腦休眠灌注喚醒實(shí)驗(yàn)研究

葉利斌，花愛(ài)遠(yuǎn)，代 波，盧婷婷，葉美麟

·論著·

腦休眠灌注喚醒實(shí)驗(yàn)研究

葉利斌，花愛(ài)遠(yuǎn)，代 波，盧婷婷，葉美麟

【摘要】目的探究兔腦休眠灌注喚醒的機(jī)制及其與腦死亡的關(guān)系。方法2010年9月—2014年9月選取健康新西蘭白兔36只，按隨機(jī)數(shù)字表法均分6組(A～F組，各6只)，按可控性兔全腦缺血實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷姆椒ㄔ炷?，分別比較全腦缺血后的傳統(tǒng)復(fù)蘇及全腦缺血后分別用自配的腦保護(hù)液、5%葡萄糖溶液及兔血漿等灌注喚醒大腦的效果；利用MS-2000計(jì)算機(jī)生物信號(hào)記錄分析系統(tǒng)全程檢測(cè)兔的呼吸、心率、血壓及腦電；目測(cè)實(shí)驗(yàn)兔的自主運(yùn)動(dòng)、對(duì)刺激的反應(yīng)及腦部水腫等，記錄6組兔的生存率。另選取健康新西蘭白兔6只，分別提取其抗凝血漿及腦、肝、心、腎等組織浸液，用試管法比較腦、肝、心、腎浸液對(duì)血液凝固時(shí)間的影響(1～5管)。結(jié)果A、C、D組兔均不能恢復(fù)自主呼吸而死亡；B組兔均反射恢復(fù)而生存；E組兔1只不能恢復(fù)自主呼吸而死亡，其余5只反射恢復(fù)而生存；F組兔3只不能恢復(fù)自主呼吸而死亡，其余3只反射恢復(fù)而生存。6組兔生存率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；B、E組兔生存率高于A、C、D組(P<0.003 3)。五管血液凝固時(shí)間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2、3、4、5管血液凝固時(shí)間長(zhǎng)于1管(P<0.05)；3、4、5管血液凝固時(shí)間長(zhǎng)于2管(P<0.05)；4管血液凝固時(shí)間短于3管，5管血液凝固時(shí)間長(zhǎng)于3管(P<0.05)；5管血液凝固時(shí)間長(zhǎng)于4管(P<0.05)。結(jié)論自主研發(fā)的腦保護(hù)液可有效防止兔大腦停止供血后迅速發(fā)生的腦水腫及血液凝固，使腦休眠期延長(zhǎng)達(dá)60 min,為臨床進(jìn)一步研究提供了參考依據(jù)。

長(zhǎng)期以來(lái)均認(rèn)為，大腦對(duì)缺血缺氧敏感，停止供血3～5 min就可出現(xiàn)不可逆死亡。美國(guó)的腦死亡實(shí)驗(yàn)室診斷金標(biāo)準(zhǔn)是4條腦血管(頸總動(dòng)脈和椎動(dòng)脈)造影無(wú)血流灌注和腦電出現(xiàn)平直等[1-4]。然而，最近的研究發(fā)現(xiàn)，大腦停止供血、腦電變平直、功能喪失等并非腦死亡，而是腦細(xì)胞在停止供血，內(nèi)環(huán)境改變后處于的休眠狀態(tài)，當(dāng)內(nèi)環(huán)境條件恢復(fù)后，腦細(xì)胞會(huì)重新覺(jué)醒并執(zhí)行其功能[5-6]，并在國(guó)際上首先提出了腦休眠概念[7]：大腦完全性缺血缺氧后的功能休止?fàn)顟B(tài)稱為腦休眠(cerebral dormancy)，腦休眠開始至能被喚醒的時(shí)間稱為休眠期，休眠期后大腦功能不可逆終止稱為腦死亡。本研究通過(guò)比較不同灌注液對(duì)腦休眠灌注喚醒的效果及腦、肝、心、腎等組織浸液對(duì)血液凝固速度的影響，以進(jìn)一步弄清腦休眠灌注喚醒的機(jī)制，找出腦休眠喚醒的有效方法。

1材料與方法

1.1不同灌注液對(duì)腦休眠灌注喚醒的效果用自創(chuàng)的可控性兔全腦缺血實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蚚8]的方法造模，分別比較全腦缺血后的傳統(tǒng)復(fù)蘇及全腦缺血后分別用自配的腦保護(hù)液、5%葡萄糖溶液及兔血漿等灌注喚醒大腦的效果。

1.1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物2010年9月—2014年9月選取健康新西蘭白兔36只，雌雄不限，體質(zhì)量3.0～3.5 kg，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.1.2實(shí)驗(yàn)儀器和藥品MS-2000計(jì)算機(jī)生物信號(hào)記錄分析系統(tǒng)，壓力換能器，按釘式引導(dǎo)電極，深動(dòng)脈血流阻斷套管，三通、四通動(dòng)脈導(dǎo)管，動(dòng)物手術(shù)器械，照明燈，兔臺(tái)，地西泮針劑，1%肝素，兔血漿，5%葡萄糖溶液，腦保護(hù)液(自主配方)：100 ml中含氯化鈉0.375 g、乳酸鈉0.077 5 g、氯化鉀0.007 5 g、氯化鈣0.005 g、葡萄糖2.5 g、右旋糖酐(40)7.5 g等。

1.1.2方法

1.1.2.1動(dòng)物分組及造模將兔按完全隨機(jī)數(shù)字表法分為A、B、C、D、E、F組共6組，每組6只。A組全腦缺血7.5 min，不做腦部灌注；B組全腦缺血15 min，腦部灌注腦保護(hù)液；C組全腦缺血15 min，腦部灌注5%葡萄糖溶液；D組全腦缺血15 min，腦部灌注兔血漿；E組全腦缺血30 min，腦部灌注腦保護(hù)液；F組全腦缺血60 min，腦部灌注腦保護(hù)液。

本研究創(chuàng)新點(diǎn)：

首先提出了腦休眠的概念，證明大腦可耐受完全性缺血的時(shí)間達(dá)60 min以上。

論證了腦休眠喚醒的關(guān)鍵是有效阻止休眠期腦部迅速發(fā)生的腦水腫及血液凝固。

1.1.2.2實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備MS-2000計(jì)算機(jī)生物信號(hào)記錄分析系統(tǒng)的準(zhǔn)備：將腦電引導(dǎo)電極的輸入線連接上按釘式引導(dǎo)電極，插入一通道插口；將血壓換能器注滿1%肝素后，插入二通道插口。啟動(dòng)MS-2000系統(tǒng)，進(jìn)入監(jiān)視狀態(tài)。參數(shù)設(shè)置：將第一通道輸入選擇“腦電”，增益為1/16 mv/cm；將第二通道輸入選擇“壓力”，增益為1/8檔處；選擇連續(xù)示波顯示，掃描基線調(diào)到適當(dāng)位置。

動(dòng)物手術(shù)準(zhǔn)備：用地西泮針劑以10 mg/kg的劑量靜脈麻醉后將兔固定在手術(shù)臺(tái)上。剪去頸部的毛，沿正中線作6～8 cm長(zhǎng)的皮膚和皮下組織切口，鈍性分離肌肉，暴露氣管、動(dòng)脈。

分離兩側(cè)椎動(dòng)脈，套上深動(dòng)脈血流阻斷套管：用止血鉗于鎖骨水平，沿一側(cè)頸總動(dòng)脈外逐層分離頸筋膜，直至椎前層筋膜。在椎動(dòng)脈始段搏動(dòng)明顯處用止血鉗鈍性分離椎前層筋膜，暴露椎動(dòng)脈，用眼科彎鑷小心在椎動(dòng)脈下方穿過(guò)，并將一根絲線在動(dòng)脈下方帶出，后用兩根引線把絲線兩端帶過(guò)深動(dòng)脈血流阻斷套管并套牢，以備結(jié)扎阻斷椎動(dòng)脈用。同法分離另一側(cè)椎動(dòng)脈。

分離兩側(cè)頸總動(dòng)脈，連接三通、四通動(dòng)脈導(dǎo)管：用止血鉗在氣管旁鈍性游離一側(cè)頸總動(dòng)脈，動(dòng)脈下方穿兩根絲線備用，頸總動(dòng)脈的兩端(間隔3 cm以上)分別用動(dòng)脈夾夾閉后于中間剪開兩端，將四通動(dòng)脈導(dǎo)管(注滿1%肝素)兩端分別插入頸總動(dòng)脈兩端并用絲線固定。四通動(dòng)脈導(dǎo)管近頭端的側(cè)口接輸液管，近心端的側(cè)口接血壓傳感器，開通閥門使血壓傳感器與心端血管相通，打開動(dòng)脈夾檢測(cè)動(dòng)脈血壓。用同法將三通動(dòng)脈導(dǎo)管的兩端插入并連接另一側(cè)的頸總動(dòng)脈，側(cè)口接輸液管，開通頸總動(dòng)脈血流。

連接腦電引導(dǎo)電極：在兔頭頂部切開皮膚暴露顱骨，在矢狀縫旁2～3 mm、人字縫前5～6 mm處，用錐鉆刺一小孔，接入按釘式引導(dǎo)電極，參考電極位于皮膚切口，監(jiān)測(cè)腦電活動(dòng)。

1.1.2.3實(shí)驗(yàn)方法A組利用深動(dòng)脈血流阻斷套管結(jié)扎椎動(dòng)脈，同時(shí)關(guān)閉頸總動(dòng)脈上的閥門，從而阻斷兩側(cè)椎動(dòng)脈和頸總動(dòng)脈的血流造成兔全腦缺血。B組用和A組相同的方法造成兔全腦缺血后，隨之打開兩側(cè)頸總動(dòng)脈輸液管閥門，讓腦保護(hù)液以60滴/min的速度從兩側(cè)頸總動(dòng)脈緩慢注入大腦。C組用和B組相同的方法，并用5%葡萄糖溶液代替腦保護(hù)液灌注大腦。D組用和B組相同的方法，并用兔血漿代替腦保護(hù)液灌注大腦。E組用和B組相同的方法，且腦保護(hù)液灌注的時(shí)間從15 min延長(zhǎng)至30 min。F組用和B組相同的方法，并將腦保護(hù)液灌注的時(shí)間從15 min延長(zhǎng)至60 min。

1.1.3檢測(cè)指標(biāo)利用MS-2000計(jì)算機(jī)生物信號(hào)記錄分析系統(tǒng)全程檢測(cè)兔的呼吸、心率、血壓及腦電；目測(cè)實(shí)驗(yàn)兔的自主運(yùn)動(dòng)、對(duì)刺激的反應(yīng)及腦部水腫等。記錄6組兔的生存率。

1.2腦、肝、心、腎等組織浸液對(duì)血液凝固時(shí)間的影響

1.2.1實(shí)驗(yàn)材料

1.2.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康新西蘭白兔6只，雌雄不限，平均體質(zhì)量2.0 kg，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2.1.2實(shí)驗(yàn)儀器和藥品2 ml試管30支，50 ml燒杯10個(gè)，1 ml吸管20支，試管架，地西泮針劑，0.1 mol/L枸櫞酸鈉溶液，1/40 mol/L氯化鈣溶液，0.9% 氯化鈉溶液，秒表，兔臺(tái)，乳缽等。

1.2.2方法

1.2.2.1抗凝血漿及腦、肝、心、腎等組織浸液制備兔常規(guī)麻醉后行頸部手術(shù)，頸動(dòng)脈放血50 ml進(jìn)入盛有0.1 mol/L枸櫞酸鈉的燒杯內(nèi)(一份抗凝劑加9份全血)，搖勻后以1 000 r/min離心10 min(離心半徑13.5 cm)，取上層為枸櫞酸血漿備用。手術(shù)取出兔的適量腦、肝、心、腎組織，分別置乳缽中研碎后，以1 g組織加10 ml 0.9% 氯化鈉溶液的比例混勻成組織懸液，分別以1 000 r/min離心8 min(離心半徑13.5 cm)取上清液即為腦浸液、肝浸液、心浸液、腎浸液等備用。

1.2.2.2各管加入成分取2 ml試管5支，標(biāo)號(hào)(1管、2管、3管、4管、5管)后置試管架上，各管均加入同一兔的枸櫞酸血漿0.6 ml，隨后在1管、2管、3管、4管、5管內(nèi)分別加入該兔的腦浸液、肝浸液、心浸液、腎浸液及0.9% 氯化鈉溶液各0.2 ml并搖勻，在以上五管溶液中同時(shí)各加入1/40 mol/L氯化鈣溶液0.2 ml后開始計(jì)時(shí)，并迅速搖勻，之后每10 s傾斜試管一次，分別記錄各試管血液凝固時(shí)間。6只兔均重復(fù)上述操作。記錄各管血液凝固時(shí)間的均值。

2結(jié)果

2.1不同灌注液對(duì)腦休眠灌注喚醒的效果

2.1.1A、B、C、D、E、F組實(shí)驗(yàn)結(jié)果A組兔均在全腦缺血10～15 s內(nèi)自主呼吸停止，13～18 s內(nèi)腦電逐漸消失，1～2 min內(nèi)血壓反應(yīng)性增高，隨后血壓迅速下降，呈休克狀態(tài)；給予人工胸外按壓搶救，并于阻斷腦血流7.5 min后開通所有被關(guān)閉的血管繼續(xù)搶救，但均不能恢復(fù)自主呼吸而死亡；10 min內(nèi)對(duì)死亡兔進(jìn)行開顱觀察，發(fā)現(xiàn)兔的腦外觀均表現(xiàn)為體積增大膨出，腦膜緊張，表面顏色暗紅，血管模糊，腦回扁平而寬，腦溝變淺及腦室腔變窄等腦水腫及淤血征象。B組兔的呼吸、血壓一直保持平穩(wěn)，而腦電在阻斷腦血流15～20 s內(nèi)逐漸消失；15 min后，停止腦保護(hù)液灌注，開通兩側(cè)頸總動(dòng)脈和椎動(dòng)脈血流：兔的血壓、呼吸均繼續(xù)保持平穩(wěn)，腦電活動(dòng)逐漸恢復(fù)，待麻醉作用過(guò)后，兔均能爬起行走，反射恢復(fù)而生存；2 h后開顱活體觀察，兔的腦外觀正常，供血良好。C組兔在灌注過(guò)程中均無(wú)法維持呼吸、血壓平穩(wěn)，只能給予人工胸外按壓維持生命體征；15 min后，停止5%葡萄糖溶液灌注，并開通頸總動(dòng)脈和椎動(dòng)脈血流：兔均不能恢復(fù)自主呼吸而死亡；開顱觀察兔的腦外觀與A組相同。D組兔在灌注過(guò)程中均無(wú)法維持呼吸、血壓平穩(wěn)，只能給予人工胸外按壓維持生命體征；15 min后，停止兔血漿灌注，并開通頸總動(dòng)脈和椎動(dòng)脈血流：兔也均不能恢復(fù)自主呼吸而死亡；開顱觀察兔的腦外觀與A組相同。E組兔有5只血壓、呼吸一直能自主維持平穩(wěn)，開通兩側(cè)頸總動(dòng)脈和椎動(dòng)脈血流后，腦電活動(dòng)逐漸恢復(fù)，待麻醉作用過(guò)后，能爬起行走，反射恢復(fù)而生存；另1只因不能恢復(fù)自主呼吸而死亡；2 h后對(duì)存活兔開顱活體觀察，腦外觀正常，供血良好。F組兔3只血壓、呼吸能自主維持平穩(wěn)，開通兩側(cè)頸總動(dòng)脈和椎動(dòng)脈血流后，腦電活動(dòng)也逐漸恢復(fù)，待麻醉藥作用過(guò)后，能爬起行走，反射恢復(fù)而生存；另3只因不能恢復(fù)自主呼吸而死亡；2 h后對(duì)存活兔開顱活體觀察，腦外觀正常，供血良好。

2.1.2A、B、C、D、E、F組兔生存率比較6組兔生存率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。B、E組兔生存率高于A、C、D組兔生存率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.003 3，見(jiàn)表1)。

表1　A、B、C、D、E、F組生存率的比較〔n(%)〕

注：與A組比較，aP<0.003 3；與B組比較，bP<0.003 3；與C組比較，cP<0.003 3；與D組比較，dP<0.003 3

2.2腦、肝、心、腎浸液對(duì)血液凝固時(shí)間的影響五管血液凝固時(shí)間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2、3、4、5管血液凝固時(shí)間長(zhǎng)于1管，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3、4、5管血液凝固時(shí)間長(zhǎng)于2管，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。4管血液凝固時(shí)間短于3管，5管血液凝固時(shí)間長(zhǎng)于3管，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。5管血液凝固時(shí)間長(zhǎng)于4管，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,見(jiàn)表2)。

表2　各管血液凝固時(shí)間比較±s，s)

注：與1管比較，aP<0.05；與2管比較，bP<0.05；與3管比較，cP<0.05；與4管比較，dP<0.05

3討論

本研究采用自配的腦保護(hù)液，其主要成分是右旋糖酐，其分子量與血漿清蛋白相近，能提高血漿膠體滲透壓，吸收血管外水分；使已經(jīng)聚集的紅細(xì)胞和血小板解聚，降低血液黏滯性；抑制凝血因子Ⅱ的激活，使凝血因子Ⅰ和Ⅷ活性降低及其抗血小板作用均可防止血栓形成[9-10]。該液的晶體滲透壓與血漿相等，不影響細(xì)胞膜內(nèi)外的水分交換，可防止細(xì)胞內(nèi)水腫，而膠體滲透壓高達(dá)正常血漿的2倍以上，具有較強(qiáng)阻止組織液生成作用，能有效阻止腦組織缺血缺氧后產(chǎn)生的快速吸水效應(yīng)，并具有抗凝作用。所以該腦保護(hù)液灌注大腦能明顯延長(zhǎng)腦休眠期，最長(zhǎng)達(dá)60 min以上。而C組和D組分別用5% 葡萄糖溶液(無(wú)膠體壓)和血漿(膠體壓正常)灌注大腦，因不能有效對(duì)抗腦組織缺血缺氧后形成的快速吸水效應(yīng)，也無(wú)抗凝作用，所以這兩組兔均出現(xiàn)腦水腫、腦淤血而死亡。

本研究對(duì)全腦缺血再灌注后死亡的兔進(jìn)行開顱觀察，發(fā)現(xiàn)這些兔均很快就出現(xiàn)明顯腦水腫外觀，而全腦缺血不做腦部灌注死亡的兔卻沒(méi)有明顯腦水腫表現(xiàn)。說(shuō)明大腦停止供血后，腦組織出現(xiàn)了特有的快速主動(dòng)吸水效應(yīng)，當(dāng)腦部再灌注時(shí)這一吸水效應(yīng)引起組織液快速生成，迅速發(fā)生腦水腫。其結(jié)果，一方面使腦部血液濃縮，黏度增高，血流阻力增大，另一方面使腦組織靜水壓增大，腦壓增高，造成腦血管受壓，口徑變小等，加速腦血流淤滯，導(dǎo)致再灌注受阻。同時(shí)，本研究在腦、肝、心、腎等組織浸液對(duì)血液凝固時(shí)間的影響中發(fā)現(xiàn)，同樣條件下血液在腦部發(fā)生凝固的時(shí)間明顯比在肝、心、腎等組織中短，加上腦組織缺血再灌注時(shí)的主動(dòng)吸水效應(yīng)造成的血液黏度增高、血流淤滯等進(jìn)一步加快血凝等，這些均可進(jìn)一步加重腦血流淤堵，形成惡性循環(huán)?？梢?jiàn)，腦部水腫及血液凝固的發(fā)生是全腦缺血再灌注后加快腦死亡的主要原因。然而，腦停止供血后，為什么會(huì)形成腦部特有的快速吸水效應(yīng)？腦部的血液凝固時(shí)間為什么比其他部位短？還有待進(jìn)一步研究。

1985年人們開始做腦缺血再灌注損傷的基礎(chǔ)研究并發(fā)現(xiàn)自由基[11]，普遍認(rèn)為腦再灌注損傷與自由基、鈣超載、興奮性氨基酸、一氧化氮、炎性反應(yīng)及細(xì)胞凋亡等有關(guān)[12-17]。用兔進(jìn)行全腦缺血再灌注的研究報(bào)道不多，這些研究報(bào)道也多針對(duì)以上機(jī)制進(jìn)行[18-22]。本研究是在兔全腦缺血狀態(tài)下用腦保護(hù)液持續(xù)灌注大腦，其方法和手段均是獨(dú)特的，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不支持上述觀點(diǎn)，認(rèn)為引起腦缺血再灌注損傷的主要原因應(yīng)該是快速形成的腦水腫、血液凝固等造成的腦血流淤堵。臨床上應(yīng)用甘露醇[23-24]、疏通血管藥物[25]及抗血小板[26]、抗凝[27]等藥物治療腦缺血性疾病有效也說(shuō)明了這一問(wèn)題。能否利用導(dǎo)管介入等手段，將具有高膠體滲透壓及抗血凝作用的藥物直接注入缺血的大腦或缺血灶，以便更有效地用于腦復(fù)蘇及腦梗死等缺血性疾病的治療還有待進(jìn)一步的臨床研究。另外，本研究發(fā)現(xiàn)，大腦停止供血后很快出現(xiàn)功能停止、腦電消失，同時(shí)腦干功能也受到嚴(yán)重影響(呼吸停止，血壓波動(dòng)大等)，但當(dāng)灌注腦保護(hù)液后腦干功能卻可單獨(dú)恢復(fù)正常，其原因也有待進(jìn)一步研究。

腦缺血性疾病是嚴(yán)重影響人類生存質(zhì)量與壽命的疾病，是臨床研究的熱點(diǎn)，缺血可導(dǎo)致腦結(jié)構(gòu)及功能的損害，腦組織損害程度與缺血時(shí)間長(zhǎng)短及殘存血流量多少相關(guān)。短期、不完全性缺血引起可逆性損害，長(zhǎng)時(shí)間、完全性缺血會(huì)引起不可逆損傷。臨床上盡早恢復(fù)腦組織血液再灌注，將有效減輕腦缺血損傷。長(zhǎng)期以來(lái)，人們對(duì)腦缺血誘導(dǎo)的再灌注損傷機(jī)制的認(rèn)識(shí)眾說(shuō)紛紜[28-32]，認(rèn)為過(guò)氧化物、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、一氧化氮失調(diào)控、興奮性氨基酸毒性、蛋白代謝異常、炎性反應(yīng)及細(xì)胞凋亡等與腦缺血再灌注損傷有關(guān)，彼此構(gòu)成一個(gè)相互促進(jìn)的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)。尤其是完全性腦缺血后導(dǎo)致腦功能停止(腦休眠)，不易用常規(guī)方法逆轉(zhuǎn)，造成全腦缺血后很快死亡的假象，認(rèn)為大腦對(duì)缺氧缺血敏感，停止供血3～5 min就可出現(xiàn)不可逆死亡。然而，本研究證明大腦停止供血后功能喪失、腦電活動(dòng)停止，只是腦細(xì)胞缺血缺氧后表現(xiàn)出的休眠狀態(tài)，并非腦死亡，當(dāng)恢復(fù)供血后，腦細(xì)胞會(huì)被喚醒并重新執(zhí)行其功能。腦被喚醒的關(guān)鍵是恢復(fù)腦供血，其關(guān)鍵是有效防止腦水腫及血液凝固的發(fā)生。并證明腦耐受完全缺血的時(shí)間(腦休眠期)達(dá)60 min以上。另外，在腦片神經(jīng)元電活動(dòng)的記錄實(shí)驗(yàn)中也看到，腦片離體數(shù)小時(shí)后神經(jīng)元仍然有活性，說(shuō)明大腦對(duì)缺血缺氧的耐受性很強(qiáng)[33-35]。

綜上所述，腦休眠是大腦停止供血后出現(xiàn)的功能暫時(shí)缺失狀態(tài)，有效的方法可以逆轉(zhuǎn)這一狀態(tài)。自主研發(fā)的腦保護(hù)液可有效防止兔大腦停止供血后迅速發(fā)生的腦水腫及血液凝固，使腦休眠期延長(zhǎng)達(dá)60 min，但有必要進(jìn)一步過(guò)度到人體臨床研究得以完善并利用。大腦停止供血后的快速吸水效應(yīng)及快速血液凝固的深層次原因也有待深入研究，大腦停止供血3～5 min并非發(fā)生腦死亡而是處于腦休眠期，腦死亡的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)重新審視。

作者貢獻(xiàn)：葉利斌對(duì)課題總負(fù)責(zé)與課題實(shí)施；花愛(ài)遠(yuǎn)參與實(shí)驗(yàn)實(shí)施與動(dòng)物模型研究；代波、盧婷婷、葉美麟?yún)⑴c實(shí)驗(yàn)實(shí)施。

本文無(wú)利益沖突。

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(本文編輯：李婷婷)

【關(guān)鍵詞】腦死亡；腦休眠；再灌注；喚醒；腦保護(hù)液

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Study of Awakening Rabbit Cerebral Dormancy by PerfusionYELi-bin,HUAAi-yuan,DAIBo,etal.RuikangHospitalAffiliatedtoGuangxiUniversityofChineseMedicine,Nanning530011，China

【Abstract】ObjectiveTo explore the mechanism of awakening rabbit cerebral dormancy by perfusion and its relationship with brain death.MethodsThe study selected 36 healthy New Zealand white rabbits from september 2010 to 2014.Using random number table method,we divided them into 6 groups(group A-F) with 6 rabbits in each group.Controllable whole brain ischemia experiment models were built,and comparison was made among the awakening effects of conventional resuscitation,self-formulated rabbit cerebral protective fluid,5% glucose solution and rabbit plasma.By MS-2000 computer biological signal system,we recorded and analyzed breath,heart rate,blood pressure and electroencephalogram of the rabbits during the whole intervention.Autokinetic movement,response to stimulation and brain edema were observed.The survival rates of the 6 groups were recorded.We selected 6 healthy New Zealand white rabbits and obtained their anticoagulant plasma and tissue extracts of brain,liver,heart and kidney.Using tube method,we compared the influences of brain,liver,heart and kidney extracts on blood coagulation time.ResultsThe rabbits of group A,group C and group D all died because of the irreparability of autonomous respiration;the rabbits of group B all recovered reflection and survived;1 rabbit in group E died because of the irreparability of autonomous respiration,and the rest 5 rabbits recovered reflection and survived;3 rabbits in group F died due to the irreparability of autonomous respiration,and the rest 3 rabbits recovered reflection and survived.The 6 groups were significantly different in survival rate(P<0.05).Group B,group E were higher than group A，group C,group D in survival rate(P<0.05).The five tubes of blood were significantly different in coagulation time (P<0.05).Tube 2,tube 3,tube 4 and tube 5 had longer blood coagulation time than tube 1(P<0.05);tube 3,tube 4 and tube 5 had longer blood coagulation time than tube 2 (P<0.05),tube 4 had shorter blood coagulation time than tube 3 (P<0.05),and tube 5 had longer blood coagulation time than tube 3(P<0.05);tube 5 had longer blood coagulation time than tube 4(P<0.05).ConclusionThe self-developed cerebral protective fluid can effectively prevent cerebral edema and blood coagulation that occur rapidly after the halt of cerebral blood supply,with the cerebral dormancy prolonging 60 minutes.The study may provide references for further clinical research.

【Key words】Brain death；Cerebral dormancy；Reperfusion；Waking up；Cerebral protective solution

(收稿日期：2015-06-20；修回日期：2015-10-11)

【中圖分類號(hào)】R 331.373

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.03.014

通信作者：葉利斌，530011廣西南寧市，廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院；E-mail:gxyelibin@sina.com

基金項(xiàng)目：廣西中醫(yī)藥大學(xué)課題 (P2010092)
作者單位：530011廣西南寧市，廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院(葉利斌，花愛(ài)遠(yuǎn)，盧婷婷，葉美麟)；廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院(代波)