同位素稀釋高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水果及其制品中的展青霉素

項(xiàng)瑜芝，許嬌嬌，蔡增軒，莫衛(wèi)民，任一平,*

(1.浙江工業(yè)大學(xué)　化學(xué)工程學(xué)院，浙江　杭州　310014；2.浙江省疾病預(yù)防與控制中心，浙江　杭州　310051)

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同位素稀釋高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水果及其制品中的展青霉素

項(xiàng)瑜芝1，許嬌嬌2，蔡增軒2，莫衛(wèi)民1，任一平1,2*

(1.浙江工業(yè)大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院，浙江杭州310014；2.浙江省疾病預(yù)防與控制中心，浙江杭州310051)

摘要：建立了同位素稀釋高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)水果及其制品中的展青霉素進(jìn)行測(cè)定。澄清果汁(濁汁、固液體及固體樣品需用果膠酶酶解處理，乙酸乙酯提取濃縮后復(fù)溶)經(jīng)混合型陰離子交換柱凈化、富集后，采用Waters HSS T3柱(2.1 mm×100 mm，1.8 μm)以乙腈-水為流動(dòng)相梯度洗脫，電噴霧離子源離子化，負(fù)離子多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)(MRM)模式檢測(cè)，同位素稀釋內(nèi)標(biāo)法定量。展青霉素在5~250 ng/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)(r2)大于0.999，該方法在不同基質(zhì)不同加標(biāo)濃度下，回收率為90.6%~110.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.4%~3.9%，定量下限為5.0 μg/kg(蘋(píng)果汁中定量下限為2.0 μg/kg)。該方法準(zhǔn)確可靠、靈敏度高，適合于水果及其制品中展青霉素的測(cè)定，可滿足我國(guó)GB 2761-2011對(duì)于水果制品、果蔬汁和酒類(僅限蘋(píng)果和山楂)中展青霉素殘留的檢測(cè)要求。

關(guān)鍵詞：展青霉素；高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；同位素稀釋法；水果及其制品

展青霉素(Patulin)是由曲霉和青霉等真菌產(chǎn)生的一種次級(jí)代謝產(chǎn)物[1]，主要污染水果及其制品，尤其是蘋(píng)果、山楂、番茄和山楂片等[2-4]。該物質(zhì)有影響生育、致癌和免疫抑制等毒理作用，同時(shí)也是一種神經(jīng)毒素，可對(duì)呼吸和泌尿等系統(tǒng)造成損害[5]。我國(guó)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB 2761-2011食品中真菌毒素限量》已明確規(guī)定食品中水果制品(果丹皮除外)、果蔬汁類及酒類(僅限蘋(píng)果和山楂)中展青霉素的限量值為50 μg/kg。

目前測(cè)定展青霉素的常用方法有薄層色譜法[6]、液相色譜法[7-10]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[11-12]及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[13-18]等。我國(guó)現(xiàn)有的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)采用薄層色譜法，該方法存在酚類成分干擾嚴(yán)重、難分離等問(wèn)題，只能用于半定量檢測(cè)。液相色譜法是目前普遍使用的方法之一，結(jié)合液液萃取凈化法[7-8]、固相萃取法[9-10]等前處理手段，可提高檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性，但在實(shí)際樣品的檢測(cè)中仍存在假陽(yáng)性和雜峰干擾的問(wèn)題。高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有靈敏度高、準(zhǔn)確性強(qiáng)的特點(diǎn)，牛華等[13]建立了超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜(UPLC-ESI-MS/MS) 聯(lián)用技術(shù)分析果汁中展青霉素的方法，該方法以O(shè)asis HLB固相萃取柱(SPE)凈化，C18色譜柱為分離柱，水-乙腈溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，電噴霧離子源電離、負(fù)離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式質(zhì)譜進(jìn)行定性和定量分析，測(cè)得果汁等樣品的定量下限為5 μg/kg。液相色譜-質(zhì)譜法大多僅針對(duì)基質(zhì)效應(yīng)較小的果汁樣品，鮮有針對(duì)山楂及其制品這類基質(zhì)效應(yīng)嚴(yán)重、有雜峰干擾的復(fù)雜基質(zhì)的研究，尤其是難制樣的果丹皮。同位素稀釋內(nèi)標(biāo)法既可克服基質(zhì)效應(yīng)帶來(lái)的誤差，又可校正實(shí)驗(yàn)過(guò)程的損失，可獲得高準(zhǔn)確度和高精確度。

本文對(duì)比現(xiàn)有的液相色譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，優(yōu)化前處理?xiàng)l件，評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)，并針對(duì)GB 2761-2011的檢測(cè)對(duì)象建立了準(zhǔn)確可靠、靈敏度高的同位素稀釋高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析方法。該方法滿足蘋(píng)果、山楂等水果及其制品中展青霉素的測(cè)定要求，克服了原國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法出現(xiàn)假陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果時(shí)缺乏確證方法的現(xiàn)況，為現(xiàn)有國(guó)家食品安全檢測(cè)方法的修訂提供了技術(shù)支持。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器、試劑與材料

高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC MS-8050，島津公司)；固相萃取裝置(美國(guó)Waters公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(Buchi B-490型，瑞士Buchi公司)；高速離心機(jī)(AllgraTM64R型，美國(guó)Beckman公司)；超純水機(jī)(Millipore System型，美國(guó)Millpore公司)。

展青霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(含量>98%，ALEXIS Biochemicals)，展青霉素同位素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)13C7-Patulin(含量>98%，美國(guó)Romer公司)；乙腈、甲醇、乙酸乙酯(色譜純，德國(guó)Merck公司)；乙酸銨、碳酸鈉(分析純，上海試劑有限公司)；果膠酶(美國(guó)Sigma公司)；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

稱取1.0 mg展青霉素標(biāo)準(zhǔn)品用0.2%乙酸水溶液溶解轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，定容得展青霉素濃度為100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確吸取100 μL的100 μg/mL展青霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液至10 mL容量瓶中，用pH 4.0的乙酸水溶液定容，得濃度為1 μg/mL的展青霉素工作液。準(zhǔn)確移取0.40 mL展青霉素同位素內(nèi)標(biāo)(25 μg/mL)至10 mL容量瓶中，用pH 4.0的乙酸水溶液定容，得濃度為1 μg/mL的同位素內(nèi)標(biāo)工作液(13C7-展青霉素)。

1.3樣品制備

液體樣品(蘋(píng)果汁、山楂汁等)：將所有液體倒入勻漿機(jī)中，混勻后密封。酒類試樣需超聲脫氣1 h或4 ℃低溫條件下存放過(guò)夜脫氣。

固體樣品(山楂片等)：用高速粉碎機(jī)將其粉碎，混合均勻后密封。果丹皮經(jīng)液氮凍干后立刻用高速粉碎機(jī)將其粉碎，混合均勻后密封。

1.4樣品前處理

1.4.1酶解與提取對(duì)于固體樣品，稱取1 g試樣于離心管中，加入50 ng同位素內(nèi)標(biāo)，再加入10 mL水與75 μL果膠酶溶液混勻，室溫下避光放置過(guò)夜，振蕩后加入10 mL乙酸乙酯，渦旋混合5 min，于6 000 r/min 下離心5 min，取乙酸乙酯層于濃縮瓶中，再用10 mL乙酸乙酯提取水相1次，合并兩次乙酸乙酯提取液，在40 ℃水浴中用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干，以5.0 mL pH 4.0的乙酸水溶液溶解殘留物，待凈化。

對(duì)于渾濁果汁樣品，準(zhǔn)確量取2 mL試樣于離心管中，加入50 ng同位素內(nèi)標(biāo)，再加入75 μL果膠酶溶液，混勻，室溫下避光放置過(guò)夜后，在6 000 r/min 下離心5 min，取上清液過(guò)玻璃纖維濾紙，準(zhǔn)確吸取2.0 mL待凈化。

對(duì)于澄清果汁樣品，準(zhǔn)確量取2 mL試樣，加入50 ng 同位素內(nèi)標(biāo)，混勻后待凈化。

對(duì)于蘋(píng)果酒(脫氣)樣品，準(zhǔn)確量取1 mL試樣，加入50 ng 同位素內(nèi)標(biāo)，混勻后待凈化。

1.4.2凈化Oasis MAX固相萃取柱分別加入3 mL甲醇和3 mL水淋洗活化，保持柱體積濕潤(rùn)。將上樣液轉(zhuǎn)移至活化好的固相萃取柱中，控制樣液以2~3 mL/min的速度穩(wěn)定下滴。上樣完畢后，依次加入3 mL 5 mmol/L乙酸銨溶液、1 mL水淋洗。抽干混合型陰離子交換柱，加入2 mL甲醇洗脫，控制流速為2~3 mL/min，抽干，收集洗脫液。在洗脫液中加入10 μL乙酸，40 ℃下用氮?dú)饩従彺抵两?，用pH 4.0的乙酸水溶液定容至1.0 mL，渦旋30 s溶解殘留物，過(guò)0.22 μm濾膜，收集濾液于進(jìn)樣瓶中以備進(jìn)樣。

1.5儀器條件

色譜條件：液相色譜柱(Waters HSS T3，100 mm×2.1 mm×1.8 μm)；流動(dòng)相：A為水，B為乙腈，梯度洗脫程序?yàn)椋?~7 min，5%B；7~7.5 min，5%~100%B；7.5~9.5 min，100%B；9.5~10 min，100%~5%B；10~15 min，5%B；流速：0.3 mL/min；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

質(zhì)譜條件：離子源為ESI負(fù)離子模式；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；噴霧電壓：-4 000 V；氣簾氣流量：3 L/min；干燥氣流量：10 L/min；離子源加熱溫度：300 ℃。展青霉素及其同位素優(yōu)化后的質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)見(jiàn)表1。

表1　展青霉素及其同位素的質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)

* quantitative ion

2結(jié)果與討論

2.1前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

水果及其制品中基本都含有親水有機(jī)酸及天然染料。選用固相萃取柱為凈化手段時(shí)，常用弱堿性的淋洗液(如碳酸氫鈉溶液、碳酸鈉溶液、氨水溶液)以取得較好的除雜效果。但展青霉素是親水化合物，在反相固相萃取柱中的保留較弱，因此樣品的加標(biāo)回收率較差(見(jiàn)表2)。本文選用混合型陰離子交換柱Oasis MAX為凈化柱，強(qiáng)酸性雜質(zhì)可被填料吸附，起到吸附除雜的作用，對(duì)以上弱堿性的淋洗液及中性淋洗液(如乙酸銨)的淋洗條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，乙酸銨溶液作為淋洗劑時(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果最佳，加標(biāo)回收率大于85%。因而選擇乙酸銨溶液作為淋洗液。

表2　以O(shè)asis MAX柱為凈化柱時(shí)不同淋洗液對(duì)展青霉素凈化效果的影響(n=3)

測(cè)定果汁中展青霉素時(shí)常用的固相萃取柱有Oasis HLB柱[13]與分子印跡親和柱[19]。分別考察了Oasis HLB柱、分子印跡親和柱以及混合型陰離子交換柱對(duì)蘋(píng)果汁樣品的凈化效果。從表3可以看出，分子印跡親和柱的回收率波動(dòng)較大，原因在于實(shí)驗(yàn)過(guò)程必須保持柱體濕潤(rùn)，否則會(huì)影響分子印跡聚合物與展青霉素的有效結(jié)合，進(jìn)而影響回收率，不適宜批量實(shí)驗(yàn)，且價(jià)格昂貴。相比之下，混合型陰離子交換柱Oasis MAX的準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性更佳，適用于果汁中展青霉素的測(cè)定。

表3　展青霉素在不同固相萃取柱中的回收率(n=6)

表4　不同樣品的基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)(n=3)

*IS-normalized MF=(Patulin MF)/(13C7-Patulin MF),**CV=

RSD{IS-normalized MF}

2.2基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)與同位素內(nèi)標(biāo)稀釋法定量的選擇

2.2.1基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)液相色譜-質(zhì)譜法基于目標(biāo)分析物離子化并用特定的子離子核質(zhì)比來(lái)進(jìn)行定量分析，在實(shí)際樣品測(cè)定時(shí)，有些雜質(zhì)會(huì)因干擾待測(cè)物的離子化而影響其離子化效率，產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng)。因此本實(shí)驗(yàn)采用同位素稀釋內(nèi)標(biāo)法定量以消除或降低基質(zhì)效應(yīng)。選取蘋(píng)果汁、山楂片和蘋(píng)果酒為考察基質(zhì)，以50 μg/kg的同位素13C7-展青霉素和5 μg/kg的展青霉素為檢測(cè)點(diǎn)，采用樣品提取后加入法來(lái)評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)[20]，即樣品經(jīng)試驗(yàn)凈化后在定溶液中加入展青霉素及其同位素。其中，展青霉素的基質(zhì)效應(yīng)因子(Matrix factor，MF)是其在基質(zhì)中與在溶劑中的響應(yīng)峰峰面積的比值，展青霉素同位素的基質(zhì)效應(yīng)因子是其同位素在基質(zhì)中與在溶劑中的響應(yīng)峰峰面積的比值。內(nèi)標(biāo)歸一化基質(zhì)效應(yīng)因子(IS-normalized MF)是展青霉素的基質(zhì)效應(yīng)因子與其同位素的基質(zhì)效應(yīng)因子的比值，因?yàn)檎骨嗝顾丶捌渫凰氐慕^對(duì)基質(zhì)效應(yīng)相近，可用兩者基質(zhì)效應(yīng)的比值來(lái)抵消展青霉素的基質(zhì)效應(yīng)。內(nèi)標(biāo)歸一化基質(zhì)效應(yīng)因子的變異系數(shù)(CV)[21]是不同樣品中內(nèi)標(biāo)歸一化基質(zhì)效應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，用于評(píng)價(jià)在不同樣品中采用同位素內(nèi)標(biāo)校正基質(zhì)效應(yīng)的準(zhǔn)確性，CV值越小說(shuō)明不同基質(zhì)對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確度影響較小，方法越可靠。從表4可看出，CV為4.7%，小于15%，符合EMEA指導(dǎo)原則[21]的規(guī)定，因此該方法適合蘋(píng)果汁、山楂片和蘋(píng)果酒等不同樣品的檢測(cè)，其基質(zhì)干擾可用同位素內(nèi)標(biāo)來(lái)校正。

2.2.2樣品基質(zhì)外標(biāo)法與同位素內(nèi)標(biāo)稀釋法定量的比較選取3種陰性基質(zhì)(蘋(píng)果汁、山楂片和蘋(píng)果酒)進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)(50 μg/kg)，重復(fù)測(cè)定6次，采用外標(biāo)法和同位素內(nèi)標(biāo)稀釋法分別定量，結(jié)果見(jiàn)圖1。結(jié)果表明，采用同位素內(nèi)標(biāo)稀釋法能達(dá)到更好的回收率和穩(wěn)定性，定量更為準(zhǔn)確。

2.3液相色譜法與液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的比較

參考SN/T 2008-2007進(jìn)出口果汁中棒曲霉毒素的檢測(cè)方法[22]——高效液相色譜法，采用傳統(tǒng)液液萃取法為凈化手段，液相色譜儀配紫外或二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定。NY/T 1650-2008蘋(píng)果和山楂制品中展青霉素的測(cè)定[23]采用高效液相色譜法，MycoSep 228 AflaPat多功能柱凈化，液相色譜儀配紫外或二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定。以上兩種液相色譜法均能對(duì)蘋(píng)果汁中展青霉素進(jìn)行定量測(cè)定，但展青霉素出峰附近有較高的雜峰5-羥甲糠醛，對(duì)低濃度展青霉素的測(cè)定有影響，其定量下限為10 μg/kg。由于山楂制品含有較多糖分雜質(zhì)，經(jīng)以上前處理方法凈化后仍有較多雜質(zhì)對(duì)展青霉素定性產(chǎn)生干擾，因此現(xiàn)有的液相色譜法不適于山楂制品中展青霉素的測(cè)定。

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的選擇性較好、適用范圍較廣。將SN/T 2534-2010(MycoSep 228 AflaPat多功能柱凈化法)[24]與本實(shí)驗(yàn)建立的方法進(jìn)行比較，兩者均能對(duì)蘋(píng)果和山楂制品中展青霉素進(jìn)行測(cè)定，但以多功能柱為凈化手段的方法基質(zhì)效應(yīng)較為嚴(yán)重，山楂制品測(cè)定中存在雜質(zhì)過(guò)載問(wèn)題，且無(wú)對(duì)果丹皮的檢測(cè)方法。以混合型陰離子交換柱為前處理方法，在果丹皮樣品中添加展青霉素標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)得到的定量離子色譜圖見(jiàn)圖2。較之現(xiàn)有的液相色譜法與液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，本方法有著較好的靈敏度，無(wú)雜峰干擾，且適用范圍較廣，滿足GB/T 2761-2011中展青霉素污染對(duì)象的檢測(cè)要求。

2.4液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍將展青霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用pH 4.0乙酸水溶液稀釋成8個(gè)不同濃度的溶液(5,10,25,50,100,150,200,250 ng/mL)，連續(xù)3 d重復(fù)實(shí)驗(yàn)，其中同位素內(nèi)標(biāo)濃度為50.0 ng/mL，以質(zhì)量濃度(X，ng/mL)對(duì)展青霉素與其同位素定量離子的峰面積比值(Y)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。3 d的回歸方程依次為Y=3.020 3X+0.047 2，Y=2.992 6X+0.071 7及Y=3.048 4X+0.070 3，相關(guān)系數(shù)(r2)均在0.999以上，方法的線性關(guān)系良好。

2.4.2檢出限與定量下限選取4種陰性樣品(蘋(píng)果汁、山楂片及蘋(píng)果酒)，加入展青霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液(加標(biāo)水平為5 μg/kg)，按照本方法進(jìn)行前處理，分離檢測(cè)，重復(fù)實(shí)驗(yàn)20次。得出3種實(shí)際樣品在5 μg/kg加標(biāo)水平下的信噪比(S/N，見(jiàn)表5)，以S/N=10計(jì)算定量下限，S/N=3計(jì)算檢出限。該方法在蘋(píng)果汁中的檢出限為0.5 μg/kg，定量下限為2.0 μg/kg；在山楂片和蘋(píng)果酒中的檢出限為2.0 μg/kg，定量下限為5.0 μg/kg。該定量下限彌補(bǔ)了液相色譜法在分析山楂等復(fù)雜基質(zhì)時(shí)，由于雜質(zhì)干擾，定量下限(5.0 μg/kg)不能達(dá)到低于限量值(50 μg/kg)10倍要求的缺點(diǎn)。

表5　不同空白基質(zhì)在低濃度加標(biāo)下的結(jié)果(n=20)

2.4.3準(zhǔn)確度與精密度稱取陰性樣品(蘋(píng)果汁、山楂片及蘋(píng)果酒)，添加3個(gè)濃度(25，50，100 μg/kg)水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)濃度水平平行6次實(shí)驗(yàn)，連續(xù)3 d，數(shù)據(jù)見(jiàn)表6。實(shí)際樣品在不同加標(biāo)水平下的回收率為90.6%~110.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于5%。說(shuō)明該方法對(duì)不同樣品、不同含量的展青霉素測(cè)定均有較好的準(zhǔn)確度和精密度。

表6　不同樣品中展青霉素的加標(biāo)回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)

2.4.4有證樣品與實(shí)際樣品的測(cè)定將購(gòu)自Sigma公司的有證樣品蘋(píng)果果泥，按照本方法平行6次實(shí)驗(yàn)，連續(xù)3 d重復(fù)測(cè)定，測(cè)得展青霉素含量的均值為17.7 μg/kg，RSD為6.4%。與證書(shū)上展青霉素含量的理想范圍10.4~26.8 μg/kg進(jìn)行比較，在合理的范圍內(nèi)。說(shuō)明該測(cè)定方法較準(zhǔn)確。

對(duì)本地超市和網(wǎng)購(gòu)的水果及其制品，包括蘋(píng)果汁、蘋(píng)果醋、蘋(píng)果醬、山楂片、山楂制品、山楂干、果蔬粉等30種樣品進(jìn)行測(cè)定，在山楂片、果丹皮、山楂干中檢測(cè)到展青霉素，含量分別為2.2，4.2，24.2 μg/kg(圖3)，其余樣品均未檢出。

3結(jié)論

本文針對(duì)水果制品、果蔬汁和酒類(僅限蘋(píng)果和山楂)等不同種類樣品，建立了較全面的檢測(cè)水果及其制品中展青霉素的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法，并采用同位素內(nèi)標(biāo)法定量，克服了基質(zhì)效應(yīng)帶來(lái)的誤差和校正實(shí)驗(yàn)過(guò)程損失。本方法的定量下限為5.0 μg/kg(蘋(píng)果汁的定量下限達(dá)到2.0 μg/kg)，有較優(yōu)的靈敏度。有證樣品驗(yàn)證結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確可靠，并已成功地對(duì)蘋(píng)果汁、蘋(píng)果醬、山楂片、果丹皮等30種實(shí)際樣品進(jìn)行了檢測(cè)。方法能夠滿足我國(guó)GB2761-2011對(duì)于水果制品、果蔬汁和酒類(僅限蘋(píng)果和山楂)中展青霉素限量的檢測(cè)要求，為在現(xiàn)國(guó)標(biāo)中增加展青霉素的液質(zhì)檢測(cè)方法提供了參考依據(jù)。

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研究簡(jiǎn)報(bào)

Determination of Patulin in Fruit Products by Isotope Dilution Combined with High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass SpectrometryXIANG Yu-zhi1,XU Jiao-jiao2,CAI Zeng-xuan2,MO Wei-min1,REN Yi-ping1,2*

(1.College of Chemical Engineering,Zhejiang University of Technology,Hangzhou310014,China;2.Zhejiang

Provincial Center for Disease Control and Prevention,Hangzhou310051,China)

Abstract：A method was developed for the determination of patulin in fruit products by isotope dilution with high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry(HPLC-MS/MS).The clear juice was directly purified and enriched with ProElut PXA.Besides,the cloud juice,solid liquid and solid samples were primarily hydrolyzed with pectinase,then extracted with ethyl acetate and concentrated,redissolved with acetic acid solution(pH 4.0),and purified and enriched with ProElut PXA.The chromatographic separation was performed on a Waters HSS T3 column(2.1 mm×100 mm，1.8 μm) by gradient elution with acetonitrile-water as mobile phase.The patulin was detected by MS with electrospray negative ionization(ESI) under multiple reaction monitoring(MRM) mode.Accurate determination was achieved using isotope as the internal standard.Results showed that the calibration curve of patulin was linear in the range of 5-250 ng/mL with correlation coefficients greater than 0.999.The limits of quantitation(LOQ) of this method were 2.0 μg/kg for apple juice and 5.0 μg/kg for apple wine and haw.The recoveries of patulin at low,medium and high spiked concentration levels were in the range of 90.6%-110.1% with relative standard deviations of 1.4%-3.9%.The proposed method was proved to be a practical method which could completely satisfy the standard requirement GB 2761-2011 for detection of patulin in fruit products including apple juice,apple wine and haw products.In conclusion,this method was reliable,accurate and sensitive,and could be used for the analysis of patulin in fruit products.

Key words：patulin;high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry(HPLC-MS/MS);isotope dilution;fruit products

中圖分類號(hào)：O657.63；S852.44

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

文章編號(hào)：1004-4957(2016)01-0054-07

doi：10.3969/j.issn.1004-4957.2016.01.009

通訊作者：*任一平，教授級(jí)高級(jí)工程師，研究方向：衛(wèi)生理化檢驗(yàn)及食品安全檢測(cè)技術(shù)，Tel：0571-87115261，E-mail：renyiping@263.net

收稿日期：2015-07-21；修回日期：2015-08-15