新疆漢族人群ALDH2（Glu504Lys）基因多態(tài)性分析與原發(fā)性高血壓的關(guān)系

摘要：目的 探討乙醛脫氫酶2（ALDH2）基因第504位點(diǎn)（Glu504Lys）多態(tài)性與新疆漢族人群原發(fā)性高血壓的關(guān)系。方法 選取無親緣關(guān)系的217例漢族（其中高血壓組108例、對(duì)照組109例），采用基因芯片法比較兩組ALDH2基因型的分布頻率是否存在差異。結(jié)果 檢測(cè)到三種基因型，漢族人群基因型分布符合Hardy-Weinberg 平衡；新疆漢族人群與上海市、山東省、洛陽市、浙江省漢族比較基因型均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P>0.05）。ALDH2野生純合子型ALDH2*1/*1、ALDH2突變雜合型ALDH2*1/*2和ALDH2突變純合子型ALDH2*2/*2在高血壓組中發(fā)生率分別為64.8%（70/108）、30.6%（33/108）、4.6%（5/108）；在對(duì)照組中發(fā)生率分別為69.7%（76/109）、29.4%（32/109）、0.9%（1/109）；高血壓組、對(duì)照組等位基因*1的發(fā)生率分別為80.1%、84.4%，等位基因*2的發(fā)生率分別為19.9%、15.6%。兩組間乙醛脫氫酶2（ALDH2）基因的第504位點(diǎn)基因型及等位基因分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 新疆漢族人群與本文中提到的其他地區(qū)漢族人群乙醛脫氫酶2基因型及等位基因分布大致相同，高血壓組與對(duì)照組乙醛脫氫酶2基因多態(tài)性及等位基因分布大致相同。

關(guān)鍵詞：乙醛脫氫酶2；基因多態(tài)性；原發(fā)性高血壓；漢族

Abstract： Objective To investigate the association between gene polymorphism of ALDH2（Gh504Lys）and hypertension among Xinjiang Han people.Methods A total of 217unrelated Xinjiang Han people were difided into hypertension group（rt=108）and control group（n=109）.Gene chip method Was used to detect the mutation.ALDH2 gene（Glu504Lys）polymorphisms distribution of the two groups were compared.Results Three different ALDH2 gene（Glu504Lys）genotypes were observed in this study. The distribution of the three ALDH2 genotypes 0f two group were according with Hardy-Weinberg principle.The frequencies of wild-type ALDH2（ALDH2*1/*1），mutant heterozygous type ALDH2（ALDH2*/*2）and mutant homozygous type ALDH2（ALDH2*2/*2） In the hypertension group were 64.8%， 30.6%， 4.6%，respectively.In control group were 69.7%， 29.4%， 0.9%，respectively. The frequencies of ALDH2*1 in hypertension and control group were 80.1%、84.4%，respectively；The frequencies of ALDH2*2 were19.9%，15.6%，respectively. There is no significant between hypertension and control group.Condusion Han patient in Xinjiang and other regions mentioned in this article Han patient aldehyde dehydrogenase 2 genotype and allele have the same distribution.hypertension and control group aldehyde dehydrogenase 2 genotype and allele have the same distribution.

Key words： Acetaldehyde dehydrogenase 2；Gene polymorphism；Hypertension；Uighur

高血壓是由遺傳基因與多種環(huán)境因素共同作用形成的慢性疾病，可并發(fā)心臟、腦、腎臟等重要靶器官功能性或器質(zhì)性改變，迄今仍嚴(yán)重威脅著人類身心健康。高血壓發(fā)病機(jī)制及其復(fù)雜。相關(guān)研究表明，遺傳因素對(duì)人類血壓變異的影響高達(dá)25%～65%[1]。

乙醛脫氫酶是由多種同工酶組成的一個(gè)大家族，其中ALDH2存在于肝臟線粒體內(nèi)，與人類的飲酒行為和體內(nèi)硝酸酯類代謝關(guān)系密切。最近一些報(bào)道顯示，ALDH2野生型是對(duì)抗氧化應(yīng)激的保護(hù)因子，通過抑制體內(nèi)的氧化應(yīng)激，減輕動(dòng)脈粥樣硬化和高血壓[2-3]。而目前對(duì)于ALDH2基因多態(tài)性與高血壓發(fā)生之間的關(guān)系國(guó)內(nèi)外相關(guān)報(bào)道尚不一致[4-5]。本文采用基因芯片法，檢測(cè)新疆地區(qū)漢族人群中ALDH2基因第504號(hào)位點(diǎn)的基因型（Glu504Lys）多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的關(guān)系。

1資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年10月～2013年11月在我院我科住院的漢族高血壓患者108例，男90例，女18例，年齡（63.53±14.52）歲，診斷均符合2010年《中國(guó)高血壓防治指南》高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)。選擇同期非高血壓患者109例，男74例，女35例，年齡（58.03±15.04）歲；兩組均為來自新疆地區(qū)漢族常住居民，相互之間無血緣關(guān)系及異族通婚史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①繼發(fā)性高血壓；②合并嚴(yán)重心功能不全、腎功能不全者，惡性腫瘤、免疫系統(tǒng)疾?。虎酆喜?yán)重心腦血管并發(fā)癥、自身免疫性疾病、急慢性感染患者。

1.2 方法

1.2.1 生化指標(biāo)的測(cè)定：所有患者清晨空腹抽取無抗凝劑靜脈血2ml送檢。血標(biāo)本嚴(yán)格按操作要求處理，均在2h內(nèi)完成檢測(cè)。血肌酐、尿酸、葡萄糖、血脂、脂蛋白a、血清胱抑素等指標(biāo)采用美國(guó)Beckman Coulter DxC80全自動(dòng)分析儀測(cè)定（試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品均由浙江夸克生物技術(shù)公司提供）。

1.2.2 ALDH2基因型檢測(cè) ①樣本收集、DNA提?。鹤袷刂橥庠瓌t，抽取研究對(duì)象靜脈血2ml，EDTA（乙二胺四乙酸二鈉）抗凝管中，按照上海白鷗科技有限公司提供的血液基因組DNA提取試劑盒要求提取和純化DNA。②PCR擴(kuò)增條件為：將ALDH2擴(kuò)增液分裝到0.2ml無菌薄壁管中，每管22μl。每管再加1μl反應(yīng)液A，2μl提取好的DNA溶液，昆勻后離心，將各管放人PCR儀中50℃5min；94℃5min；94℃25sec，60℃25sec，72℃30sec，35cycles。③雜交顯色：取出Baio雜交顯色試劑盒，將反應(yīng)試管條拿出（其中預(yù)雜交液、洗液1、洗液2和洗液3已加在反應(yīng)試管條的各自試管杯中，做好標(biāo)記），將反應(yīng)液B低速離心，吸取10μl加入雜交緩沖液中混勻，吸取190μl雜交緩沖液，加入10μl PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，混勻，加入到反應(yīng)試管條的預(yù)雜交液試管杯中；取出抗體，按1：1管的比例，加抗體稀釋劑，振蕩混勻，制成抗體使用液，吸取200μl的抗體使用液到反應(yīng)試管條的抗體試管杯中；再加200μl顯色液到反應(yīng)試管條的顯色試管杯中。把反應(yīng)試管條放入雜交儀中雜交，結(jié)束后將取出的芯片放人生物芯片識(shí)讀儀中，用Baio基因芯片圖像分析軟件V 2.0進(jìn)行圖像掃描與數(shù)據(jù)分析，輸出檢測(cè)結(jié)果。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，用Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)樣本的群體代表性，計(jì)量資料以 x±s表示，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)， P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組基線資料比較 年齡、性別、體重指數(shù)、糖尿病病史、血肌酐、尿酸等比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。吸煙史、飲酒史、冠心病病史、葡萄糖、甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、血清胱抑素等比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2 Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn) 兩組ALDH2基因基因型及等位基因分布均符合Hardy-Weinberg 平衡，具有一定的群體代表性（ χ2=0.149，P=0.699），見表2。

2.3 本研究結(jié)果與其他地區(qū)漢族人群該基因型及等位基因比較 新疆地區(qū)漢族分別與上海市、山東市、洛陽市、浙江地區(qū)漢族ALDH2基因型及等位基因比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。見表3。

2.4 本研究我們將新疆地區(qū)漢族人群分成高血壓和非高血壓組。兩組人群同樣檢測(cè)到ALDH2的三種基因型。高血壓組突變型雜合子和突變型純合子發(fā)生率高于非高血壓組，但兩組間基因型及等位基因分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（分別為χ2= 2.924，P=0.232，χ2= 1.382，P=0.260），見表3。

3討論

高血壓是以血管重塑為特征的全身性疾病，而氧化應(yīng)激在血管重構(gòu)發(fā)生、發(fā)展過程中扮演重要的角色。ALDH2是ALDH同工酶家族中的重要成員，在人群中有3種組合方式：野生純合子GG型：ALDH2*1/*1、突變雜合子GA型：ALDH2*1/*2和突變純合子AA型：ALDH2*2/*2。由于ALDH2基因第12外顯子內(nèi)G（鳥嘌呤）→ A（腺嘌呤）的點(diǎn)突變，導(dǎo)致翻譯產(chǎn)物第504位氨基酸發(fā)生了谷氨酸→賴氨酸的替換，使ALDH2酶活性的喪失。ALDH2基因多態(tài)性在不同人種、民族、地域分布不同。國(guó)內(nèi)相關(guān)研究顯示，該基因在上海人群與山東人群中基因型及等位基因分布差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[6]。本文對(duì)新疆地區(qū)漢族人群分別與上海市、山東省、洛陽市、浙江省等地區(qū)漢族間進(jìn)行比較，結(jié)果顯示基因型及等位基因分布差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見表-3）。與既往研究不一致，考慮原因與樣本量及入選對(duì)象不同有關(guān)。

ALDH2是參與乙醇代謝的關(guān)鍵酶，具有抑制心肌細(xì)胞凋亡、對(duì)抗心肌細(xì)胞氧化損傷的作用。ALDH2也是硝酸甘油代謝的關(guān)鍵酶，使硝酸甘油代謝生成二硝酸甘油和一氧化氮（NO）NO為氣體自由基，可舒張血管，增加血管壁彈性和順應(yīng)性，改善老年單純收縮期高血壓的脈壓增大問題。目前相關(guān)研究證實(shí)，該基因多態(tài)性與多種心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。ALDH2酶活性降低會(huì)增加體內(nèi)氧化應(yīng)激，增加高血壓風(fēng)險(xiǎn)。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)[8-9]ALDH2缺失型可能是獨(dú)立于飲酒之外的高血壓危險(xiǎn)因素。馮契[4]等的研究顯示，高血壓病組野生型基因及等位基因ALDH2*1的比例較對(duì)照組高，而突變型基因及等位基因ALDH2*2的比例較低，但基因型及等位基因分布均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別為P=0.264，P=0.164）。而呂遠(yuǎn)棟[5]的研究顯示，高血壓組野生型基因發(fā)生率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.48，P<0.05）。我們這次研究結(jié)果顯示，高血壓組ALDH2純合子型（野生型）發(fā)生率低于對(duì)照組，而突變型雜合子、突變型純合子及等位基因A發(fā)生率均高于非高血壓組，但兩組間基因型及等位基因分布差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見表4），與既往報(bào)道結(jié)果不一致，考慮原因可能與樣本量不同有關(guān)，但目前相關(guān)研究并未排除該基因多態(tài)性與高血壓無顯著關(guān)系。

隨著人類全基因組計(jì)劃的完成，人們愈來愈相信基因組中的單核苷酸多態(tài)性（SNP）有助于解釋個(gè)體的表型差異、對(duì)疾病的易感性、對(duì)藥物的反應(yīng)性和對(duì)環(huán)境因子的耐受性。綜上所述，ALDH2基因多態(tài)性與新疆地區(qū)漢族人群發(fā)生高血壓可能不相關(guān)。本研究中高血壓組與對(duì)照組之間在年齡、性別、體重指數(shù)、糖尿病病史、血肌酐、尿酸等指標(biāo)間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這些指標(biāo)也是高血壓的危險(xiǎn)因素之一，這些危險(xiǎn)因素與ALDH2基因型之間有無內(nèi)在關(guān)系在目前所能獲得的相關(guān)研究里還未明確。由于本研究樣本量的的局限性，未能對(duì)ALDH2基因突變與高血壓及其危險(xiǎn)因素之間的因果關(guān)系作出評(píng)價(jià)，還有待于擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。

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編輯/馮焱