胰島素聯(lián)合肝細(xì)胞生長因子對肝切除術(shù)后肝再生的促進(jìn)作用

潘光棟　盧五昌　朱曉雯

摘要：目的：觀察經(jīng)門靜脈聯(lián)合灌注胰島素和肝細(xì)胞生長因子促進(jìn)肝切除術(shù)后肝再生的效果。方法：將實(shí)驗(yàn)用新西蘭兔隨機(jī)分為胰島素（INS）治療組、肝細(xì)胞生長因子（HGF）治療組、聯(lián)合用藥組（INS+HGF）、對照組，分別經(jīng)門靜脈置管微泵胰島素、肝細(xì)胞生長因子、胰島素和肝細(xì)胞生長因子、生理鹽水，治療結(jié)束時(shí)測定肝臟體積，計(jì)算肝臟再生速度。術(shù)后監(jiān)測肝功能、血清TNF-α、IL-6。結(jié)果：聯(lián)合治療組較對照組及胰島素組、肝細(xì)胞生長因子組肝功能恢復(fù)快（P<0.01），肝細(xì)胞生長因子組和胰島素組較對照組肝功能恢復(fù)快（P<0.05）。術(shù)后殘肝再生速度胰島素組和肝細(xì)胞生長因子組均較對照組快（P<0.05），聯(lián)合用藥組較對照組和單一用藥組顯著增快（P<0.01）。實(shí)驗(yàn)組TNF-α、IL-6均較對照組升高，聯(lián)合用藥組與單一用藥組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：經(jīng)門靜脈聯(lián)合灌注胰島素和肝細(xì)胞生長因子能顯著促進(jìn)肝切除術(shù)后肝再生。

關(guān)鍵詞：肝細(xì)胞生長因子；胰島素；肝再生；肝切除；門靜脈

中圖分類號：R657.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1008-2409（2016）05-0057-04

臨床實(shí)踐中常遇到需要促進(jìn)肝細(xì)胞再生的挑戰(zhàn)，比如極限肝切除術(shù)后、急性肝功能衰竭、肝硬化需要行肝切除術(shù)等。但目前尚無有效促進(jìn)肝細(xì)胞再生的措施，肝部分切除術(shù)后余肝獲得更多的門靜脈血流灌注和門靜脈血流中所攜帶的營養(yǎng)因子及相關(guān)激素，可能是肝再生的原因，經(jīng)門靜脈補(bǔ)充相關(guān)激素和營養(yǎng)因子促肝再生對肝切除術(shù)后患者有著重要的意義。胰島素是肝細(xì)胞再生的必要因子，肝細(xì)胞生長因子能促進(jìn)肝細(xì)胞再生。本研究探討了經(jīng)門靜脈灌注胰島素和肝細(xì)胞生長因子促進(jìn)肝切除術(shù)肝再生的效果?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物

雄性新西蘭兔120只（廣西醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)動物中心、桂林醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供），體重接近、健康，采用復(fù)合飼料和水喂養(yǎng)。隨機(jī)分為4組，分別為胰島素治療組、肝細(xì)胞生長因子組、胰島素和肝細(xì)胞生長因子聯(lián)合治療組、空白對照組各30只。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)前禁食8 h，將兔固定在手術(shù)臺上，2.5%硫噴妥鈉按照3mg/kg腹腔內(nèi)注射麻醉。剪去腹部手術(shù)野長毛，并用脫毛劑（8%硫化鈉）脫毛，消毒后鋪無菌巾。取上腹正中切口，顯露肝臟，測量肝臟各葉徑線計(jì)算肝臟體積。切除肝左葉，稱重，殘端用4號線縫扎止血。各組顯露門靜脈下段，切肝后置入介入造影用微導(dǎo)管（強(qiáng)生公司生產(chǎn)）約2 cm，結(jié)扎固定，并引出體外固定在兔子耳后。關(guān)腹后給予流質(zhì)飲食，2 d后恢復(fù)正常飲食，繼續(xù)飼養(yǎng)。

1.3藥物治療

各組接受相應(yīng)藥物治療，對照組接受生理鹽水治療，均為經(jīng)門靜脈插管微泵注入，胰島素2U/h，肝細(xì)胞生長因子2mg/kg，生理鹽水2ml/h，連用7 d，監(jiān)測血糖在7～8 mmol/L。

1.4動物處理及觀察指標(biāo)測定

治療期間每天外周靜脈抽血測定炎癥細(xì)胞因IL-6、TNF-α。藥物治療后1周，開始在B超引導(dǎo)下行肝臟斷面肝活檢，每周1次，病理切片觀察肝細(xì)胞核分裂情況，Proplus-image軟件對各組進(jìn)行比較，評價(jià)肝細(xì)胞再生。藥物治療后1周、2周檢測肝功能，評價(jià)肝功能恢復(fù)情況。術(shù)后1、2、4周分別處死每組動物10只，并立即將肝臟切除，測量肝臟體積，計(jì)算肝臟再生體積和相對重量，根據(jù)公式計(jì)算肝臟再生速度。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，用x±s表示，采用非配對t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1動物模型建立

成功建立了新西蘭兔門靜脈置管模型，無動物死亡。

2.2各組相關(guān)資料比較

分別統(tǒng)計(jì)了體重、失血量、手術(shù)時(shí)間、切除肝臟重量等指標(biāo)，各組在體重、失血量、手術(shù)時(shí)間、切除肝臟重量等差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明各組有可比性。詳見表1。

2.3各組肝功能變化的比較

分別統(tǒng)計(jì)了各組術(shù)前1 d及術(shù)后3 d、7 d、14 d的肝功能指標(biāo)。術(shù)前各組肝功能指標(biāo)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，術(shù)后3 d的肝功能指標(biāo)差別也不大；術(shù)后14 d復(fù)查肝功能指標(biāo)，胰島素組和肝細(xì)胞生長因子組肝功能指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，聯(lián)合治療組較對照組及胰島素組、肝細(xì)胞生長因子組肝功能恢復(fù)快（P<0.01），肝細(xì)胞生長因子組和胰島素組較對照組肝功能恢復(fù)快（P<0.05）。詳見表2。

2.4各組殘肝再生速度比較

術(shù)后殘肝再生速度胰島素組和肝細(xì)胞生長因子組均較對照組快（P<0.05），聯(lián)合用藥組較對照組和單一用藥組顯著增快（P<0.01）。詳見表3、表4。

2.5各組術(shù)后血清TNF-a、IL-6濃度比較

TNF-α、IL-6作為肝再生的刺激因子，實(shí)驗(yàn)組TNF-α、IL-6均較對照組升高，聯(lián)合用藥組與單一用藥組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明聯(lián)合用藥組的肝再生比較活躍。詳見表5。

3討論

肝切除術(shù)后殘肝體積不足是限制肝腫瘤根治性切除的主要因素，部分患者失去手術(shù)治療機(jī)會。正常肝臟可以耐受70%的切除量，合并肝硬化的肝臟只能耐受50%的切除量，與肝硬化的程度及肝功能儲備情況也有關(guān)聯(lián)。在我國原發(fā)性肝癌的患者往往合并肝硬化，腫瘤切除術(shù)后殘肝量不足時(shí)易發(fā)生小肝綜合征，導(dǎo)致急性肝功能衰竭。

研究表明，肝部分切除術(shù)后余肝獲得更多的門靜脈血流灌注和門靜脈血流中所攜帶的營養(yǎng)因子和相關(guān)激素，可能是肝細(xì)胞得以再生的原因。結(jié)扎一側(cè)的門靜脈后，對側(cè)肝臟代償性肥大的原因也是門靜脈所供應(yīng)的激素。

目前有部分藥物和激素可以促進(jìn)肝細(xì)胞再生，包括胰島素、胰高血糖素、肝細(xì)胞生長因子、肝細(xì)胞刺激物質(zhì)、甲強(qiáng)龍、前列腺素E₁和某些中藥等，其中以胰島素和肝細(xì)胞生長因子的作用較為肯定。胰島素被認(rèn)為是肝臟的營養(yǎng)因子，肝部分切除術(shù)后經(jīng)門靜脈灌注胰島素較經(jīng)周圍靜脈用藥的促肝細(xì)胞再生效應(yīng)更顯著。經(jīng)門靜脈用藥能維持較高的胰島素濃度，持續(xù)灌注的藥物濃度較穩(wěn)定，促肝細(xì)胞再生作用明顯，對血糖影響也小。聯(lián)合應(yīng)用肝細(xì)胞生長因子和胰島素是否能更有效促進(jìn)肝細(xì)胞再生是本研究的重點(diǎn)。

本研究結(jié)果顯示，經(jīng)門靜脈灌注胰島素和肝細(xì)胞生長因子能促進(jìn)肝切除術(shù)后肝再生，表現(xiàn)在術(shù)后肝功能恢復(fù)更快、殘肝再生速度更快。分別測定術(shù)后當(dāng)時(shí)、術(shù)后1周、2周、1月的殘肝體積，計(jì)算殘肝再生速度，胰島素組和肝細(xì)胞生長因子組均較對照組快（P<0.05），聯(lián)合用藥組較對照組和單一用藥組顯著增快（P<0.01）。術(shù)前各組肝功能指標(biāo)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，術(shù)后3 d的肝功能指標(biāo)差別也不大；術(shù)后14 d復(fù)查肝功能指標(biāo)，胰島素組和肝細(xì)胞生長因子組肝功能指標(biāo)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，聯(lián)合治療組較單一用藥組肝功能恢復(fù)快（P<0.01），肝細(xì)胞生長因子組和胰島素組較對照組肝功能恢復(fù)快（P<0.05）。說明聯(lián)合用藥較單一用藥的促肝細(xì)胞再生作用顯著。

有研究報(bào)道，肝切除術(shù)后肝再生的啟動刺激因子包括IL-6、TNF-α等。術(shù)后6 h即啟動肝細(xì)胞再生，因此，早期用藥促進(jìn)肝細(xì)胞再生有其理論依據(jù)。本研究測定的IL-6、TNF-α也反映了相似的結(jié)果，不同組別間術(shù)后的濃度比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

總之，經(jīng)門靜脈聯(lián)合應(yīng)用促肝細(xì)胞再生因子較單一用藥和外周血管用藥能更明顯促進(jìn)肝切除術(shù)后肝再生。