功能性消化不良患者胃黏膜肥大細(xì)胞及5—羥色胺變化的研究

摘要：目的 初步探討胃黏膜肥大細(xì)胞及5-羥色胺的變化在功能性消化不良患者發(fā)病機(jī)制中的作用。方法 選擇符合功能性消化不良患者診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者作為實(shí)驗(yàn)組，取健康志愿者作為對(duì)照組。應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)胃黏膜肥大細(xì)胞含量。應(yīng)用高效液相電化學(xué)檢測(cè)法測(cè)定胃黏膜5-羥色胺濃度，結(jié)合臨床資料數(shù)據(jù)對(duì)照比較。結(jié)果 ①?gòu)谋狙芯恐锌梢钥闯鰧?shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在胃黏膜肥大細(xì)胞含量及胃黏膜5-羥色胺濃度都有顯著性差異（P<0.05）。②從本研究中可以看出實(shí)驗(yàn)組患者胃黏膜5-羥色胺濃度與胃黏膜肥大細(xì)胞數(shù)目、胃黏膜肥大細(xì)胞脫顆粒比率之間有明顯相關(guān)性（P<0.05）。結(jié)論 胃黏膜肥大細(xì)胞含量增高及胃黏膜5-羥色胺濃度的異常在功能性消化不良發(fā)病機(jī)制中起一定的作用。

關(guān)鍵詞：功能性消化不良；肥大細(xì)胞；5-羥色胺

Clinical Study on the Changes of Gastric Mucosal Mast Cells and 5- in Patients with Functional Dyspepsia

LIU Tao，ZHANG Huan，CHEN Jie

（Affiliated Hospital of Jiangxi TCM University，Nanchang 330006，Jiangxi，China）

Abstract：Objective To investigate the effect of the changes of gastric mucosal mast cells and 5-HT in the pathogenesis of functional dyspepsia.Methods Patients with functional dyspepsia patients were selected as the experimental group， taking healthy volunteers as the control group. Detection of mast cell in gastric mucosa by immunohistochemical method. Application of high efficiency liquid phase electrochemical detection method for the determination of 5- concentration in gastric mucosa， and the comparison of clinical data.Results ① from the present study， we can see that there is a significant difference between the experimental group and the control group in the gastric mucosal mast cell content and gastric mucosal 5-HT serotonin concentration （P < 0.05）.②from the present study， we can see that there is a significant correlation between the concentration of 5-HT in the gastric mucosa of the experimental group and the number of mast cells in gastric mucosa， and the percentage of mast cells in gastric mucosa （P<0.05）.Conclusion Gastric mucosal mast cells increased and 5-HT concentration of gastric mucosa in the pathogenesis of functional dyspepsia.

Key words：Functional dyspepsia； Mast cell； 5-HT

功能性消化不良是臨床上消化科門(mén)診中最為常見(jiàn)的功能性疾病之一，占消化內(nèi)科門(mén)診大約為50%左右[1-2]。功能性消化不良病因復(fù)雜，對(duì)其發(fā)病機(jī)制目前尚未研究清楚，初步發(fā)現(xiàn)可能是多種因素及病因?qū)δ苄韵涣嫉陌l(fā)病起到了協(xié)同作用[3]，本研究是初步探討胃黏膜肥大細(xì)胞及胃黏膜5-羥色胺含量在功能性消化不良患者發(fā)病機(jī)制中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集在江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科就診的門(mén)診及住院病人作為研究對(duì)象。選擇符合功能性消化不良患者診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]的患者32例作為實(shí)驗(yàn)組，來(lái)自本院體檢中心的健康志愿者16例作為對(duì)照組。

1.2方法

1.2.1胃黏膜肥大細(xì)胞含量及脫顆粒比率的測(cè)定

1.2.1.1標(biāo)本采集和處理 所有研究對(duì)象均接受胃鏡檢查，取胃竇粘膜 2 塊，用固定液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，做連續(xù)切片，切片厚度 6 um。

1.2.1.2胃黏膜肥大細(xì)胞含量的測(cè)定 利用顯微鏡下查看肥大細(xì)胞的形態(tài)并計(jì)數(shù)，在高倍視野（×400）下隨機(jī)取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)肥大細(xì)胞數(shù)并取平均值。肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)以平均每高倍視野的肥大細(xì)胞個(gè)數(shù)表示。

1.2.1.3 胃黏膜肥大細(xì)胞脫顆粒比率的測(cè)定 利用顯微鏡下查看每張切片隨機(jī)選5個(gè)高倍視野（×400），計(jì)數(shù)肥大細(xì)胞總數(shù)及脫顆粒肥大細(xì)胞數(shù)。肥大細(xì)胞脫顆粒比率則以脫顆粒肥大細(xì)胞數(shù)占總肥大細(xì)胞比值表示。

1.2.2 5-羥色胺檢測(cè)

1.2.2.1用0.5%磺基水楊酸0.1 ml與黏膜組織一起于玻璃勻漿器中勻漿，勻漿液于離心機(jī)中4℃下15000轉(zhuǎn)/min離心10 min，取上清液20 ul進(jìn)行分析。

1.2.2.2高效液相電化學(xué)法測(cè)定：流動(dòng)相：0.1 mol/L NaH2PO4溶液，內(nèi)含0.1 mmol/L EDTA-Na2，5 mmol/L庚烷磷酸鈉，磷酸調(diào)pH至4.5，7%乙腈。使用前脫氣處理。色譜柱：Spherisorb ODS（C18）柱，250×4.6（id）m，dp 5 um。流速0.8 ml/min，工作電壓0.75 V，柱溫30℃。上清液20 ul直接進(jìn)樣測(cè)定5-羥色胺。以保留時(shí)間定性與外標(biāo)法（峰面積）定量，方法的準(zhǔn)確度、精密度、重現(xiàn)性均符合要求。

1.2.2.3 5-羥色胺結(jié)果判定 高效液相電化學(xué)法最終結(jié)果為黏膜所含的5-羥色胺質(zhì)量，5-羥色胺質(zhì)量與粘膜質(zhì)量相比，即為5-羥色胺濃度（ng/g粘膜組織）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 15.0軟件包。兩個(gè)樣本均數(shù)之間的比較采用t檢驗(yàn)，多個(gè)樣本均數(shù)之間的比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），肥大細(xì)胞含量、5-HT濃度之間關(guān)系采用Pearson直線相關(guān)分析，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著定義為P<0.05。

2結(jié)果

2.1胃黏膜肥大細(xì)胞含量及脫顆粒比率的測(cè)定的結(jié)果 從本研究中可以看出實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在胃黏膜肥大細(xì)胞含量及脫顆粒比率上有顯著性差異（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2胃黏膜5-羥色胺濃度檢測(cè)的結(jié)果 從本研究中可以看出實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在5-羥色胺檢測(cè)上有顯著性差異（P<0.05），見(jiàn)表2。

2.3胃黏膜5-羥色胺濃度與胃黏膜肥大細(xì)胞數(shù)目、胃黏膜肥大細(xì)胞脫顆粒比率之間的關(guān)系：從本研究中可以看出胃黏膜5-羥色胺濃度與胃黏膜肥大細(xì)胞數(shù)目、胃黏膜肥大細(xì)胞脫顆粒比率之間有明顯相關(guān)性（P<0.05），見(jiàn)表3。

3討論

3.1胃黏膜肥大細(xì)胞與功能性消化不良發(fā)病的關(guān)系 肥大細(xì)胞廣泛分布于皮膚、淋巴組織、子宮、膀胱、呼吸道和消化道黏膜、黏膜下毛細(xì)血管和淋巴管周圍的結(jié)締組織中，肥大細(xì)胞表面有多種受體表達(dá)，當(dāng)細(xì)胞受體與其識(shí)別的特異性抗原結(jié)合時(shí)，可被激活而發(fā)生特征性化學(xué)和形態(tài)改變，稱為過(guò)敏性脫顆粒，能引起生物活性介質(zhì)的通道開(kāi)放，釋放生物活性介質(zhì)[5]。肥大細(xì)胞釋放的生物活性介質(zhì)[6]包括：生物胺、酶、花生四烯酸及代謝產(chǎn)物、腺苷、神經(jīng)肽、細(xì)胞因子等，其中有預(yù)先合成在刺激后立即釋放的介質(zhì)，如5-羥色胺、各種蛋白酶、神經(jīng)肽以及某些細(xì)胞因子，也有受刺激后新合成介質(zhì)，如花生四烯酸代謝物（前列腺素、白三烯）。早在1990年Matter對(duì)功能性消化不良患者胃竇部肥大細(xì)胞的研究中發(fā)現(xiàn)，大約有13%的患者每個(gè)高倍鏡視野有11個(gè)或更多的肥大細(xì)胞，同時(shí)伴有脫顆粒比率明顯增多。本研究發(fā)現(xiàn)功能性消化不良患者的胃黏膜肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)及脫顆粒比率明顯增多，與許多國(guó)內(nèi)外的研究結(jié)果基本相似[7]。提示胃黏膜肥大細(xì)胞與功能性消化不良存在一定的相關(guān)性。

3.2胃黏膜5-羥色胺與功能性消化不良發(fā)病的關(guān)系 5-羥色胺是廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸道的一種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，具有多種生物學(xué)功能，參與胃腸運(yùn)動(dòng)、攝食、睡眠、情緒、認(rèn)知及生殖等在內(nèi)的多種生理功能調(diào)控。人體內(nèi)總的5-羥色胺約95%存在于胃腸道中，其余的5%存在于人腦之中。功能性消化不良主要表現(xiàn)為胃腸動(dòng)力異常、內(nèi)臟感覺(jué)過(guò)敏和精神心理異常。相關(guān)研究認(rèn)為可能與5-羥色胺的下列功能有關(guān)[8]：①調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)功能：5-羥色胺既可使胃腸道平滑肌收縮，又可使之松弛[9]，但更多的是先舒張后收縮的雙向反應(yīng)，引起胃腸的分節(jié)運(yùn)動(dòng)。②調(diào)節(jié)內(nèi)臟感覺(jué)：5-羥色胺1～3受體在介導(dǎo)外周痛覺(jué)中起重要作用。③與精神情志密切相關(guān)：5-羥色胺是廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸道的神經(jīng)遞質(zhì)，它在中樞內(nèi)水平的改變可導(dǎo)致精神行為障礙。本研究發(fā)現(xiàn)功能性消化不良患者的胃黏膜5-羥色胺濃度明顯升高，提示胃黏膜5-羥色胺濃度與功能性消化不良存在一定的相關(guān)性。

3.3胃黏膜5-羥色胺濃度與肥大細(xì)胞之間的關(guān)系 目前的研究認(rèn)為，肥大細(xì)胞很可能是在神經(jīng)和免疫機(jī)制之間擔(dān)當(dāng)溝通作用的重要免疫細(xì)胞，而5-羥色胺是一種廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸道的重要神經(jīng)遞質(zhì)。本研究表明，功能性消化不良患者胃黏膜5-羥色胺濃度與胃黏膜肥大細(xì)胞數(shù)目、胃黏膜肥大細(xì)胞脫顆粒比率之間具有正相關(guān)性，提示對(duì)功能性消化不良胃黏膜5-羥色胺濃度影響可能與腸粘膜肥大細(xì)胞含量增加及誘導(dǎo)消化道的肥大細(xì)胞脫顆粒這一機(jī)制有關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

[1]侯曉華，柯美云，劉新光，等.功能性胃腸病[J].中華消化雜志，2002，22（1）：40.

[2]鄒多武，許國(guó)銘.功能性消化不良的癥狀流行病學(xué)及西沙必利治療多因素分析[J].中華消化雜志，1997，17（增刊）：65.

[3]Kane FJ，Sortein J，Harper RG，F(xiàn)unctional dyspepsia assoeiated with psy-chiartric disorder [J].South Med J，1993：86（6）：641-646.

[4]中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)胃腸動(dòng)力學(xué)組，中國(guó)消化不良的診治指南（2007 大連）[J].中華消化雜志，2007，27（12）：832-834.

[5]王利華，方秀才，潘國(guó)宗.腸易激綜合征患者腸黏膜肥大細(xì)胞與神經(jīng)纖維的關(guān)聯(lián)[J].中華消化雜志，2003，23（6）：332-335.

[6]Mertz H，Naliboff B，Munakata J，et a1.Altered rectal perception is a Biological marker of patients with irritable bowel syndrome[J].Gastroentero]ogy，1995，109（1）：40-52.

[7]朱良如，李啟祥，侯曉華.功能性消化不良患者胃粘膜肥大細(xì)胞的增加[J].胃腸病學(xué)，2002，7（1）：27-29.

[8]袁耀宗.消化系統(tǒng)疾病臨床新技術(shù)[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2002：89.

[9]Kuemmerle JF，Murthy KS，Grider JR，et a1.Coexpression of 5-HT2A and 5-HT4 receptors coupled to distinct'signaiing pathways in human intestinal muscle cells[J].Gastroenterology，1995，109（6）：179-180.

編輯/肖慧