姜狀三七水提物的止血鎮(zhèn)痛作用和急性毒性反應(yīng)研究

吳其國，符德歡，毛小明，胡葉青，高 麗*

(1.安慶醫(yī)藥高等專科學(xué)校，安徽安慶246052；2.云南省藥物研究所，云南昆明650111)

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姜狀三七水提物的止血鎮(zhèn)痛作用和急性毒性反應(yīng)研究

吳其國1，符德歡2，毛小明1，胡葉青1，高 麗2*

(1.安慶醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，安徽安慶246052；2.云南省藥物研究所，云南昆明650111)

摘要[目的]觀察姜狀三七的止血鎮(zhèn)痛作用及急性毒性反應(yīng)，為姜狀三七的臨床應(yīng)用與開發(fā)提供參考。[方法]用水回流提取姜狀三七，經(jīng)濃縮干燥后得干浸膏粉，用前配制；鎮(zhèn)痛作用采用小鼠醋酸扭體法，止血作用采用小鼠斷尾法和毛細(xì)管法；并用其最大給藥濃度的藥液進(jìn)行小鼠灌胃給藥，連續(xù)觀察14 d，記錄小鼠毒性反應(yīng)情況。[結(jié)果]與對照組比較，姜狀三七中(2.58 g/kg)、低(0.64 g/kg)劑量組明顯減少小鼠的扭體次數(shù)，具有良好的鎮(zhèn)痛作用；姜狀三七高(5.16 g/kg)、中(2.58 g/kg)、低(0.64 g/kg)劑量組均可明顯縮短小鼠的出血時(shí)間和凝血時(shí)間，具有良好的止血作用；對小鼠灌服最大給藥濃度(90 g/kg)，相當(dāng)于50 kg成人用量的1 000倍，未出現(xiàn)毒性反應(yīng)。[結(jié)論]姜狀三七有鎮(zhèn)痛止血作用，且其毒性小，用藥范圍廣。

關(guān)鍵詞姜狀三七；止血；鎮(zhèn)痛；急性毒性

The Analgesic Hemostatic Action and Acute Toxicity Reaction of Water Extracts fromPanaxzingiberensis

WU Qi-guo1,FU De-huan2, MAO Xiao-ming1,GAO li2*et al(1. Anqing Medical College, Anqing, Anhui 246052; 2. Yunnan Institute of Material Medica, Kunming, Yunnan 650111)

Abstract[Objective] To observe the analgesic hemostatic action and acute toxicity reaction of water extracts fromPanaxzingiberensis, and to provide references for the clinical application and development ofP.zingiberensis. [Method] Water reflux extraction ofP.zingiberensiswas carried out. Dry extracts powder was obtained after concentration and drying. Analgesic effect was researched by acetic acid writhing method; hemostasis was researched by tail cutting method and capillary tube method. Mouse intragastric administration was carried out by the maximum concentration. After continuous observation for 14 d, toxic reaction of mice was recorded. [Result] Compared with control group, writhing times of mice reduced significantly in middle (2.58 g/kg) and low (0.64 g/kg) dosage groups ofP.zingiberensis, which had relatively good analgesic effects. Bleeding time and blood coagulation time significantly shortened in high (5.16 g/kg), middle (2.58 g/kg) and low (0.64 g/kg) dosage groups ofP.zingiberensis, which had relatively good hemostasis effects. The maximum administration concentration (90 g/kg) was equal to 1000 times of the dosage of 50 kg human adult. And there was no toxic reaction. [Conclusion]P.zingiberensishas analgesic hemostatic effect, with slight toxicity and wide application range.

Key wordsPanaxzingiberensis; Hemostasis; Analgesia; Acute toxicity

姜狀三七為五加科人參屬植物姜狀三七PanaxzingiberensisC.Y.Wu et K.W.Feng的根及根莖，味苦，性溫，具有散瘀、止血、定痛之功，用于跌打損傷、內(nèi)傷出血、產(chǎn)后血暈、惡露不下、虛傷、咳嗽、貧血等[1]，為云南特有藥用植物[2]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，其主要含有三萜皂苷，含量較高[3]。姜狀三七資源多以栽培為主，其生長年限及產(chǎn)量均較三七好，在民間有將其替代三七使用。目前在姜狀三七藥理方面的研究尚屬空白，為了更好地開發(fā)利用該資源，筆者對其止血鎮(zhèn)痛作用藥效和急性毒性反應(yīng)進(jìn)行初步系統(tǒng)的研究，為姜狀三七藥效學(xué)研究和臨床安全用藥提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1供試品。試驗(yàn)藥材采于金平，為栽培品。經(jīng)中國科學(xué)院昆明植物研究所陶德定副研究員鑒定為五加科人參屬植物姜狀三七PanaxzingiberensisC.Y.Wu et K.W.Feng的根及根莖，植物標(biāo)本收藏于云南省藥物研究所標(biāo)本室。稱取藥材350 g，依次分別加8倍量、8倍量和5倍量水經(jīng)回流提取1 h、1 h和30 min，合并提取液，經(jīng)濃縮后，放入真空干燥箱中干燥，得干浸膏粉151 g。使用前配制到所需濃度。

1.1.2對照藥。阿司匹林，拜耳醫(yī)藥保健有限公司，國藥準(zhǔn)字j20080078，批號20110810；安絡(luò)血(腎上腺色腙片)，江蘇亞邦愛普森藥業(yè)有限公司，批號20100918；云南白藥，云南白藥集團(tuán)股份有限公司，批號20090524。

1.1.3試驗(yàn)動物。 SPF級昆明種小鼠，雌雄各半，體重(20±2)g，由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號SCXK(滇)2005008。飼料批號SCXK(滇)2005009。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1鎮(zhèn)痛試驗(yàn)。取昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只。按表1中的劑量灌胃給藥，每天1次，連續(xù)給藥3 d，于末次給藥30 min后，腹腔注射新配制的0.6%醋酸溶液，0.2 mL/只。觀察并記錄30 min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)[4]，按下列公式計(jì)算給藥組的抑制率：抑制率=(對照組扭體次數(shù)-給藥組扭體次數(shù))/對照組扭體次數(shù)×100%。

1.2.2止血試驗(yàn)。

1.2.2.1 對小鼠凝血時(shí)間的影響。取小鼠70只，雌雄各半，稱重、標(biāo)記，隨機(jī)分為6組，分組情況和給藥劑量見表2。空白對照組給予等體積0.9%氯化鈉溶液，其他各組給予相應(yīng)的藥物。每天灌胃給藥1次，連續(xù)7 d。末次給藥30 min后，按毛細(xì)玻管法進(jìn)行凝血時(shí)間測定，即用毛細(xì)玻管插入小鼠內(nèi)眥眼球后靜脈叢取血，以達(dá)5 cm血柱為止，每隔30 s折斷毛細(xì)玻管一小截，檢查有無血凝絲出現(xiàn)；記錄從毛細(xì)玻管采血到出現(xiàn)血凝絲的時(shí)間，即為凝血時(shí)間[5]。

1.2.2.2對小鼠出血時(shí)間的影響。取小鼠50只，雌雄各半，分組及給藥劑量見表3。每天灌胃給藥1次，連續(xù)7 d。末次給藥后60 min，采用斷尾法進(jìn)行出血時(shí)間測定，即將小鼠固定，露鼠尾于外，用利剪將小鼠尾尖3 mm處橫斷，待血液自行溢出開始計(jì)時(shí)，每隔30 s用濾紙吸去血滴一次，直至血流自然停止(濾紙吸時(shí)無血)為止，即為出血時(shí)間[6]。

1.2.3急性毒性試驗(yàn)。姜狀三七在民間大多以煎湯內(nèi)服，或入丸散，或浸酒，還有研末敷作外用[1]。所以有必要對其口服給藥的安全性進(jìn)行評價(jià)。在該試驗(yàn)中，采用姜狀三七小鼠經(jīng)口給藥急性毒性試驗(yàn)對其急性毒性進(jìn)行考察。

1.2.3.1預(yù)試驗(yàn)。 取合格昆明種小鼠16只，雌雄各半，按體重與性別隨即分為4組，每組4只。試驗(yàn)前禁食不禁水12 h。供試藥以生理鹽水按等比例稀釋得到，系數(shù)為0.8，最大給藥量以生藥給藥量(90 g/kg)開始給藥，共得供試藥的4個(gè)劑量組。5組小鼠分別經(jīng)口給藥，給藥體積為0.04 mL/g。給藥后即刻觀察，持續(xù)40 min。以后每天上午、下午各觀察一次，連續(xù)14 d，觀察動物飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物、死亡情況及中毒反應(yīng)癥狀及其起始時(shí)間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間、是否可逆及恢復(fù)時(shí)間、體重變化等。觀察可見，給藥組所有小鼠均活動減少，4 h后恢復(fù)正常；待第2天進(jìn)食正常，活動也正常。因在大劑量下，無動物死亡，難以測出半數(shù)致死量LD50，故進(jìn)行最大耐受量的測定。

1.2.3.2最大耐受量的測定。取合格昆明種小鼠40只，雌雄各半，按體重和性別隨即分為試驗(yàn)組和空白對照組，試驗(yàn)前禁食不禁水12 h，試驗(yàn)組給藥劑量以生藥量計(jì)(90 g/kg)，給藥體積為0.04 mL/g?？瞻讓φ战M給予等體積的生理鹽水。給藥后連續(xù)觀察14 d，每天上午、下午各觀察一次。觀察動物狀態(tài)并記錄動物的體重變化。第14天處死，解剖小鼠，肉眼觀察其主要臟器的外觀[7]。計(jì)算給藥后小鼠的最大耐受量倍數(shù)，小鼠的最大耐受量倍數(shù)=每只小鼠的耐受藥量/小鼠的平均體重(20 g)×成人的平均體重(50 000 g)/成人每日用量(倍)[8]。

2結(jié)果與分析

2.1鎮(zhèn)痛試驗(yàn)表1顯示，與模型組相比，姜狀三七低、中劑量組的扭體次數(shù)具有顯著性差異，而姜狀三七高劑量組無顯著性差異，各組呈現(xiàn)出不同的抑制效應(yīng)，說明姜狀三七中、低劑量時(shí)具有良好的鎮(zhèn)痛作用。姜狀三七對小鼠的鎮(zhèn)痛作用隨著劑量的加大而減弱，在該試驗(yàn)中高、中、低劑量組小鼠的扭體次數(shù)基本相同，相互之間差別不是很大，因此高劑量組雖然無顯著性差異，但也有較好的鎮(zhèn)痛作用。

表1　姜狀三七提取物對小鼠鎮(zhèn)痛作用的影響

注：*、**分別表示與模型組比較P<0.05、P<0.01。

Note：Compared with model group，*and**indicatedP<0.05 andP<0.01，respectively.

2.2止血試驗(yàn)由表2~3可見，姜狀三七高、中、低劑量組的凝血時(shí)間均具有極顯著性差異(P<0.01)，即姜狀三七高、中、低劑量組均可明顯縮短小鼠的凝血時(shí)間；姜狀三七中、低劑量組的出血時(shí)間均具有顯著性差異(P<0.05)，姜狀三七高劑量組具有極顯著性差異(P<0.05)，即姜狀三七高、中、低劑量組均可明顯縮短小鼠的出血時(shí)間，說明姜狀三七高、中、低劑量組均有止血作用。

2.3急性毒性試驗(yàn)姜狀三七水提液的最大給藥量為90 g/kg，按成人(50 kg)的用量為3～6 g[1]，取中間值4.5 g計(jì)算，姜狀三七的最大給藥量為成人用量的1 000倍。由表4可見，給藥2周后，姜狀三七對小鼠的體重?zé)o影響；小鼠灌藥第2天后行為活動無異常，小鼠未見活動減少、蜷縮、松毛等現(xiàn)象，鼻、眼、口腔未見分泌物，小鼠組織器官經(jīng)解剖可見心、肝、脾、肺、腎等組織的顏色正常，組織器官及腹腔均未見異常和腫物。試驗(yàn)結(jié)果表明，該藥材的臨床用藥安全范圍大。

表2　姜狀三七對小鼠凝血時(shí)間的影響

注：*、**分別表示與生理鹽水組比較P<0.05、P<0.01。

Note：Compared with normal saline group， * and ** indicatedP<0.05 andP<0.01，respectively.

表3　姜狀三七對小鼠出血時(shí)間的影響

注：*、**分別表示與生理鹽水組比較P<0.05、P<0.01。

Note：Compared with normal saline group， * and ** indicatedP<0.05 andP<0.01，respectively.

表4姜狀三七小鼠經(jīng)口給藥急性毒性試驗(yàn)動物體重變化(n=20)

Table 4Changes of mice body weight in acute toxicity test after administered orally

給藥天數(shù)Administrationdays∥d體重Bodyweight∥g試驗(yàn)組Testgroup對照組Controlgroup020.33±2.0121.46±2.17221.23±2.3822.48±2.17422.35±3.2123.82±3.20623.59±3.5124.64±3.47823.74±4.1123.97±3.821025.32±4.4924.74±4.381226.58±5.0825.94±3.511426.40±5.1526.09±4.24

3小結(jié)與討論

該試驗(yàn)通過對姜狀三七水提物的止血鎮(zhèn)痛作用研究，結(jié)果表明，姜狀三七水提物可以明顯減少小鼠的扭體次數(shù)、縮短小鼠的出血時(shí)間和凝血時(shí)間，具有明顯的鎮(zhèn)痛止血作用；其急性毒性反應(yīng)研究表明，姜狀三七水提物的毒性小、用藥范圍廣。

由于三七的鎮(zhèn)痛作用主要是與其中的三七總皂苷(PNS)有關(guān)[9]，所以推測姜狀三七的鎮(zhèn)痛作用很有可能也與其中含有的三七皂苷類成分有關(guān)，具體是何種成分影響還有待藥理學(xué)的進(jìn)一步研究。在血液系統(tǒng)中，凝血時(shí)間主要與各種凝血因子的含量和活性有關(guān)，而出血時(shí)間與毛細(xì)血管功能、組織因子、血小板數(shù)量和功能等因素有關(guān)。作用于機(jī)體止血過程的任何一個(gè)環(huán)節(jié)，均有利于血液凝固而起到止血效果[10]。因此，究竟是什么原因引起的止血效果還有待進(jìn)一步研究。通過對姜狀三七水提物小鼠灌胃給藥的急性毒性試驗(yàn)，為臨床用藥的安全性提供試驗(yàn)依據(jù)。

藥用植物資源是我國一項(xiàng)重要的稀缺資源，對藥用植物資源的開發(fā)利用也是近年來炙手可熱的話題，但由于人們對藥用植物資源的認(rèn)識不夠、技術(shù)有限等問題，使得藥用植物資源浪費(fèi)破壞比較嚴(yán)重，尤其是如三七這一類的名貴中藥材資源。姜狀三七在民間以三七同等功效應(yīng)用，是云南特有藥用植物資源，目前對其研究較少，該試驗(yàn)通過對其藥效及毒理研究，為姜狀三七資源的開發(fā)利用提供參考。

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收稿日期2015-12-28

作者簡介吳其國(1986-)，男，安徽安慶人，助教，碩士，從事中藥新劑型方面的研究。*通訊作者，正高級工程師，碩士生導(dǎo)師，從事中藥材鑒定與中藥資源開發(fā)方面的研究。

基金項(xiàng)目云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(2011FB133)。

中圖分類號S 567.23+6

文獻(xiàn)標(biāo)識碼A

文章編號0517-6611(2016)03-138-03