黑素與真菌抗藥性的研究進(jìn)展

陳映丹　陸春　馮佩英

(廣州市中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院皮膚科，廣州 510630)

?

·綜述·

黑素與真菌抗藥性的研究進(jìn)展

陳映丹陸春馮佩英

(廣州市中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院皮膚科，廣州 510630)

黑素是生物界普遍存在的一類暗褐色或黑色物質(zhì)，在真菌主要存在于細(xì)胞壁，與真菌的形態(tài)和毒力密切相關(guān)，具有增強(qiáng)真菌在逆環(huán)境中的存活力、抵抗宿主免疫攻擊和耐受抗真菌藥物等作用。隨著臨床真菌感染發(fā)病率逐漸上升，對抗真菌藥物耐藥現(xiàn)象增多，探討真菌黑素與其抗藥性關(guān)系將為闡明真菌感染的發(fā)病機(jī)制奠定基礎(chǔ)，為開發(fā)新型的抗真菌藥物提供依據(jù)。本文重點從真菌黑素的生物學(xué)特性及其與人類致病真菌抗藥性方面研究進(jìn)展進(jìn)行闡述。

真菌黑素；抗藥性；致病性真菌

黑素是廣泛存在于自然界動植物和微生物中的一類暗褐色或黑色物質(zhì)，由多酚類或吲哚類異源多聚物聚合而成，具有難溶于水、耐酸堿、帶負(fù)電荷等特性。研究顯示，黑素是多種人類致病真菌的毒力因子，具有增強(qiáng)真菌在逆環(huán)境中的存活力、抗氧化、抗溶菌酶、吸收紫外線、抵抗宿主免疫攻擊和耐受抗真菌藥物等作用。本文將從真菌黑素的生物學(xué)特性及其與人類致病性真菌抗藥性方面研究進(jìn)展作一綜述。

1　真菌黑素的分類和生物學(xué)特征

根據(jù)合成途徑和中間代謝產(chǎn)物的不同，真菌來源的黑素可分為真黑素(Eumelanin)、棕黑素(Phaeomelanin)、膿黑素(Pyomelanin)和1，8-二羥基萘(DHN)黑素(DHN melanin)4大類[1]。聚酮體合成酶(Polyketide synthase，PKS)是經(jīng)典DHN黑素合成途徑中的關(guān)鍵酶，該酶催化丙二酸單酰輔酶A合成DHN，再經(jīng)氧化聚合成多聚二羥黑素，即DHN黑素。多數(shù)子囊菌和半知菌通過DHN途徑合成黑素，如煙曲霉、黑曲霉、皮炎外瓶霉、甄氏外瓶霉、卡氏枝孢瓶霉、裴氏著色霉等。膿黑素又稱尿黑酸黑素(HGA melanin)，主要經(jīng)對羥苯丙酮酸羥化酶催化底物酪氨酸經(jīng)過尿黑素途徑所合成，可見于申克孢子絲菌和巴西孢子絲菌。DHN黑素和尿黑酸黑素在化學(xué)組成上均不含氮或硫，被統(tǒng)稱為異黑素(Allomelanin)。而真黑素和棕黑素均經(jīng)經(jīng)典DOPA途徑合成，含有氮或硫，被統(tǒng)稱為DOPA黑素，該合成途徑主要通過多酚氧化酶(漆酶)的作用催化3,4-左旋多巴(L-DOPA)氧化聚合形成黑素。新生隱球菌、白念珠菌、莢膜組織胞漿菌等主要通過DOPA途徑合成黑素[2-3]。此外，真菌黑素的合成與其生理形態(tài)有關(guān)，例如申克孢子絲菌分生孢子能在體外合成DHN黑素，菌絲不合成黑素；酵母細(xì)胞在體內(nèi)、外均能合成DHN黑素和DOPA黑素[4]。

真菌黑素依據(jù)分布的不同可分為細(xì)胞壁結(jié)合黑素和細(xì)胞外黑素兩種[5]。電子顯微鏡顯示新生隱球菌的黑素在細(xì)胞壁內(nèi)層密集，但皮炎外瓶霉的黑素卻在細(xì)胞壁外層密集[6]。細(xì)胞外黑素可由真菌釋放的漆酶氧化外源物質(zhì)或分泌的酚類化合物經(jīng)自氧化而形成[2-3]。此外，某些真菌還可產(chǎn)生類黑素樣復(fù)合物(melanin-like component)顆粒，其產(chǎn)生能力與真菌致病性有關(guān)。例如，裴氏著色霉胞外可產(chǎn)生可溶性黑素顆粒和黑素影子顆粒(melanin ghost)，這些顆粒能預(yù)防宿主免疫細(xì)胞的攻擊[7]。

真菌黑素具有廣泛的生物功能，可保護(hù)真菌抵御不同的環(huán)境因子，提高其在惡劣的環(huán)境條件下的生存能力。例如，黑素能與蛋白質(zhì)的交聯(lián)產(chǎn)生強(qiáng)化結(jié)構(gòu)的作用，降低菌株對降解酶的易感性，從而加強(qiáng)真菌屏障防御功能。其次，黑素可保護(hù)真菌細(xì)胞免遭紫外線、離子輻射、極端溫度和酸堿度等環(huán)境因素破壞[1-3,8]。黑素結(jié)構(gòu)中的羧基和酚羥基團(tuán)能與陽離子發(fā)生絡(luò)合作用，從而避免環(huán)境中重金屬對生物體的損害。研究發(fā)現(xiàn)黑化的新生隱球菌對硝酸銀的耐受性優(yōu)于未黑化的菌株[9]。黑素還具有高效的氧化還原能力，是一種高效的自由基清除劑，抵抗宿主吞噬細(xì)胞吞噬和殺傷作用，保護(hù)真菌細(xì)胞防御宿主免疫效應(yīng)細(xì)胞的殺傷[10]。因此，黑素被認(rèn)為是多種人類致病真菌重要的毒力因子。新生隱球菌、裴氏著色霉、申克孢子絲菌、馬爾尼菲籃狀菌、巴西副球孢子菌等真菌黑素在體內(nèi)、外均具有耐受吞噬細(xì)胞吞噬的作用。Madrid等[11]研究發(fā)現(xiàn)申克孢子絲菌黑化株比白化株對小鼠組織有更強(qiáng)的侵襲力，可導(dǎo)致多灶性肉芽腫形成。

2　致病真菌黑素的抗藥性研究現(xiàn)狀

隨著真菌耐藥性的報道日益增多，黑素被稱為“抗真菌藥物耐藥因子”，真菌黑素在體內(nèi)、外對抗真菌藥物的影響已成為目前研究的熱點。不同真菌黑素具有不同降低殺/抑真菌藥物的抗真菌作用，其可能機(jī)制包括：(1)DOPA黑素和DHN黑素具有疏水性，使其極易與水溶性的抗真菌藥物結(jié)構(gòu)中的疏水基團(tuán)二硫鍵(-s-s-)結(jié)合，而破壞其空間結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致藥效降低或失活[12]。(2)黑素能與抗真菌藥物非特異相結(jié)合，從而影響其殺菌活性[13]。(3)細(xì)胞壁結(jié)合黑素可影響微生物細(xì)胞壁的孔隙，阻止或延緩抗真菌藥物進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)從而降低其藥效[14-15]。(4)耐藥性的分子微生態(tài)學(xué)研究顯示，真菌黑素可通過結(jié)合真菌胞膜壁的藥物外滲泵體(drug efflux pump facilitator)和藥物外滲通道決定基團(tuán)(drug efflux determinats)從而提高對真菌藥物的抵抗性[16]。

2.1暗色真菌

暗色真菌是一組菌絲和(或)孢子細(xì)胞壁具有天然棕色或黑色的真菌，多數(shù)為土壤腐生菌或植物病原菌，其中至少有60種以上可引起人或動物感染，臨床上主要引起暗色絲孢霉病、著色芽生菌病或足菌腫等真菌感染。大多數(shù)暗色真菌對抗真菌藥物不敏感，療效往往欠理想。皮炎外瓶霉是引起暗色絲孢霉病的重要病原菌，易引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變。敲除DHN黑素合成途徑重要的PKS基因可引起皮炎外瓶霉表型改變，對冷熱和溶壁酶的抵抗力下降，對伏立康唑和兩性霉素B更敏感[17]。侵染鏈格孢(Alternaria infectoria)是引起免疫受損人群暗色絲孢霉病的重要病原菌之一，主要合成DHN黑素。尼可霉素、卡泊芬凈和伊曲康唑可刺激侵染鏈格孢細(xì)胞壁黑素合成，但氟康唑和兩性霉素B無此作用。研究顯示黑素合成抑制劑咯喹酮(Pyroquilon)抑制DHN黑素合成，影響真菌形態(tài)，進(jìn)而影響對卡泊芬凈的敏感性[18]。裴氏著色霉分生孢子、菌絲和硬殼小體在體內(nèi)、外均可合成黑素，為胞外分泌和細(xì)胞壁結(jié)合的DHN黑素[19]。DHN黑素合成抑制劑三環(huán)唑(Tricyclazole)可影響裴氏著色霉分生孢子和硬殼小體的形態(tài)結(jié)構(gòu)[20]。其形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變是否進(jìn)一步會影響對抗真菌藥物的敏感性，目前尚無相關(guān)報道。Sun等[21]用M38-A2方案檢測Fonsecaea monophora分生組織突變株CBS 122845和其天然白化突變株CBS 125149對抗真菌藥物的敏感性無明顯差異。van de Sande等[22]研究顯示足菌腫馬杜拉菌主要合成DHN黑素，研究者將黑素預(yù)先加入RPMI培養(yǎng)基中，然后通過先德藥敏分析系統(tǒng)(Sensititre System)測定足菌腫馬杜拉菌對兩性霉素B、5-氟胞嘧啶、酮康唑、伊曲康唑、伏立康唑和氟康唑等抗真菌藥物敏感性，結(jié)果顯示與不含黑素的對照組相比，實驗組伊曲康唑MIC值提高了16倍，而酮康唑組提高了32倍。伊曲康唑和酮康唑的結(jié)構(gòu)相似，有別于氟康唑和伏立康唑，作者推測黑素與伊曲康唑和酮康唑的相互作用由該唑類藥物的二氯苯環(huán)(dichlorobenzene ring)和長芳香烴支鏈(long polyaromatic side chain)或兩者相結(jié)合介導(dǎo)。

2.2雙相真菌

雙相真菌是人類重要的致病性真菌，在組織中或37℃培養(yǎng)時呈酵母相，而在自然界或室溫培養(yǎng)時則呈菌絲相。研究顯示，馬爾尼菲籃狀菌、申克孢子絲菌、皮炎芽生菌、莢膜組織胞漿菌、巴西副球孢子菌和粗球孢子菌等雙相真菌均能合成黑素。馬爾尼菲籃狀菌酵母細(xì)胞在體內(nèi)、外均能合成黑素，而菌絲和分生孢子能在體外合成黑素，該黑素經(jīng)加工后形成小顆粒分布于細(xì)胞壁內(nèi)側(cè)[23]。馬爾尼菲籃狀菌全基因組分析顯示其含有分別編碼DHN黑素和DOPA黑素的PKS基因和多銅氧化酶(Multicopper oxidase)基因[24-25]。在培養(yǎng)基中加入L-DOPA可誘導(dǎo)產(chǎn)生黑素是研究黑素的基礎(chǔ)。Kaewmalakul等[26]研究顯示黑素合成增多可降低馬爾尼菲籃狀菌酵母細(xì)胞對抗真菌藥物敏感性，依據(jù)M27-A方案在含/不含L-DOPA的測試培養(yǎng)基(含0.17%YNB、2%葡萄糖和1.5%瓊脂)檢測黑化和非黑化的酵母細(xì)胞對抗真菌藥物敏感性，結(jié)果顯示黑素可顯著降低酵母細(xì)胞對兩性霉素B、伊曲康唑、氟康唑、酮康唑和克霉唑的敏感性。但是，在常規(guī)的肉湯稀釋法RMPI培養(yǎng)基中檢測黑化和非黑化馬爾尼菲籃狀菌酵母細(xì)胞對上述抗真菌藥物敏感性無顯著差異。此外，國內(nèi)學(xué)者發(fā)現(xiàn)菌絲相馬爾尼菲籃狀菌在抵抗氟康唑時可分泌大量紅色素，提示該色素可能是耐藥因子之一[27]。申克孢子絲菌復(fù)合體包括申克孢子絲菌、球形孢子絲菌、巴西孢子絲菌、墨西哥孢子絲菌和盧艾里孢子絲菌，是孢子絲菌病主要病原菌。申克孢子絲菌酵母細(xì)胞在體內(nèi)外均能合成DHN黑素和DOPA黑素，而分生孢子能在體外合成DHN黑素，菌絲則不合成黑素[4,28]。菌絲相和酵母相的申克孢子絲菌、球形孢子絲菌和巴西孢子絲菌在含酪氨酸培養(yǎng)基中可合成膿黑素[29]。Mari等[30]同樣先用肉湯稀釋法檢測黑化和非黑化申克孢子絲菌和巴西孢子絲菌酵母細(xì)胞對兩性霉素B和伊曲康唑的敏感性，兩組結(jié)果無明顯差異，但用時間殺菌試驗(Time killing assay)發(fā)現(xiàn)黑化菌株對兩性霉素B的敏感性下降，但對伊曲康唑的敏感性無明顯差異。類似結(jié)果同樣報道于巴西副球孢子菌、莢膜組織胞漿菌和皮炎芽生菌，研究者用肉湯稀釋法檢測黑化和非黑化菌株對兩性霉素B、卡泊芬凈、氟康唑和伊曲康唑等抗真菌藥物敏感性未見明顯差異，但用時間殺菌試驗則可發(fā)現(xiàn)黑化與非黑化菌株在體外藥敏對不同抗真菌藥物存在差異[31-34]。由于RPMI培養(yǎng)基不能使實驗菌株黑化，而加入L-DOPA能產(chǎn)生自聚合作用而形成沉淀從而影響藥敏結(jié)果判斷，所以肉湯稀釋法不適合比較黑化和非黑化菌株對抗真菌藥物敏感性，然而時間殺菌試驗是將抗真菌藥物加入黑化和非黑化菌懸液中共同培養(yǎng)數(shù)小時，然后通過平板計數(shù)菌落形成單位(colony forming unites，CFU)比較對抗真菌藥物的敏感性，更能反映黑素在體內(nèi)對抗真菌藥物的影響[35]。

2.3酵母和酵母樣菌

隱球菌和念珠菌是臨床常見的兩類主要機(jī)會性致病真菌，易引起免疫受損人群局部皮膚和系統(tǒng)器官感染。盡管這類酵母菌落顏色為白色或乳白色，研究顯示其在體內(nèi)、外均可合成黑素，且與其他病原真菌產(chǎn)生的黑素具有相同的抗原性。新生隱球菌主要通過多酚氧化酶(漆酶)催化外源性底物L(fēng)-DOPA氧化聚合形成黑素，此外尿黑酸也可誘導(dǎo)4種血清型新生隱球菌產(chǎn)生黑化[36]。透射電子顯微鏡顯示新生隱球菌黑素外殼由2～5層黑素顆粒以同心圓方式排列于細(xì)胞壁表面，顆粒之間和各層之間存在多孔性，此結(jié)構(gòu)使黑素具有一種濾網(wǎng)式功能[14]。van Duin等[33]通過時間殺菌試驗發(fā)現(xiàn)黑化新生隱球菌對兩性霉素B和卡泊芬凈敏感性下降，但對氟康唑、伊曲康唑和5-氟胞嘧啶無影響。兩性霉素B和卡泊芬凈與黑素共培養(yǎng)后，黑素C∶N∶O比例發(fā)生改變，而與唑類或5-氟胞嘧啶共培養(yǎng)后黑素各元素沒有發(fā)生明顯變化，提示黑素可與兩性霉素B和卡泊芬凈能結(jié)合而導(dǎo)致真菌敏感性下降[37]。兩性霉素B能與真菌細(xì)胞膜麥角固醇特異結(jié)合，而卡泊芬凈則與細(xì)胞膜蛋白酶β-(1,3)合成酶特異結(jié)合，推測沉積于細(xì)胞壁的黑素能通過與兩性霉素B和卡泊芬凈結(jié)合，減少或延緩抗真菌藥物通過細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，從而降低其藥效[35,38]。但是，黑化的巴西副球孢子菌對氟康唑和伊曲康唑的敏感性下降，提示黑素除與抗真菌藥物結(jié)合而影響藥敏結(jié)果外，還存在其他影響病原真菌對抗真菌藥敏感性的機(jī)制[31]。白念珠菌在體內(nèi)外均可合成DOPA黑素，在細(xì)胞內(nèi)形成的黑素小體可穿過細(xì)胞壁在細(xì)胞外釋放黑素，幾丁質(zhì)參與此釋放過程但不參與黑素合成。Fuentes等[39]研究顯示黑素可降低白念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌和近平滑念珠菌對氟康唑的敏感性。

2.4其他真菌

曲霉是臨床常見的條件致病菌，其不同菌種的黑素合成途徑不一樣。Pal等[2]研究顯示黑曲霉、黃曲霉和溜曲霉的黑素經(jīng)DOPA黑素途徑合成，而土曲霉和塔賓曲霉經(jīng)DHN黑素途徑合成。黑素主要分布于分生孢子細(xì)胞壁，產(chǎn)黑素的分生孢子具有較強(qiáng)的侵襲力和致病力，能誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生少量炎癥細(xì)胞因子以逃避宿主產(chǎn)生的抗真菌物質(zhì)殺傷[40-41]。新近研究顯示黑素與煙曲霉的生物膜有關(guān)，在侵襲肺部感染過程被釋放，從而影響抗真菌藥物的作用[42]。

淺部真菌病的主要病原菌，如糠秕馬拉色菌、紅色毛癬菌、須癬毛癬菌、犬小孢子菌和絮狀表皮癬菌等在體內(nèi)外均可產(chǎn)生黑素或黑素樣小體，并具有一定的抗原免疫性，其否影響抗真菌藥物作用有待進(jìn)一步研究[43-44]。

3　展　　望

綜述所述，黑素是致病真菌的代謝產(chǎn)物，與真菌的形態(tài)、毒力、抗藥性等密切相關(guān)。抑制/阻斷真菌黑素合成，可提高其對抗真菌藥物的敏感性，有望成為新的治療手段。隨著基因組測序技術(shù)的發(fā)展，越來越多的真菌黑素合成相關(guān)基因被發(fā)現(xiàn)，研究不同致病真菌黑素合成途徑，探討黑素在基因水平的調(diào)控機(jī)制，將為闡明真菌的發(fā)病機(jī)制奠定基礎(chǔ)，為開發(fā)新型的抗真菌藥物提供依據(jù)。

[1]Langfelder K,Streibel M,Jahn B,et al.Biosynthesis of fungal melanins and their importance for human pathogenic fungi[J].Fungal Genet Biol,2003,38(2):143-158.

[2]Pal AK,Gajjar DU,Vasavada ATR.DOPA and DHN pathway orchestrate melanin synthesis in Aspergillus specoes[J].Med Mycol,2014,52(1):10-18.

[3]Revankar SG,Sutton DA.Melanized fungi in human disease[J].Clin Microbiol Rev,2010,23(4):884-928.

[4]Romero-Martinez R,Wheeler M,Guerrero-Plata A,et al.Biosynthesis and functions of melanin in Sporothrix schenckii[J].Infect Immun,2000,68(6):3696-3703.

[5]Wang Y,Aisen P,Casadevall A.Cryptococcus neoformans melanin and virulence:mechanism of action[J].Infect Immun,1995,63(8):3131-3136.

[6]Carzaniga R,Fiocco D,Bowyer P,et al.Localization of melanin in conidia of Alternaria alternate using phage display antibodies[J].Mol Plant Microbe Interact,2002,15(3):216-224.

[7]Alviano DS,Franzen AJ,Travassos LR,et al.Melanin from Fonsecaea pedrosoi induces production of human antifungal antibodies and enhances the antimicrobial efficacy of phagocytes[J].Infect Immun,2004,72(1):229-237.

[8]Rosas AL,Casadevall A.Melaninzation decreases the susceptibility of Cryptococcus neoformans to enzymatic degradation[J].Mycopathologia,2001,151(2):53-56.

[9]García-Rivera J,Casadevall A.Melanization of Cryptococcus neoformans reduces its susceptibility to the antimicrobial effects of silver nitrate[J].Med Mycol,2001,39(4):353-357.

[10]de Cássia R Goncalves R,Pombeiro-Sponchiado SR.Antioxidant activity of the melanin pigment extracted from Aspergillus nidulans[J].Biol Pharm Bull,2005,28(6):1129-1131.

[11]Madrid IM,Mattei AS,Soares MP,et al.Ultrastructural study of the mycelial phase of clinical isolates of Sporothrix schenckii obtained from feline,canine and human cases of sporotrichosis[J].Braz J Microbiol,2011,42(3):1147-1150.

[12]Nosanchuk JD,Stark RE,Casadevall A.Fungal Melanin:What do we know about structure[J]?Front Microbiol,2015,6:1463.

[13]Bridelli MG,Ciati A,Crippa PR.Binding of chemicals to melanins re-examined:adsorption of some drugs to the surface of melanin particles[J].Biophys Chem,2006,119(2):137-145.

[14]Eisenman HC,Nosanchuk JD,Webber JB,et al.Microstructure of cell wall-associated melanin in the human pathogenic fungus Cryptococcus neoformans[J].Biochemistry,2005,44(10):3683-3693.

[15]Jacobson ES,Ikeda R.Effect of melanization upon porosity of the Cryptococcal cell wall[J].Med Mycol,2005,43(4):327-333.

[16]侯幼紅,呂江陵,黃瑛,等.真菌色素與真菌感染[J].中國真菌學(xué)雜志,2008,3(6):375-380.

[17]Paolo WF Jr,Dadachova E,Mandal P,et al.Effects of disrupting the polyketide synthase gene WdPKS1 in Wangiella[Exophiala]dermatitidis on melanin production and resistance to killing by antifungal compounds,enzymatic degradation,and extremes in temperature[J].BMC Microbiology,2006,6:55.

[18]Fernandes C,Prados-Rosales R,Silva BM,et al.Activation of melanin synthesis in Alternaria infectoria by antifungal drugs[J].Antimicrob Agents Chemother,2015,60(3):1646-1655.

[19]Andrade TS,Castro LG,Nunes RS,et al.Susceptibility of sequential Fonsecaea pedrosoi isolates from chromoblastomycosis patients to antifungal agents[J].Mycoses,2004,47(5-6):216-217.

[20]Franzen AJ,Cunha MM,Batista EJ,et al.Effects of tricyclazole(5-methyl-1,2,4-triazol[3,4]benzothiazole),a specific DHN-melanin inhibitor,on the morphology of Fonsecaea pedrosoi conidia and sclerotic cells[J].Microsc Res Tech,2006,69(9):729-737.

[21]Sun J,Zhang J,Najafzadeh MJ,et al.Melanization of a meristematic mutant of Fonsecaea monophora increases tolerance to stress factors while no effects on antifungal susceptibility[J].Mycopathologia,2011,172(5):373-380.

[22]van de Sande WW,de Kat J,Coppens J,et al.Melanin biosynthesis in Madurella mycetomatis and its effect on susceptibility to itraconazole and ketoconazole[J].Microbes Infect,2007,9(9):1114-1123.

[23]韋立莉,劉棟華，梁伶，等.馬爾尼菲青霉酵母相黑色素的顯微結(jié)構(gòu)形態(tài)觀察[J].中國皮膚性病學(xué)雜志,2014,28(4):334-337.

[24]Woo PC,Tam EW,Chong KT,et al.High diversity of polyketide synthase genes and the melanin biosynthesis gene cluster in Penicillium marneffei[J].FEBS J,2010,277(18):3750-3758.

[25]Boyce KJ,Andrianopoulos A.Fungal dimorphism:the switch from hyphae to yeast is a specialized morphogenetic adaptation allowing colonization of a host[J].FEMS Microbiol Rev,2015,39(6):797-811.

[26]Kaewmalakul J,Nosanchuk JD,Vanittanakom N,et al.Melanization and morphological effects on antifungal susceptibility of Penicillium marneffei[J].Antonie Van Leeuwenhoek,2014,106(5):1011-1020.

[27]劉棟華，譚升順，羅紅，等.氟康唑誘導(dǎo)菌絲相馬爾尼菲青霉菌產(chǎn)67.5kDa蛋白[J].中國皮膚性病學(xué)雜志，2006,20(12):718-720.

[28]Morris-Jones R,Youngchim S,Gomez BL,et al.Synthesis of melanin-like pigments by Sporothrix schenckii in vitro and during mammalian infection[J].Infect Immun,2003,71(7):4026-4033.

[29]Almeida-Paes R,Frases S,Araújo Gde S,et al.Biosynthesis and functions of a melanoid pigment produced by species of the Sporothrix complex in the presence of L-tyrisube[J].Appl Environ Microbiol,2012,78(24)：8623-8630.

[30]Mario DA,Santos RC,Denardi LB，et al.Interference of melanin in the susceptibility profile of Sporothrix species to amphotericin B[J].Rev Iberoam Micol,2016,33(1):21-25.

[31]da Silva MB,Marques AF,Nosanchuk JD,et al.Melanin in the dimorphic fungal pathogen Paracoccidioides brasiliensis:effects on phagocytosis,intracellular resistance and drug susceptibility[J].Microbes Infect,2006,8(1):197-205.

[32]Baltazar LM,Werneck SM,Soares BM,et al.Melanin protects Paracoccidioides brasiliensis from the effects of antimicrobial photodynamic inhibition and antifungal drugs[J].Antimicrob Agents Chemother,2015,59(7):4003-4011.

[33]van Duin D,Casadevall A,Nosanchuk JD.Melanization of Cryptococcus neoformans and Histoplasma capsulatum reduces their susceptibilities to amphotericin B and caspofungin[J].Antimicrob Agents Chemother,2002,46(11):3394-3400.

[34]Nosanchuk JD,van Duin D,Mandal P,et al.Blastomyces dermatitidis produces melanin in vitro and during infection[J].FEMS Microbiol Lett,2004,239(1):187-193.

[35]Nosanchuk JD,Casadevall A.Impact of melanin on microbial virulence and clinical resistance to antimicrobial compounds[J].Antimicrob Agents Chemother,2006,50(11):3519-3128.

[36]Frases S,Salazar A,Dadachova E,et al.Cryptococcus neoformans can utilize the bacterial melanin precursor homogentisic acid for fungal melanogenesis[J],Appl Environ Microbiol,2007,73(2):615-621.

[37]Ikeda R,Sugita T,Jacobson ES,et al.Effects of melanin upon susceptibility of Cryptococcus to antifungals[J].Microbiol Immunol,2003,47(4):271-277.

[38]Taborda CP,da Silva MB,Nosanchuk JD,et al.Melanin as a virulence factor of Paracoccidioides brasiliensis and other dimorphic pathogenic fungi:a minireview[J].Mycopathologia,2008,165(4-5):331-339.

[39]Fuentes M,Hernández R,Gordillo D,et al.Antifungal activity of melanin in clinical isolates of Candida spp.[J].Rev ChilenaInfectol,2014,31(1):28-33.

[40]Pihet M,Vandeputte P,Tronchin G,et al.Melanin is an essential component for the integrity of the cell wall of Aspergillus fumigatus conidia[J].BMC Microbiol,2009,24(9):177.

[41]Chai LY,Netea MG,Sugui J,et al.Aspergillus fumigatus conidial melanin modulates host cytokine response[J].Immunobiology,2010,215(11):915-920.

[42]Müller FM,Seidler M,Beauvais A.Aspergillus fumigatus biofilms in the clinical setting[J].Med Mycol,2011,49( Suppl 1):S96-S100.

[43]Youngchim S,Pornsuwan S,Nosanchuk JD,et al.Melanogenesis in dermatophyte species in vitro and during infection[J].Microbiology,2011,157(Pt 8):2348-2356.

[44]Youngchim S,Nosanchuk JD,Pornsuwan S,et al.The role of L-DOPA on melanization and mycelial production in Malassezia furfur[J].PLoS One,2013,8(6):e63764.

[本文編輯]王飛

中山大學(xué)青年教師培育項目(13ykpy32)；國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項目(81401650)

陳映丹，女(漢族)，碩士研究生在讀.E-mail:chenyingdan89@163.com

馮佩英,E-mail:fengpeiying@medmail.com.cn

R 379

B

1673-3827(2016)11-0248-04

2016-02-02