蓮藍口服液的制備工藝研究

耿元邦，董發(fā)明*，馬 霞，張國祖,3，劉永錄(.河南科技大學(xué) 動物科技學(xué)院，河南 洛陽 47003； .河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院，河南 鄭州 450046；3.河南省康星藥業(yè)股份有限公司，河南 鄭州 45464)

蓮藍口服液的制備工藝研究

耿元邦1，董發(fā)明1*，馬 霞2，張國祖2,3，劉永錄2
(1.河南科技大學(xué) 動物科技學(xué)院，河南 洛陽 471003； 2.河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院，河南 鄭州 450046；3.河南省康星藥業(yè)股份有限公司，河南 鄭州 451464)

為了確定蓮藍口服液的生產(chǎn)工藝參數(shù)，為蓮藍口服液的生產(chǎn)提供參考，以(R，S)-告依春含量、穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯含量為依據(jù)，采用水提、水提醇沉的方法提取板藍根和大青葉，醇提法提取穿心蓮，篩選出各成分含量均較高的蓮藍口服液制備工藝。結(jié)果顯示，穿心蓮粗粉加10倍量85%乙醇進行滲漉提取，滲漉液中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量最高；板藍根和大青葉進行水煎濃縮，濃縮液中加入穿心蓮滲漉液使乙醇最終體積分?jǐn)?shù)為60%時進行醇沉，穿心蓮、板藍根、大青葉三者的質(zhì)量比為1∶2∶1制備的蓮藍口服液各標(biāo)示成分含量最高。

穿心蓮； 板藍根； 大青葉； 提取

溫?zé)岵∮赏飧袦責(zé)岵⌒耙?，以熱象偏重為主要特征。該病具有季?jié)性，且有不同程度的傳染性，易在動物群體中和群體間傳播蔓延，給養(yǎng)殖業(yè)造成較大損失。臨床用于預(yù)防治療溫?zé)岵〉闹兴幏絼┯小吨腥A人民共和國獸藥典》(第2部)和《中華人民共和國藥典》(第1部)中收錄的清解合劑、清溫敗毒散、銀翹散、雙黃連口服液等[1-2]，但這些方劑成分多、制備和質(zhì)量控制程序繁瑣、藥材成本高，限制了其在養(yǎng)殖生產(chǎn)中的使用，如清解合劑由板藍根、連翹、黃芩、金銀花、玄參等12味中藥組成，其雙黃連口服液原料成本就在50～100元/kg。為此，本試驗在《中華人民共和國獸藥典》(第2部)收載的方劑板青顆粒基礎(chǔ)上進行加減化裁/重新組方。板藍根和大青葉均含有(R，S)-告依春、靛玉紅等成分[3]，有清熱解毒、涼血清咽的功效，一般采用水提或水提醇沉的方法進行提取。穿心蓮的主要有效成分為二萜內(nèi)酯類，具有解熱、抗炎、鎮(zhèn)靜的藥效[4-5]，其中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量最高，但其在水中的溶解度非常小，故本研究對穿心蓮采用醇提工藝進行研究，在保證提取率的前提下，簡化操作步驟，以(R，S)-告依春、穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯含量為依據(jù)，分別篩選板藍根、大青葉的最佳組成及提取工藝，優(yōu)化穿心蓮提取工藝[6-8]，最終確定蓮藍口服液的最佳組方及最佳生產(chǎn)工藝，為蓮藍口服液的生產(chǎn)提供參考。

1 材料和方法

1.1 儀器與試藥

SHZ-D(Ⅲ)型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，由鞏義市瑞德儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)；津騰溶劑過濾器，由天津津騰實驗設(shè)備有限公司生產(chǎn)；高效液相色譜儀(P230Ⅱ)，由大連依利特分析儀器有限公司生產(chǎn)；色譜柱：Hypersil BDS C18(4.6 mm×250 mm)；超聲波清洗器(KQ3200)，由昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn)；電子分析天平(AUW220D)，由日本島津公司生產(chǎn)。

板藍根、大青葉、穿心蓮全葉購自禹州凱旋藥業(yè)有限公司，所有藥物經(jīng)鑒定均符合生藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；95%乙醇、分析甲醇，由天津市富宇精細化工有限公司生產(chǎn)；一級色譜甲醇，由天津四友精細化學(xué)品有限公司生產(chǎn)；(R,S)-告依春標(biāo)準(zhǔn)品(批號為111753-201304)、穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品(批號為110854-201313)、脫水穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品(批號為110797-200307)、靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)品(批號為110717-200204)均購自中國藥品生物制品檢定所。

1.2 穿心蓮提取工藝的優(yōu)化

將穿心蓮粗粉碎后分別加不同體積倍數(shù)的乙醇進行滲漉提取，以穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯含量為指標(biāo)，進行三因素三水平正交試驗設(shè)計(表1)，分別設(shè)置加乙醇體積分?jǐn)?shù)(75%、85%、95%)、加醇量(5倍、10倍、15倍)及浸泡時間(12 h、24 h、36 h)進行正交試驗[9]，統(tǒng)計每個因素各個水平下的指標(biāo)總和K1、K2、K3，平均值k1、k2、k3以及極差R。分析各因素對穿心蓮提取的影響程度，以確定最佳提取條件。穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯含量采用高效液相色譜法檢測。

1.3 板藍根、大青葉提取工藝的優(yōu)化

參考藥典中板藍根顆粒、板青顆粒的制備工藝，以(R,S)-告依春含量為指標(biāo)，對板藍根、大青葉的制備工藝進行優(yōu)化篩選，即板藍根和大青葉分別采用水提和水提醇沉的工藝進行提取[10-11]。

表1 三因素三水平的正交試驗設(shè)計

1.3.1 水提工藝 分別按照板藍根︰大青葉=2∶1、板藍根∶大青葉=1∶1、板藍根∶大青葉=1∶2的質(zhì)量比稱取適量原藥材，加10倍量水，浸泡30 min，煎煮2次，每次2 h，過濾，合并濾液濃縮至每毫升相當(dāng)于1 g原藥材。各樣品均分為2份，離心后備用。各樣品取其中1份分別標(biāo)記為樣品1、樣品2、樣品3。

1.3.2 水提醇沉工藝 分別取上述水提工藝中板藍根和大青葉水提液的另一份樣品，分別加乙醇至終體積分?jǐn)?shù)為60%，4 ℃靜置24 h，棄去沉淀，過濾，濾液回收濃縮至每毫升相當(dāng)于1 g原藥材，離心，分別標(biāo)記為樣品4、樣品5、樣品6。

采用高效液相色譜法檢測樣品1—6中(R,S)-告依春和靛玉紅含量[12]。

1.4 蓮藍口服液提取工藝的優(yōu)化

試驗中發(fā)現(xiàn)，板藍根與大青葉質(zhì)量比為2∶1的水煎濃縮液中加入1份以上穿心蓮時，滲漉液醇沉回收后的樣品易出現(xiàn)，結(jié)晶現(xiàn)象，對結(jié)晶樣品離心檢測發(fā)現(xiàn)，結(jié)晶物為穿心蓮內(nèi)酯成分，故選擇板藍根2份、大青葉1份的水煎濃縮液中加入1份穿心蓮滲漉液進行醇沉，即配方組成為板藍根︰大青葉︰穿心蓮為 2∶1∶1。

以穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯含量及(R,S)-告依春含量為考察指標(biāo)，采用穿心蓮滲漉液(乙醇體積分?jǐn)?shù)75%)對板藍根、大青葉質(zhì)量比為2∶1的水煎液進行醇沉，對醇沉?xí)r乙醇最終體積分?jǐn)?shù)進行考察。將同一批板藍根、大青葉質(zhì)量比為2∶1的水煎濃縮液均分為12份(每份240 mL)，每3份為 1個 處理，處理1加入乙醇使乙醇終體積分?jǐn)?shù)為60%，醇沉過夜，過濾，濾液回收濃縮至每毫升相當(dāng)于1 g原藥材，然后加入穿心蓮滲漉回收液(穿心蓮滲漉液回收乙醇至含藥量1 g/mL)。處理2—4中分別加入等量穿心蓮滲漉液(800 mL)，調(diào)節(jié)乙醇的最終體積分?jǐn)?shù)依次為50%、60%、70%，醇沉過夜，過濾，濾液回收濃縮至每毫升相當(dāng)于1 g原藥材。優(yōu)選醇沉?xí)r乙醇的體積分?jǐn)?shù)，處理分組見表2。

表2 蓮藍口服液制備工藝處理分組

2 結(jié)果與分析

2.1 穿心蓮提取工藝的優(yōu)化結(jié)果

根據(jù)表3極差大小可知，影響穿心蓮的提取因素主次順序為A>B>C，即：乙醇體積分?jǐn)?shù)>加醇量>浸泡時間，即乙醇體積分?jǐn)?shù)為85%、10倍加醇量時穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯含量最高，浸泡時間對提取影響較小。綜合正交試驗結(jié)果和生產(chǎn)的可行性，選取最佳工藝為A2B2C1，即加10倍量85%乙醇、常溫浸泡12 h后滲漉。

表3 正交試驗穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯含量結(jié)果

2.2 板藍根、大青葉提取工藝的優(yōu)化結(jié)果

由表4可以看出，水提醇沉樣品(樣品4—6)中(R,S)-告依春和靛玉紅含量高于相應(yīng)組方比例的水提樣品(樣品1—3)。靛玉紅在水提或水提醇沉提取液中含量均很低，僅為0.13～0.23 μg/mL，但在水提醇沉樣品中的含量稍高于相應(yīng)的水提樣品中的含量；(R，S)-告依春在水提樣品1—3中含量較低，在醇沉后的樣品4—6中含量較高，樣品4中(R,S)-告依春含量高達140.6 μg/mL。故選擇樣品4的比例(板藍根︰大青葉=2∶1)進行后續(xù)研究。

表4 不同提取工藝板藍根、大青葉樣品中各成分的含量 μg/mL

2.3 蓮藍口服液提取工藝的優(yōu)化結(jié)果

按照1.4中的處理方法制得4批蓮藍口服液樣品，各標(biāo)示成分的含量見表5。處理1與處理3、4的穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯含量、(R,S)-告依春含量差異不顯著，但顯著高于處理2。處理1先用乙醇醇沉板藍根和大青葉的水煎濃縮液，再回收穿心蓮滲漉液中的乙醇，提取過程復(fù)雜并且用乙醇量多，增加了成本。處理4和處理3僅需回收1次乙醇，但處理4的乙醇最終體積分?jǐn)?shù)為70%，比處理3用量大?？紤]到提取過程的簡化及成本的節(jié)約，最終確定處理3為蓮藍口服液的提取工藝，即板藍根、大青葉(2∶1)的水煎濃縮液240 mL，加入穿心蓮滲漉液800 mL，調(diào)節(jié)乙醇的最終體積分?jǐn)?shù)為60%，醇沉過夜，過濾，濾液回收濃縮至每毫升相當(dāng)于1 g原藥材。

表5 不同醇沉濃度蓮藍口服液中各成分的含量

注：同列不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

3 結(jié)論與討論

穿心蓮的提取工藝多選用乙醇溫浸或者滲漉提取[13]，但乙醇溫浸工藝耗時長、用醇量大，因此，本試驗選用滲漉提取方法，通過不同滲漉時間、不同乙醇體積分?jǐn)?shù)和不同體積的乙醇進行優(yōu)化，獲得最佳提取方法。最后確定穿心蓮的提取工藝為：10倍量85%乙醇進行滲漉提取12 h。

將板藍根和大青葉的提取工藝進行對比，發(fā)現(xiàn)水提醇沉工藝的標(biāo)示成分含量明顯比直接水提的含量高，且以板藍根、大青葉質(zhì)量比為2∶1的樣品中含量最高。因此，板藍根和大青葉的提取工藝定為板藍根、大青葉質(zhì)量比為2∶1，加10倍量水煎煮2次，濃縮，再進行醇沉。

結(jié)合穿心蓮及板藍根和大青葉提取工藝的初步研究，按簡化操作步驟、節(jié)約成本的原則，將板藍根、大青葉質(zhì)量比2∶1水煎醇沉回收乙醇后與穿心蓮滲漉回收液(含藥量1 g/mL)混合，以及采用穿心蓮滲漉液(醇體積分?jǐn)?shù)75%)對板藍根、大青葉(2∶1)水煎液進行醇沉，對醇沉?xí)r乙醇最終體積分?jǐn)?shù)(50%、60%、70%)進行了考察，對蓮藍口服液提取工藝進行了優(yōu)化。結(jié)果顯示，穿心蓮與板藍根及大青葉分別提取再混合的工藝與采用穿心蓮滲漉液對板藍根、大青葉(質(zhì)量比2∶1)水煎液進行醇沉(乙醇最終體積分?jǐn)?shù)60%和70%)處理間差異不顯著。最終將蓮藍口服液的最佳提取工藝確定為：穿心蓮粗粉加10倍量85%乙醇浸泡12 h后滲漉，得滲漉液；板藍根和大青葉以質(zhì)量比2∶1進行水煎濃縮，濃縮液中加入穿心蓮滲漉液使乙醇最終體積分?jǐn)?shù)為60%進行醇沉，回收乙醇調(diào)節(jié)至每1 mL相當(dāng)于1 g原藥材，制備蓮藍口服液。

穿心蓮、板藍根、大青葉三者的質(zhì)量比為1∶2∶1，并將穿心蓮滲漉液用作板藍根和大青葉水提液的醇沉溶液，制得的蓮藍口服液各標(biāo)示成分含量較高。用穿心蓮的含醇滲漉液對板藍根和大青葉提取液進行醇沉，不僅節(jié)省乙醇的使用量，而且減少乙醇的回收次數(shù)，簡化了提取工藝，降低了生產(chǎn)成本，更利于臨床的推廣應(yīng)用。

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Study on Preparation Technology of Andrographis-isatidis Oral Liquid

GENG Yuanbang1,DONG Faming1*,MA Xia2,ZHANG Guozu2,3,LIU Yonglu2
(1.College of Animal Technology,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China;2.Henan University of Animal Husbandry and Economy,Zhengzhou 450046,China;3.Henan Kangxing Pharmaceutical Company Limited,Zhengzhou 451464,China)

In order to optimize extraction process of andrographis-isatidis oral liquid and provide a reference for industrial production of this preparation,the research had been screened out the best abstraction technological conditions of andrographis-isatidis oral liquid by water extraction,water extraction and ethanol precipitation,with the content of R-S epigoitrin,andrographolide and dehydroandrographolide as the indexes.The results showed that the contents of andrographolide and dehydroandrographolide were the hightest,when the extraction condition wasAndrographispaniculatawith 10 times amount of 85% ethanol.Concentration liquid was obtained by the methods of decoction and concentration ofIsatistinctoriaandIsatisindigotica，percolation liquid were added to the concentration liquid for alcohol precipitation with the alcohol concentration of 60%.The active ingredient of andrographis-isatidis oral liquid peaked when the mass ratio ofAndrographispaniculata,IsatistinctoriaandIsatisindigoticawas 1∶2∶1.

Andrographispaniculata;Isatistinctoria;Isatisindigotica; extraction

2015-12-20

河南省重點科技攻關(guān)項目( 122102110185)；河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院?？萍紕?chuàng)新團隊項目(HUAHE2015009)

耿元邦(1990-)，男，河南禹州人，在讀碩士研究生，研究方向：中獸藥新制劑研發(fā)。E-mail：348856323@qq.com

*通訊作者：董發(fā)明(1964-)，男，河南武陟人，教授，博士，主要從事中獸醫(yī)與中獸藥研究。E-mail：dfming24@aliyun.com

S859.3

A

1004-3268(2016)06-0126-04