梅毒初篩三種方法檢測(cè)的應(yīng)用比較

摘要：目的 為了了解快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)（RPR）﹑酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和膠體金免疫層析法在初篩試驗(yàn)中的應(yīng)用和價(jià)值。方法 采用RPR，ELISA，免疫層析法三種方法同時(shí)對(duì)5394例檢測(cè)對(duì)象檢驗(yàn)，以梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）作為驗(yàn)證試驗(yàn)。分別統(tǒng)計(jì)RPR，ELISA，免疫層析法三種方法的測(cè)試。結(jié)果 陽(yáng)性率分別為4.2%，5.2%，5.5%。結(jié)論 ELISA法具有較高的敏感度和特異性，為三種方法中篩查梅毒感染的最好方法。

關(guān)鍵詞：梅毒螺旋體；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；膠體金免疫層析法；快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)

梅毒是由梅毒螺旋體（TP）感染引起的一種性傳播感染疾病。因其癥狀隱匿，治療常常被延誤，導(dǎo)致更廣泛的流行和傳播。TP侵入人體后，經(jīng)過2～3w的潛伏期，即發(fā)生皮膚損害。TP人工培養(yǎng)迄今沒有被解決。直接鏡檢簡(jiǎn)便，但是明感度偏低。我們必須采取措施制止梅毒的蔓延，復(fù)發(fā)梅毒，隨著機(jī)體免疫的消長(zhǎng)，進(jìn)入梅毒晚期，對(duì)機(jī)體損害很大，尤其是皮膚黏膜，骨骼，心血管系統(tǒng)[1]。在梅毒快速診斷方面，初篩試驗(yàn)以快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)（RPR）﹑酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和膠體金免疫層析法為主。為了了解的應(yīng)用以上3種方法的價(jià)值，我們將這3種方法進(jìn)行檢驗(yàn)。先將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 2012年～2013年度在我中心進(jìn)行自愿咨詢及監(jiān)測(cè)項(xiàng)目的體檢，年齡在18～55歲。

1.2方法和試劑 靜脈采取的血清，同天進(jìn)行檢測(cè)。血清在我中心同時(shí)經(jīng)過TRUST檢測(cè)和梅毒螺免疫吸附試驗(yàn)和膠體金初篩陽(yáng)性者，再經(jīng)過梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）檢測(cè)血清梅毒復(fù)檢。TRUST上海榮盛生物藥業(yè)有限公司，ELISA法北京萬泰有限公司，膠體金法北京萬泰有限公司。復(fù)檢梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)檢測(cè)血清梅毒TPPA試劑則由日本富士珠式會(huì)社。儀器為酶標(biāo)儀Thermo MultiScan和洗板機(jī)Thermo Cell Wash。

2 結(jié)果

ELISA，膠體金，RPR結(jié)果比較。其陽(yáng)性率分別為ELISA（278：5394），膠體金（302：5394），RPR（6224：5394），用梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）。

2.1 ELISA，膠體金，RPR檢測(cè)，其陽(yáng)性率分別為5.2%，5.6%，4.2%。但是通過TPPA法符合檢驗(yàn)陽(yáng)性率，ELISA，膠體金，RPR分別是100%，91.9%和79.5%說明ELISA方法準(zhǔn)確率較高，其他兩種方法假陽(yáng)性率較高。尤其是RPR法，由于影響因素較多，假陽(yáng)性率明顯高過其他兩種方法。見表1、表2。

2.2膠體金與ELSEA結(jié)果比較 ELSEA與膠體金法差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.392，P>0.05），ELSEA法與RPR結(jié)果比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001，P<0.05）。并且膠體金，RPR和ELSEA法比較都存在假陰性和假陽(yáng)性的結(jié)果。見表3。

3 討論

梅毒病原體是TP，它是一種危害性比較大，傳染性強(qiáng)的疾病，站全國(guó)性傳播性病的第4位，人是唯一的宿主，性接觸傳染占95%。由于梅毒螺旋體為厭氧性，體外不易生存，且對(duì)干燥極為敏感，故通過各種器物的間接傳染，可能性極少。輸血時(shí)如供血者為梅毒患者可傳染于受血者。先天梅毒是患有梅毒的孕婦通過胎盤血行而傳染給胎兒。一般在妊娠前4個(gè)月，由于滋養(yǎng)體的保護(hù)作用，梅毒螺旋體不能通過，故妊娠前4個(gè)月胎兒不被感染，以后滋養(yǎng)體萎縮，梅毒螺旋體即可通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)傳染胎兒[2]。通常人體在受到梅毒螺旋體感染后會(huì)出現(xiàn)2種不同的抗體，一種是由于機(jī)體產(chǎn)生對(duì)媒體螺旋體有著針對(duì)性的特異性抗體，通常情況下，該種抗體即使梅毒疾病有所痊愈后也不會(huì)消失，患者會(huì)終身攜帶，是梅毒感染的特有標(biāo)志。另一種是組織遭受破壞時(shí)將具有抗原性的類脂質(zhì)全面釋放，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體有所刺激，屬于為特異性反應(yīng)素[3]。

快速血漿反應(yīng)素環(huán)裝卡片實(shí)驗(yàn)（RPR）屬非螺旋體抗原血清實(shí)驗(yàn)，其方法采用活性炭吸附心磷脂，此抗原和血清中的反應(yīng)素結(jié)合，形成肉眼可見黑色絮狀物，主要用于一期梅毒的診斷，也可作為治療觀察，判預(yù)，復(fù)發(fā)或再感染的制證。在健康體檢、產(chǎn)前檢查、婚檢、普通檢查中較為適用，該方法快速，簡(jiǎn)便，可以定性。也可定量，結(jié)果判斷簡(jiǎn)便，適用于大量標(biāo)本檢驗(yàn)。缺點(diǎn)是判斷結(jié)果帶有主觀性，容易出現(xiàn)假陰性或假陽(yáng)性的判斷（牛痘疹、病毒性肺炎、肺炎球菌性肺炎、上呼吸道感染、傳染性肝炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥、水痘、風(fēng)疹等），對(duì)于存在的神經(jīng)梅毒、潛伏期梅毒有著極小的名感性，由于其特異性反應(yīng)素的效價(jià)以及病變活動(dòng)高度有著較大的關(guān)系，因此，常應(yīng)用于抗梅毒治療效果的觀察中。

膠體金是以基因工程方法的重組外膜蛋白為包被和標(biāo)記抗原，采用膠體金標(biāo)記和免疫層析技術(shù)[4]。本組調(diào)查顯示與ELSEA方法結(jié)果比較無顯著差別，比PRP好。膠體金的優(yōu)點(diǎn)是監(jiān)測(cè)成本低，5～20min內(nèi)得出結(jié)果，需要設(shè)備少，適合大量篩查。但是此方法容易產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果，同時(shí)陽(yáng)性需要確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，此外膠體金進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控存在困難，標(biāo)準(zhǔn)方法還很難統(tǒng)一。

ELISA法用純化的基因組包被TP抗原包被的微孔板和酶標(biāo)抗原。應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定的IGG和IGA抗體。本組方法表明，ELISA法是最好的一種法，敏感性和特異性較高，是初篩的一種良好方法[5]。但是結(jié)果陽(yáng)性不能用于診療觀察，不能判斷梅毒復(fù)發(fā)和再感染的情況。但是操作簡(jiǎn)單，不受標(biāo)本中纖維蛋白和溶血影響?？赏ㄟ^酶標(biāo)儀讀取數(shù)據(jù)，自動(dòng)化程度高，建議用法作為初篩試驗(yàn)得首先方法。

本組試驗(yàn)顯示，三種方法都有一定局限性。包括可能出現(xiàn)的假陰性和假陽(yáng)性結(jié)果。各種方法并不完善。還不能做到100%準(zhǔn)確。但是ELISA法準(zhǔn)確率和比較高建議用在初篩用法，以TPPA驗(yàn)證用法，這樣可以提高梅毒檢驗(yàn)的準(zhǔn)確度。可以進(jìn)行療效觀察，梅毒復(fù)發(fā)，再感染的診斷。

綜上所述，3種方法用于梅毒檢測(cè)中各有長(zhǎng)處以及短處，臨床應(yīng)該根據(jù)具體的情況合理的選擇檢驗(yàn)方法，從根本上提高梅毒確診率。

參考文獻(xiàn)：

[1]高樹恩，焦曉敏.淺談梅毒[J].中華適宜診療技術(shù)雜志，2004，22（4）：13-16.

[2]劉鵬.梅毒螺旋體的檢測(cè)技術(shù)和應(yīng)用現(xiàn)狀[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志，2005，22（10）：939.

[3]林彤，獨(dú)軍政，叢國(guó)正，等.膠體金標(biāo)記免疫層析技術(shù)的最新應(yīng)用進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38，（16）.

[4]郭家權(quán)，洪敏，林永前.酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)與甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)在梅毒檢驗(yàn)中應(yīng)用價(jià)值的比較[J].廣東醫(yī)學(xué)，2014，35（5）.

[5]吳勁松.RPR與TPPA檢測(cè)對(duì)梅毒診斷及療效的價(jià)值分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2011，4（02）：63-64.

編輯/哈濤