水煎提取及濃縮工藝對(duì)感冒退熱顆粒有效成分的影響

楊貝貝 王寶華 李萍 季文琴 孟慶卿 施金鈸 李麗娟

摘要：目的 考察感冒退熱顆粒處方藥材在水煎提取、減壓濃縮、常壓濃縮過程中有效成分表告依春、連翹酯苷A、連翹苷轉(zhuǎn)移率的變化。方法 感冒退熱顆粒處方藥材水煎提取后，分別進(jìn)行減壓濃縮和常壓濃縮，采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定不同狀態(tài)下有效成分表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的含量，計(jì)算轉(zhuǎn)移率。結(jié)果 水煎提取后，表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的轉(zhuǎn)移率分別為72.97%、29.27%、72.84%，減壓濃縮過程中3種指標(biāo)性成分轉(zhuǎn)移率RSD<2%，濃縮至相同狀態(tài)時(shí)，常壓濃縮表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的轉(zhuǎn)移率分別比減壓濃縮降低了13.51%、7.38%、4.24%。結(jié)論 本研究建立了同時(shí)檢測(cè)表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的HPLC方法，感冒退熱顆粒的制劑工藝應(yīng)據(jù)此選擇合理的提取和濃縮工藝。

關(guān)鍵詞：感冒退熱顆粒；水煎提??；濃縮；有效成分

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.01.022

中圖分類號(hào)：R283.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2016）01-0093-03

Effects of Water-extracting and Concentration Process on Active Ingredients of Ganmao Tuire Granules YANG Bei-bei1， WANG Bao-hua1， LI Ping1， JI Wen-qin1， MENG Qing-qing1， SHI Jin-bo1， LI Li-juan2 （1. School of Chinese Materia Medica， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100102， China； 2. Shexian Chinese Medicine Hospital， Shexian 056400， China）

Abstract： Objective To observe the changes in transfer rates of epigoitrin， forsythoside A and forsythin in Ganmao Tuire Granules prescription medicinal materials by water decoction extraction， vacuum concentration and atmospheric concentration. Methods Prescription medicinal materials from Ganmao Tuire Granules were decocted in water and the decoction was condensed by vacuum and atmospheric concentration process. The contents of epigoitrin， forsythoside A and forsythin at different states were measured by HPLC for transfer rates. Results The transfer rates of epigoitrin， forsythoside A and forsythin were 72.97%， 29.27%， 72.84%， respectively after decocted in water. The RSD of epigoitrin， forsythoside A and forsythin were less than 2% in the process of vacuum concentration. The transfer rates of epigoitrin， forsythoside A and forsythin by atmospheric concentration decreased by 13.51%， 7.38% and 4.24% respectively compared with vacuum concentration when concentrated to the same state. Conclusion The method for simultaneous determination of epigoitrin， forsythoside A and forsythin by HPLC has been established. A more suitable extraction and concentration process should be chosen for the preparation of Ganmao Tuire Granules.

Key words： Ganmao Tuire Granules； water decoction extraction； concentration； active ingredients

感冒退熱顆粒由大青葉、板藍(lán)根、連翹及拳參4味中藥組成，具有清熱解毒、疏風(fēng)解表功效，臨床用于上呼吸道感染、急性扁桃體炎、咽喉炎屬外感風(fēng)熱、熱毒壅盛證[1]。藥理研究表明，板藍(lán)根中的表告依春，連翹中的連翹酯苷A、連翹苷為感冒退熱顆粒的主要抗菌和抗病毒成分[2-4]。本研究采用高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定表告依春、連翹酯苷A、連翹苷含量，考察感冒退熱顆粒處方藥材在水煎提取、減壓濃縮、常壓濃縮過程中3種有效成分轉(zhuǎn)移率的變化，

以期為感冒退熱顆粒的工藝生產(chǎn)及優(yōu)化提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

島津LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司）：SPD-20A二級(jí)陣列檢測(cè)器（PDA），SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器，DGU-20A5在線脫氣機(jī)，CTO-10ASvp柱溫箱和島津LC-solution工作站；KQ-300DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；Sartorious BT 125D型電子分析天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；YP6001型電子天平（上海佑科儀器儀表有限公司）；SHZ-Ⅲ循環(huán)水真空泵（上海亞榮生化儀器廠）；0.45 μm微孔濾膜（天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

表告依春、連翹酯苷A、連翹苷對(duì)照品（成都曼思特生物科技有限公司，批號(hào)分別為MUST-14111807、MUST-14060118、MUST-14052103，純度≥98%），甲醇（色譜純，F(xiàn)isher公司），磷酸（分析純，北京北化精細(xì)化學(xué)品有限責(zé)任公司），娃哈哈純凈水，自制高純水，其他試劑均為分析純。板藍(lán)根、大青葉、連翹、拳參飲片購于北京同仁堂健康藥業(yè)股份有限公司，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)劉春生教授鑒定，分別為十字花科植物菘藍(lán)Isatis indigotica Fort.的干燥根、十字花科植物菘藍(lán)Isatis indigotica Fort.的干燥葉、木犀科植物連翹Forsythia suspensa（Thunb.）Vahl的干燥果實(shí)、蓼科植物拳參Polygonum bistorta L.的干燥根莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Purospher STAR C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.02%磷酸水溶液，梯度洗脫（0～17 min，9%A；19 min，32%A；29 min，34%A；39 min，35%A；44 min，40%A；54～60 min，54%A）；流速為1.0 mL/min；檢測(cè)波長為227 nm；檢測(cè)溫度為30 ℃。色譜圖見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取表告依春對(duì)照品0.93 mg、連翹苷對(duì)照品9.40 mg于50 mL容量瓶中，連翹酯苷A對(duì)照品10.06 mg于10 mL容量瓶中，加50%甲醇定容，即得對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取板藍(lán)根藥材粉末（過四號(hào)篩）0.2 g、大青葉藥材粉末（過四號(hào)篩）0.2 g、連翹藥材粉末（過五號(hào)篩）0.1 g、拳參藥材粉末（過四號(hào)篩）0.1 g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇40 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率400 W，頻率40 kHz）60 min，放冷，靜置10 h，再稱定質(zhì)量，補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 水煎液、濃縮液供試品溶液的制備 按感冒退熱顆粒處方比例取大青葉、板藍(lán)根、連翹、拳參，加8倍量水，煎煮2次，每次1.5 h，合并煎煮液，過濾[1]，得感冒退熱顆粒水煎液，測(cè)量準(zhǔn)確體積，留取一定量原水煎液，取500 mL水煎液稱重，分別于70 ℃不同程度減壓濃縮、100 ℃常壓濃縮，稱重，將濃縮液用容量瓶稀釋定容至500 mL，精密吸取5 mL上述溶液于25 mL容量瓶中，用50%甲醇定容，靜置10 h，過濾，取續(xù)濾液，作為感冒退熱顆粒處方水煎液、減壓濃縮液和常壓濃縮液的供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密吸取表告依春、連翹苷對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.8、1.2、1.8、2.6 mL于10 mL容量瓶中，精密吸取連翹酯苷A對(duì)照品溶液0.4、0.8、1.2、2.5、5.0、8.0 mL于10 mL容量瓶中，用50%甲醇定容，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行HPLC分析，進(jìn)樣10 μL。以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，結(jié)果見表1。表告依春、連翹酯苷A、連翹苷3種成分在線性范圍內(nèi)與峰面積均呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的RSD分別為1.59%、0.14%、1.43%，表明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批次板藍(lán)根、大青葉、連翹、拳參6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積，表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的RSD分別為1.52%、0.45%、2.01%，表明方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別在0、3、6、12、24 h測(cè)定峰面積，表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的RSD分別為1.57%、0.88%、1.41%，說明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

稱取板藍(lán)根粉末0.2 g、大青葉粉末0.2 g、連翹粉末0.1 g、拳參粉末0.1 g，精密稱定6份，每份精密加入一定量表告依春、連翹酯苷A、連翹苷，制成供試品溶液，測(cè)定峰面積，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果表明表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的平均加樣回收率分別為98.24%、99.43%、99.21%，RSD分別為2.41%、2.84%、2.40%，加樣回收率符合要求。

2.8 藥材含量測(cè)定

按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，進(jìn)樣10 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算表告依春、連翹酯苷A、連翹苷含量分別為0.37、110.30、7.07 mg/g，符合《中華人民共和國藥典》規(guī)定。

2.9 水煎液、濃縮液含量測(cè)定

分別取“2.2.3”項(xiàng)下水煎液及濃縮液供試品，進(jìn)樣10 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算表告依春、連翹酯苷A、連翹苷含量及轉(zhuǎn)移率[水煎液（濃縮液）中該成分含量÷藥材中該成分含量×100%]，結(jié)果見表2。

3 討論

根據(jù)表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的極性和溶解度，本試驗(yàn)考察了甲醇、50%甲醇、水等溶劑的回流提取和超聲提取，發(fā)現(xiàn)用50%甲醇超聲提取較為充分。經(jīng)紫外全波長掃描，在227 nm下，3個(gè)成分有較高吸收。本試驗(yàn)考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.02%磷酸水溶液、乙腈-0.02%磷酸水溶液等多種溶劑洗脫系統(tǒng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲醇-0.02%磷酸水溶液作為流動(dòng)相梯度洗脫時(shí)3個(gè)有效成分的峰形和分離度均較好。

文獻(xiàn)報(bào)道不同廠家不同批次的感冒退熱顆粒中表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的含量差異較大[5-7]，原因可能是藥材來源或生產(chǎn)工藝的差異。本試驗(yàn)建立了同時(shí)檢測(cè)表告依春、連翹酯苷A、連翹苷3個(gè)有效成分的HPLC方法，并考察了感冒退熱顆粒處方水煎液及濃縮液中有效成分的轉(zhuǎn)移率，結(jié)果顯示，水煎提取后，表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的轉(zhuǎn)移率分別為72.97%、29.27%、72.84%，各成分尤其是連翹酯苷A在提取過程中損失較大，可能與水煎提取不完全及提取溫度較高、時(shí)間較長有關(guān)。原水煎液由502.1 g減壓濃縮至360.9、189.8、11.9 g的過程中，表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的轉(zhuǎn)移率RSD<2%，因此，在減壓濃縮過程中3種有效成分幾乎沒有變化；減壓濃縮和常壓濃縮均濃縮至11.9 g時(shí)，常壓濃縮時(shí)表告依春、連翹酯苷A、連翹苷轉(zhuǎn)移率分別比減壓濃縮降低了13.51%、7.38%、4.24%，故減壓濃縮較常壓濃縮有利于防止有效成分的損失。本研究對(duì)中成藥感冒退熱顆粒的工藝優(yōu)化及質(zhì)量控制有一定的參考價(jià)值。當(dāng)然，由于樣品量較少，對(duì)于大工業(yè)生產(chǎn)是否有同樣的規(guī)律，還有待于今后進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2015-04-13）

（修回日期：2015-05-05；編輯：陳靜）