阿糖胞苷等8種藥物用于白血病治療的耐藥性分析

胡曉麗　郝東升　胡 軍（河南省永城市人民醫(yī)院，河南 永城 476600）

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阿糖胞苷等8種藥物用于白血病治療的耐藥性分析

胡曉麗郝東升胡 軍
（河南省永城市人民醫(yī)院，河南 永城 476600）

目的 探討阿糖胞苷等8種藥物用于白血病治療中的耐藥性。方法 選取108例白血病患者為研究對(duì)象，以MTT法實(shí)施藥敏試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀對(duì)各孔的吸光度OD值實(shí)施測(cè)定。結(jié)果 阿糖胞苷等8種藥物對(duì)患者體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)療效的總符合率為82.63%，陰性符合率為83.21%，陽(yáng)性符合率為82.32%。結(jié)論 針對(duì)于白血病患者的化學(xué)治療前，應(yīng)對(duì)阿糖胞苷等多種藥物治療白血病的耐藥性進(jìn)行有效分析，根據(jù)耐藥結(jié)果來(lái)制定有針對(duì)性的治療方案，可以降低患者復(fù)發(fā)，改善臨床治療效果。

阿糖胞苷；急性白血?。荒退幮?；分析

急性白血病是血液系統(tǒng)惡性常見(jiàn)疾?。?～2］，且近年來(lái)該病發(fā)病率逐年上升，利用化學(xué)治療是醫(yī)治該病的主要手段，但目前該病中仍存有部分患者對(duì)化學(xué)治療不敏感，且急性白血病患者中過(guò)半數(shù)患者使用化學(xué)治療后仍有復(fù)發(fā)現(xiàn)象，弄清耐藥性是提高治療成功率的重要影響因素。因此，本文以MTT法評(píng)價(jià)包括阿糖胞苷等8種藥物的敏感性，以此為臨床治療提供參考依據(jù)，報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料：2012年2月至2014年3月收治于我院的108例子急性白血病患者為研究對(duì)象，所有患者均經(jīng)骨髓細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞遺傳學(xué)及免疫表型、結(jié)合臨床癥狀確診為急性白血病，108例患者中男62例，女46例，年齡16～70歲，平均年齡（36.9±8.3）歲。其中，63例急性髓性白血病（AML），45例急性淋巴細(xì)胞性白血?。ˋLL）。

1.2方法：以0.9%氯化鈉注射液配制8種化學(xué)治療藥物，最終質(zhì)量濃度為：高三尖杉酯堿0.12 μg/mL，米托蒽醌0.25 μg/mL，依托泊苷6.8 μg/mL，長(zhǎng)春地辛0.2 μg/mL，吡柔比星1.2 μg/mL，表阿霉素6 μg/mL，阿克拉霉素0.8 μg/mL，阿糖胞苷25 μg/mL。將所有藥物放置入冰箱內(nèi)，箱內(nèi)溫度保持4 ℃。然后利用MTT藥物敏感性試驗(yàn)法進(jìn)行試驗(yàn)，96孔細(xì)胞培養(yǎng)板分為試驗(yàn)孔、空白孔、對(duì)照孔，在試驗(yàn)孔內(nèi)，向其加入細(xì)胞懸液90 μL及10 μL的化學(xué)治療藥物，空白孔內(nèi)，向其加入無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基90 μL及10 μL 0.9%氯化鈉注射液。對(duì)照空內(nèi)加入細(xì)胞懸液90 μL，再加入10 μL 0.9%氯化鈉注射液，每種復(fù)作3孔。在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)放入細(xì)胞培養(yǎng)板，在37 ℃環(huán)境下培養(yǎng)，CO2為5%，培養(yǎng)2 d。培養(yǎng)后再加入20 μL含5 g/L MTT的0.9%氯化鈉注射液稀釋液，再進(jìn)行4 h培養(yǎng)。再次培養(yǎng)后向內(nèi)加入10%十二烷基硫酸鈉溶液100 μL，終止反應(yīng)。然后利用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，對(duì)各個(gè)孔的吸光度（OD）值實(shí)施測(cè)定，參考波長(zhǎng)為630 nm，測(cè)定波長(zhǎng)為570 nm。測(cè)定的結(jié)果則是以3孔吸光度平均值為最后的結(jié)果。細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=［（OD對(duì)照-OD試驗(yàn)）］/［（OD對(duì)照-OD空白）］×100%。

1.3指標(biāo)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：體外試驗(yàn)方面，耐藥：體外試驗(yàn)現(xiàn)在是抑制率＜30%。中度敏感：抑制率30%～50%。敏感：＞50%。體內(nèi)敏感性方面，患者經(jīng)1個(gè)療程治療后，骨髓白血病細(xì)胞下降數(shù)＜60%為體內(nèi)耐藥，體內(nèi)敏感則是2個(gè)療程內(nèi)緩解，或者患者細(xì)胞下降數(shù)不低于60%。

S/S：體內(nèi)/體外均敏感，使用1種，或者不低于2種的體外敏感藥物治療，患者可以獲得部分緩解，或獲得完全緩解的效果，為真陽(yáng)性；R/R：體內(nèi)體外均不敏感；使用1種或2種及2種以上的體外敏感藥物治療，患者病情穩(wěn)定或者病情進(jìn)展，為真陰性。S/R：1種或2種、2中以上體外不敏感藥物可以獲得部分緩解或完全緩解的效果，為假陽(yáng)性。R/S：體內(nèi)使用體外不敏感藥物，獲得部分緩解或完全緩解的效果，為假陰性。

陽(yáng)性符合率=［S/S÷（S/S+S/R）］×100%，陰性符合率=［R/R÷ （R/R+R/S）］×100%?？偡下?［（S/S+R/R）÷總例數(shù)］×100%。

2　結(jié) 果

AML患者中，阿糖胞苷對(duì)白血病細(xì)胞的平均抑制率為（57.7± 36.0）%，表阿霉素抑制率為（62.7±32.2）%，阿克拉霉素抑制率為（47.9±32.8）%，長(zhǎng)春地辛抑制率為（52.4±33.9）%，米托蒽醌抑制率（69.3±36.8）%，吡柔比星抑制率（56.7±36.8）%，依托泊苷抑制率（66.7±32.2）%，高三尖杉酯堿（62.7±34.3）%。

ALL患者中，阿糖胞苷對(duì)白血病細(xì)胞的平均抑制率為（43.7± 32.3）%，表阿霉素抑制率為（59.7±36.5）%，阿克拉霉素抑制率為（36.7±36.1）%，長(zhǎng)春地辛抑制率為（41.5±34.1）%，米托蒽醌抑制率（46.2±34.9）%，吡柔比星抑制率（64.2±35.5）%，依托泊苷抑制率（56.7±33.0）%，高三尖杉酯堿（54.5±35.7）%。

阿糖胞苷等8種藥物對(duì)患者體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)療效的總符合率為82.63%，陰性符合率為83.21%，陽(yáng)性符合率為82.32%。

3　討 論

在以往針對(duì)白血病的化學(xué)藥物治療中，針對(duì)患者個(gè)體藥物敏感性的考慮不足，盡管以往固定的經(jīng)驗(yàn)性治療方案可以讓患者得到緩解，但治療后的復(fù)發(fā)率較高［3-4］，細(xì)胞遺傳學(xué)的改變、腫瘤細(xì)胞耐藥性、藥物藥代動(dòng)力學(xué)等因素均是復(fù)發(fā)的重要影響因素。而腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性，此項(xiàng)因素則是化學(xué)治療失敗的主要影響因素。產(chǎn)生耐藥的機(jī)制有多種，多耐藥性相關(guān)的主要為人MDRI基因表達(dá)的P-糖蛋白，P-糖蛋白可以通過(guò)ATP提供的能量將化學(xué)治療藥物從細(xì)胞泵出細(xì)胞外，從而造成了細(xì)胞內(nèi)藥物濃度持續(xù)降低，從而使藥物作用大幅降低，出現(xiàn)耐藥。在體外藥物敏感性試驗(yàn)方面，通過(guò)該項(xiàng)試驗(yàn)可以有效預(yù)測(cè)患者對(duì)化學(xué)治療藥物的敏感性，從而為臨床用藥提供了合理依據(jù)，且有研究報(bào)道藥物敏感性試驗(yàn)臨床體內(nèi)療效有相關(guān)性［5］。但是該項(xiàng)體外藥物敏感性試驗(yàn)?zāi)壳霸谂R床還未有推廣應(yīng)用，因白血病細(xì)胞在體外增殖率低。在MTT法中，體外培養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)間比較短，可以避免出現(xiàn)上面的不足之處。從阿糖胞苷等8種藥物的體外試驗(yàn)來(lái)看看，本研究結(jié)果顯示體外試驗(yàn)與體內(nèi)療效具有相關(guān)性，在部分患者中有假陽(yáng)性、假陰性顯示，當(dāng)時(shí)仍尅一作為個(gè)體化化學(xué)藥物治療方案的參考依據(jù)。

［1］ 曹翊雄，戴崇文，張廣森，等.K562細(xì)胞及其耐藥細(xì)胞株K562/A02細(xì)胞白血病耐藥相關(guān)microRNA篩選［J］.中華血液學(xué)雜志，2010，31（6）：361-365.

［2］ 易娟，陳靜，孫靜，等.白血病K562/ADM細(xì)胞耐藥性與白血病干細(xì)胞及耐藥蛋白表達(dá)的關(guān)系［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，2009，89（25）：1741-1744.

［3］ 徐曉軍，石淑文，湯永民，等.人參皂苷Rh2抗白血病多藥耐藥細(xì)胞K562/VCR作用研究［J］.中草藥，2010，41（7）：1131-1135.

［4］ 周敏，仇惠英，何廣勝，等.伊馬替尼治療慢性髓性白血病過(guò)程中發(fā)生耐藥的多因素分析［J］.中華血液學(xué)雜志，2013，34（5）：395-398.

［5］ 白穎，吳丹彤，周凡，等.環(huán)氧合酶-2在白血病中的表達(dá)及其與耐藥的相關(guān)性［J］.實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2013，17（17）：23-26.

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1671-8194（2016）19-0092-02