炎作用。結(jié)果：醋炙威靈仙能明顯減少冰醋酸所致的小鼠扭體次數(shù)（P＜0.01）；生品威靈仙、醋炙威靈仙、酒炙威靈仙均能明顯抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹（P＜0.01）；醋炙威靈仙在造模后2 h能明顯抑制蛋清所致大鼠足腫脹（P＜0.05）。結(jié)論：威靈仙生品及酒炙、醋炙品均具有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，其中醋炙品作用效果最好。

威靈仙；醋炙；酒炙；抗炎；鎮(zhèn)痛

威靈仙為毛茛科植物威靈仙Clematis chinensis osbeck、棉團(tuán)鐵線蓮Clematis hexa petala Pall.或東北鐵線蓮Clematis manshurica Rupr.的干燥根和根莖［1］。威靈仙味辛、咸，性溫。其根及莖入藥，具有祛風(fēng)除濕、通絡(luò)止痛、消痰涎、散癖積的功效，主治痛風(fēng)頑痹，風(fēng)濕痹痛，肢體麻木，腰膝冷痛，筋脈拘攣，諸骨鯁咽等癥。2010版《中國(guó)藥典》收載的威靈仙炮制規(guī)格僅生品一種，其他常見(jiàn)的飲片規(guī)格有酒炙威靈仙、蒸制威靈仙。研究表明威靈仙具有抗炎鎮(zhèn)痛作用［2］。諸多臨床研究報(bào)道表明，威靈仙與醋或酒共煎后具有很好的治療骨鯁等疾病的作用［3-5］。傳統(tǒng)炮制理論也認(rèn)為，醋炙可增強(qiáng)藥物活血止痛作用，酒炙可增強(qiáng)藥物活血化瘀作用。因此，本研究比較了威靈仙生品、醋炙品、酒炙品煎劑的抗炎鎮(zhèn)痛作用，為進(jìn)一步證實(shí)其臨床療效，擴(kuò)大威靈仙炮制品規(guī)格奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性KM小鼠，體質(zhì)量（18～22）g；雄性SD大鼠，體質(zhì)量（180～220）g，購(gòu)于山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SCXK（晉）2011-0007。自由取食飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w（飼料為普通鼠全價(jià)顆粒飼料，購(gòu)自山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）后進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 試藥與儀器 威靈仙（購(gòu)于榮華大藥房，安國(guó)市弘發(fā)中藥材飲片），經(jīng)山西中醫(yī)學(xué)院孟祥龍老師鑒定為東北鐵線蓮Clematis manshurica Rupr.的干燥根和根莖。米醋（山西老陳醋集團(tuán)有限公司，總酸≥9.00 g/100 mL），黃酒［山西老陳醋集團(tuán)有限公司，酒精度（20℃）：10%濃度］，冰乙酸（CH3COOH，天津市耀華化學(xué)試劑有限責(zé)任公司，批號(hào)20080517），二甲苯（C8H10，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20080228），氯化鈉（NaCl，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20110126），吲哚美辛（臨汾奇林藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H14020549）。SHJM-1型數(shù)顯恒溫電熱套（菏澤市石油化工學(xué)校儀器設(shè)備廠），HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋（國(guó)華電器有限公司），JA4003電子精密天平（上海良平儀器儀表有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 威靈仙的炮制品及煎煮液制備 酒炙威靈仙：取威靈仙飲片100 g，加入30 mL黃酒拌勻，燜潤(rùn)，待酒被吸盡后，置炒制容器內(nèi)，文火加熱，炒干至顏色加深，取出晾涼，篩去碎屑，待用。醋炙威靈仙：取威靈仙飲片100 g，加入20 mL米醋拌勻，燜潤(rùn)，待米醋被吸盡后，置炒制容器內(nèi)，文火加熱，炒干至顏色加深，取出晾涼，篩去碎屑，待用。煎煮液：分別稱取威靈仙生品與上述炮制品各50 g，各以10倍量、8倍量、6倍量的水煎煮3次，每次60 min，合并煎出液，濃縮，制成相對(duì)原藥材0.5 g/mL的濃縮液。

1.2.2 抑制醋酸致小鼠扭體反應(yīng)實(shí)驗(yàn) 雄性KM小鼠，隨機(jī)分成5組，每組10只，分別是模型組（每天灌胃0.9%氯化鈉溶液0.5mL/只）、陽(yáng)性對(duì)照組（吲哚美辛1.2 g/kg）、生威靈仙組（3.3 g/kg）、酒炙威靈仙組（3.3 g/kg）、醋炙威靈仙組（3.3 g/kg）。陽(yáng)性對(duì)照組在測(cè)試當(dāng)天灌胃給藥，其余各組均連續(xù)灌胃給藥3 d，末次給藥0.5 h后，每只小鼠腹腔注射新配制的0.6%醋酸溶液0.2 mL。觀察并記錄注射醋酸溶液后各組首次出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間（潛伏期）與15 min內(nèi)各小鼠扭體反應(yīng)（腹部凹陷、伸展后肢、臀部抬高）次數(shù)，計(jì)算鎮(zhèn)痛抑制率。其中y為鎮(zhèn)痛抑制率，a為模型組扭體次數(shù)，b為給藥組扭體次數(shù)。

1.2.3 抑制二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn) 雄性KM小鼠，隨機(jī)分成5組，每組10只。分組及各組的給藥量、方法與給藥時(shí)間同1.2.2。各組小鼠末次給藥1 h后，于小鼠右耳前后兩面涂抹20 μL二甲苯致炎。1 h后脫臼處死小鼠，用直徑8 mm的不銹鋼圓沖沿耳緣相同部位沖下左右兩耳同一部位耳廓，分別置于分析天平上稱其質(zhì)量，計(jì)算鼠耳腫脹度及抑制率。其中y為腫脹度，a為左耳質(zhì)量，b為右耳質(zhì)量。，其中y為腫脹抑制率，a為模型組平均腫脹度，b為給藥組平均腫脹度。

1.2.4 對(duì)蛋清所致大鼠足腫脹的影響 雄性SD大鼠，隨機(jī)分為5組，每組8只，分別是模型組（每天灌胃0.9%氯化鈉溶液1 mL/只）、陽(yáng)性對(duì)照組（吲哚美辛1.2 g/kg）、生威靈仙組（2 g/kg）、酒炙威靈仙組（2 g/kg）、醋炙威靈仙組（2 g/kg）。各組均灌胃給藥，連續(xù)給藥5 d，最后1次給藥前，分別測(cè)量大鼠足周長(zhǎng)。陽(yáng)性對(duì)照組和模型組給藥15 min，實(shí)驗(yàn)組給藥0.5 h后，其余分別給各組大鼠右后趾踝關(guān)節(jié)注射10%新鮮蛋清0.1 mL/只。分別于致炎1 h、1.5 h、2 h后測(cè)量大鼠足周長(zhǎng)，計(jì)算各組平均腫脹度。其中y為腫脹度，a為左足周長(zhǎng)，b為右足周長(zhǎng)。其中y為腫脹抑制率，a為模型組平均腫脹度，b為給藥組平均腫脹度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 抑制醋酸致小鼠扭體反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

與模型組比較，醋炙威靈仙組、酒炙威靈仙組可明顯降低小鼠扭體次數(shù)（P＜0.01，P＜0.05）；與陽(yáng)性對(duì)照組和生威靈仙組相比，醋炙威靈仙組可顯著降低小鼠扭體次數(shù)（P＜0.05）；與酒炙威靈仙組相比，醋炙威靈仙組可明顯降低小鼠扭體次數(shù)（P＜0.01），提高抑制率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 （±s）

表1 對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 （±s）

注:與模型組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，3）P＜0.05；與生威靈仙組比較，4）P＜0.05；與酒炙威靈仙組比較，5）P＜0.01

組別 n 扭體潛伏期（s） 扭體次數(shù) 抑制率（%）模型組 10 125±35 46±17 -陽(yáng)性對(duì)照組 10 184±67 29±81）37.05生威靈仙組 10 104±26 35±10 23.85酒炙威靈仙組 10 126±44 26±71）42.93醋炙威靈仙組 10 131±48 16±52）3）4）5）65.30

2.2 抑制二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)結(jié)果

與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組、生威靈仙組、醋炙威靈仙組、酒炙威靈仙組均可明顯降低小鼠耳廓腫脹度，提高抑制率（P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹反應(yīng)的影響 （±s）

表2 對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹反應(yīng)的影響 （±s）

注:與模型組比較，1）P＜0.01

組別 n 腫脹度（%） 抑制率（%）模型組 10 8.25±3.08 -陽(yáng)性對(duì)照組 10 3.84±1.401）53.45生威靈仙組 10 3.07±1.141）62.79酒炙威靈仙組 10 3.58±1.401）56.61醋炙威靈仙組 10 2.99±1.041）63.76

2.3 對(duì)蛋清所致大鼠足腫脹的影響

與模型組比較，致炎1 h、1.5 h及2 h后，各受試藥物組均有一定的抑制作用，其中醋炙威靈仙組在造模后2 h抑制作用顯著。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 對(duì)蛋清致足跖腫脹作用的影響 （±s）

表3 對(duì)蛋清致足跖腫脹作用的影響 （±s）

注：與模型組相應(yīng)時(shí)間段比較，1）P＜0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組相應(yīng)時(shí)間段比較，2）P＜0.05，3）P＜0.01

組別 n 腫脹度（%） 抑制率（%）1 h 1.5 h 2.0 h 1 h 1.5 h 2 h模型組 8 10.08±2.77 8.40±1.67 7.00±2.61 / / /陽(yáng)性對(duì)照組 8 6.00±1.831）5.50±1.381）4.38±2.33 40.48 34.52 37.43生威靈仙組 8 7.29±2.81 7.00±1.58 6.42±3.31 27.68 16.67 8.29酒炙威靈仙組 8 8.75±1.303）7.63±2.072）5.25±2.49 13.19 9.17 25.00醋炙威靈仙組 8 8.20±1.482）7.14±2.54 4.00±1.891）18.65 15.00 42.86

3 討論

威靈仙不同炮制規(guī)格在以上三個(gè)模型上均顯示出一定的作用，但作用強(qiáng)度不同。醋酸扭體實(shí)驗(yàn)中，生品威靈仙無(wú)抗炎鎮(zhèn)痛作用，醋制威靈仙作用最為明顯，優(yōu)于酒炙威靈仙和吲哚美辛；小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)中，醋炙威靈仙仍然具有最佳的抗炎鎮(zhèn)痛作用，其次為生品，酒炙品在該模型實(shí)驗(yàn)中作用不明顯。蛋清致大鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)中，醋炙威靈仙造模2 h后體現(xiàn)出一定的抗炎鎮(zhèn)痛作用。

從以上結(jié)果可以看出，不同炮制規(guī)格中，醋炙品抗炎鎮(zhèn)痛作用最為明顯，且在不同致炎模型中均能體現(xiàn)明顯的優(yōu)勢(shì)作用。蛋清致大鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)中，雖然抗炎鎮(zhèn)痛作用不及陽(yáng)性對(duì)照藥，但隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，其抗炎鎮(zhèn)痛作用明顯增強(qiáng)。提示威靈仙抗炎鎮(zhèn)痛作用可能發(fā)揮的比較遲緩，有必要延長(zhǎng)時(shí)間點(diǎn)，進(jìn)行深入研究。

綜上所述，威靈仙不同炮制規(guī)格中，醋炙品可發(fā)揮穩(wěn)定的抗炎作用，這與臨床使用過(guò)程中多用醋煎的研究結(jié)果相符。提示醋炙可以作為一個(gè)新的飲片規(guī)格，擴(kuò)大臨床應(yīng)用范圍。具體的炮制工藝及抗炎鎮(zhèn)痛機(jī)理，還有待進(jìn)一步探討。

［1］中國(guó)人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：234.

［2］章蘊(yùn)毅，張宏偉，李佩芬，等威靈仙的解痙抗炎鎮(zhèn)痛作用［J］.中成藥，2001，23（11）：808-811.

［3］許偉.威靈仙米醋治療魚刺梗喉21例［J］.中國(guó)民間療法，2001，9（11）：54.

［4］馬惠敏.威靈仙治鐵物梗喉［J］.湖北中醫(yī)雜志，2000，22（7）：5.

［5］姚金才.威靈仙治療骨刺卡喉20例［J］.實(shí)用中醫(yī)藥雜志，2003，19（8）：438.

（編輯：翟春濤）

Research on the anti-inflammation and analgesic effect of different processed products of Clematis.

Liu Shiqi，Li Fei，Li Junlian，Luo Xiuxia
（Shanxi college of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：To evaluate the anti-inflammation and analgesic effect of different processed products of Clematis. Methods：The analgesic and the anti-inflammation effects of different processed products of Clematis were studied by writhing response，exploring in the xylene-induced ear swelling model in mice，and egg white-induced paw edema in rats. Results：Clematis by stir-heating with rice vinegar can significantly prolonge the latency and reduce the writhe number at the turning of trunk model in Kun-Ming mice（P＜0.01）.Clematis，Clematis by stir-heating with rice vinegar and wine have good anti-inflammatory effect on inhibiting xylene-induced ear swelling（P＜0.01）.Clematis by stir-heating with rice vinegar can also reduce rats foot-plate swelling in 2 hour（P＜0.05）.Conclusion：The results demonstrate that different processed products of Clematis can release the pain，suppress the inflammation.The effect of Clematis by stir-heating with rice vinegar is the best.

Clematis；stir-heating by vinegar；stir-heating by wine；anti-inflammation；suppress pain

R285.5

A

1671-0258（2016）04-0016-03

山西省高校131人才工程項(xiàng)目；山西省國(guó)際合作項(xiàng)目（2014081049-6）

劉仕琦，本科在讀，E-mail：1429860563@qq.com

李俊蓮，教授，博士，E-mail：lijunlian0909@126．com