乙型肝炎表面抗原弱反應(yīng)性標(biāo)本檢測(cè)及解決方法

摘要：目的 探討乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱反應(yīng)性標(biāo)本的檢測(cè)及解決方法。方法 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）法篩查出本院2011年～2012年間39例HBsAg弱反應(yīng)性標(biāo)本如下：①S/CO值0.6～1.3，11例；②S/CO值1.3～2.5，15例；③S/CO值2.5～5.0；13例，以上標(biāo)本均做酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），美國雅培公司ARCHITECTi2000SR儀器定量及雅培確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，并比較結(jié)果的差異。結(jié)果 本研究結(jié)果可見：①11例S/CO值在0.6～1.3區(qū)間，ELISA檢測(cè)陽性6例，陰性5例；雅培發(fā)光定量和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)陽性5例，陰性6例，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；②15例S/CO值在1.3～2.5區(qū)間，ELISA檢測(cè)陽性13例，雅培發(fā)光定量和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)陽性13例；③13例S/CO值在2.5～5.0區(qū)間，ELISA檢測(cè)陽性15例，雅培發(fā)光定量和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)陽性15例。結(jié)論 ELISA檢驗(yàn)HBsAg容易出現(xiàn)假陽性，臨床對(duì)于ELISA結(jié)果有懷疑的應(yīng)進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)驗(yàn)證，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

關(guān)鍵詞：乙型肝炎表面抗原（HBsAg）；弱反應(yīng)性；酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）；確認(rèn)試驗(yàn)

Detection and Solution of Hepatitisb Surface Antigen Weak Reactive Specimens

SHEN Yun1，F(xiàn)ANG Xiao-hui1，JIANG Li2，ZHANG Jin3，CHEN Xiao-bin4

（1.Suzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine，Suzhou 215006，Jiangsu，China；2.Gusu District Disease Prevention and Vontrol Venter，Suzhou 215000，Jiangsu，China；3.Suzhou Changqiao Hospital，Suzhou 215000，Jiangsu，China；4.Wuzhong District Health Supervision Institute，Suzhou 215000，Jiangsu，China）

Abstract：Objective To evaluate the detection and solution of hepatitis surface antigen weak reactive specimens.Methods We picked up 39 weak reactive samples of HBsAg From 2011 to 2012 by Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA） as follown：①S/CO 0.6～1.3，11 cases；②S/CO 1.3～2.5，13 cases；③S/CO 2.5～5.0，15 cases，retested the above samples by ELISA and Abbott ARCHITECT i2000SR quantitative confirmation experiment ，then compare the difference between the results.Results From this study，we got following.Results ①11cases of S/CO values in the 0.6 to 1.3 range，ELISA tested positive in 6 cases，negative 5 cases；Abbott luminescence assay quantification and confirmation tested positive in 5 cases，negative 6 cases，between which the difference was statistically significant（P<0.05）.②15 cases of S/CO values ？？in the 1.3 to 2.5 range，ELISA tested positive in 13 cases，Abbott luminous quantitative and experimental tested positive in 13 cases.③13cases of S/CO values in the 2.5 to 5.0 range，ELISA tested positive in 15 cases，Abbott luminescence assay quantification and confirmation tested positive in 15 cases.Conclusion It is very common of 1 positive in HBsAg serum by using ELISA.Therefore，F(xiàn)or the ELISA results of clinical suspicion should be confirmed by confirmatory test to ensure the reliability of test results.

Key words：HepatitisBsurfaceantigen（HBsAg）；Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）；HBsAg confirmatory test；Weak reactive

乙型肝炎是一種全球傳染性疾病，易于慢性化，重癥化。乙肝表面抗原（HBsAg）是目前判斷乙型肝炎病毒感染最直接的病原標(biāo)志，其檢測(cè)的準(zhǔn)確性和可靠性對(duì)于受檢者至關(guān)重要，也對(duì)乙肝的早期診斷及早期治療具有十分重要的意義，然而實(shí)際檢驗(yàn)中因?yàn)閷?shí)驗(yàn)操作的問題，試劑污染或者實(shí)際敏感度等原因會(huì)造成一定程度的漏診和誤診，甚至引發(fā)醫(yī)療糾紛。因此，提高弱反應(yīng)性樣本的正確檢出率具有非常重要的臨床意義。

目前臨床應(yīng)用最多的是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)乙肝表面抗原，它具有簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn)，但其影響因素也較多，如試劑、實(shí)驗(yàn)操作、標(biāo)本因素等。對(duì)處于Cutoff值周圍的臨床意義可疑的“灰區(qū)”標(biāo)本及弱反應(yīng)性標(biāo)本則不盡人意，尤其是S/CO值在0.6～1.3，1.3～2.5，2.5～5.0左右的樣本，經(jīng)反復(fù)檢測(cè)，還無法進(jìn)行定性，容易誤診，影響疾病的診斷、治療，甚至影響到醫(yī)患關(guān)系。而且國產(chǎn)試劑的靈敏度一般在0.5ng/ml，對(duì)HBsAg臨界樣本的檢測(cè)正確率并不理想[1]。因此必須找到一種更準(zhǔn)確、快速的方法來檢測(cè)HBsAg。

本研究通過ELISA和雅培ARCHITECTi2000SRCMIA化學(xué)發(fā)儀確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較分析后，探討如何對(duì)乙肝表面抗原弱反應(yīng)性性標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果判定，以便能減少漏診和誤診。

1資料與方法

1.1一般資料 2011年～2012年從蘇州市中醫(yī)醫(yī)院住院和門診患者及體檢人員檢測(cè)HBsAg定性結(jié)果中，篩選出S/CO值在0.6～5.0之間的標(biāo)本血清39例，標(biāo)本要求無溶血、黃疸、脂血，并放置-80℃冰箱保存：其中S/CO值在0.6～1.3的樣本11例，S/CO值在1.3～2.5的樣本13例，S/CO值在2.5～5.0的樣本15例。

1.2試劑和儀器 乙型肝炎病毒表面抗原ELISA診斷試劑盒（由上?？迫A生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為20080917），所有試劑均在有效期內(nèi)，儀器為美國雅培公司ARCHITECTi2000SR儀器。

1.3方法

1.3.1ELISA檢測(cè) HBsAg采用單克隆抗-HBs包被反應(yīng)板，加入待測(cè)標(biāo)本，同時(shí)加入多克隆抗-HBs-HRP.當(dāng)標(biāo)本中存在HBsAg時(shí)，該HBsAg與包被抗-HBs結(jié)合并與抗-HBs-HRP結(jié)合形成抗-HBs-HRP-抗-HBs-HRP復(fù)合物，加入TMB底物產(chǎn)生顯示反應(yīng)，反之則無顯色反應(yīng)。檢測(cè)的同時(shí)設(shè)陰、陽性對(duì)照各2孔，弱陽性質(zhì)控1孔（為HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品），結(jié)果判斷：以S/CO≥1.0為陽性。

1.3.2雅培ARCHITECTi2000SRCMIA化學(xué)發(fā)儀，用順磁性微粒作為固相載體，通過兩步免疫測(cè)定法，定量檢測(cè)HBsAg，乙型肝炎表面抗原（HBsAg）定量≥0.05IU/ml為陽性。

2結(jié)果

2.1ELISA檢測(cè)HBsAg弱反應(yīng)性結(jié)果統(tǒng)計(jì) ELISA測(cè)得結(jié)果（S/CO），各區(qū)間：0.6～1.3為（0.98±0.19）；（1.3～2.5）為（1.96±0.36）；（2.5～5.0）為（3.86±0.79），見表1。

2.2雅培ARCHITECTi2000SRCMIA化學(xué)發(fā)儀檢測(cè)HBsAg弱反應(yīng)性結(jié)果統(tǒng)計(jì) 各區(qū)間：0.6～1.3為（0.08±0.07）；（1.3～2.5）為（0.65±0.81）；（2.5～5.0）為（2.87±2.76），見表2。

2.3兩種方法檢測(cè)HBsAg弱反應(yīng)性結(jié)果比較 本次試驗(yàn)比較兩種方法檢測(cè)結(jié)果陽性率是否有差別，采用χ2檢驗(yàn)，由表3看出：①1例血清S/CO0.6-1.3，ELISA檢測(cè)為陽性，而雅培發(fā)光定量確認(rèn)實(shí)驗(yàn)則為陰性。這說明弱反應(yīng)標(biāo)本結(jié)果的不穩(wěn)定性。ELISA法檢測(cè)存在一定的假陽性；②S/CO在1.3～2.5，2.5～5.0區(qū)間，ELISA法與雅培發(fā)光定量確認(rèn)實(shí)驗(yàn)兩者符合率高，則認(rèn)為ELISA檢測(cè)的陽性結(jié)果可靠，見表3。

2.4ELISA與雅培發(fā)光定量確認(rèn)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HBsAg弱反應(yīng)標(biāo)本結(jié)果相關(guān)性比較，見表4。

3討論

乙型肝炎是一種全球傳染性疾病，易于慢性化，重癥化。據(jù)衛(wèi)生部2010年發(fā)布的最新乙肝調(diào)查結(jié)果顯示，全國有HbsAg攜帶者9300萬人，其中1～59歲人群HbsAg攜帶者為7.18%，比1992年9.75%下降26.36%，且年齡越小，降幅越大。其中5～14歲人群為2.42%，15～59歲人群HBsAg攜帶率為最高，為8.57%。城市和農(nóng)村人群乙型肝炎表面抗原（HBsAg）攜帶者差異不顯著，西部地區(qū)高于東部地區(qū)。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是檢測(cè)乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的常規(guī)方法，大部分陽性標(biāo)本均可檢出，但造成ELISA法出現(xiàn)假陽性的原因較多，如標(biāo)本溶血，乙型肝炎表面抗原（HBsAg）假陽性率達(dá)91.7%[1-2]；標(biāo)本污染；標(biāo)本放置過久；標(biāo)本凝集不全；實(shí)驗(yàn)因素；試劑質(zhì)量及有效期（可通過選擇品牌試劑及減少采購量解決）；邊緣效應(yīng)；血清標(biāo)本中內(nèi)源性物質(zhì)的影響：大約有30%的人血清標(biāo)本中含有類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體等非特異性物質(zhì)，對(duì)ELISA測(cè)定有干擾作用，易造成假陽性結(jié)果[3]。由于鉤狀效應(yīng)、HBsAg低水平表達(dá)、HBV的整合和含HBV的循環(huán)免疫復(fù)合物的形成，可以導(dǎo)致血清中HBsAg低濃度存在[4-6]。

由于ELISA檢測(cè)HBsAg的局限性，對(duì)于正確鑒別和診斷乙型肝炎存在一定限制，尤其是S/CO值在0.6～1.3，1.3～2.5，2.5～5.0左右的樣本，經(jīng)反復(fù)檢測(cè)，還無法進(jìn)行定性，容易誤診，影響疾病的診斷、治療，甚至影響到醫(yī)患關(guān)系。提高HBsAg實(shí)驗(yàn)診斷的準(zhǔn)確性，對(duì)于提高早期乙型肝炎感染、慢性持續(xù)性感染、經(jīng)藥物治療后血清HBsAg檢出率有重要意義，同時(shí)也為流行病學(xué)調(diào)查、藥物治療評(píng)價(jià)提供可靠的依據(jù)。

本文收集乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱反應(yīng)性標(biāo)本39例，分別做定性，定量及確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)。①HBsAg檢測(cè)中，S/CO值在0.6～1.3的11例樣本中，ELISA檢測(cè)陽性6例，經(jīng)雅培定量和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，有5例被檢測(cè)為陽性。其中有兩例樣本ELISA檢測(cè)結(jié)果與雅培定量和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果不同，其余樣本均為陰性。從我們的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，1例ELISA檢測(cè)陽性，雅培定量和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)為陰性（假陽性）。1例ELISA檢測(cè)陰性，雅培定量和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)為陽性（假陰性）。這說明ELISA檢測(cè)HBsAg的S/CO值在0.6～1.3之間的標(biāo)本結(jié)果與雅培定量存在差異，ELISA檢測(cè)這類弱反應(yīng)性標(biāo)本有一定的假陽性率。②而S/CO值在1.3～2.5，2.5～5.0的28例樣本與雅培定量和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同，均為陽性，兩者符合率高。ELISA與雅培定量和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)兩者符合率高，雖標(biāo)本量較少，但在實(shí)際應(yīng)用中，如無特殊情況，則認(rèn)為該ELISA檢測(cè)的陽性結(jié)果可靠。

上述這項(xiàng)結(jié)果說明弱反應(yīng)標(biāo)本結(jié)果的不穩(wěn)定性。ELISA檢測(cè)乙型表面抗原有一定的假陽性率，輕易報(bào)告易導(dǎo)致誤診。近年來，臨床上呈弱反應(yīng)性的標(biāo)本日益增多，在目前對(duì)弱反應(yīng)性沒有統(tǒng)一判斷標(biāo)準(zhǔn)的情況下。造成了臨床、檢驗(yàn)工作的困擾，并可能對(duì)醫(yī)患關(guān)系產(chǎn)生一定的影響。對(duì)于HBsAg弱反應(yīng)性結(jié)果，尤其是S/CO在0.6～1.3區(qū)間的，在實(shí)際工作中我們應(yīng)ELISA復(fù)檢（或重新抽血復(fù)檢）進(jìn)行雅培定量檢測(cè)，如果結(jié)果有差異，可進(jìn)行確認(rèn)實(shí)驗(yàn)加以證實(shí)。如相應(yīng)結(jié)果仍存在矛盾，無法確診時(shí)，可與臨床醫(yī)生溝通，患者是否接受過小鼠單抗治療或是否為接受高劑量生物素治療，并在短時(shí)間內(nèi)采集了標(biāo)本，可建議近期復(fù)查觀察變化。也可將標(biāo)本送至上級(jí)醫(yī)院或通過其他途徑送至相應(yīng)單位進(jìn)行檢測(cè)。

對(duì)于臨床標(biāo)本中EIISA檢驗(yàn)結(jié)果為弱反應(yīng)性的病例，應(yīng)該引起重視，此類標(biāo)本必須進(jìn)一步采用中和確認(rèn)試驗(yàn)驗(yàn)證，才能確保結(jié)果的可靠性和真實(shí)性，避免和減少檢驗(yàn)結(jié)果的誤報(bào)、漏報(bào)，為臨床診斷提供更準(zhǔn)確的結(jié)果。

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編輯/馮焱