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    不同基因型的鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性及體外黏附能力差異的研究

    2016-01-18 01:21:22王俊瑞崔晶花杜小莉楊麗敏魏常梅張軍力
    檢驗(yàn)醫(yī)學(xué) 2015年5期
    關(guān)鍵詞:鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性

    塔 拉, 王俊瑞, 崔晶花, 杜小莉, 楊麗敏, 孫 鵬, 魏常梅, 張軍力

    不同基因型的鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性及體外黏附能力差異的研究

    塔拉1,王俊瑞2,崔晶花3,杜小莉3,楊麗敏4,孫鵬4,魏常梅1,張軍力2

    (1. 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué),內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110;

    2. 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010050;

    3. 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所, 北京 102206;

    4. 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)研究中心,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010059)

    摘要:目的對(duì)不同基因型鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥特征及體外黏附能力進(jìn)行分析,為進(jìn)一步闡明鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性變遷與其黏附能力變化之間的相關(guān)性及指導(dǎo)鮑曼不動(dòng)桿菌感染防控和治療提供試驗(yàn)依據(jù)。方法采用脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)對(duì)從內(nèi)蒙古不同地區(qū)住院患者體內(nèi)分離的具有不同耐藥性的50株鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行分子分型;采用纖維黏連蛋白黏附試驗(yàn)對(duì)不同基因型分離株的體外黏附能力進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果50株鮑曼不動(dòng)桿菌共分為22個(gè)PFGE基因型,其中A和E型為優(yōu)勢(shì)型,分別占22%(11/50)和24%(12/50);L型對(duì)所有受試的抗菌藥物均耐藥,其余基因型耐藥表型差異明顯。從地區(qū)分布來看,A型主要分布在興安盟和赤峰市2個(gè)地區(qū),而E型則分布在呼和浩特地區(qū)。體外黏附能力最強(qiáng)的菌株屬于G型和J型,其中J型對(duì)所有抗菌藥物均敏感;黏附能力最弱的菌株為D型,僅對(duì)碳青霉烯類藥物敏感。結(jié)論內(nèi)蒙古地區(qū)鮑曼不動(dòng)桿菌的基因型呈現(xiàn)多樣性,具有明顯的地域分布特征,特定基因型菌株具有相同或相近的耐藥特征。鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性的增加與其體外黏附能力未見明顯相關(guān)性。

    關(guān)鍵詞:鮑曼不動(dòng)桿菌;耐藥性;脈沖場(chǎng)凝膠電泳;分子分型;體外黏附能力

    Study on the drug resistance and in vitro adhesion ability difference ofAcinetobacterbaumanniiwith different genotypesTALa1,WANGJunrui2,CUIJinghua3,DUXiaoli3,YANGLimin4,SUNPeng4,WEIChangmei1,ZHANGJunli2

    .(1.InnerMongoliaMedicalUniversity,InnerMongoliaHohhot010110,China; 2.DepartmentofClinicalLaboratory,theAffiliatedHospitalofInnerMongoliaMedicalUniversity,InnerMongoliaHohhot010050,China; 3.NationalInstituteforCommunicableDiseaseControlandPrevention,ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention,Beijing102206,China; 4.PathogenicMicrobeResearchCenter,InnerMongoliaMedicalUniversity,InnerMongoliaHohhot010059,China)

    Abstract:ObjectiveTo analyze the drug resistance characteristics and in vitro adhesion abilities of Acinetobacter baumannii with different genotypes, to provide the reference for further study on the relationship between the evolution of drug resistance of Acinetobacter baumannii and its adhesion ability change, and to guide infection prevention and control. MethodsPulsed field gel electrophoresis(PFGE) was used to do molecular typing for 50 isolates of Acinetobacter baumannii from different inpatients in Inner Mongolia. In vitro adhesion abilities of Acinetobacter baumannii with different genotypes were detected by fibronectin adherence assay. ResultsThe 50 isolates had 22 PFGE genotypes, among which A and E types were the advantageous types, and the rates were 22%(11/50)and 24%(12/50), while the isolates with L type were resistant to all tested antibiotics, and the drug resistance of the isolates belonging to the remaining genotypes were significantly different. The isolates of A type were mainly isolated from 2 regions, Xing′an Meng and Chifeng City. The isolates of E type were all isolated from Hohhot. Fibronectin adherence assay showed that the isolates with G type and J type showed the highest in vitro adhesion ability, while the isolates with J type were sensitive to all tested antibiotics, and the isolates with D type showed the lowest in vitro adhesion ability, only being resistant to carbapenem. ConclusionsThe genotypes of Acinetobacter baumannii isolated from Inner Mongolia show diverse features, which seems to be specific with different districts. There is no significant correlation between the drug resistance acceleration of Acinetobacter baumannii and its in vitro adhesion abilities.

    Key words:Acinetobacter baumannii; Drug resistance; Pulsed field gel electrophoresis; Molecular typing; In vitro adhesion ability

    鮑曼不動(dòng)桿菌是一種非發(fā)酵糖、氧化酶陰性、無(wú)動(dòng)力的革蘭陰性桿菌,廣泛分布于自然界、醫(yī)院環(huán)境等,是引起醫(yī)院感染的一種重要的條件致病菌。近年,我國(guó)住院患者中鮑曼不動(dòng)桿菌的分離率和耐藥率均呈逐年上升趨勢(shì),對(duì)碳青霉烯類抗菌藥物的耐藥率達(dá)57%以上[1]。新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶(New Delhi metallo-beta lactamase 1, NDM-1)超級(jí)耐藥細(xì)菌的出現(xiàn)[2],使各國(guó)醫(yī)療機(jī)構(gòu)對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性及其致醫(yī)院感染的重視程度進(jìn)一步增強(qiáng)。但耐藥性不斷增加的同時(shí),鮑曼不動(dòng)桿菌致病力是否相應(yīng)增加尚不明確。鮑曼不動(dòng)桿菌致病力的強(qiáng)弱不僅與宿主易感性相關(guān),還與其侵襲力密切相關(guān)。作為鮑曼不動(dòng)桿菌侵襲宿主的第一步,黏附能力的強(qiáng)弱決定其后續(xù)的生物膜形成、侵入宿主細(xì)胞等致病過程[3]。但針對(duì)不同鮑曼不動(dòng)桿菌體外黏附等致病特征與其耐藥性之間的相關(guān)性研究報(bào)道甚少。因此,本研究擬以內(nèi)蒙古不同地區(qū)住院患者分離的鮑曼不動(dòng)桿菌為研究對(duì)象,采用脈沖場(chǎng)凝膠電泳(pulsed field gel electrophoresis, PFGE)進(jìn)行分子分型,分析不同地區(qū)分離株基因型及耐藥特征是否呈現(xiàn)特征性分布;同步采用體外黏附試驗(yàn)檢測(cè)不同基因型鮑曼不動(dòng)桿菌體外黏附能力的變化,分析不同耐藥表型分離株體外黏附能力是否存在差異,為更好地防控和治療多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌醫(yī)院內(nèi)感染提供新的試驗(yàn)數(shù)據(jù)和思路。

    材料和方法

    一、菌株來源

    收集2011年11月至2013年10月從臨床標(biāo)本中分離的鮑曼不動(dòng)桿菌50株,其中來自分泌物24株、痰液9株、膿液8株、尿液4株、血液3株、肺泡灌洗液1株、咽拭子1株。地區(qū)分布為內(nèi)蒙古中部呼和浩特市22株,東部赤峰市9株,東北部呼倫貝爾市11株、興安盟8株。所有入選菌株均經(jīng)VITEK-2 Compact 全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)進(jìn)行重新鑒定。

    二、主要試劑

    PFGE使用膠為SeaKem@Gold Agarose低熔點(diǎn)瓊脂糖膠(Bio-Rad公司,美國(guó));細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒購(gòu)自天根生化科技(北京)有限公司;革蘭陰性菌鑒定卡(GN Card)及革蘭陰性細(xì)菌藥物敏感性卡片(AST-GN16 Card)購(gòu)自法國(guó)生物梅里埃公司。

    三、主要儀器

    VITEK-2 Compact全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)為法國(guó)生物梅里埃公司產(chǎn)品。PFGE儀為美國(guó)伯樂Bio-rad CHEF DRⅢ,凝膠成像系統(tǒng)為美國(guó)伯樂Bio-rad Gel Doc XR,PFGE圖譜分析軟件采用BioNumerics V 5.1版本。

    四、方法

    1. 細(xì)菌鑒定及藥物敏感性試驗(yàn)將收集的菌株接種于麥康凱平板上,37℃培養(yǎng)18~24 h,采用VITEK-2全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)進(jìn)行再次鑒定??咕幬锞捎酶锾m陰性菌藥物敏感性卡片(VITEK-2 AST-GN16卡)進(jìn)行檢測(cè)。藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)2013版本M100-S23文件進(jìn)行判定,質(zhì)控菌株為大腸埃希菌(ATCC 25922)。

    2. PFGE分型菌株復(fù)活后, 挑取新鮮單個(gè)菌落接種至LB培養(yǎng)基中,37℃孵育18~24 h,刮取適量細(xì)菌,懸濁于細(xì)胞菌懸液中。調(diào)整細(xì)胞懸液濃度,用比濁儀(bioMerieux Vitek colorimeter)測(cè)其濃度至4.0~4.5麥?zhǔn)蠁挝弧H?00 μL菌懸液和20 μL蛋白酶K(儲(chǔ)存液濃度為20 mg/mL)37℃水浴中孵育后與等體積的1%Seakem Gold混合制膠。用細(xì)胞裂解液和蛋白酶K進(jìn)行細(xì)菌的裂解,再用水和三羥甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸緩沖液沖洗膠塊。切膠,酶切(ApaⅠ,TAKARA),37℃水浴4 h。電泳參數(shù)為138 mA,脈沖時(shí)間為5~40 s,電泳時(shí)間18 h。電泳結(jié)束后用GelRed染劑染色,然后進(jìn)行凝膠成像系統(tǒng)觀察并拍照。

    3. 纖維黏連蛋白黏附試驗(yàn)試驗(yàn)前1天用人纖維黏連蛋白10 μg/mL包被96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,4℃過夜孵育,經(jīng)磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer solution, PBS)(牛血清白蛋白1%)洗滌2次,再取牛血清白蛋白溶液125 μL 37℃封閉1 h,經(jīng)PBS洗滌3次。將待檢鮑曼不動(dòng)桿菌常規(guī)接種于羊血瓊脂培養(yǎng)基,37℃孵育過夜,重懸于PBS中,調(diào)整濃度至1麥?zhǔn)蠁挝?。?2.5 μL菌懸液和等量PBS混合,加入包被的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,37℃孵育2 h,經(jīng)PBS洗滌4次去除未黏附細(xì)菌,之后加入0.5% Triton X-100,室溫30 min,取1 μL接種麥康凱培養(yǎng)基,37℃孵育24~48 h,人工計(jì)數(shù)細(xì)菌菌落,以細(xì)菌菌落數(shù)的多少反映每株鮑曼不動(dòng)桿菌黏附能力的強(qiáng)弱。

    結(jié)果

    一、體外藥物敏感性試驗(yàn)

    50株鮑曼不動(dòng)桿菌體外藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果見表1。

    二、PFGE分型

    PFGE后,經(jīng)ApaⅠ酶切,按照相似度90%分為22種基因型和29種亞型:A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V。A和E型為優(yōu)勢(shì)帶型,分別占22%(11/50)和24%(12/50);L型對(duì)所有受試的抗菌藥物均耐藥,其余基因型耐藥表型差異明顯,見圖1。優(yōu)勢(shì)型A型菌株共11株,主要分布在東北部地區(qū)興安盟和赤峰市(81.82%,9/11);優(yōu)勢(shì)型E型菌株共12株,則主要分布在中部地區(qū)呼和浩特市(11/12)。

    表1 50株鮑曼不動(dòng)桿菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果

    注:MIC為最低抑菌濃度

    圖1 50株鮑曼不動(dòng)桿菌PFGE分型

    根據(jù)PFGE分型,優(yōu)勢(shì)基因型A型對(duì)一代和二代頭孢類抗菌藥物、阿莫西林-克拉維酸、環(huán)丙沙星、呋喃妥因、氨芐西林和氨基糖苷類抗菌藥物的耐藥率最高,為100%;對(duì)亞胺培南和哌拉西林-他唑巴坦的耐藥率最低,為0%;對(duì)復(fù)方磺胺甲噁唑、左氧氟沙星和替加環(huán)素的耐藥率分別為91%、45%和27%。優(yōu)勢(shì)基因型E型對(duì)阿莫西林-克拉維酸、環(huán)丙沙星、氨芐西林和氨曲南的耐藥率最高,為100%;對(duì)替加環(huán)素的耐藥率最低,為33%;對(duì)頭孢唑啉、頭孢西丁、慶大霉素、左氧氟沙星、哌拉西林-他唑巴坦、頭孢曲松、呋喃妥因、亞胺培南、復(fù)方磺胺甲噁唑、妥布霉素和頭孢吡肟的耐藥率在兩者之間,但均在50%以上。見圖2。

    注:R表示耐藥;I表示中介;S表示敏感

    圖22種主要基因型鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥特征

    三、體外黏附試驗(yàn)

    黏附試驗(yàn)結(jié)果顯示,體外黏附能力最強(qiáng)的菌株歸屬于PFGE G型(A19)和J型(A30),前者僅對(duì)頭孢菌素類和阿莫西林-克拉維酸耐藥,后者對(duì)所有受試抗菌藥物均敏感;黏附能力最弱的菌株為PFGE D型(A41),僅對(duì)亞胺培南敏感。見圖3。

    圖3 黏附試驗(yàn)人工計(jì)數(shù)細(xì)菌菌落數(shù)

    討論

    鮑曼不動(dòng)桿菌是目前我國(guó)住院患者中分離率最高的病原菌之一,且其耐藥性呈不斷增長(zhǎng)趨勢(shì)。從我國(guó)CHINET耐藥監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)來看,各地分離的鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)除米諾環(huán)素和頭孢哌酮-舒巴坦外的大多數(shù)抗菌藥物的耐藥率均在50%以上,特別是對(duì)碳青霉烯類藥物。鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)亞胺培南和美羅培南的耐藥率從2007年的37.6%和42.7%分別上升至2012年的57%和61%[4-5]。究其原因,鮑曼不動(dòng)桿菌可以通過多種途徑對(duì)抗菌藥物產(chǎn)生耐藥[6]。因此,近年針對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的研究大多集中在其耐藥機(jī)制方面[7-8],但對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌致病力及致病機(jī)制的研究相對(duì)較少。

    有研究顯示,在鮑曼不動(dòng)桿菌發(fā)揮致病力的初始階段,首先通過其外膜蛋白o(hù)mpA介導(dǎo)細(xì)菌與纖維黏連蛋白結(jié)合,實(shí)現(xiàn)與細(xì)胞外基質(zhì)和宿主細(xì)胞之間的黏附,為細(xì)菌進(jìn)一步在組織局部定植、生長(zhǎng)繁殖、生物被膜形成及侵入宿主細(xì)胞創(chuàng)造條件[9-10]。黏附的鮑曼不動(dòng)桿菌通過分泌多糖蛋白復(fù)合物將自身克隆集聚包裹于其中而形成生物被膜,而被膜的屏蔽作用使細(xì)菌接觸到的抗菌藥物濃度和速度明顯降低,從而進(jìn)一步介導(dǎo)細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生。因此,生物被膜形成被認(rèn)為是鮑曼不動(dòng)桿菌的主要致病機(jī)制之一,也是當(dāng)前研究的一個(gè)熱點(diǎn)[11-12]。王國(guó)戧等[13]發(fā)現(xiàn)細(xì)菌一旦形成生物被膜,在體內(nèi)耐藥性將大幅增加,是形成慢性持續(xù)性細(xì)菌感染的重要原因。另有研究發(fā)現(xiàn),眼部分離的鮑曼不動(dòng)桿菌具有明顯的體外黏附、侵入宿主細(xì)胞及生物膜形成能力[14]。提示不同來源部位菌株黏附能力等致病特征可能存在差異。纖維黏連蛋白黏附試驗(yàn)是用于評(píng)估細(xì)菌體外黏附能力的常用方法,目前已在金黃色葡萄球菌等常見病原菌體外黏附特征的研究中廣泛應(yīng)用。本研究所用方法在相關(guān)研究的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改良,試驗(yàn)可重復(fù)性更好。本研究采用纖維黏連蛋白黏附試驗(yàn)進(jìn)一步分析不同來源及具有不同耐藥特征的鮑曼不動(dòng)桿菌體外黏附能力是否存在差異,結(jié)果發(fā)現(xiàn),黏附能力最強(qiáng)的2株菌株分離部位全部來自膿液,而最弱的株則來自尿液,黏附能力的強(qiáng)弱是否與分離部位有關(guān),還需進(jìn)一步試驗(yàn)來明確。本研究同時(shí)發(fā)現(xiàn),優(yōu)勢(shì)基因型鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥性高于非優(yōu)勢(shì)型菌株,但其體外黏附能力未見相應(yīng)增加。鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性的增加與其體外黏附能力并未見明顯相關(guān)性。目前針對(duì)不同耐藥特征的鮑曼不動(dòng)桿菌,體外耐藥性的變化與其致病力之間的相關(guān)性研究報(bào)道甚少。但由于本研究所選菌株例數(shù)有限,為進(jìn)一步證實(shí)鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性演變與其致病力變化之間的相關(guān)性,更加深入的多中心、大樣本研究有待進(jìn)一步開展。

    本研究PFGE分子分型結(jié)果發(fā)現(xiàn)內(nèi)蒙古地區(qū)分離的鮑曼不動(dòng)桿菌基因型呈現(xiàn)多樣性,特定基因型菌株具有相同或相近的耐藥特征,且呈現(xiàn)一定的地區(qū)分布特點(diǎn)。如A型優(yōu)勢(shì)株中編號(hào)為16、18、24、25、38、40、43、45的菌株具有相同的耐藥特征,且均分布在內(nèi)蒙古東北地區(qū);E型優(yōu)勢(shì)株中編號(hào)為1、4、5、7、12、13、47的菌株耐藥特征相同,分布在呼和浩特地區(qū)。A型中的2種亞型AⅠ和AⅡ在PFGE結(jié)果中顯示僅有1條條帶的不同,反映到耐藥特征上也稍有差異。如A45和A36對(duì)替加環(huán)素的MIC值分別為4和2 μg/mL。對(duì)PFGE優(yōu)勢(shì)型A型和E型的菌株隨機(jī)選擇3~4株進(jìn)行多位點(diǎn)序列分型[15],結(jié)果顯示A型和E型分別歸屬于ST92和ST208型。ST92和ST208均屬于歐洲克?、蚝涂寺?fù)合體92(CC92),而CC92是世界范圍內(nèi)流行最廣泛的克隆復(fù)合體[16]。有研究顯示,歐洲克隆Ⅱ型菌株的黏附能力強(qiáng)于Ⅰ型,且生物被膜形成能力要高于Ⅰ型,基因組的重排、代謝能力以及環(huán)境因素的影響,可能造成不同克隆株之間的致病潛力出現(xiàn)差異[17]。不同地區(qū)分離流行株的生物學(xué)特性尚需進(jìn)一步研究,特別對(duì)于耐藥性和毒力特征的演變,以便更好地指導(dǎo)特定地區(qū)分離株的感染防控和治療。

    綜上所述,內(nèi)蒙古地區(qū)鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離株基因型呈多樣化,不同基因型菌株耐藥譜差異明顯。本研究結(jié)果初步揭示了不同基因型鮑曼不動(dòng)桿菌體外黏附能力存在明顯的差異,可能與菌株分離部位存在一定相關(guān)性。但菌株耐藥性的增加與其體外黏附能力的特征并未見明顯相關(guān)性。由于本研究所選菌株有限,關(guān)于鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性變化與其致病力之間的相關(guān)性尚需進(jìn)一步研究,以便為臨床上更好防控及治療多重耐藥及泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌感染提供理論依據(jù),降低耐藥菌株的傳播。

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    [17]DE BREIJ A, DIJKSHOORN L, LAGENDIJK E,et al. Do biofilm formation and interactions with human cells explain the clinical success ofAcinetobacterbaumannii[J]. PLoS One,2010,5(5):e10732.

    (本文編輯:姜敏)

    2015年《檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)》舉辦“檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)新技術(shù)”國(guó)家級(jí)繼續(xù)教育項(xiàng)目的通知

    為滿足全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)工作者對(duì)繼續(xù)教育的需求,充實(shí)基礎(chǔ)理論知識(shí)、促進(jìn)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)水平、提高教學(xué)和科研質(zhì)量,節(jié)省有關(guān)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)工作者接受繼續(xù)教育的費(fèi)用和時(shí)間,在期刊編委專家們的積極支持下,經(jīng)國(guó)家繼續(xù)教育委員會(huì)批準(zhǔn),《檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)》將于2015年度舉辦“檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)新技術(shù)”[Ⅰ類10分,項(xiàng)目編號(hào):2015-11-00-281 (國(guó)),由上海市臨床檢驗(yàn)中心主辦]國(guó)家級(jí)繼續(xù)教育項(xiàng)目。具體實(shí)施方案如下:

    1. 學(xué)員對(duì)象具有中級(jí)或中級(jí)以上專業(yè)技術(shù)職稱、正在從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)或其他相關(guān)專業(yè)技術(shù)工作的衛(wèi)生技術(shù)人員均可參加。

    2. 繼續(xù)教育內(nèi)容臨床檢驗(yàn)與血液學(xué)檢驗(yàn)、免疫學(xué)檢驗(yàn)、微生物學(xué)檢驗(yàn)、生物化學(xué)檢驗(yàn)、分子生物學(xué)檢驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)室管理等檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的新技術(shù)、新進(jìn)展,均出自期刊發(fā)表的文章。

    3. 學(xué)員報(bào)名步驟欲參加繼續(xù)教育項(xiàng)目者,請(qǐng)將回執(zhí)(見第488頁(yè))復(fù)印、填寫后寄回(回執(zhí)請(qǐng)務(wù)必填寫完整,信封上注明“參加繼續(xù)教育”);也可以登錄期刊網(wǎng)站(http://www.shjyyx.com),在“編輯部公告”中下載、填寫回執(zhí),并將回執(zhí)用E-mail(該E-mail地址請(qǐng)與回執(zhí)中填寫的一致)發(fā)回;或登錄上海市臨床檢驗(yàn)中心網(wǎng)站(www.sccl.org.cn)直接報(bào)名參加。編輯部以收到學(xué)員報(bào)名的回執(zhí)和教育費(fèi)用的次序作登記注冊(cè)和編號(hào)。

    4. 考試方法編輯部將試卷寄給注冊(cè)過的學(xué)員(試卷復(fù)印無(wú)效),考試合格者參照國(guó)家《繼續(xù)教育學(xué)分授予方法》授予繼續(xù)教育學(xué)分證書。編輯部將依據(jù)學(xué)員報(bào)名登記、注冊(cè)編號(hào)、交費(fèi)記錄和考試成績(jī)寄發(fā)學(xué)分證書。

    5. 時(shí)間安排2015年4月1日至10月30日。

    6. 收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)300元。

    讀者如有疑問,請(qǐng)咨詢期刊編輯部。

    地址:上海市浦東新區(qū)洪山路528號(hào)《檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)》編輯部郵編:200126

    匯款地址:上海市浦東新區(qū)洪山路528號(hào)《檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)》編輯部郵編:200126

    電話:021-68316211;傳真:021-68315766E-mail:shyy_jm@126.com

    上海市臨床檢驗(yàn)中心《檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)》編輯部

    2015年4月

    收稿日期:(2014-07-09)

    中圖分類號(hào):

    文章編號(hào):1673-8640(2015)05-0468-06R446.5

    文獻(xiàn)標(biāo)志碼:ADOI:10.3969/j.issn.1673-8640.2015.05.015

    通訊作者:張軍力,聯(lián)系電話:0471-6637610。

    作者簡(jiǎn)介:塔拉,女,1988年生,學(xué)士,主要從事臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)研究。

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