1～21日齡黃羽肉雞飼糧銅營(yíng)養(yǎng)需要量的研究

1～21日齡黃羽肉雞飼糧銅營(yíng)養(yǎng)需要量的研究

黃羽肉雞由我國(guó)地方黃羽雞種選育而成，具有肉質(zhì)鮮美、肌間脂肪含量高、風(fēng)味獨(dú)特等特點(diǎn)，深受消費(fèi)者喜愛。我國(guó)農(nóng)業(yè)部于2004年制定并頒布了《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY／T 33—2004）［1］，然而，隨著家禽育種學(xué)科的快速發(fā)展，黃羽肉雞的品種（品系）特點(diǎn)、生長(zhǎng)性能等發(fā)生了很大變化，導(dǎo)致其營(yíng)養(yǎng)需要改變。加上該飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)銅需要量主要是參照NRC（1994）［2］制定的，而NRC是以白羽肉雞作為對(duì)象制定的，由于白羽肉雞和黃羽肉雞在生長(zhǎng)發(fā)育、生理機(jī)能都有所差異，所以該飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)銅需要量并不完全符合黃羽肉雞的特點(diǎn)，因此有必要對(duì)黃羽肉雞銅需要量進(jìn)行研究。對(duì)肉雞銅需要量的研究主要是以白羽肉雞為主，并且需要量主要集中在8～11 mg／kg內(nèi)［3－6］，不同階段黃羽肉雞的銅需要量卻缺乏系統(tǒng)的研究。研究表明飼糧中常可通過添加一定劑量的銅來改變銅代謝，改善抗氧化性能、免疫性能，從而緩解應(yīng)激，提高生長(zhǎng)性能［7－9］。因此本試驗(yàn)以黃羽肉雞為研究對(duì)象，研究飼糧添加不同水平銅對(duì)1～21日齡階段快大型嶺南黃羽肉雞生長(zhǎng)性能、抗氧化性能、免疫器官發(fā)育及血清和肝臟銅含量等的影響，從而確定該階段黃羽肉雞銅需要量，為微量元素添加劑的安全有效應(yīng)用、黃羽肉雞飼糧的科學(xué)配制和黃羽肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1．1 試驗(yàn)動(dòng)物與分組

試驗(yàn)在廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究室試驗(yàn)場(chǎng)進(jìn)行。本試驗(yàn)選用1日齡健康、發(fā)育良好的塊大型嶺南黃羽肉公雞雛雞作為試驗(yàn)雞1 440只，采用單因子隨機(jī)分組設(shè)計(jì)，根據(jù)體重均衡原則隨機(jī)分成6個(gè)組，分別飼喂添加0（對(duì)照）、4、8、16、32、64 mg／kg銅的飼糧。每個(gè)組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)40只雞。

1．2 試驗(yàn)飼糧及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)采用純合基礎(chǔ)飼糧（表1），其營(yíng)養(yǎng)水平參考《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》［1］（NY／T 33—2004）中的黃羽肉雞營(yíng)養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)《中國(guó)飼糧成分表（第15版）》計(jì)算飼糧配方，參考Okonkwo等［10］的方法選用大豆?jié)饪s蛋白、酪蛋白、葡萄糖、玉米淀粉等配制。試驗(yàn)1組為對(duì)照組，采用基礎(chǔ)飼糧，不添加銅（銅含量為2．80 mg／kg），試驗(yàn)2～6組在基礎(chǔ)飼糧中分別添加4、8、16、32、64 mg／kg銅，銅以五水硫酸銅（CuSO4·5H2O）形式添加，以設(shè)計(jì)的銅等量替代預(yù)混料中的玉米芯粉。各組飼糧除銅水平不同外，其他營(yíng)養(yǎng)成分水平基本一致。試雞采用網(wǎng)上平養(yǎng)，自由采食與飲水。其他按常規(guī)飼養(yǎng)操作規(guī)程進(jìn)行，試驗(yàn)期為21 d。

1．3 試驗(yàn)方法與測(cè)定指標(biāo)

試驗(yàn)全期，每天仔細(xì)觀察雞群的精神狀態(tài)、食欲、糞便、缺乏癥、死亡等情況，記錄試驗(yàn)各組雛雞的死亡數(shù)，并對(duì)病死雞逐只進(jìn)行病理剖檢，查明死因。

1．3．1 樣品的采集與處理

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每重復(fù)選取健康、接近平均體重的試雞2只，每組12只，共72只，稱活重后，翅靜脈采血約10 mL，在室溫下傾斜放置30 min后，3 500 r／min離心10 min，分離血清于－20℃保存待測(cè)。采血后將雞完全放血處死，剖摘肝臟，做好標(biāo)記，－20℃保存待測(cè)；摘取免疫器官（脾臟、胸腺、法氏囊），去除結(jié)締組織和脂肪稱重。

表1　基礎(chǔ)飼糧組成與營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet（air?dry basis）　%

1．3．2 生產(chǎn)性能指標(biāo)

在試驗(yàn)結(jié)束前1天22：00斷料供水，于次日08：00以重復(fù)為單位稱雞空腹重、計(jì)算每個(gè)重復(fù)剩余飼料，計(jì)算平均日增重、平均日采食量和料重比，記錄死亡數(shù)，計(jì)算死亡率。

1．3．3 免疫器官指數(shù)

免疫器官（脾臟、胸腺、法氏囊）指數(shù)（%）＝（免疫器官的重量／屠體重）×100。

1．3．4 血清生化指標(biāo)

血清中過氧化產(chǎn)物丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量、銅鋅超氧化物歧化酶（CuZn?superox?ide dismutase，CuZnSOD）活性采用在紫外可見光分光光度儀（Biomate－5型，熱電公司，美國(guó)）測(cè)定；血清中銅藍(lán)蛋白（ceruloplasmin，CP）活性用酶標(biāo)儀（SprctrsaMax－5型，美國(guó)瓦里安公司）按照聯(lián)大茴香胺法測(cè)定；血清銅含量采用火焰原子吸收光譜儀（SpectrAA－50／55型，美國(guó)瓦里安公司）測(cè)定，操作步驟為：取200 μL血清于100 mL燒杯中，加5 mL濃硝酸（優(yōu)級(jí)純），蓋上表面皿，置于電熱板上消煮至澄清透明，待消煮過的樣品冷卻后用去離子水定容至10 mL，搖勻后測(cè)定銅含量。以上所用的分析試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，樣品處理方法按照試劑盒說明書步驟操作。

1．3．5 肝臟生化指標(biāo)

肝臟MDA含量、CuZnSOD活性以及肝臟中銅含量的測(cè)定同血清中的測(cè)定方法。肝臟中金屬硫蛋白（metallothionein，MT）含量用酶標(biāo)儀（Sprc?trsaMax－5型，美國(guó)瓦里安公司）按照鎘血紅蛋白親和力分析法測(cè)定［11］；以上所用的分析試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，樣品處理方法按照試劑盒說明書步驟操作。

1．4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)統(tǒng)計(jì)

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 8．2軟件的GLM程序進(jìn)行方差分析，在差異顯著的基礎(chǔ)上再進(jìn)行Duncan氏法多重比較以及線性（linear）和二次曲線（quad?ratic）趨勢(shì)分析，統(tǒng)計(jì)顯著性水平為P＜0．05，極顯著性水平為P＜0．01。各組試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（means±SE）或平均值表示。對(duì)相關(guān)敏感指根據(jù)數(shù)據(jù)特征選擇擬合線性和二次曲線等不同的數(shù)學(xué)模型，然后根據(jù)擬合度選擇擬合最佳的模型，用以確定黃羽肉雞銅需要量。

2　結(jié)果與分析

2．1 飼糧銅添加水平對(duì)1～21日齡黃羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，飼糧添加不同水平銅對(duì)末重、平均日增重和料重比沒有顯著影響（P＞0．05）；4、64 mg／kg組試雞平均日采食量顯著高于其他組（P＜0．05）。

表2　飼糧銅添加水平對(duì)1～21日齡黃羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響Table 2 Effects of dietary copper supplemental level on growth performance of yellow?feathered broilers aged from 1 to 21 days

2．2 飼糧銅添加水平對(duì)21日齡黃羽肉雞免疫器官的影響

由表3可知，飼糧添加不同水平銅對(duì)胸腺和脾臟指數(shù)沒有顯著影響（P＞0．05）；與對(duì)照組相比，飼糧添加8 mg／kg銅顯著提高法氏囊指數(shù)（P＜0．05），而其他組則差異不顯著（P＞0．05）。

2．3 飼糧銅添加水平對(duì)21日齡黃羽肉雞血清、肝臟銅含量的影響

由表4可知，16、32和64 mg／kg組試雞血清中銅的含量顯著低于對(duì)照組和4、8 mg／kg組（P＜0．05），其他組比較則差異不顯著（P＞0．05）；飼糧添加不同水平銅對(duì)試雞肝臟中銅含量沒有顯著影響（P＞0．05）。

表3　飼糧銅添加水平對(duì)21日齡黃羽肉雞免疫器官指數(shù)的影響Table 3 Effects of dietary copper supplemental level on immune organ indexes of yellow?feathered broilers at 21 days of age　%

表4　飼糧銅添加水平對(duì)21日齡黃羽肉公雞血清銅和肝臟銅含量的影響Table 4 Effects of dietary copper supplemental level on copper content in serum and liver of yellow?feathered broilers at 21 days of age

2．4 飼糧銅添加水平對(duì)63日齡黃羽肉雞血清、肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

由表5可知，與對(duì)照組相比，飼糧銅添加水平對(duì)血清MDA含量的影響不顯著（P＞0．05）；16、32 和64 mg／kg組試雞血清CuZnSOD活性顯著高于對(duì)照組和4 mg／kg組（P＜0．05），并且8 mg／kg組也顯著高于對(duì)照組（P＜0．05），而其他組比較則差異不顯著（P＞0．05）；16、32、64 mg／kg組試雞血清CP活性顯著低于對(duì)照組和4、8 mg／kg組（P＜0．05），并且32和64 mg／kg組試雞血清CP活性顯著高于16 mg／kg組（P＜0．05），而與其他組比較則差異不顯著（P＞0．05）。飼糧添加不同水平銅對(duì)肝臟中MDA和MT的含量影響不顯著（P＞0．05）；8、16、32和64 mg／kg組試雞肝臟中CuZnSOD活性顯著高于對(duì)照組和4 mg／kg組（P＜0．05），而其他組比較則差異不顯著（P＞0．05）。

2．5 對(duì)1～21日齡黃羽肉雞敏感指標(biāo)的多項(xiàng)式擬合結(jié)果

趨勢(shì)分析表明，隨飼糧銅水平的升高，試雞血清和肝臟CuZnSOD活性初步判斷與Baker等［12］和Robbins等［13］方法描述的曲線大致相符，運(yùn)用SAS軟件的NLIN程序建立二次曲線方程（Y＝A1X2＋B1X＋C1，X＜X0；Y＝A1X20＋B1X0＋C1，X≥X0。式中：Y代表血清或肝臟CuZnSOD活性；X代表飼糧銅水平；A1和B1分別代表方程二次項(xiàng)和一次項(xiàng)的系數(shù)；C1代表方程的常數(shù)項(xiàng)；X0代表拐點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的飼糧銅水平，即為黃羽肉雞銅需要量）與單斜率折線性方程（Y＝A2X＋B2，X＜X0；Y＝A2X0＋B2，X≥X0。式中：Y代表血清或肝臟CuZnSOD活性；X代表飼糧銅水平；A2代表斜率；B2代表截距；X0代表拐點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的飼糧銅水平，即為黃羽肉雞銅需要量）。本試驗(yàn)研究表明，總體上試雞血清中CuZnSOD活性隨飼糧銅水平升高呈線性上升變化（P＜0．05），但上升變化主要集中在2．80～10．80 mg／kg銅水平，而18．80～64．80 mg／kg銅水平可視為平臺(tái)期。非線性回歸模型建立飼糧銅水平與血清中CuZnSOD活性之間的二次曲線方程（方程1）和單斜率折線方程（方程2），其中X代表飼糧銅水平，Y代表血清CuZnSO活性。方程1：Y＝72．2423＋3．1441X－0．0808X2，X＜19．46；Y＝ 93．839，X≥19．46（R2＝0．954 2，P＝0．009 8）。方程2：Y＝74．797 7＋2．092 5X，X＜13．38；Y＝102．8，X≥13．38（R2＝0．965 3，P＝0．006 4）。但是肝臟CuZnSOD活性擬合的結(jié)果是差異不顯著（P＞0．05）（表3）。

表5　飼糧銅添加水平對(duì)21日齡黃羽肉雞血清、肝臟抗氧化指標(biāo)的影響Table 5 Effects of dietary copper supplemental level on antioxidant indexes in serum and liver of yellow?feathered broilers at 21 days of age

CP活性、血清銅含量、法氏囊指數(shù)數(shù)據(jù)分布初步符合Coma等［14］二次曲線和Robbins等［13］分段線性回歸的方法的描述的分布，運(yùn)用SAS軟件的REG和NLIN程序分別建立二次曲線方程｛Y＝A3X2＋B3X＋C3。式中：Y代表血清CP活性或血清銅含量或法氏囊指數(shù)；X代表飼糧銅水平；A3和B3分別代表方程二次項(xiàng)和一次項(xiàng)的系數(shù)；C3代表方程的常數(shù)項(xiàng)；二次曲線的最高點(diǎn)對(duì)應(yīng)的橫坐標(biāo)乘以矯正系數(shù)［即（－B3／2A3）×矯正系數(shù)］即為飼糧銅最適水平｝、雙斜率折線方程［Y＝L＋U×（XX0），X＜X0；Y＝L＋V×（X0－X），X≥X0。式中：Y代表血清CP活性或血清銅含量或法氏囊指數(shù)；X代表飼糧銅水平；L代表拐點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的縱坐標(biāo)值，即血清CP活性或血清銅含量或法氏囊指數(shù)；X0代表拐點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的橫坐標(biāo)即飼糧適宜銅需要量；U代表X＜X0時(shí)的斜率；V代表X≥X0時(shí)的斜率］。但是程序運(yùn)行結(jié)果顯示血清CP活性或血清銅含量或法氏囊指數(shù)擬合結(jié)果差異都不顯著（P＞0．05）（表3、表4、表5），說明不適合用這2種曲線估測(cè)銅需要量。

3　討 論

3．1 飼糧銅添加水平對(duì)1～21日齡黃羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響

大量研究表明，飼糧中添加適宜的銅水平可以提高采食量、平均日增重和降低肉雞料重比［4，9，15－16］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在0～32 mg／kg銅添加范圍內(nèi)，添加4 mg／kg銅時(shí)能顯著肉雞平均日采食量，這也與前面研究的結(jié)論一致。但是當(dāng)飼糧添加銅水平為64 mg／kg（總銅水平66．8 mg／kg）時(shí)，肉雞的平均日采食量也顯著提高。有研究表明，飼糧高銅通過刺激神經(jīng)膚激素從豬下丘腦的分泌，進(jìn)而引起豬采食量增加［17－18］，并且雞與哺乳動(dòng)物一樣，禽類腦部也含有神經(jīng)肽Y（neuro peptide Y，NPY）［19］，因此64 mg／kg銅能促進(jìn)肉雞平均日采食量增加，可能是因?yàn)?4 mg／kg銅屬于高劑量范圍，能夠刺激神經(jīng)肽Y的分泌，從而提高了平均日采食量。但是飼糧銅水平對(duì)平均日增重和料重比無顯著影響，且肉雞在試驗(yàn)期間生長(zhǎng)和健康狀況正常，說明基礎(chǔ)飼糧中銅的含量（2．80 mg／kg）在該試驗(yàn)條件下能滿足肉雞生長(zhǎng)。但是由于小雞孵化過程后要繼續(xù)吸收卵黃囊中含有的營(yíng)養(yǎng)，并且動(dòng)物在低銅條件下肝臟對(duì)銅等有蓄積作用［20］，故雞在低銅條件下可能加強(qiáng)了對(duì)母源銅有蓄積作用，這種母源銅和飼糧中銅含量，保證了即使在低銅條件下也能滿足雞銅的需要，但是其機(jī)理還需要進(jìn)一步研究，因此低銅條件下小雞自身儲(chǔ)存銅耗竭的研究以及種雞飼糧銅添加水平對(duì)小雞銅需要量的影響是下一步研究的重點(diǎn)。

3．2 飼糧銅添加水平對(duì)1～21日齡黃羽肉雞免疫器官發(fā)育的影響

研究表明，飼糧銅含量在一定范圍內(nèi)能夠促進(jìn)雛雞法氏囊的發(fā)育，但是銅含量過高則不同程度地抑制了雛雞法氏囊的發(fā)育，導(dǎo)致雛雞體液免疫功能受損［21］，并且低銅或高銅可使肉雞胸腺、脾臟和法氏囊不同程度地萎縮，從而影響細(xì)胞免疫和體液免疫［22］。本試驗(yàn)研究表明，飼糧添加銅對(duì)脾臟和胸腺指數(shù)沒有顯著影響，但是8 mg／kg銅水平下法氏囊指數(shù)顯著增加，說明此銅水平能促進(jìn)肉雞法氏囊的早期生長(zhǎng)發(fā)育，這與上述的研究飼糧銅在一定范圍內(nèi)促進(jìn)法氏囊發(fā)育一致，而對(duì)脾臟和胸腺發(fā)育無影響，但是具體機(jī)理需要進(jìn)一步研究。

3．3 飼糧銅添加水平對(duì)1～21日齡黃羽肉雞血清、肝臟銅含量的影響

研究表明，隨著飼糧中銅水平的升高，血清中銅的含量增高［23－26］。但是本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著飼糧中銅水平的升高，血清中銅的含量卻顯著降低。有研究表明，肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中合成的脫銅CP與吸收肝臟中的銅離子結(jié)合形成血漿CP，隨后被分泌入血漿，生成銅離子［7，27］，并且血漿中銅離子主要是由血漿中75%～95%銅以非擴(kuò)散狀態(tài)儲(chǔ)存于CP中，而5%呈可透析狀態(tài)通過腸黏膜絨毛頂端的轉(zhuǎn)移（載體）是將銅從腸腔轉(zhuǎn)移到腸黏膜表層細(xì)胞內(nèi)然后再通過載體運(yùn)輸?shù)礁闻K的，在肝臟中摻入CP后經(jīng)唾液酸結(jié)合，最后釋入血液循環(huán)［7，28］。并且研究表明進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的銅和細(xì)胞銅蛋白遍布各細(xì)胞器和胞液，25%～50%銅分布于胞液，其中還原型谷胱甘肽（GSH）將銅運(yùn)輸?shù)讲煌?xì)胞器及新合成的超氧化物歧化酶（SOD）、MT和CP儲(chǔ)存在細(xì)胞中［28］。因此，在肝中的銅也主要是以游離銅、銅蛋白的形式儲(chǔ)存在肝細(xì)胞中。本試驗(yàn)研究結(jié)果可知，飼糧銅的添加水平超過16 mg／kg后CP顯著降低，由于飼糧銅添加水平對(duì)肝臟銅含量差異不顯著，所以血漿中CP可能和血清銅含量有一定聯(lián)系；并且飼糧銅水平達(dá)到16 mg／kg時(shí)血清銅確實(shí)顯著降低，證實(shí)了以上推論，但是具體機(jī)理還需要進(jìn)一步研究論證。

肝臟是體內(nèi)銅的重要貯存和代謝器官，肝臟銅離子含量能反映體內(nèi)銅的狀態(tài)［2，24，29］。研究表明隨飼糧銅水平提高，肝臟銅離子含量增加［2，29－31］，但是本試驗(yàn)結(jié)果表明隨著飼料銅水平的提高，肝臟銅離子含量并不增加。也有研究表明，臨界缺乏的低銅狀態(tài)下機(jī)體能通過加強(qiáng)肝臟銅離子的蓄積以平衡或滿足銅的需要［20］，在高銅條件下，肝臟銅離子的蓄積量在達(dá)到飽和之前時(shí)一定劑量和時(shí)間范圍內(nèi)的飼糧高銅能有效地促進(jìn)肝臟銅離子的蓄積，使肝臟對(duì)銅的蓄積量都保持在動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)［31－32］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧銅水平對(duì)肝臟銅離子含量差異不顯著，只有當(dāng)肝臟銅離子的蓄積量達(dá)到飽和時(shí)，繼續(xù)增加飼糧銅含量則導(dǎo)致肝臟銅離子迅速大量地釋放；因此說明黃羽肉雞在肝臟銅離子的蓄積量在未達(dá)到飽和時(shí)，肝臟銅離子可能處于動(dòng)態(tài)平衡中，肝臟銅離子含量始終未變，其中具體的機(jī)理還需要進(jìn)一步研究與驗(yàn)證。

3．4 飼糧銅添加水平對(duì)1～21日齡黃羽肉雞抗氧化性能的影響

銅的生理功能之一是抗氧化作用，銅能參與到抗氧化防御系統(tǒng)中，影響自由基和改變抗氧化酶與底物的狀態(tài)，銅嚴(yán)重缺乏或過量都會(huì)引起病變，包括許多血漿和組織中含銅酶活性等生化指標(biāo)的顯著變化［33］。

CuZnSOD是最常見的抗氧化酶之一，也是機(jī)體內(nèi)超氧自由基的主要清除劑，對(duì)于維持生物膜的完整性、機(jī)體免疫功能、動(dòng)物健康都有非常重要的作用。在調(diào)節(jié)CuZnSOD活性中銅較鋅起著更主要的作用，銅作為CuZnSOD的輔助因子。Dameron等［34］報(bào)道幼年生長(zhǎng)動(dòng)物主動(dòng)脈中的CuZnSOD活性受到飼糧中銅水平的調(diào)節(jié)，當(dāng)動(dòng)物飼糧缺銅時(shí)，可降低其許多組織中CuZnSOD的活性［35］，并且CuZnSOD活性隨飼糧銅水平的升高顯著提高［36］。本研究飼糧添加不同水平銅顯著提高了血清和肝臟里CuZnSOD的活性，這與上述結(jié)果一致。

CP可作為超氧陰離子的清除劑，能抑制通過黃嘌呤氧化酶調(diào)節(jié)的正鐵細(xì)胞色素C的還原作用，以減少此過程中誘發(fā)的超氧陰離子自由基的生成，具有類似CuZnSOD的作用［37］，CP主要由肝臟合成，然后隨血液循環(huán)在身體各處發(fā)揮作用［38］。許多研究所證實(shí)，飼料中添加銅可提高CP的活性［39－40］；但也有研究表明CP活性隨飼糧銅水平的增加而升高，但當(dāng)飼糧銅達(dá)到一定水平（過量）時(shí)，CP活性顯著下降［41－44］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，隨著飼糧中銅水平升高未出現(xiàn)銅CP的活性顯著升高的情況，反而在達(dá)到銅水平達(dá)到18．74 mg／kg后CP活性顯著下降，說明可能銅已經(jīng)過量，這也與何霆等［45］的研究結(jié)果一致，但是具體的機(jī)理還需要進(jìn)一步研究與驗(yàn)證。

MT在體內(nèi)主要與銅和鋅結(jié)合，組織中MT含量受鋅和銅狀態(tài)的影響，當(dāng)鋅水平穩(wěn)定時(shí)，銅的攝取速度超過了細(xì)胞內(nèi)銅的清除能力而發(fā)生銅沉積時(shí)，將誘導(dǎo)大量MT合成，而銅缺乏時(shí)，肝臟MT的代謝也會(huì)發(fā)生改變［46］。本試驗(yàn)研究表明，飼糧不同水平銅對(duì)試雞肝臟中MT的含量無顯著影響，這可能是由于動(dòng)物機(jī)體內(nèi)銅攝取速度和細(xì)胞內(nèi)銅的清除能力能保持了動(dòng)態(tài)平衡［47］，從而使肝臟中的MT含量沒有顯著變化，但是具體的機(jī)理還需要進(jìn)一步研究與驗(yàn)證。

MDA是脂質(zhì)過氧化降解的主要產(chǎn)物，其含量反映了體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的氧化程度及細(xì)胞受自由基攻擊的程度。測(cè)定MDA的含量可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化強(qiáng)弱，間接反映機(jī)體氧化損傷的程度［48－49］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中不同水平的銅對(duì)血清和肝臟中MDA含量也無顯著影響，說明血清和肝臟中的脂質(zhì)過氧化物的生成量在該銅水平范圍內(nèi)較穩(wěn)定。

3．5 黃羽肉雞銅需要量的探討

研究畜禽營(yíng)養(yǎng)素需要量的方法多種多樣，傳統(tǒng)營(yíng)養(yǎng)學(xué)上常采用劑量反應(yīng)法研究畜禽營(yíng)養(yǎng)素需要量，但隨著統(tǒng)計(jì)知識(shí)和SAS軟件的開發(fā)應(yīng)用，越來越多的學(xué)者采用建立合適的數(shù)學(xué)模型的方法來描述和預(yù)測(cè)畜禽對(duì)營(yíng)養(yǎng)素的需要量和反映［12－14］。評(píng)定營(yíng)養(yǎng)需要量的時(shí)，隨著飼糧銅水平的增加，反映指標(biāo)要達(dá)到一個(gè)平臺(tái)期，即不再有顯著意義上的增加或降低［50］。根據(jù)這一定義，本試驗(yàn)適宜評(píng)價(jià)銅營(yíng)養(yǎng)需要量的指標(biāo)為血清和肝臟中CuZnSOD活性和血清CP活性。本試驗(yàn)通過方差分析、多重比較的結(jié)果，以平均日采食量、血清和肝臟中CuZnSOD活性適宜作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，1～21日齡黃羽肉公雞銅需要量分別為6．80和10．80 mg／kg；根據(jù)擬合結(jié)果可知，血清CuZnSOD活性的單斜率折線方程的回歸系數(shù)R2大于方程2的R2，說明方程2擬合度優(yōu)于方程1，即飼糧銅水平低于13．38 mg／kg時(shí)，血清中CuZnSOD活性隨銅水平升高而升高，飼糧中銅水平為13．38 mg／kg時(shí)，試雞血清中CuZnSOD活性達(dá)到平臺(tái)期，即1～21日齡試雞銅需要量為13．38 mg／kg。

國(guó)內(nèi)外有關(guān)肉雞的銅需要量的大部分接近于NRC（1994）［2］和《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY／T 33—2004）［1］的推薦量（8 mg／kg），《美國(guó)飼料周刊》（Feedstuffs）的推薦標(biāo)準(zhǔn)是11 mg／kg［3］。從本試驗(yàn)結(jié)果來看，1～21日齡黃羽肉雞獲得最佳生長(zhǎng)性能和免疫器官發(fā)育、抗氧化功能的銅需要量為10．80 mg／kg，通過非線性回歸模型以血清中CuZnSOD活性估測(cè)的飼糧銅需要量分別為13．38 mg／kg，都高于NRC（1994）和黃羽肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（2004）的推薦量（8 mg／kg）；有研究表明，黑色素和褐色素的相對(duì)數(shù)量與分布決定了動(dòng)物被毛表現(xiàn)出從白至黑多種毛色［51］，其中起最重要作用的就是酪氨酸酶，銅含量的多少直接影響酪氨酸酶的活性，并且酪氨酸酶能氧化酪氨酸形成黑色素和形成褐色素的前體物質(zhì)，進(jìn)而影響毛色［52－53］；由于黃羽肉雞羽毛比白羽肉雞羽毛色素沉積更多，這就有可能需要更多的酪氨酸酶，所以可能就表現(xiàn)出黃羽肉雞比白羽肉雞銅需要量高；其次NRC選用以生產(chǎn)性能為評(píng)價(jià)指標(biāo)，而本試驗(yàn)以生產(chǎn)性能和抗氧化性能為評(píng)價(jià)指標(biāo)；這種評(píng)判指標(biāo)不同也能造成需要量差異。正是由于這種雞的品種和評(píng)價(jià)指標(biāo)不同，才產(chǎn)生了本研究高于NRC （1994）［2］和《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY／T 33—2004）［1］的推薦量（8 mg／kg）的結(jié)果；但是具體機(jī)理還需要進(jìn)一步研究。因此，生產(chǎn)中應(yīng)根據(jù)雞的品種和評(píng)判指標(biāo)對(duì)肉雞銅添加水平做適當(dāng)調(diào)整。

4　結(jié) 論

①飼糧中添加適宜水平的銅可改善1～21日齡黃羽肉雞采食量、提高抗氧化性能、免疫器官發(fā)育。

②在本試驗(yàn)條件下，以生長(zhǎng)性能和抗氧化性能為評(píng)定指標(biāo)，1～21日齡快大型黃羽肉雞銅需要量為10．80 mg／kg；而通過非線性回歸模型以血清中CuZnSOD活性估測(cè)的銅需要量為13．38 mg／kg。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部．NY／T 33—2004雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)［S］．北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2004．

［2］ NRC．Nutrient requirements of poultry［S］．9th ed．Washington，D．C．：National Academy Press，1994．

［3］ WALDROUP P W．Dietary nutrient allowances for chickens and turkeys［J］．Feedstuffs，1990，62（31）：74－82．

［4］ 周桂蓮，韓友文，杜忠亮．肉仔雞銅需要量的研究［J］．動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，1996，8（4）：6－14．

［5］ 古少鵬，鄭明學(xué)，李寶鈞，等．銅和維生素A及其互作效應(yīng)對(duì)肉雞免疫功能的影響［J］．中國(guó)生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2011，19（1）：135－140．

［6］ 李紅雪，呂林，計(jì)成，等．不同銅源和銅水平對(duì)肉仔雞前期生長(zhǎng)性能和組織中維生素E氧化穩(wěn)定性的影響［J］．中國(guó)畜牧雜志，2010，46（17）：58－61．

［7］ AJUWON O R，IDOWU O M O，AFOLABI S A，et al．The effects of dietary copper supplementation on oxidative and antioxidant systems in broiler chickens ［J］．Archivos de Zootecnia，2011，60（230）：275－282．

［8］ 姜云霞．微量元素銅的研究進(jìn)展及其對(duì)動(dòng)物健康的影響［J］．微量元素與健康研究，2007，24（5）：58－61．

［9］ 呂武興．肉仔雞微量礦物元素營(yíng)養(yǎng)研究進(jìn)展［J］．湖南畜牧獸醫(yī)，2004（2）：1－3．

［10］ OKONKWO A C，KU P K，MILLER E R，et al．Cop?per requirement of baby pigs fed purified diets［J］．The Journal of Nutrition，1979，109（6）：939－948．

［11］ CAO J，HENRY P R，GUO R，et al．Chemical charac?teristics and relative bioavailability of supplemental or?ganic zinc sources for poultry and ruminants［J］．Jour?nal of Animal Science，2000，78（8）：2039－2054．

［12］ BAKER D H，KATZ R S，EASTER R A．Lysine re?quirement of growing pigs at two levels of dietary pro?tein［J］．Journal of Animal Science，1975，40（5）：851－856．

［13］ ROBBINS K R，SAXTON A M，SOUTHERN L．Esti?mation of nutrient requirements using broken?line re?gression analysis［J］．Journal of Animal Science，2006，84（13S）：E155－E165．

［14］ COMA J，CARRION D，ZIMMERMAN D R．Use of plasma urea nitrogen as a rapid response criterion to determine the lysine requirement of pigs［J］．Journal of Animal Science，1995，73（2）：472－481．

［15］ 常新耀，王翠．日糧中添加銅對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能的影響［J］．飼料工業(yè)，2007，28（20）：39－41．

［16］ 張春善，高林青，宋金昌，等．銅和維生素A及互作效應(yīng)對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能及理化指標(biāo)的影響［J］．畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2006，37（9）：940－945．

［17］ 顧有方．日糧高銅可提高豬的采食量［J］．國(guó)外畜牧科技，1995，22（2）：18－19．

［18］ PAU K Y F，KHORRAM O，KAYNARD A H，et al．Simultaneous induction of neuropeptide Y and gona?dotropin?releasing hormone release in the rabbit hypo?thalamus［J］．Neuroendocrinology，1989，49（2）：197－201．

［19］ 黃金秀，呂林，張億一，等．禽類采食量生理調(diào)節(jié)因子的研究進(jìn)展［J］．動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2006，18（增刊）：353－360．

［20］ 劉選珍，李鳴，黃承鈺，等．大鼠銅營(yíng)養(yǎng)狀況生化評(píng)價(jià)指標(biāo)的篩選［J］．衛(wèi)生研究，2007，36（3）：385－386．

［21］ 徐之勇，崔恒敏，彭西，等．日糧高銅對(duì)雛雞法氏囊影響的研究［J］．畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2008，39（5）：658－664．

［22］ 趙德明，方文軍，張日俊，等．銅缺乏對(duì)肉雞淋巴組織器官發(fā)育的影響［J］．中國(guó)獸醫(yī)科技，1996，26（6）：13－14．

［23］ 張?zhí)K江，劉國(guó)文，王哲．飼料銅水平對(duì)生長(zhǎng)豬血清銅、血清鋅和血清鐵的影響［J］．畜牧獸醫(yī)雜志，2003，22（1）：1－3．

［24］ 王明根，張明，徐濟(jì)梅，等．日糧中添加銅對(duì)小鼠血清和肝臟中銅、鋅、錳的影響［J］．安徽技術(shù)師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，19（1）：8－10．

［25］ 王建明，孫奕南，謝璋琪．生長(zhǎng)豬飼料添加中等劑量銅的可能性探討［J］．廣東飼料，1999（3）：17－18．

［26］ 錢莘莘，梅光芝，郭萍，等．生長(zhǎng)肥育豬日糧中添加高銅和超高銅對(duì)其肉、肝中銅元素的影響［J］．飼料工業(yè)，1997，18（7）：10－11．

［27］ SONG Z J，ZHU L X，ZHAO T，et al．Effect of copper on plasma ceruloplasmin and antioxidant ability in broiler chickens challenged by lipopolysaccharide［J］．Asian?Australasian Journal of Animal Sciences，2009，22（10）：1400－1406．

［28］ CARRI M T，GALIAZZO F，CIRIOLO M R，et al．Ev?idence for co?regulation of Cu，Zn superoxide dis?mutase and metallothionein gene expression in yeast through transcriptional control by copper via the ACE 1 factor［J］．FEBS Letters，1991，278（2）：263－266．

［29］ 張力，柳樹青．日糧不同銅水平對(duì)生長(zhǎng)豬組織器官礦物元素和血液生化指標(biāo)的影響［J］．福建農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1994，23（2）：196－198．

［30］ 錢劍，王哲，劉國(guó)文．銅在動(dòng)物體內(nèi)代謝的研究進(jìn)展［J］．動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2003，24（2）：55－57．

［31］ 王學(xué)智，楊志強(qiáng)，馬偉，等．小白鼠肝臟微量元素與日糧銅含量變化的動(dòng)態(tài)關(guān)系研究［J］．中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2002（3）：12－14．

［32］ 羅文麗，陳代文，余冰，等．不同銅源對(duì)大鼠生長(zhǎng)性能及組織中銅含量和血清中抗氧化酶活性的影響［J］．中國(guó)畜牧雜志，2009，45（23）：26－29．

［33］ PROHASKA J R．Responses of rat cuproenzymes to variable dietary copper［J］．The Journal of Nutritional Biochemistry，1997，8（6）：316－321．

［34］ DAMERON C T，HARRIS E D．Regulation of aortic CuZn?superoxide dismutase with copper．Caeruloplas?min and albumin reactivate and transfer copper to the enzyme in culture［J］．Biochemical Journal，1987，248 （3）：669－675．

［35］ KLEVAY L M，SAARI J T．Comparative responses of rats to different copper intakes and modes of supple?mentation［C］／／Proceedings of the Society for Exper?imental Biology and Medicine：Society for Experimen?tal Biology and Medicine．New York：Royal Society of Medicine，1993，203（2）：214－220．

［36］ 張?zhí)K江，張光圣，王哲，等．豬飼料銅水平對(duì)血清酶活性的影響［J］．動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)，2002，19（8）：16－19．

［37］ 季紅光，王恩美，謝天培．缺銅對(duì)大鼠自由基防御系統(tǒng)酶組分和血清溶血素的影響［J］．營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，1990，12（2）：146－157．

［38］ 常彥忠，錢忠明．銅藍(lán)蛋白與腦鐵代謝［J］．生理科學(xué)進(jìn)展，2002，33（2）：101－105．

［39］ LAURIDSEN C，H?JSGAARD S，S?RENSEN M T． Influence of dietary rapeseed oil，vitamin E，and cop?per on the performance and the antioxidative and oxi?dative status of pigs［J］．Journal of Animal Science，1999，77（4）：906－916．

［40］ HILL G M，LINK J E，MEYER L，et al．Effect of vita?min E and selenium on iron utilization in neonatal pigs ［J］．Journal of Animal Science，1999，77（7）：1762－1768．

［41］ 張彩英，胡國(guó)良，曹華斌，等．飼糧銅添加水平對(duì)育成蛋雞免疫功能和抗氧化酶活性的影響［J］．動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2011，23（1）：154－161．

［42］ 趙麗，楊帆，彭西，等．高銅對(duì)雛鴨抗氧化酶活性的影響［J］．中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2009，29（2）：210－213．

［43］ TURNLUND J R，DOMEK J M，NAIR P P，et al．Copper retention in intestinal mucosal cells of young men at normal and high copper intakes［J］．The Jour?nal of Trace Elements in Experimental Medicine，2003，16（2／3）：105－108．

［44］ 姜俊芳，張春善，賈春燕，等．鐵與維生素A及其互作效應(yīng)對(duì)肉仔雞的生產(chǎn)性能、鐵、銅、錳、鋅表觀存留率的影響［J］．動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2003，15（1）：31－37．

［45］ 何霆，劉漢林，梁琳，等．肉用仔雞的飼糧銅水平［J］．廣東畜牧獸醫(yī)科技，1994，19（2）：1－3，18．

［46］ 劉選珍．大鼠銅缺乏和過量敏感指標(biāo)篩選及銅鋅生物效應(yīng)［D］．博士學(xué)位論文．成都：四川大學(xué)，2007．

［47］ COUSINS R J．Absorption，transport，and hepatic me?tabolism of copper and zinc：special reference to met?allothionein and ceruloplasmin［J］．Physiological Re?views，1985，65（2）：238－309．

［48］ CLIMKO R P，ROEHRICH H，SWEENEY D R，et al．Ecstacy：a review of MDMA and MDA［J］．The Inter?national Journal of Psychiatry in Medicine，1986，16 （4）：359－372．

［49］ 胡鍇，任常寶，顏城，等．高銅日糧對(duì)肉雞肝臟抗氧化功能的影響［J］．中國(guó)家禽，2011，33（12）：12－15．

［50］ WEDEKIND K J，YU S，COMBS G F．The selenium requirement of the puppy［J］．Journal of Animal Phys?iology and Animal Nutrition，2004，88（9／10）：340－347．

［51］ 李影球，張國(guó)良，夏中生．營(yíng)養(yǎng)與優(yōu)質(zhì)雞羽色異常［J］．中國(guó)畜禽種業(yè)，2007，3（8）：42－44．

［52］ 李繼興．銅對(duì)卡拉庫(kù)爾羊毛色影響的研究［D］．碩士學(xué)位論文．阿拉爾：塔里木大學(xué)，2012．

［53］ 角根琴，李新榮．豬銅離子中毒和高致病性豬藍(lán)耳病的鑒別診治［J］．畜禽業(yè)，2008（7）：58－59．

（責(zé)任編輯 陳 燕）

Copper Requirement of Yellow?Feathered Broilers Aged from 1 to 21 Days

LI Long JIANG Shouqun?ZHENG Chuntian GOU Zhongyong CHEN Fang RUAN Dong YU Deqian
（The Key Laboratory of Animal Nutrition and Feed Science（South China）of Ministry of Agriculture，State Key Laboratory of Livestock and Poultry Breeding，Guangdong Public Laboratory of Animal Breeding and Nutrition，Guangdong Key Laboratory of Animal Breeding and Nutrition，Institute of Animal Science，Guangdong Academy of Agricultural Sciences，Guangzhou 510640，China）

?Corresponding author，professor，E?mail：jsqun3100＠sohu．com

Abstract：This experiment was conducted to investigate the effects of dietary copper supplemental level on growth performance，immune organ development，antioxidative property，copper content in serum and liver of yellow?feathered broilers etc．，then to estimate the dietary copper requirement of yellow?feathered broilers aged from 1 to 21 days．A total of 1 440 twenty?two days old healthy，well?developmental，fast large male Lingnan yellow?feathered broilers were randomly assigned to six groups．Each group consisted of six replicates with 40 birds per replicate．Diets of these groups included the purified basal diet supplemented with different levels of copper to ensure dietary copper levels up to 2．80（control），6．80，10．80，18．80，34．80，66．80 mg／kg，re?spectively．The contents of other nutrients in diets were consistent．The experiment lasted for 21 days．Results showed as follows：under the experiment condition，1）the average daily feed intake of broilers in 4，64 mg／kg groups were significantly higher than those in the other groups（P＜0．05），but there were no signifi?cant differences in the final weight，average daily gain，ratio of feed to gain among all groups（P＞0．05）．2）Compared with the control group，diet supplemented with 8 mg／kg copper significantly improved index of bur?sa of Fabricius（P＜0．05），but copper supplemental level did not significantly affect the spleen and thymus in?dexes（P＞0．05）．3）The CuZn?superoxide dismutase（CuZnSOD）activity in serum and liver in 8，16，32 and 64 mg／kg groups was significantly higher than that in the control group（P＜0．05）．Dietary copper supple?mental level did not significantly affect the content of malondialdehyde in serum and liver of broilers（P＞0．05）．Diet supplemented with 16，32 and 64 mg／kg copper significantly decreased the ceruloplasmin activity in serum（P＜0．05）．4）Compared with the control group，diet supplemented with 16，32 and 64 mg／kg cop?per significantly decreased the copper content in serum（P＜0．05）．But copper supplemental level had no sig?nificant effects on the contents of copper and metallothionein in liver（P＞0．05）．In conclusion，base on the growth performance，immune organ development and antioxidative property，the fitting dietary supplemental copper level of yellow?feathered broilers aged from 1 to 21 days is 8 mg／kg，base of 2．80 mg／kg of the copper content in the basal diet，copper requirement of yellow?feathered broilers at this phase is 10．80 mg／kg．Base on the estimated result by nonlinear regression analysis，the copper requirement of yellow?feather broilers aged from 1 to 21 days is 13．38 mg／kg．［Chinese Journal of Animal Nutrition，2015，27（2）：578?587］

Key words：yellow?feathered broilers；copper；requirement；growth performance；antioxidative property