針刺對抑郁癥睡眠障礙大鼠海馬組織及血清中SOD·MDA的影響

針刺對抑郁癥睡眠障礙大鼠海馬組織及血清中SOD·MDA的影響

俞裕天1,袁青2,陳津巖3,謝津津1,郎建英4,麥嘉玲1,曾曉林1，汪滿霞1，薛爾平1

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州 510405；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)針灸康復(fù)臨床醫(yī)學(xué)院，廣州 510405；

3.廣州中醫(yī)藥大學(xué)核醫(yī)學(xué)教研室，廣州 510405；4.廣州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣州 510405)

摘要：目的觀察針刺對抑郁癥睡眠障礙(SDD)大鼠海馬組織及血清中SOD活性和MDA含量的影響。方法正常組8只SD大鼠常規(guī)合籠飼養(yǎng)。32只SD大鼠接受為期21 d的孤養(yǎng)+CUMS法+REM睡眠剝奪法造模，其中28只完成造模,二次分組為模型組、針刺組、藥物組、針?biāo)幗M,每組各7只。模型組僅造模不干預(yù);針刺組取印堂、神庭、太沖(雙)進行針刺;藥物組給予舍曲林和阿普唑侖水溶液灌胃；針?biāo)幗M同時結(jié)合針刺組與藥物組的兩種干預(yù)方式;3組均連續(xù)干預(yù)7 d。結(jié)果SDD造模致大鼠海馬組織〔(41.19±5.59)u/mL〕和血清〔(34.57±5.53)u/mL〕的SOD活性較正常組〔(60.19±8.85)、(56.20±13.68)u/mL〕明顯下調(diào)(P<0.05),且致海馬組織〔(5.12±1.22)nmol/mg〕和血清〔(6.22±0.96)nmol/mg〕的MDA含量較正常組〔(3.49±1.02)、(4.35±1.55)nmol/mg〕明顯上調(diào)(P<0.05);針刺組海馬組織〔(52.29±11.37)u/mL〕和血清〔(54.32±6.95)u/mL〕SOD活性均較模型組有明顯的上調(diào)(P<0.05)，且僅針刺組的海馬組織〔(3.86±0.80)nmol/mg〕MDA含量較模型組得到了明顯的下調(diào)(P<0.05)；藥物組僅上調(diào)了血清SOD活性〔(44.70±5.31)u/mL，P<0.05)〕；針?biāo)幗M上調(diào)了海馬組織〔(51.95±7.58)u/mL〕和血清〔(48.23±6.70)u/mL〕的SOD活性(P<0.05)。結(jié)論SDD造模能明顯加速衰老；3種干預(yù)手段均有一定的抗衰老作用，其中針刺組最優(yōu)，針?biāo)幗M次之。

關(guān)鍵詞：抑郁癥;睡眠障礙；衰老；針刺；靳三針;大鼠

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.10.027

中圖分類號：R246文獻標(biāo)志碼： A

文章編號：1003-5699(2015)10-1060-04

基金項目:國家自然科學(xué)基金經(jīng)費資助(81072878、81303041)。

作者簡介:俞裕天(1987-)，男,博士，在站博士后，主要從事中醫(yī)藥及針灸防治腦病、神志病的臨床與實驗研究。

收稿日期:(責(zé)任編輯：趙玉芝2014-12-03)

*通信作者:袁青，電話-13902211008，電子信箱-yuanqing1005@126.com

Acupuncture on hippocampus and serum SOD activity and MDA content of SDD rats

YU Yutian1,YUAN Qing2,CHEN Jinyan3,XIE Jinjin1,LANG Jianying4,MAI Jialing1,ZENG Xiaolin1,WANG Manxia1,XUE Erping1

(1.Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510405,China;

2.Clinical Medical College of Acupuncture,Moxibustion and Rehabilitation,Guangzhou University of Chinese Medicine,

Guangzhou 510405,China;

3.Dept.of Nuclear Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510405,China;

4.College of Basic Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510405,China)

Abstract:ObjectiveObservation on acupuncture on hippocampus and serum SOD Activity and MDA content of SDD Rats.MethodsThe 8 normal Sprague Dawley rats were caged together normally.The 32 Sprague Dawley rats were underwent a 21 d solitary raised+CUMS+REM sleep deprivation method modeling.The 28 rats successfully completed the modeling,and divided into model group,acupuncture group,medicine group,acupuncture with medicine group,each group with 7 rats.Model group rats,only modeling without intervention.Acupuncture group rats were acupuncture on acupoint Yintang,Shenting and Taichong (both) each day for 20 min with a 15 s stimulation every 10 min.Medicine group rats were gavaged administration with Zoloft and Alprazolam solution.Acupuncture with medicine group combined acupuncture and medicine intervention.Three intervention groups were given intervention for 7 days.ResultsSOD activity of hippocampal tissue (41.19±5.59) u/mL and serum (34.57±5.53) /mL of DD rats was significantly lower than the normal rats (P<0.05),and hippocampus tissue and serum MDA content significantly increased than the normal (60.19±8.85,56.20±13.68) u/mL rats (P<0.05);Acupuncture group’s SOD activity of hippocampal tissue (5.12±1.22) nmol/mg and serum (6.22±0.96) nmol/mg were up regulated than the model group (3.49±1.02),(4.35±1.55) nmol/mg (P<0.05),and only acupuncture group’s MDA content in hippocampus has been significantly down regulated (P<0.05);Medicine group’s SOD (52.29±11.37) u/ml activity of serum (54.32±6.95) u/ml were down regulated (P<0.05);Acupuncture combined with medicine group’s SOD activity (44.70±5.31)u/mL,P<0.05, of hippocampal tissue (51.95±7.58) u/ml and serum (48.23±6.70) u/ml were up regulated (P<0.05).ConclusionSleep deprivation depression modeling can significantly accelerate aging;3 ways of interventions on SDD rats have some anti-aging effects.And acupuncture group has the best effect with acupuncture combined with medicine group followed.

Keywords:depression;sleep deprivation;aging;acupuncture;Jin’s three technique;rat

抑郁障礙(Major Depressive Disorder,MDD)影響著全世界約16%的人口[1]。睡眠障礙是抑郁癥狀群的重要組成部分，是抑郁癥最常見的癥狀之一，以入睡困難、睡眠不深及早醒為特征。睡眠障礙可加重抑郁癥的病情，延緩抑郁癥的康復(fù)進程。抑郁癥睡眠障礙(sleep deprivation depression,SDD)的研究已成為人們關(guān)注的焦點[2]，對SDD的動物模型[2-3]也在逐漸增多。眾所周知，失眠容易引起各種疾病，加速衰老[4]，然而對于該問題的實驗室研究文獻仍較少見。本研究復(fù)制SDD大鼠模型并探討針刺、藥物、針?biāo)幗Y(jié)合對其大腦海馬組織及血清SOD活性和MDA的影響，報道如下。

1材料與方法

1.1動物與分組SPF級SD大鼠40只，體質(zhì)量220～250 g，雄性(廣州中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供，實驗動物許可證號:SCXK(粵)2013-0034)。實驗于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院SPF級動物實驗室進行。先用Open-Field法[5]及蔗糖偏好實驗[6]進行行為學(xué)評分，選得分相近的40只大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，隨機分成正常組8只、造模組32只。

1.2抑郁癥睡眠障礙(SDD)造模正常組8只常規(guī)合籠飼養(yǎng)，不接受任何刺激。造模組32只大鼠接受不可預(yù)見中等應(yīng)激(CUMS)，結(jié)合孤養(yǎng)18 d，再用小平臺睡眠剝奪技術(shù)[7]行快速動眼相(REM)睡眠剝奪72 h。

1.2.1孤養(yǎng)造模組32只均單獨分籠飼養(yǎng)。

1.2.2CUMS法由Willner P[6]和Katz[8]方法改進而來：1)禁水17 h；2)禁食、禁水20 h；3)持續(xù)光照17 h；4)傾斜鼠籠(45°)17 h；5)4 ℃冰水游泳5 min;6)潮濕墊料21 h；7)搖晃(1次/s，15 min)；8)夾尾1 min；9)行為限制2 h；共9種刺激，每天隨機采取1種，共安排18 d。

1.2.3小平臺睡眠剝奪技術(shù)(platform technique)[7]于造模的第19 d開始，連續(xù)72 h快速動眼相睡眠(REM)剝奪：剝奪箱為30×30×36 cm的玻璃水箱，正中立一個直徑6 cm圓形平臺(高18 cm)，箱中注水，水面距平臺面約1 cm。大鼠在平臺上可抬頭自由進食進水;如果大鼠進入REM睡眠期，大鼠會因為肌張力松弛而落入水中或節(jié)律性低頭、觸水，以此來達到剝奪快速動眼相(REM)睡眠的目的。造模期間持續(xù)高光通量LED燈光照射，室內(nèi)溫度控制在18.0～22.0 ℃，水溫保持在20.0 ℃左右。

1.3二次分組與干預(yù)正常組不造模不干預(yù)。造模組再次隨機分成模型組、針刺組、藥物組、針?biāo)幗M,預(yù)計每組8只。模型組僅造模不干預(yù)(第21天后繼續(xù)行CUMS法)。針刺組造模后進行針刺干預(yù)：用佳健牌針灸針(規(guī)格：0.25 mm×13 mm)針刺，根據(jù)《實驗針灸學(xué)》[9]大鼠穴位定位方法取:1)印堂穴，2)神庭穴，3)配太沖穴(雙)，各穴均行導(dǎo)氣通經(jīng)的手法15 s，隔10 min運針1次，每次留針20 min。 藥物組給予兩種藥物的水溶液灌胃：按成人劑量折算出大鼠給藥劑量舍曲林0.83 mg/(kg·d)+阿普唑侖0.067 mg/(kg·d)。針?biāo)幗M同時結(jié)合針刺組與藥物組的兩種干預(yù)方式。針刺組、藥物組、針?biāo)幗M均連續(xù)干預(yù)7 d。

1.4樣本處理與指標(biāo)檢測于28 d進行完其他測試后，對各組大鼠取樣：1)血樣：大鼠眼眶取血，12 000 g，離心5 min，取上清液待測；2)海馬組織:取100 mg海馬組織，加1 mL預(yù)冷的生理鹽水研磨勻漿，成10%的勻漿液，1 2000 g，離心5 min，取上清液待測；選用凱基微量丙二醛(MDA)測定試劑盒與凱基微量丙二醛(MDA)測定試劑盒進行測定，測定方法嚴(yán)格按照試劑盒所附方法步驟進行。

2結(jié)果

2.1SDD造模致死CUMS法造模期間，4只造模大鼠出現(xiàn)較重的抑郁癥狀，分別于CUMS法造模的第15天和第17天死亡。完成21 d孤養(yǎng)+CUMS+REM睡眠剝奪造模的大鼠共28只,分為模型組、針刺組、藥物組、針?biāo)幗M，每組各7只。

2.2各組大鼠大腦海馬組織SOD活性和MDA含量如表1所示：模型組大鼠海馬組織SOD活性較正常組顯著下調(diào)(P<0.05)，提示SDD造模能顯著降低海馬組織SOD活性;針刺組和針?biāo)幗M海馬組織SOD活性則較模型組顯著上調(diào)(P<0.05)。如表1所示：模型組大鼠海馬組織MDA含量較正常組明顯上調(diào)(P<0.05)，提示SDD造模能顯著增加海馬組織MDA含量;僅針刺組大鼠MDA含量較模型組得到了明顯下調(diào)(P<0.05)。

表1　海馬組織SOD活性和MDA含量

注:模型組與正常組比較,#P<0.05;干預(yù)組與模型組比較,△P<0.05

2.3各組大鼠大腦血清SOD活性和MDA含量如表2所示：模型組大鼠血清SOD活性較正常組顯著下調(diào)(P<0.05)，提示SDD造模能顯著降低血清SOD活性；3個干預(yù)組血清SOD活性則較模型組顯著上調(diào)(P<0.05)。如表2所示:模型組大鼠血清MDA含量較正常組明顯上調(diào)(P<0.05)，提示SDD造模能顯著增加血清MDA含量；3個干預(yù)組都未能顯著下調(diào)血清MDA含量(P<0.05)。

表2　血清SOD活性和MDA含量

注：模型組與正常組比較,#P<0.05；干預(yù)組與模型組比較,△P<0.05

3討論

3.1SDD造模加速衰老長期以來，人們都認(rèn)為失眠會加速衰老,然而這方面的實驗室研究仍較少見于報道。通過本次研究，我們發(fā)現(xiàn)，SDD造模會致大鼠海馬組織和血清的SOD活性顯著降低(P<0.05)，并且導(dǎo)致海馬組織和血清的MDA含量顯著上調(diào)(P<0.05);這個結(jié)果提示：抑郁癥睡眠障礙降低了機體清除自由基的能力，加重了機體受自由基攻擊的嚴(yán)重程度。因此，我們可以認(rèn)為抑郁癥睡眠障礙造模加速了大鼠衰老。

3.2藥物治療SDD目前臨床上30%～40%的抑郁癥睡眠障礙患者聯(lián)合使用選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRIs)+苯二氮卓類(BDZ)藥物。選擇性5-羥色胺再吸收抑制劑(SSRIs)的基本藥理是通過抑制神經(jīng)突觸細胞對神經(jīng)遞質(zhì)血清素的再吸收，以增加細胞外可以和突觸后受體結(jié)合的血清素濃度。作為目前抗抑郁的一線用藥,SSRIs被廣泛用于臨床治療抑郁癥、焦慮癥、強迫癥等。傳統(tǒng)的鎮(zhèn)靜催眠藥苯二氮卓類(BDZ)可以治療抑郁相關(guān)性失眠[10],此類藥物可縮短入睡時間、減少覺醒時間和次數(shù)、增加總睡眠時間，具有安全、起效快、耐受性良好等特點[11]。聯(lián)用BDZ，主要在于加強SSRIs對中樞神經(jīng)的作用，以盡快改善睡眠以及全身癥狀，穩(wěn)定患者的情緒，特別是對抑郁癥狀和睡眠障礙改善尤為明顯。本研究藥物組和針?biāo)幗M聯(lián)合使用舍曲林(Sertraline)和阿普唑侖(Alprazolam)是SSRIs+BDZ治療抑郁癥睡眠障礙的典型代表。

3.3靳三針調(diào)神針法多年以來，靳三針療法在治療腦病、神志病方面取得了巨大的成就。神志病，多源于大腦功能與結(jié)構(gòu)的異常。我們的前期研究證實：靳三針能有效緩解HIBD大鼠的神經(jīng)細胞凋亡，起到了保護大腦的作用[12]。對于抑郁癥睡眠障礙治療，靳三針療法有著獨特的優(yōu)勢[13-14]。中醫(yī)自古對“不寐”就有因氣郁而營衛(wèi)失調(diào)的論述[15],臨床80%以上的失眠與焦慮、抑郁等心理因素相關(guān)。抑郁癥睡眠障礙則屬于神志病中“失神”的范疇，因此臨床治療中調(diào)神的作用極為重要[16]。本研究針刺組和針?biāo)幗M所選用的靳三針刺神穴組，由靳三針中的智三針與定神針精煉而來[17]。印堂穴是定神針的要穴，在兩眉之間、鼻根部，雖說是經(jīng)外奇穴，但處于督脈之上，可振奮陽氣；神庭穴是智三針的要穴，是頭部僅有的以“神”命名的兩個穴位之一，專用于調(diào)神的要穴；配穴方面，太沖穴是足厥陰肝經(jīng)的輸穴和原穴，位于足背第一、二跖骨之間，能鎮(zhèn)肝熄風(fēng)、醒腦開竅、鎮(zhèn)心安神、解郁止痛、治療失眠、調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)等，是臨床運用具有高效、精簡、安全的典范對穴。

3.4針?biāo)幗Y(jié)合的加速起效和增效作用我們的同期研究結(jié)果表明:1)為期7 d的針?biāo)幗Y(jié)合干預(yù)對抑郁癥睡眠障礙大鼠起效較快，能明顯改善抗抑郁藥物起效慢的問題(中縫背核5-羥色胺受體mRNA表達)[18]；2)為期7 d的針刺干預(yù)對抑郁癥睡眠障礙大鼠有效,且與藥物干預(yù)效果相當(dāng)，為期7 d的針?biāo)幗Y(jié)合干預(yù)則有明顯的增效作用(外側(cè)韁核βCaMKⅡ蛋白表達)[19]。

3.5單純針刺較針?biāo)幗Y(jié)合、藥物的抗衰老效果更優(yōu)從實驗結(jié)果可以看出：針刺組的海馬組織和血清SOD活性均較模型組有顯著的提升(P<0.05),且僅針刺組的海馬組織MDA含量得到了明顯的下調(diào)(P<0.05);藥物組僅上調(diào)了血清SOD活性(P<0.05)，海馬組織SOD活性、血清與海馬組織MDA含量均未得到顯著的調(diào)整(P<0.05);針?biāo)幗M上調(diào)了海馬組織和血清的SOD活性(P<0.05)，海馬組織和血清的MDA含量也均未被顯著下調(diào)(P<0.05)。因此，從3個干預(yù)組的抗衰老效果來看，針刺組最優(yōu)，針?biāo)幗M次之。

4結(jié)論

抑郁癥睡眠障礙(SDD)造模能顯著加速大鼠衰老；為期7 d對SDD大鼠的3種干預(yù)手段，均有一定的抗衰老作用，其中針刺組最優(yōu)，針?biāo)幗M次之。

參考文獻：

[1]KESSLER R C,BERGLUND P,DEMLER O,et al.The epidemiology of major depressive disorder:results from the National Comorbidity Survey Replication (NCS-R)[J].JAMA-The Journal of the American Medical Association,2003,289(23):3095-3105.

[2]甄君,范建中,姚曉黎,等.針刺對抑郁癥睡眠障礙大鼠行為學(xué)和海馬5-羥色胺受體表達水平的影響[J].中國康復(fù)理論與實踐,2011,17(7):625-627.

[3]孔梅,舒曉春,邢長永.抑郁癥睡眠障礙模型大鼠甲狀腺激素變化及逍遙散干預(yù)的研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2010(16):147-149.

[4]劉同想,孔素平,廖忠友,等.睡眠質(zhì)量與疾病及衰老關(guān)系的研究[J].中國行為醫(yī)學(xué)科學(xué),1994(3):134-135,169.

[5]DE OLIVEIRA R A,CUNHA G,M BORGES K D,et al.The effect of venlafaxine on behaviour,body weight and striatal monoamine levels on sleep-deprived female rats[J].Pharmacology Biochemistry and Behavior,2004,79(3):499-506.

[6]WILLNER P,TOWELL A,SAMPSON D,et al.Reduction of sucrose preference by chronic unpredictable mild stress,and its restoration by a tricyclic antidepressant[J].Psychopharmacology,1987,93(3):358-364.

[7]LOPEZ-RODRIGUEZ F,KIM J,POLAND R E.Total sleep deprivation decreases immobility in the forced-swim test[J].Neuropsychopharmacology:Official Publication of the American College of Neuropsychopharmacology,2004,29(6):1105-1111.

[8]KATZ R J,ROTH K A,CARROLL B J.Acute and chronic stress effects on open field activity in the rat:implications for a model of depression[J].Neuroscience & Biobehavioral Reviews,1981,5(2):247-251.

[9]李忠仁.實驗針灸學(xué)(新世紀(jì)全國高等中醫(yī)藥院校規(guī)劃教材)[M].2003.

[10]BENCA R M,ANCOLI-ISRAEL S,MOLDOFSKY H.Special considerations in insomnia diagnosis and management:Depressed,elderly,and chronic pain populations[J].The Journal of Clinical Psychiatry,2004,65(8):26-35.

[11]BECKER P M.Trazodone as a hypnotic in major depressi-on[J].Sleep Medicine,2004,5(1):7-8.

[12]袁青,陳飛,江振頤,等.不同針刺介入時間對宮內(nèi)窘迫缺氧缺血性腦損傷大鼠大腦皮質(zhì)凋亡細胞、巢蛋白的影響[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2013(3):344-347.

[13]劉進,劉恩玉.《內(nèi)經(jīng)》中的營衛(wèi)學(xué)說與睡眠障礙[J].吉林中醫(yī)藥,1998(2):2-3.

[14]袁青,沈秀進,孫礫,等.靳三針調(diào)神針法淺析[J].新中醫(yī),2013,45(11):100-101.

[15]袁青.靳三針問答圖解[M].廣州:廣東經(jīng)濟出版社,2003.

[16]俞裕天,袁青,陳津巖,等.針?biāo)幗Y(jié)合對抑郁癥睡眠障礙大鼠行為學(xué)與中縫背核5-羥色胺受體mRNA表達的影響[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2015(3):448-453,576.

[17]俞裕天,袁青,陳津巖,等.針?biāo)幗Y(jié)合對抑郁癥睡眠障礙大鼠行為學(xué)及外側(cè)韁核βCaMKⅡ蛋白表達的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志,2015(5):1546-1550.