血清midkine檢測(cè)在非小細(xì)胞肺癌輔助診斷及預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值

顧勤花 沈琦斌 李冬 謝忠海 李鴻偉

血清midkine檢測(cè)在非小細(xì)胞肺癌輔助診斷及預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值

顧勤花 沈琦斌 李冬 謝忠海 李鴻偉

目的 探討血清中期因子（S-MK）檢測(cè)對(duì)非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）輔助診斷的價(jià)值。方法選擇NSCLC患者120例（觀察組），同期因肺部良性腫瘤住院的患者62例（肺良性腫瘤組）及健康對(duì)照組64例，采用ELISA法測(cè)定觀察組患者術(shù)前及術(shù)后（S-MK）水平，以及肺良性腫瘤組和健康對(duì)照組的S-MK水平。結(jié)果NSCLC組（術(shù)前）S-MK水平為（285．70±20．52）pg/ml，高于肺良性腫瘤組（211．88±15．69）pg/ml和健康對(duì)照組（189．06±12．92）pg/ml（t=2．402、3．257，均P＜0．01）。NSCLC組（術(shù)后1個(gè)月時(shí)）S-MK水平（218．26±10．77）pg/ml，低于術(shù)前（285．70±20．52）pg/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3．303，P＜0．01）。結(jié)論NSCLC患者S-MK水平升高，且術(shù)后出現(xiàn)一定程度的下降，S-MK水平可作為一種臨床腫瘤標(biāo)志物，為NSCLC的診斷、療效評(píng)價(jià)提供一定的依據(jù)。

中期因子 非小細(xì)胞肺癌 腫瘤標(biāo)記物 預(yù)后

非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCKC）是最常見的惡性腫瘤之一，約占肺癌總數(shù)的80%，但因其極易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，5年生存率不足15%[1]，因此NSCKC的早期診斷尤為重要。中期因子（Midkine，MK）是一種肝素結(jié)合性生長(zhǎng)因子，在多種腫瘤細(xì)胞和組織中MK呈現(xiàn)高表達(dá)[2]，包括肺癌、胃癌、結(jié)直腸癌、食管癌和胰腺癌等，而在周邊正常組織中MK低表達(dá)甚至不表達(dá)[3]。此外，在腫瘤早期、潛伏期和癌前病變階段，MK也呈高表達(dá)狀態(tài)[4]。重要的是MK蛋白是一種分泌型蛋白，當(dāng)腫瘤組織分泌大量的MK蛋白時(shí)，血清MK（serum MK，S-MK）表達(dá)水平也會(huì)相應(yīng)升高。已有研究顯示，S-MK的表達(dá)程度與多種腫瘤的分期相關(guān)[5-7]，且與不良預(yù)后及轉(zhuǎn)移也密切相關(guān)[8]。然而S-MK蛋白表達(dá)與NSCKC的相關(guān)性鮮有報(bào)道。本研究通過檢測(cè)NSCKC患者S-MK水平，旨在探討S-MK用于NSCKC輔助診斷及預(yù)后評(píng)估的意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 收集2009年1月至2014年6月本院收治并確診為NSCKC的患者120例（觀察組），其中男72例，女48例，年齡38～77（62.6±14.8）歲；鱗癌58例，腺癌62例；TNM分期Ⅰ～Ⅱ期32例，Ⅲ～Ⅳ期88例；病理檢查均確診為NSCKC，臨床資料完整，術(shù)前均未接受放化療。選擇同期因肺部良性腫瘤入住本院的患者62例（肺良性腫瘤組），其中男40例，女22例，年齡35～79（58.2±16.8）歲。另選擇同期在本院行健康體檢者64例為健康對(duì)照組，男40例，女24例，年齡32～74（57.2± 13.8）歲。3組性別、年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 方法 采集觀察組術(shù)前及術(shù)后1個(gè)月時(shí)，肺良性腫瘤組和健康對(duì)照組體檢時(shí)外周靜脈血5ml，乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，3 000r/min離心10min提取血清，于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆?。S-MK檢測(cè)采用EKISA法，Midkine EKISA試劑盒購(gòu)自美國(guó)PeproTech公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。將羊抗人MK多克隆包被抗體按每孔100μl加入96孔板中，4℃孵育過夜。次日棄去抗體包被液，用洗滌緩沖液清洗4次。每孔加入300μl封閉液室溫封閉1h。棄去封閉液，用洗滌緩沖液清洗4次。按照說明書配置標(biāo)準(zhǔn)品（2倍倍比稀釋）。在空白孔，標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔分別加入100μl稀釋液，標(biāo)準(zhǔn)品和樣本（各做2個(gè)復(fù)孔），4℃孵育過夜。次日棄去96孔板中液體，用洗滌緩沖液清洗4次。每孔加入100μl檢測(cè)抗體，室溫孵育2h。棄去96孔板中液體，用洗滌緩沖液清洗4次。每孔加入100μl Avidin-HRP溶液，室溫孵育30min。棄去96孔板中液體，用洗滌緩沖液清洗4次。每孔加入100μl 1X TMB溶液，室溫孵育30min。每孔加入100μl終止液。用酶聯(lián)免疫分析儀在405nm波長(zhǎng)下檢測(cè)吸光度（A）值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用GraphPad統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 3組S-MK水平的比較 NSCKC組（術(shù)前）S-MK水平為（285.70±20.52）pg/ml，高于肺良性腫瘤組（211.88± 15.69）pg/ml和健康對(duì)照組（189.06±12.92）pg/ml（t= 2.402、3.257，均P＜0.01），而肺良性腫瘤組與健康對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.126，P＞0.05）。

2.2 NSCKC組手術(shù)前后S-MK水平的比較 NSCKC組術(shù)后1個(gè)月時(shí)S-MK水平（218.26±10.77）pg/ml，較術(shù)前明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.303，P＜0.01）。

3 討論

在過去10年中，全球新靶點(diǎn)、新作用機(jī)制的抗腫瘤藥物不斷涌現(xiàn)，為臨床提供了更多用藥選擇，然而一個(gè)客觀現(xiàn)實(shí)是，現(xiàn)有的抗腫瘤藥物對(duì)肺癌患者仍只能起到緩解病情的作用。2006年發(fā)表在新英格蘭醫(yī)學(xué)的一項(xiàng)研究表明，患有NSCKC并在1A期進(jìn)行手術(shù)的患者，其10年生存率高達(dá)92%。早期發(fā)現(xiàn)肺癌并進(jìn)行手術(shù)是目前唯一有可能治愈肺癌的方法。由于肺癌在早期沒有明顯的臨床特征，肺癌的發(fā)現(xiàn)非常困難，大部分有臨床特征的患者在診斷時(shí)已經(jīng)是肺癌中晚期，從而失去了最佳的手術(shù)機(jī)會(huì)。目前，低劑量螺旋CT被認(rèn)為是肺癌高危人群早期篩查的重要工具，然而隨著低劑量螺旋CT的廣泛應(yīng)用，其檢查結(jié)果的高假陽性的弊端逐漸顯現(xiàn)。以往的研究也顯示目前常用的腫瘤標(biāo)記物，包括癌胚抗原（CEA）、癌抗原125（CA125）、糖原19-9（CA19-9）檢測(cè)對(duì)肺癌的診斷有一定的價(jià)值，但特異性并不高[9]。

MK是肝素結(jié)合性生長(zhǎng)因子家族中新發(fā)現(xiàn)的一類成員，是一種分泌型肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子。近年來的研究顯示，MK在多種人類腫瘤組織中高表達(dá)，包括肺癌、胃癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、甲狀腺癌、食管癌和胰腺癌等，當(dāng)腫瘤組織分泌大量的MK蛋白時(shí)，S-MK表達(dá)水平也會(huì)相應(yīng)升高，并參與惡性腫瘤發(fā)生、炎癥和組織細(xì)胞修復(fù)過程，能抑制細(xì)胞凋亡，與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、炎性疾病的發(fā)生密切相關(guān)[10]，而在周邊正常組織中MK低表達(dá)甚至不表達(dá)[3]。此外，MK在腫瘤潛伏期、早期和癌前病變期間也可呈高表達(dá)狀態(tài)，提示MK可能可以作為腫瘤的早期篩查和診斷的工具。本研究結(jié)果顯示，NSCKC患者（術(shù)前）S-MK水平為（285.70± 20.52）pg/ml，均高于肺良性腫瘤組（211.88±15.69）pg/ml和健康對(duì)照組（189.06±12.92）pg/ml，這與以往對(duì)于NSCKC S-MK表達(dá)水平的研究一致[11]。因此，S-MK表達(dá)水平可能是一個(gè)監(jiān)測(cè)NSCKC發(fā)展進(jìn)程的潛在標(biāo)志物，也是一個(gè)預(yù)測(cè)肺部占位性質(zhì)的良好指標(biāo)。

惡性腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移對(duì)于患者的預(yù)后影響極大，很多研究者嘗試各種方式尋找敏感的腫瘤指標(biāo)用來預(yù)測(cè)惡性腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，尤其是常規(guī)檢查無法發(fā)現(xiàn)的早期微轉(zhuǎn)移。Shimada等[5]通過比較食管鱗癌手術(shù)前后S-MK水平，提示食管鱗癌患者手術(shù)后S-MK水平明顯下降。同時(shí)，Meng等[8]對(duì)甲狀腺乳頭狀癌手術(shù)前后S-MK水平分析，提示甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后S-MK水平也明顯下降，而且發(fā)現(xiàn)S-MK≥300pg/ml的甲狀腺乳頭狀癌患者的5年生存率明顯低于S-MK＜300pg/ml的患者。惡性腫瘤患者S-MK水平手術(shù)前后的改變提示S-MK可能可以作為腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。因此，為進(jìn)一步研究S-MK表達(dá)水平與NSCKC發(fā)展的相關(guān)性，本研究對(duì)120例行手術(shù)治療的NSCKC患者進(jìn)行隨訪，將NSCKC患者術(shù)后1個(gè)月時(shí)S-MK水平與術(shù)前進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)NSCKC組術(shù)后S-MK水平（218.26±10.77）pg/ml，低于術(shù)前（285.70±20.52）pg/ml，提示S-MK水平可以為NSCKC患者臨床療效評(píng)價(jià)提供依據(jù)，具有一定的臨床價(jià)值。

總之，本研究結(jié)果顯示NSCKC患者S-MK水平升高，且術(shù)后出現(xiàn)一定程度的下降，S-MK水平可作為一種腫瘤標(biāo)志物，為NSCKC的診斷、療效評(píng)價(jià)提供一定的依據(jù)。

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Detection of serum midkine in patients with non-small cell lung cancer and its clinical significance

GU Oinhua, SHEN Oibin, LI Dong. et al. Department of Thoracic Surgery.Huzhou Central Hospital. Huzhou 313000. China

ObjectiveTo detect serum midkine(S-MK)in patients with non-small cell lung cancer(NSCLC)and to evaluate its clinical significance．MethodsThe S-MK values were measured by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) in 64 healthy controls,62 patients with benign lung disease(LBD),and 120 patients with NSCLC before surgery．The S-MK values were re-examined in NSCLC patients 1 month after surgery．ResultsThe S-MK values in patients with NSCLC were significantly higher than those in patients with LBD or healthy controls(285．70±20．52pg/ml vs．211．88±15．69pg/ml or 189．06± 12．92,P＜0．01)．S-MK significantly decreased in NSCLC patients 1month after surgery(218．26±10．77 pg/ml,P＜0．01)．ConclusionThe S-MK may be a useful serologic tumor biomarker for diagnosis and prognosis of NSCLC．

Midkine Non-small cell lung cancerTumor biomarkerPrognosis

2015-12-25）

（本文編輯：馬雯娜）

湖州市級(jí)一般公益性科研基金項(xiàng)目（2013GY21）

313000 湖州市中心醫(yī)院胸外科

顧勤花，E-mail：guqinhua0204@163.com