老鷹茶總黃酮顆粒劑的制備工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

張 杰， 余心哲， 郁建平

(貴州大學(xué)藥學(xué)院,貴州貴陽(yáng) 550025)

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老鷹茶總黃酮顆粒劑的制備工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

張 杰， 余心哲， 郁建平*

(貴州大學(xué)藥學(xué)院,貴州貴陽(yáng) 550025)

摘要[目的]優(yōu)選老鷹茶總黃酮顆粒劑的制備工藝并建立質(zhì)量控制方法。[方法]將老鷹茶在一定提取方法下得到其水溶液，再通過(guò)大孔樹(shù)脂純化得到總黃酮干浸膏粉，通過(guò)考察不同輔料對(duì)顆粒劑成型性、堆密度、休止角、吸濕性的影響篩選出制備顆粒劑的最優(yōu)輔料和處方組成。采用薄層色譜法對(duì)老鷹茶總黃酮進(jìn)行定性，通過(guò)分光光度法對(duì)老鷹茶總黃酮顆粒劑含量進(jìn)行測(cè)定及方法學(xué)考察。[結(jié)果]老鷹茶總黃酮顆粒劑最佳處方為總黃酮粉末30 g，甘露醇20 g，乳糖10 g；最佳工藝條件為原輔料比1∶1.0 g/g，潤(rùn)濕劑70%乙醇，烘干溫度60 ℃?？傸S酮的標(biāo)準(zhǔn)曲線為A=22.100c+0.001 0(R2=0.999 86)，顆粒劑的水分、溶化性、粒度均符合要求，總黃酮含量為134.4 mg/g，加樣回收率96.94%。[結(jié)論]老鷹茶總黃酮顆粒劑制備工藝簡(jiǎn)單、可行，質(zhì)量穩(wěn)定可控。

關(guān)鍵詞老鷹茶；總黃酮；顆粒劑；質(zhì)量控制

老鷹茶俗稱(chēng)“白茶”，是利用豹皮樟的嫩梢和葉片為原料，以簡(jiǎn)單的工藝制成的一種天然飲品，在民間有較悠久的飲用歷史。研究表明，老鷹茶具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)、保肝、降糖降脂等作用，且無(wú)明顯毒副作用，為一種藥食同源的植物。老鷹茶含有黃酮、苷類(lèi)、有機(jī)酸、香豆素和鞣質(zhì)等成分，其中黃酮類(lèi)成分是主要活性成分[1-2]。將老鷹茶中的總黃酮提取制備為顆粒制劑，可為人體健康提供一種新的保健產(chǎn)品。目前，尚未有此方面的研究。筆者以產(chǎn)于貴州省息烽縣的老鷹茶為原料，通過(guò)大孔樹(shù)脂純化得到總黃酮干浸膏粉，添加輔料制備出老鷹茶總黃酮顆粒劑，考察該顆粒劑的最佳輔料及配方組成，并測(cè)定其總黃酮含量，以期為老鷹茶的開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1研究對(duì)象。試驗(yàn)用老鷹茶均來(lái)源于貴州省息烽縣老鷹茶文化發(fā)展有限公司，經(jīng)干燥、粉碎、過(guò)篩備用。

1.1.2主要儀器。TU-1901型雙光束紫外分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；GZX-9140MBE型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司；KW-1000D數(shù)顯恒溫水浴鍋，上海梅香儀器有限公司；RE52CS-1型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；SHB-ⅢS型循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；BS224S型分析天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；KW-1740QTD型超聲清洗機(jī)，北京科璽科技有限公司；ZF-2型紫外儀，上海市海亭電子儀器廠；藥用粉碎機(jī)；藥用篩。

1.1.3主要試劑。蘆丁對(duì)照品(≥98%)，上海源葉生物科技有限公司；其他試劑均為分析純，市售。

1.2方法

1.2.1浸膏粉制備工藝。先將老鷹茶粉末石油醚回流脫脂，然后在30倍量的70%乙醇、80 ℃條件下提取1.5 h后過(guò)濾，濾渣再次提取，合并2次濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無(wú)醇味，用水稀釋至一定濃度后通過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂柱，富集一定量后用75%的乙醇溶液洗脫收集，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干浸膏，粉碎即得老鷹茶總黃酮干浸膏粉末[3]。

1.2.2顆粒劑制備[4-5]。

1.2.2.1處方組成。老鷹茶總黃酮干浸膏粉末與乳糖、甘露醇等混合均勻，制粒，干燥，即得老鷹茶總黃酮顆粒劑。

1.2.2.2單一輔料的篩選。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，稱(chēng)取表1中的原輔料并混勻，用75%乙醇制軟材，過(guò)10目篩制粒，50 ℃烘干，過(guò)篩整粒，備用。

表1單一輔料與總黃酮粉末配比

Table 1Proportions of single auxiliary materials and total flavonoids powder

g

1.2.2.3成型率測(cè)定。取“1.2.2.2”中干燥后的4種顆粒劑進(jìn)行稱(chēng)量，按照《中國(guó)藥典》(2010版)一部附錄XI B中雙分法測(cè)定成型率。

成型率=合格顆粒的質(zhì)量/(干浸膏粉質(zhì)量+輔料質(zhì)量)×100%

1.2.2.4堆密度測(cè)定。精密稱(chēng)取“1.2.2.2”中制備的4種顆粒劑(m),加入刻度試管中讀取刻度(V)，計(jì)算堆密度(ρ),公式如下：

ρ=m/V

1.2.2.5休止角測(cè)定。精密稱(chēng)取“1.2.2.2”中制備的4種顆粒劑，按照注入法測(cè)定休止角(β)，計(jì)算公式：

tanβ=h/r

式中，h為錐體的高度；r為錐體底部圓的半徑。

1.2.2.6吸濕性測(cè)定。精密稱(chēng)取“1.2.2.2”中制備的4種顆粒劑放入稱(chēng)量瓶中，厚度約為2 mm，然后放入干燥器內(nèi)，底部放有氯化鈉飽和溶液(相對(duì)濕度為75%)，24 h后取出，精密稱(chēng)定。按下列公式計(jì)算吸濕率：

吸濕率(%)=(吸濕后質(zhì)量-吸濕前質(zhì)量)/吸濕前質(zhì)量×100%

1.2.2.7溶化性測(cè)定。取“1.2.2.2”中制備的顆粒劑，按照《中國(guó)藥典》(2010版)一部附錄I C中溶化性檢查方法進(jìn)行溶化性測(cè)定。

1.2.2.8混合輔料的篩選。根據(jù)以上測(cè)定結(jié)果，得出最佳輔料為乳糖和甘露醇的混合輔料。對(duì)混合輔料配比進(jìn)行篩選，根據(jù)表2的原輔料配比進(jìn)行混勻，用75%乙醇制軟材，過(guò)10目篩制粒，45 ℃烘干，過(guò)篩整粒，備用。

表2混合輔料與總黃酮粉末配比

Table 2Proportions of mixed auxiliary materials and total flavonoids powder

g

1.2.3制粒工藝條件的選擇。

1.2.3.1潤(rùn)濕劑的選擇。選取50%、60%、70%、80%、90%的乙醇作為潤(rùn)濕劑，以制成顆粒劑的合格率為指標(biāo)，結(jié)果顯示70%的乙醇最佳。

1.2.3.2正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)。根據(jù)試驗(yàn)選擇對(duì)顆粒劑成型率影響最大的原輔料配比、潤(rùn)濕劑濃度、烘干溫度為考察因素，以顆粒劑成型率為考察指標(biāo)設(shè)計(jì)正交表進(jìn)行正交試驗(yàn)，因素水平見(jiàn)表3。

1.2.4供試品溶液制備。精密稱(chēng)取顆粒劑2 g，加適量乙醇溶解，抽濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)乙醇，加適量甲醇溶液制成供試品溶液備用。

表3　制粒工藝正交試驗(yàn)因素水平

1.2.5對(duì)照品溶液制備。精密稱(chēng)取蘆丁，加適量乙醇溶液制備成約0.1 mg/mL的溶液備用。

1.2.6對(duì)照藥材溶液制備。取2 g老鷹茶在70%乙醇溶液中提取1.5 h，過(guò)濾，濾液蒸干，加適量甲醇溶液制成對(duì)照藥材溶液備用。

1.2.7方法學(xué)考察。

1.2.7.1最大波長(zhǎng)選擇。取適量對(duì)照品溶液和供試品溶液分別在200~600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，都在495 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，且無(wú)干擾，選擇495 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

1.2.7.2標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。精密稱(chēng)取經(jīng)120 ℃干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品25.0 mg，置50 mL容量瓶中，加適量60%乙醇溶液溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得0.5 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密量取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，分別置于50 mL容量瓶中。各加60%乙醇至6 mL；然后分別加5%NaNO2溶液2 mL，搖勻，放置6 min；分別加10%Al(NO3)3溶液2 mL，搖勻，放置6 min；最后分別加4% NaOH溶液10 mL，并加60%乙醇至刻度，搖勻，靜置15 min，在波長(zhǎng)495 nm測(cè)定吸光度，以對(duì)照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[6]。

1.2.7.3穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密量取蘆丁溶液2 mL，置于50 mL容量瓶中分別于10、20、30、40、50、60 min時(shí)在波長(zhǎng)495 nm處按照“1.2.7.2”中方法測(cè)定吸光度，并計(jì)算吸光度RSD。

1.2.7.4精密度試驗(yàn)。精密量取蘆丁溶液2 mL，置于50 mL容量瓶，在波長(zhǎng)495 nm處按照“1.2.7.2”中方法測(cè)定吸光度5次，并計(jì)算吸光度RSD。

1.2.7.5重復(fù)性試驗(yàn)。按照“1.2.4”中的方法分別制備6份供試品溶液，精密量取2 mL，置于50 mL容量瓶，在波長(zhǎng)495 nm處按照“1.2.7.2”中方法測(cè)定吸光度5次，并計(jì)算吸光度RSD。

1.2.7.6加樣回收試驗(yàn)。精密稱(chēng)取6份含有1.492 mg蘆丁的對(duì)照品溶液，分別加入含有1.00 mg總黃酮的顆粒劑置于50 mL容量瓶中，在波長(zhǎng)495 nm處按照“1.2.7.2”中方法測(cè)定吸光度5次，并計(jì)算吸光度RSD。

1.2.8質(zhì)量控制[7-8]。

1.2.8.1性狀鑒別。 取3批樣品，批號(hào)分別為20150607、20150608、20150609，進(jìn)行性狀鑒別。

1.2.8.2溶化性檢查。按照《中國(guó)藥典》(2010版)一部附錄I C中溶化性檢查方法，取3份顆粒劑10 g，加熱水200 mL，攪拌5 min，進(jìn)行溶化性檢查。

1.2.8.3粒度檢查。按照《中國(guó)藥典》(2010版)一部附錄XI B中雙分法進(jìn)行測(cè)定。

1.2.8.4含量測(cè)定。精密稱(chēng)取3個(gè)批次的(20150701、20150702、2015703)的顆粒劑各0.50 g，按照“1.2.4”的方法制備供試品溶液，按照“1.2.7.2”中方法測(cè)定吸光度，計(jì)算總黃酮含量。

1.2.9定性鑒別。按照“1.2.4”、“1.2.5”、“1.2.6”中的方法分別制備對(duì)照品溶液、供試品溶液、對(duì)照藥材溶液，根據(jù)《中國(guó)藥典》(2010版)一部附錄VI B中薄層色譜法，以乙酸-乙酯-正丁醇-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)、晾干，放置紫外燈下檢視，進(jìn)行定性鑒別。

2結(jié)果與分析

2.1輔料選擇根據(jù)表4結(jié)果顯示，最佳輔料為乳糖和甘露醇的混合輔料。根據(jù)表3對(duì)混合輔料配比進(jìn)行篩選，結(jié)果見(jiàn)表5。

表4　單一輔料與總黃酮制粒結(jié)果

由表5可知，乳糖和甘露醇的最佳混合比例為2∶4，此時(shí)的成型率最高，吸濕率相對(duì)較低，溶化性合格。

表5　混合輔料的考察結(jié)果

2.2制粒工藝的篩選由表6分析可知，以顆粒劑成型率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，最佳制粒工藝條件A1B1C3，即原輔料配比1∶1.0 g/g，乙醇濃度70%，烘干溫度60 ℃。由極差R可知，對(duì)成型率的影響因素大小依次為烘干溫度、原輔料配比、乙醇濃度。根據(jù)最佳制粒工藝條件A1B1C3制備3批顆粒劑并進(jìn)行合格率測(cè)定，分別為90.42%、91.57%、91.01%，符合《中國(guó)藥典》(2010版)中對(duì)顆粒劑粒度要求。

表6　制粒工藝正交設(shè)計(jì)表及結(jié)果

2.3方法學(xué)考察

2.3.1線性考察結(jié)果。標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程：A=22.100c+0.001 0(R2=0.999 86)，表明蘆丁在0.000 0~30.00 μg/mL范圍內(nèi)濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2穩(wěn)定性試驗(yàn)。根據(jù)“1.2.7.3”的方法計(jì)算得平均吸光度值為0.478，RSD為1.60%(n=6)。.

2.3.3精密度試驗(yàn)。根據(jù)“1.2.7.4”的方法計(jì)算得平均吸光度值為0.660 8，RSD為0.35%(n=5)。

2.3.4重復(fù)性試驗(yàn)。根據(jù)“1.2.7.5”的方法計(jì)算得平均吸光度值為0.532，RSD為0.59%(n=5)。

2.3.5加樣回收試驗(yàn)。根據(jù)“1.2.7.6”的方法計(jì)算平均回收率為96.94%，RSD為0.90%(n=6)。

2.4質(zhì)量檢查

2.4.1性狀鑒別。試驗(yàn)制得的老鷹茶黃酮顆粒劑顏色為深褐色，味微苦，顆粒大小均勻，干燥，顏色均一，無(wú)潮解、軟化、吸潮等現(xiàn)象。

2.4.2溶化性檢查。試驗(yàn)制得的老鷹茶黃酮顆粒劑全部溶化，符合規(guī)定。

2.4.3粒度檢查。試驗(yàn)得出，制得的老鷹茶黃酮顆粒劑能通過(guò)1號(hào)篩不能通過(guò)5號(hào)篩的總和為9.00%，符合要求。

2.4.4總黃酮含量。試驗(yàn)制得的老鷹茶黃酮顆粒劑平均總黃酮含量為134.4 mg/g。

2.4.5定性鑒別。由圖1可見(jiàn)，在薄層色譜圖中，樣品、對(duì)照藥材、對(duì)照品在相同的位置上。

3結(jié)論與討論

該試驗(yàn)主要采用乙醇回流的方法得到老鷹茶總黃酮溶液，通過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂對(duì)總黃酮溶液進(jìn)行純化，得到純度77.12%的總黃酮粉末，符合《中國(guó)藥典》(2010版)中對(duì)顆粒劑主藥純度的要求。

通過(guò)考察不同輔料對(duì)顆粒劑成型性、堆密度、休止角、吸濕性、溶化性的影響，并用綜合評(píng)分法篩選出制備顆粒劑的最優(yōu)輔料和處方組成：總黃酮粉末30 g，甘露醇20 g，乳糖10 g。通過(guò)正交試驗(yàn)得到顆粒劑制備的最佳工藝條件：原輔料比1∶1.0 g/g，潤(rùn)濕劑70%乙醇，烘干溫度為60 ℃。

注：1.對(duì)照藥材；2.樣品溶液；3.對(duì)照品溶液。　Note: 1. Control drug; 2. Sample solution; 3. Reference solution.圖1　總黃酮TCL圖譜Fig. 1　TCL of total flavonoids

質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)以活性成分總黃酮為指標(biāo)。其中以蘆丁為對(duì)照品，通過(guò)分光光度法對(duì)老鷹茶總黃酮顆粒劑含量進(jìn)行測(cè)定及方法學(xué)考察。采用薄層色譜法對(duì)老鷹茶總黃酮進(jìn)行定性，顆粒劑總黃酮含量為134.4 mg/g。

通過(guò)此方法制備的總黃酮顆粒劑操作簡(jiǎn)單，質(zhì)量可控，并通過(guò)對(duì)顆粒劑的性狀、溶化性、粒度、含量進(jìn)行檢查，說(shuō)明所選的輔料和制備工藝條件可行，為老鷹茶的開(kāi)發(fā)和利用提供了一定的依據(jù)。

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Preparation Technology and Quality Standard of Total Flavonoids from Laoying Tea

ZHANG Jie, YU Xin-zhe, YU Jian-ping*(College of Pharmacy, Guizhou University, Guiyang, Guizhou 550025)

Abstract[Objective]To study the preparation technology of total flavonoids from Laoying tea granules and to establish methods for its quality control. [Method] Water solution of Laoying tea was obtained under a given extraction method. Extract powder of total flavonoids was obtained by macroporous resin. Effects of auxiliary materials on the compactibility, hygroscopicity, bulk density and slope of repose were investigated, so as to screen the optimal auxiliary materials and prescriptions. Total flavonoids from Laoying tea granules were qualitatively analyzed by thin layer chromatography. Content detection and methodology study of total flavonoids were carried out by spectrophotometric method. [Result] The optimal prescription of total flavonoids from Laoying tea granules were as follows: 30 g powder of total flavonoids, 20 g mannitol and 10 g lactose. The optimal technology was 1∶1.0 g/g raw materials to auxiliary materials ratio, 70% ethanol as wetting agent and 60 ℃ baking temperature. The standard curve of total flavonoids wasA=22.100c+0.001 0(R2=0.999 86). The dissolubility, moisture content and grain size all met the requirements. Content of total flavonoids was 134.4 mg/g, the added recovery rate was 96.94%. [Conclusion] This technology is simple and feasible; and the quality was stable and controllable.

Key wordsLaoying tea; Total flavonoids; Granules; Quality control

收稿日期2015-12-10

作者簡(jiǎn)介張杰(1988- )，男，陜西渭南人，碩士研究生，研究方向：天然產(chǎn)物提取及制劑制備。*通訊作者，教授，博士，博士生導(dǎo)師，從事天然產(chǎn)物的提取開(kāi)發(fā)研究。

中圖分類(lèi)號(hào)S 571.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)0517-6611(2016)02-110-04