尿蛋白定性與定量方法比較分析

摘要：目的 比較（UPRO）定性與定量方法測(cè)定尿蛋白的符合率。評(píng)價(jià)尿蛋白的臨床常見定性和定量檢測(cè)方法對(duì)蛋白尿的診斷價(jià)值。方法 用試帶法（定性）和比濁法（定量）、比色法（定量）測(cè)定尿蛋白。分別用兩種方法同時(shí)檢測(cè)一定數(shù)量標(biāo)本，進(jìn)行符合率比較。結(jié)果 尿總蛋白低于1.63g/24h時(shí)，其與尿蛋白定性實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性符合率為52.24%；微量白蛋白大于300mg/L時(shí)，尿蛋白定性實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性符合率為98.47%，微量白蛋白100～300mg/L的患者共有61例，尿蛋白定性實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性符合率為21.31%。結(jié)論 尿蛋白檢測(cè)各種方法都存在一定的優(yōu)缺點(diǎn)，在檢測(cè)尿蛋白時(shí)需要結(jié)合具體的臨床情況來(lái)選擇合適的方法。

關(guān)鍵詞： 尿蛋白；定性檢測(cè)；定量檢測(cè)

Comparative Analysis of Qualitative and Quantitative Methods of Urine Protein

XUE Xia，SHEN Ying，SHAN Yong-mei，LI Dong

（Department of Clinical Laboratory，Shanghai Tongji Hospital，Shanghai 200065，China）

Abstract：Objective To compare （UPRO） qualitative and quantitative method for the determination of urinary protein. To evaluate the diagnostic value of urine protein in the diagnosis of proteinuria.

Methods Using the method of the test with the method （Qualitative） and the ratio of the turbidity method （Quantitative）， colorimetric method （Quantitative） for the determination of urinary protein. Two methods were used to detect a certain number of specimens， and the coincidence rate was compared. Results When total urinary protein lower than 1.63g/24h， the positive coincidence rate with qualitative urine protein test was 52.24%； microalbuminuria is greater than 300mg / L， uric albumen is qualitative experiment positive coincidence rate was 98.47%， albumin 100mg / L ～ 300 mg / L with a total of 61 people， uric albumen is qualitative experiment positive with rate was 21.31%. Conclusion There are some advantages and disadvantages of all kinds of methods for detecting urine protein. In the detection of urine protein， it should be combined with the specific clinical situation to choose the appropriate method.

Key words：Urinary protein；Qualitative detection；Quantitative detection

在尿液的化學(xué)成分的檢查中，蛋白質(zhì)是十分重要的項(xiàng)目之一。在正常情況下，由于腎小球?yàn)V過膜的濾過作用和腎小管的重吸收作用，終尿中的蛋白質(zhì)含量是很少的，僅僅為30～130mg/24h。隨機(jī)尿的尿蛋白定性實(shí)驗(yàn)一般是陰性的，含量為0～80mg/L。蛋白尿是指尿蛋白定性實(shí)驗(yàn)呈現(xiàn)陽(yáng)性，此時(shí)，尿液中的蛋白質(zhì)含量大于100mg/L或者超過150mg/24h[1]。蛋白尿的測(cè)定是管理腎病患者的核心部分，且在診斷和監(jiān)測(cè)漿細(xì)胞病、血管內(nèi)溶血性疾病、急性肌肉損傷、酶類增高性疾病有重要意義，還與膀胱以下的泌尿系統(tǒng)疾病有關(guān)，如結(jié)石、炎癥、腫瘤等。在進(jìn)行尿蛋白的測(cè)定時(shí)，應(yīng)對(duì)具體情況進(jìn)行具體分析，綜合考慮到各種影響因素，選擇最為適宜的方法。本文就目前尿蛋白檢測(cè)的常用方法對(duì)蛋白尿的診斷價(jià)值進(jìn)行評(píng)價(jià)，具有十分重要的臨床意義。

1資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 主要試劑 韓國(guó)盈東試帶條（國(guó)藥管械字2002第3040009號(hào)，由酚藍(lán)試劑以雙面膠黏附于聚氯已烯片基上構(gòu)成，100根/筒；10筒/盒）、西門子白蛋白測(cè)定試劑盒（兔抗人血清白蛋白試劑）、尿總蛋白檢測(cè)試劑盒（由郞道公司出品， 貨號(hào)：UP1571，試劑盒主要成分包括60mol/l焦棓酸紅 、40mol/l鉬酸二鈉、150mmol/l琥珀酸、1 mmol/l草酸鈉、3 mmol/l安息香酸鈉）。

1.1.2 主要儀器 盈東尿液分析儀（URISCAN PRO） 、西門子特定蛋白分析儀（BN II）、722分光光度計(jì)。

1.2 方法

1.2.1 尿蛋白定性檢測(cè)方法 試帶法：在pH3.0的強(qiáng)酸環(huán)境下，蛋白質(zhì)自身的陽(yáng)性離子能與溴酚藍(lán)的陰性離子反應(yīng)生成復(fù)合物，生成復(fù)合物后會(huì)引起酸堿指示劑溴酚藍(lán)的進(jìn)一步電離，這時(shí)，指示劑將會(huì)發(fā)生顏色的變化。蛋白質(zhì)的含量與指示劑顏色變化的深淺是呈正相關(guān)的。采集尿液時(shí)最好采集條件相對(duì)恒定的晨尿，應(yīng)留取10ml新鮮的清潔尿液，需要置于一次性的清潔的有蓋容器。

1.2.2尿蛋白定量檢測(cè)方法

1.2.2.1比濁法（散射比濁法） 在免疫化學(xué)反應(yīng)中，尿液中的蛋白質(zhì)與相應(yīng)的抗體在某種電解質(zhì)溶液中發(fā)生特異性反應(yīng)，形成小分子的免疫復(fù)合物，利用某種增濁劑使其迅速形成較大分子的免疫復(fù)合物微粒（>19S），這些復(fù)合物會(huì)使得穿過標(biāo)本的光束發(fā)生散射，散射光的強(qiáng)度與尿液中相關(guān)蛋白的濃度成正比。適用的標(biāo)本為人的新鮮尿液，注意不得冷凍尿液，而且每份尿液在檢測(cè)前都必須經(jīng)過離心沉淀。

1.2.2.2比色法 在含有鉬酸鹽離子的酸性環(huán)境中，焦棓酸紅復(fù)合物與蛋白質(zhì)反應(yīng)。反應(yīng)生成的藍(lán)色復(fù)合物，該藍(lán)色復(fù)合物在600nm處有最大吸收值。因此，標(biāo)本在600nm測(cè)得的光密度與蛋白質(zhì)濃度是成比例的。該方法需要采集24h尿液，放在以甲苯作為防腐劑的干凈的容器中，且要準(zhǔn)確量出其體積。

1.2.3研究方法

1.2.3.1比較24h尿總蛋白與尿蛋白定性實(shí)驗(yàn) 選取上海同濟(jì)醫(yī)院2015年2月～5月，在同一天進(jìn)行這兩項(xiàng)檢測(cè)的患者且兩項(xiàng)檢測(cè)中有一項(xiàng)大于參考范圍，共有67例，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。

1.2.3.2比較微量白蛋白與尿蛋白定性實(shí)驗(yàn) 選取上海同濟(jì)醫(yī)院2015年2月～5月，在同一天進(jìn)行這兩項(xiàng)檢測(cè)的患者且兩項(xiàng)檢測(cè)中有一項(xiàng)大于參考范圍，共有368例，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。

1.2.3.3比較微量白蛋白與24h尿總蛋白檢測(cè) 選取上海同濟(jì)醫(yī)院2015年2月～5月，在同一天進(jìn)行這兩項(xiàng)檢測(cè)的患者且兩項(xiàng)檢測(cè)中有一項(xiàng)大于參考范圍，共有72例，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。

2結(jié)果

2.1比較24h尿總蛋白與尿蛋白定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 67例患者檢測(cè)中，當(dāng)24h尿總蛋白未檢出時(shí)，尿蛋白定性實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性患者為0例。24h尿總蛋白檢出，當(dāng)24h尿總蛋白低于1.63g/24h時(shí)，其與尿蛋白定性實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性符合率為52.24%，結(jié)果見表1。

2.2比較微量白蛋白與尿蛋白定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 微量白蛋白大于300mg/L時(shí)，尿蛋白定性陽(yáng)性患者有129例，尿蛋白定性陰性患者有2例，尿蛋白定性實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性符合率為98.47%，微量白蛋白100～300mg/L的患者共有61例，其中尿蛋白定性陽(yáng)性患者有13例，尿蛋白定性陰性患者有48例，在此微量白蛋白含量的范圍內(nèi)，尿蛋白定性實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性符合率僅僅為21.31%，結(jié)果見表2。

2.3比較24h尿總蛋白與微量白蛋白定量實(shí)驗(yàn)結(jié)果 同時(shí)進(jìn)行24h尿總蛋白與微量白蛋白檢測(cè)的72例患者中，24h尿蛋白陰性時(shí)，微量白蛋白大于30mg/L的患者有0例；24h尿蛋白陽(yáng)性時(shí)，微量白蛋白大于30mg/L的患者有50例，而小于30mg/L的患者有22例。結(jié)果見表3。

3討論

尿蛋白定性實(shí)驗(yàn)中的試帶法的最小檢測(cè)量為100mg/L，而在微量白蛋白0～100mg/L的172例患者中，尿蛋白定性陽(yáng)性患者有8例，而試帶法檢測(cè)的主要蛋白成分是尿液中的白蛋白，所以這8例患者可能出現(xiàn)了假陽(yáng)性結(jié)果，或者存在其他可以檢測(cè)的蛋白成分。微量白蛋白大于300mg/L時(shí)，尿蛋白定性陽(yáng)性患者有129例，尿蛋白定性陰性患者有2例，尿蛋白定性實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性符合率為98.47%。微量白蛋白100～300mg/L的患者共有61例，其中尿蛋白定性陽(yáng)性患者有13例，尿蛋白定性陰性患者有48例，在此微量白蛋白含量的范圍內(nèi)，尿蛋白定性實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性符合率僅僅為21.31%。由此，可以看出科室存在的尿白蛋白檢測(cè)陽(yáng)性而尿蛋白定性陰性的問題，并發(fā)現(xiàn)了300mg/L這個(gè)比較有意義的界限，即在微量白蛋白低于300mg/L時(shí)，尿蛋白定性實(shí)驗(yàn)存在較為嚴(yán)重的漏檢現(xiàn)象，出現(xiàn)這一現(xiàn)象的原因有待進(jìn)一步觀察和探討。

同時(shí)進(jìn)行24h尿總蛋白與微量白蛋白檢測(cè)的72例患者中，24h尿蛋白陰性時(shí)，微量白蛋白大于30mg/L的患者有0例；24h尿蛋白陽(yáng)性時(shí)，微量白蛋白大于30mg/L的患者有50例，而小于30mg/L的患者有22例，這是由于24h尿總蛋白除了可以檢測(cè)出白蛋白外，還可以檢測(cè)其他蛋白成分。

尿蛋白試帶法可用于尿蛋白的定性或者半定量檢測(cè)，主要用于尿液分析儀，也可以用于肉眼觀察。該方法操作十分簡(jiǎn)便、快速、也易于標(biāo)準(zhǔn)化。不同類型的試帶的靈敏度是存在差異的，一般為70～100mg/L，這與使用的酸堿指示劑是有關(guān)的[2，3]。試帶法對(duì)尿中白蛋白敏感，尿中球蛋白的靈敏度僅僅為白蛋白的1/100～1/50，這樣會(huì)容易使得本周蛋白漏檢。

尿蛋白定量檢測(cè)方法較多，常用的有比濁法、比色法、酶聯(lián)免疫分析法、放射免疫分析法、尿蛋白電泳等。酸沉淀比濁法靈敏度高、操作簡(jiǎn)便，但缺點(diǎn)是存在較多影響濁度大小的因素，而且各種蛋白質(zhì)形成的濁度也具有較大的差別，因此臨床上大多使用免疫比濁法[4]，以散射比濁法居多，該法檢測(cè)速度快、穩(wěn)定性好、靈敏度和精確度高，但是儀器和試劑價(jià)格比較貴，對(duì)抗體的質(zhì)量要求也比較高。雙縮脲比色法特異性較好，各種蛋白質(zhì)的呈色一致性也比較好。此法的檢測(cè)范圍是10～120g/L，靈敏度不高，適合血清總蛋白濃度和胸腹腔積液總蛋白濃度的測(cè)定，但是對(duì)于蛋白質(zhì)濃度比較低的尿液來(lái)說并不是合適的定量方法[5]。酚試劑比色法的靈敏度高，但易受還原性化合物的干擾（如糖類、酚類、帶-SH的化合物等），而且由于各種蛋白質(zhì)含有的酪氨酸和色氨酸的量不同，如球蛋白的色氨酸含量為2%～3%而白蛋白的色氨酸含量為0.2%，所以此方法不適合用來(lái)測(cè)定混合蛋白質(zhì)，僅僅適合測(cè)定單一蛋白質(zhì)。染料結(jié)合比色法簡(jiǎn)便、靈敏、快速，但存在試劑吸附于比色杯、不同蛋白質(zhì)與染料的結(jié)合力不一致的問題[6]。酶聯(lián)免疫分析法靈敏度、特異性高，可檢測(cè)幾乎所有可溶性抗原抗體系統(tǒng)，且標(biāo)記試劑穩(wěn)定，無(wú)放射危害[7]。放射免疫分析法法靈敏度、特異性、精密度、準(zhǔn)確性高，但是放射核素有一定的危害性[8]。尿蛋白電泳主要用于確定尿液中蛋白質(zhì)的種類及分子量大小，可用于診斷評(píng)估特定的臨床疾病并了解腎臟病變程度。

檢測(cè)尿蛋白是腎病以及其他有蛋白尿指征患者管理的關(guān)鍵，因此選擇合適尿蛋白的檢測(cè)方法具有重要的臨床意義。尿蛋白檢測(cè)各種方法都存在一定的優(yōu)缺點(diǎn)，在檢測(cè)尿蛋白時(shí)需要結(jié)合具體的臨床情況來(lái)選擇合適的方法，像健康體檢、初次就診患者、疾病篩檢、現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)等，可以采用試帶法或磺基水楊酸法，當(dāng)進(jìn)行疾病的確認(rèn)診斷、療效的觀察或者預(yù)后的判斷時(shí)，最好采用尿蛋白定量檢測(cè)和特定蛋白質(zhì)的分析。

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