紫外分光光度法測定甲基丁香酚含量方法的建立＊

白 波，江秀慧，付明哲，宋曉平

（西北農(nóng)林科技大學動物醫(yī)學院 中獸醫(yī)藥研究所，陜西楊陵 712100）

甲基丁香酚（methyleugenol）屬苯丙素類化合物，主要存在于肉豆蔻、香茅和細辛等植物中，可作為桔小實蠅等農(nóng)業(yè)害蟲的引誘劑［1］，是潛在的植物源殺蟲劑［2］。現(xiàn)代藥理研究證明，甲基丁香酚具有顯著的鎮(zhèn)咳、祛痰、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛和抗菌作用［3－6］。本試驗擬采用紫外分光光度法測定甲基丁香酚在原料藥的含量，旨在為其質(zhì)量控制提供參考資料。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑 甲基丁香酚為齊爾普醫(yī)藥化工有限公司產(chǎn)品，甲基丁香酚對照品為中國藥品生物制品檢定所提供，無水乙醇為西安三浦精細化工廠產(chǎn)品。

1.1.2 主要儀器 UV－3802H 紫外－可見分光光度計為尤尼柯儀器有限公司產(chǎn)品；BSA224S－CW型電子天平為賽多利斯科學儀器有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 對照品溶液的配制 用分析天平稱取甲基丁香酚對照品5mg于小燒杯中，用無水乙醇稀釋后加入到100mL容量瓶中，再加無水乙醇至刻度，搖勻，即得濃度為50mg／L的對照品溶液。再用移液管分別移取上述對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置不同的10mL容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，即得濃度分別為1、2、3、4、5μg／mL的對照品溶液。

1.2.2 甲基丁香酚原料藥溶液的配制 用分析天平稱取甲基丁香酚原料藥5mg于小燒杯中，用無水乙醇稀釋后加入到100mL容量瓶中，再加無水乙醇至刻度，搖勻，即得濃度為50mg／L的原料藥溶液。再用移液管移取上述溶液0.6mL置10mL容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，可得濃度為3 μg／mL的溶液。

1.2.3 測定波長的選擇 采用紫外分光光度法進行掃描。取對照品溶液和原料藥溶液，以無水乙醇為空白對照，在190nm～400nm波長范圍內(nèi)掃描，記錄對照品溶液和原料藥溶液的最大吸收波長，將其作為測定波長。

1.2.4 標準曲線的繪制 在最大吸收波長處測定濃度分別為1、2、3、4、5μg／mL的對照品溶液的吸光度，以無水乙醇溶液為空白對照，重復測定3次，取平均值。以吸光度（A）為縱坐標，濃度（C）為橫坐標繪制標準曲線，得其回歸方程。

1.2.5 加樣回收率測定 取已知含量的原料藥溶液0.1mL于10mL容量瓶中，分別向容量瓶中加入對照品溶液0.1、0.5、1mL，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，在測定波長處測定其吸光度，將測定的吸光度代入標準曲線方程中計算出測得值（C），根據(jù)回收率公式計算出回收率。

回收率＝（C－A）／B×100%

式中A為已知被測樣品含量；B為加入對照品的量；C為實測值。

1.2.6 精密度試驗 取濃度1、3、5μg／mL的甲基丁香酚對照品溶液，分別于1d內(nèi)5次和1周內(nèi)5次在測定波長處測定其吸光度，并根據(jù)標準曲線法計算其濃度，計算其日內(nèi)及日間精密度（RSD）。

1.2.7 甲基丁香酚原料藥含量的測定 在最大吸收波長處測濃度為3μg／mL原料藥溶液的吸光度，重復測定3次，取平均值。用標準曲線法計算甲基丁香酚原料藥的含量［7］。

2 結(jié)果

2.1 最大吸收波長的確定

由圖1可見，甲基丁香酚對照品溶液在230nm處有最大吸收峰，故確定230nm為甲基丁香酚的測定波長。

2.2 標準曲線的繪制

以吸光度（A）對相應濃度（C）進行線性回歸，得回歸方程為 A＝0.025 1x－0.001 4，r＝0.996 6。由此可見，在0μg／mL～5μg／mL濃度范圍內(nèi)，甲基丁香酚濃度與吸光度的線性關系良好（圖2）。

2.3 加樣回收率測定結(jié)果

由表1可以看出，該方法的平均回收率為99.45%，RSD為1.03%，說明該方法穩(wěn)定可靠，回收率高，可用于甲基丁香酚的含量測定。

2.4 精密度測定結(jié)果

由表2可知，日內(nèi)、日間精密度的RSD均小于1.00%，這說明該檢測方法可靠、穩(wěn)定性好。

圖1 甲基丁香酚對照品紫外掃描圖譜Fig.1 UV spectrum of methyleugenol

圖2 甲基丁香酚標準曲線Fig.2 The standard curve of methyleugenol

表1 回收率試驗結(jié)果Table 1 The results of recovery experiment

表2 精密度測定結(jié)果Table 2 Results of precision determination

2.5 甲基丁香酚含量的測定

原料藥溶液在230nm波長處測得3次吸光度分別為0.072 8、0.072 5、0.072 6，平均值0.072 6，代入標準曲線方程中計算其濃度相當于甲基丁香酚對照品溶液2.948 2μg／mL，即甲基丁香酚原料藥的含量為98.27%。

3 討論

利用紫外分光光度法測定原料藥的含量，方法簡單易行，成本低廉［8－10］，但需注意溶劑本身的吸收范圍［11］。本試驗以乙醇為溶劑溶解甲基丁香酚對照品和原料藥，采用紫外分光光度法進行波長掃描，乙醇在210nm處有吸收，而甲基丁香酚對照品和原料藥溶液在230nm處有特征吸收，因此選擇230 nm為甲基丁香酚原料藥含量測定的檢測波長。本研究建立的紫外分光光度法測定甲基丁香酚含量的標準曲線為A＝0.025 1x－0.001 4（r＝0.996 6），平均回收率為99.45%，日內(nèi)、日間精密度的RSD均小于1%。該方法簡便、快速、重現(xiàn)性好且準確度較高，可用于甲基丁香酚原料藥的含量測定和質(zhì)量控制。

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