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    大豆抗原蛋白的結(jié)構(gòu)和功能及其對(duì)魚(yú)類(lèi)消化生理功能的影響

    2016-02-01 19:29:23殷海成
    中國(guó)飼料 2016年2期
    關(guān)鍵詞:豆球蛋白亞基魚(yú)類(lèi)

    殷海成

    (河南工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院,河南鄭州450001)

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    綜述

    大豆抗原蛋白的結(jié)構(gòu)和功能及其對(duì)魚(yú)類(lèi)消化生理功能的影響

    殷海成

    (河南工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院,河南鄭州450001)

    大豆抗原蛋白既是大豆的主要營(yíng)養(yǎng)成分,又是大豆中的主要抗?fàn)I養(yǎng)因子之一,同時(shí)也是制約大豆蛋白在食品或飼料工業(yè)中利用的關(guān)鍵因素。本文綜述了大豆抗原蛋白的結(jié)構(gòu)、功能及其對(duì)魚(yú)類(lèi)消化生理功能的影響,旨在為大豆蛋白的合理開(kāi)發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

    大豆抗原蛋白;結(jié)構(gòu);功能;消化生理;魚(yú)類(lèi)

    大豆蛋白因營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高而被廣泛應(yīng)用于食品與飼料工業(yè)。然而,大豆蛋白中含有多種抗?fàn)I養(yǎng)因子(ANF),如胰蛋白酶抑制因子、抗原蛋白、凝集素、單寧、皂甙和生物堿等(Tsukada等,1986)。其中大豆抗原蛋白,易引起動(dòng)物機(jī)體的過(guò)敏反應(yīng)(Herian等,1990)。過(guò)敏反應(yīng)能夠干擾動(dòng)物腸道生理功能,影響腸道的新陳代謝以及對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收,進(jìn)而影響動(dòng)物特別是幼小動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育。大豆抗原蛋白按免疫學(xué)方法分為:大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白、γ-伴大豆球蛋白和α-伴大豆球蛋白;按沉降系數(shù)S分為:2S、7S、11S、15S組分。其中β-伴大豆球蛋白屬于7S組分,分子質(zhì)量為140~180 ku,是由α、α'和β三個(gè)亞基組合而成的三聚體,并以α和α'亞基的抗原性最強(qiáng)(Amigo-Benavent等,2011;Krishnan等,2009)。大豆球蛋白為11S組分,由6個(gè)酸性(A)亞基和6個(gè)堿性(B)亞基組成的分子質(zhì)量為300~380 ku的六聚體復(fù)合物,其中酸性亞基可引起人體和動(dòng)物的過(guò)敏(Adachi等,2003)。通過(guò)二級(jí)結(jié)構(gòu)研究發(fā)現(xiàn),二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)于蛋白質(zhì)的功能有著至關(guān)重要的作用,一旦二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,蛋白質(zhì)的功能就發(fā)生巨大的變化(Badley等,1975)。本文綜述了大豆球蛋白與β-伴大豆球蛋白結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系,以及其對(duì)魚(yú)類(lèi)消化生理的影響,旨在為魚(yú)類(lèi)充分利用大豆蛋白奠定基礎(chǔ)。

    1 大豆球蛋白的基本結(jié)構(gòu)

    大豆球蛋白約占大豆籽實(shí)體總蛋白的19.5%~23.1%和總球蛋白的40%,是主要的貯藏蛋白和最大的單體組分,屬于11S球蛋白,分子質(zhì)量為300~380 ku(Hou和Chang,2004;Adachi等,2003)。大豆球蛋白也是含糖蛋白較少的聚合蛋白質(zhì)(0.8%的糖),是酸性和堿性亞基(每個(gè)亞基約60 ku)交互連接而成的穩(wěn)定結(jié)構(gòu);酸性亞基包括Ala、A1b、A3、A4、A5、A6,堿性亞基包括B1a、B1b、B3、B4、B5、B6,分別通過(guò)二硫鍵(S-S)連接而成,形狀為2個(gè)環(huán)狀六角形;其單聚體亞基可表示為A-S-S-B,A為酸性多肽鏈,分子量為34~44 ku;B為堿性多肽鏈,分子量為20 ku;SS是二硫鍵(Nielsen等,1989)。目前已知有5種單體形式,分別為:AlaB1b(53.6 ku)、A1bBlb(52.2 ku)、A1bBla(52.4 ku)、A3B4(55.4 ku)和A5A4B3(61.2 ku)(Maruyama等,1998)。11S球蛋白中,蛋氨酸含量較低,賴(lài)氨酸含量較高,纈氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸和異亮氨酸占23.5%,賴(lài)氨酸、精氨酸、組氨酸、谷氨酸和天冬氨酸占46.7%(周瑞寶和周兵,1998)。在二級(jí)結(jié)構(gòu)中α-螺旋約有24%、β-折疊約有30%、β-轉(zhuǎn)角約有31%以及12%的無(wú)規(guī)則卷曲(朱翠等,2011)。

    2 β-伴大豆球蛋白的基本結(jié)構(gòu)

    β-伴大豆球蛋白作為另一種主要貯藏蛋白,約占大豆籽實(shí)體總蛋白的10.0%~12.7%和總球蛋白的30%,分子質(zhì)量為140~180 ku,同時(shí)它又是糖基化蛋白質(zhì),約含有4%~5%的碳水化合物(氨基葡糖和甘露糖殘基)(Mujoo等,2003)。β-伴大豆球蛋白由α、α'和β三個(gè)亞基組成且具有82%的同源性,分子質(zhì)量分別為58~77、58~83、42~53 ku(Coates等,1985)。3個(gè)亞基在組成上具有多樣性,表示為:αxα'yβz(x、y、z代表相對(duì)應(yīng)亞基的數(shù)量),目前已知的6種聚合方式為ααα、αα α'、αα'β、ααβ、αββ、α'ββ(Mujoo等,2003)。β-伴大豆球蛋白的氨基酸組成顯示都富有谷氨酸/谷氨酰胺、天冬氨酸/天門(mén)冬酰胺、亮氨酸和精氨酸(Thanh和Shibasaki,1976)。與大豆球蛋白比較,β-伴大豆球蛋白蛋氨酸殘基存在于α、α'亞(α亞基2個(gè)、α'亞基3~4個(gè))基以及不含半胱氨酸(Maruyama等,2003)。β-伴大豆球蛋白的α-螺旋、β-折疊和無(wú)規(guī)則卷曲分別占5%、35%和60%。然而,對(duì)于不同大豆品種,β-伴大豆球蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)在α-螺旋、β-折疊、β-轉(zhuǎn)角、無(wú)規(guī)則卷曲存在一定差異,如大豆球蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)中酰胺Ⅰ帶α螺旋16%,β-折疊47%,而β-伴大豆球蛋白α螺旋17%,β-折疊47%,α-螺旋含量少,β-折疊含量高(Duke,1934)。

    3 大豆抗原蛋白的結(jié)構(gòu)變化與功能關(guān)系

    蛋白質(zhì)的功能與結(jié)構(gòu)密切相關(guān),結(jié)構(gòu)改變,功能也發(fā)生變化。大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白在結(jié)構(gòu)和組成上的不同決定了其具有不同功能。大豆球蛋白是熱穩(wěn)定蛋白,這是由其組成亞基中具有最低變性溫度的亞基決定的,但也與肽鏈中酸性和堿性亞基交互對(duì)應(yīng)形成比較穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)以及二硫鍵多(﹥20)有關(guān)。差示掃描量熱法研究豆?jié){中的2種主要大豆抗原蛋白,結(jié)果表明,豆?jié){中7S球蛋白的變性溫度為(70±2)℃,11S球蛋白的變性溫度為(90±2)℃(汪立君等,2001)。熱處理使蛋白質(zhì)變性,主要是破壞蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu),使亞基和多肽鏈解聚,蛋白質(zhì)原有功能丟失。利用熱乙醇處理方法提純的大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白基本不具有抗原活性,也不會(huì)引起消化不良反應(yīng)(Kilshow和Sissons,1979)。李巖濤(2013)對(duì)高純度大豆抗原蛋白進(jìn)行不同溫度加熱處理,并通過(guò)紅外光譜等技術(shù)對(duì)熱處理前后的大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,結(jié)合SDS-PAGE和Naive-PAGE凝膠電泳,探討了溫度變化對(duì)大豆抗原蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響,結(jié)果顯示,熱處理可以改變大豆抗原的免疫活性,究其原因是蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,蛋白質(zhì)的有序結(jié)構(gòu)發(fā)生解離,形成無(wú)規(guī)卷曲。隨后的研究又產(chǎn)生了很多熱處理大豆抗原蛋白的其他方法(膨化、高壓和蒸汽等),均獲得了比較理想的效果(段春紅等,2009;Zhang等,2003)。但有些研究結(jié)果與其不盡相同,因?yàn)檫€受其他因素的影響。Davis和Williams(1998)認(rèn)為,熱處理能夠改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),但改變?nèi)Q于溫度和加熱過(guò)程。同樣,Lakemond等(2000)也認(rèn)為pH、離子強(qiáng)度和處理前大豆球蛋白的二、三、四級(jí)結(jié)構(gòu)均會(huì)在很大程度上影響熱處理后的效果。熱處理后的大豆抗原蛋白的天然分子表面抗原表位被破壞,可新的抗原表位被暴露,又顯著提高了小分子抗原的免疫原性(Herian等,1993)。

    對(duì)于pH對(duì)大豆抗原蛋白結(jié)構(gòu)的影響,魏冬旭等(2015)采用Lowry法、8-苯氨基萘-1-磺酸銨鹽熒光探針?lè)ㄒ约皥A二色光譜和熒光光譜對(duì)不同pH值條件下11S球蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,結(jié)果表明,隨著pH值的升高,大豆球蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)中發(fā)生β折疊和無(wú)規(guī)則卷曲向α-螺旋轉(zhuǎn)變,表明蛋白發(fā)生了聚集,結(jié)果功能也發(fā)生改變(Rickert等,2004)。其原因在于外部環(huán)境pH的改變能夠引起大豆抗原蛋白可解離基團(tuán)的電離增加或減少,從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,進(jìn)而影響其功能。大豆球蛋白含有堿性肽鏈與酸性肽鏈,理論上易受pH影響,然而肽鏈中酸性和堿性亞基交互對(duì)應(yīng),相對(duì)穩(wěn)定,不易受pH影響,但pH大于11時(shí),蛋白解離成2S和7S組分亞基,溶解度增加,抗原性降低(Fukushima,1991)。β-伴大豆球蛋白易隨溶液的離子強(qiáng)度變化而發(fā)生聚合和解離作用。在0.1離子強(qiáng)度和中性pH值溶液中,7S會(huì)聚合成9S和12S,致敏作用顯著降低(Dev等,1988)。β-伴大豆球蛋白是糖基化蛋白,其熱穩(wěn)定性和凝膠能力較差,但乳化能力比大豆球蛋白強(qiáng),在低溫條件下能溶解(Koshiyama,1968)。這與大豆球蛋白顯著不同。Utsumi等(1993)通過(guò)分析大豆球蛋白改性后的功能變化發(fā)現(xiàn),大豆球蛋白結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定性以及巰基基團(tuán)的位置和數(shù)目直接影響其乳化能力和疏水性。在致敏作用方面,β-伴大豆球蛋白的三個(gè)亞基都是潛在的致敏原,尤其α亞基很容易被免疫球蛋白E抗體識(shí)別,引起免疫反應(yīng),其活性反應(yīng)決定域就在糖基化的N-連接聚糖部分,這也是β-伴大豆球蛋白致敏作用較強(qiáng)的原因(Hiemori等,2000)。

    4 大豆抗原蛋白對(duì)魚(yú)類(lèi)消化生理功能的影響

    大豆抗原蛋白為致敏蛋白,能導(dǎo)致幼齡動(dòng)物發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)。大豆抗原蛋白進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)后,大部分被消化酶分解成小肽和氨基酸而被吸收利用,只有少部分以完整的大分子穿過(guò)小腸上皮細(xì)胞或上皮細(xì)胞間隙進(jìn)入血液或淋巴,從而引發(fā)致敏反應(yīng)的發(fā)生。當(dāng)水產(chǎn)動(dòng)物攝入含有較多大豆抗原蛋白的飼料后,可破壞魚(yú)的腸細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu),具體表現(xiàn)在后腸上皮頂端細(xì)胞脫落,吸收小泡大小不一,數(shù)量減少,上皮細(xì)胞核排列紊亂,局部出現(xiàn)核濃縮,核頂部及腸細(xì)胞總面積發(fā)生改變(Ostaszewska等,2005;Refstie等,2001)。Rumsey等(1994)對(duì)胡子鲇的腸管敏感性研究表明,胡子鲇腸道從前向后對(duì)大豆蛋白的敏感程度逐漸降低,腸道皺襞逐漸下降,并隨著大豆抗原蛋白含量的增加腸管皺襞高度下降幅度加大。腸道上皮細(xì)胞損傷,必然引起對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力下降。對(duì)于幼魚(yú),營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要在后腸上皮細(xì)胞內(nèi)消化,營(yíng)養(yǎng)吸收依賴(lài)細(xì)胞內(nèi)吸收小泡,吸收小泡數(shù)量的多少直接影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收多少。成魚(yú)胃發(fā)育成熟,消化不依賴(lài)后腸,但營(yíng)養(yǎng)吸收還依賴(lài)后腸的上皮細(xì)胞,因此,大豆抗原蛋白對(duì)于幼魚(yú)的傷害要大于胃發(fā)育成熟的成魚(yú)。除此之外,腸壁損傷勢(shì)必影響腸內(nèi)消化酶活性。消化酶活力高低影響?hù)~(yú)類(lèi)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化與吸收,進(jìn)而影響?hù)~(yú)類(lèi)生長(zhǎng)和發(fā)育。吳莉芳等(2009)對(duì)鯉魚(yú)研究表明,當(dāng)用去皮豆粕替代45%魚(yú)粉蛋白時(shí),其后腸和肝胰臟的蛋白酶活力下降極其顯著。說(shuō)明大豆蛋白中含有影響消化酶的抗?fàn)I養(yǎng)因子。孫玲(2008)進(jìn)一步使用大豆抗原蛋白研究發(fā)現(xiàn),大豆抗原蛋白顯著降低了埃及胡子鲇胃、肝胰臟及前腸,鯉魚(yú)前腸,草魚(yú)后腸和肝胰臟蛋白酶活力。主要原因在于大豆抗原蛋白損傷了魚(yú)類(lèi)消化道結(jié)構(gòu),導(dǎo)致消化道內(nèi)酶的分泌減少、活力降低。Krogdahl和Bakke-Mckellep(2003)對(duì)虹鱒研究發(fā)現(xiàn),使用大豆抗原蛋白后,虹鱒中腸和后腸上皮刷狀緣胞外酶:堿性磷酸酶、亮氨酸氨肽酶和雙糖酶(麥芽糖酶、乳糖酶、蔗糖酶等)活性下降,并隨大豆抗原蛋白比例增加酶活性呈指數(shù)性下降。大豆抗原蛋白可使大西洋鮭魚(yú)后腸上皮刷狀緣的胞內(nèi)、外酶:5'-核苷酸酶、Mg2+ATP酶、酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、丙氨酸氨肽酶等活性降低;5'-核苷酸酶與單核細(xì)胞增多有關(guān),酶的活性降低,表明單核細(xì)胞增多;酸性磷酸酶、非特異性脂酶活降低,表明巨噬細(xì)胞浸潤(rùn);胞內(nèi)的堿性磷酸酶、酸性磷酸酶等活性的降低引起蛋白質(zhì)和脂類(lèi)消化減弱等(Burrells等,1999)。腸道損傷導(dǎo)致其對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力下降;消化道酶活性降低可加劇魚(yú)類(lèi)消化性能降低,從而影響?hù)~(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)及對(duì)飼料的利用,最終導(dǎo)致魚(yú)類(lèi)消化性能降低和生長(zhǎng)性能下降。

    總之,探討大豆抗原蛋白結(jié)構(gòu)與功能以及對(duì)魚(yú)類(lèi)消化生理功能影響,對(duì)于大豆抗原的致敏性研究和大豆蛋白的營(yíng)養(yǎng)與功能研究具有現(xiàn)實(shí)意義;對(duì)于降低或消除大豆抗原蛋白的抗?fàn)I養(yǎng)特性,保障大豆蛋白在食品或飼料中的安全與高效利用具有指導(dǎo)意義。

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    soybean allergenic protein;structure;function;digestive physiology;fish

    S963

    A

    1004-3314(2016)02-0015-04

    10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20160204

    河南省重點(diǎn)科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(132102110026)

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