P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌易感性的Meta 分析

王明珠，譚詩云，王 軍

武漢大學(xué)人民醫(yī)院消化內(nèi)科，湖北 武漢430060

大腸癌是癌癥的第三大最常見的類型，近幾年，大腸癌在中國的發(fā)病率逐年上升，城市地區(qū)占總癌癥比例約為6. 5%，農(nóng)村地區(qū)占總癌癥的比例約為4.6%［1］。男性和女性大腸癌的發(fā)病率分別居所有惡性腫瘤的第3 位、第2 位;而其死亡率分別居所有男性和女性惡性腫瘤的第4 位、第3 位［2］。與大腸癌發(fā)生相關(guān)的因素目前尚未完全明確，但流行病學(xué)研究揭示，微量元素缺乏、吸煙、飲酒及遺傳等與大腸癌的發(fā)展相關(guān)，而遺傳因素又是諸多因素中與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展最為密切的一個(gè)［3］。

P53 是一種腫瘤抑制基因，在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分裂及細(xì)胞凋亡中起著不可替代的作用［4］。它位于染色體17p13 上，在人類所有類型的癌癥中，是一種最常見的突變基因［5］。除了突變外，野生型P53 基因多態(tài)性也可以改變其功能，在一般人群中，與癌癥發(fā)展相關(guān)的常見多態(tài)性是P53 基因密碼子72 所編碼的的精氨酸(CGC)被脯氨酸(CCC)替代［6］。氨基酸序列的改變，可以改變P53 蛋白結(jié)合靶基因中反應(yīng)元件的能力，并改變翻譯后修飾的識別基序，或改變P53 的穩(wěn)定性及與其他蛋白的相互作用［7］。這種變化可能有助于腫瘤的發(fā)展，且預(yù)后不良［8］。

在過去的20 年中，大量的病例對照研究探討了人P53 基因密碼子72 多態(tài)性與人類大腸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)聯(lián)。然而，這些研究的結(jié)論不盡相同。2010 年-2011 年有兩個(gè)薈萃分析曾發(fā)表評價(jià)P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)聯(lián)。這兩項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，這種多態(tài)性與大腸癌風(fēng)險(xiǎn)無相關(guān)性，并建議進(jìn)一步研究來證實(shí)這些結(jié)果。然而，這兩項(xiàng)研究有一定的局限性，如樣本量相對較小，而且很少有研究是基于亞洲人群。此后，也有一些研究相繼發(fā)表。為了更全面的估計(jì)P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌之間的關(guān)聯(lián)風(fēng)險(xiǎn)，我們收集了25 個(gè)病例對照進(jìn)行了一項(xiàng)薈萃分析研究，來評估它們之間的聯(lián)系。

1 材料與方法

1.1 材料 計(jì)算機(jī)檢索PubMed、Medline、EMbase、CBM、CNKI、萬方和維普等數(shù)據(jù)庫。中文檢索以P53、TP53、密碼子72、大腸癌、基因多態(tài)性為檢索詞，英文檢索以P53、TP53、codon 72、mutation、variation、polymorphism、colorectal cancer 等為檢索詞，無語言限制，搜索由兩位研究人員獨(dú)立進(jìn)行，檢索時(shí)間從建庫至2014 年2 月，同時(shí)輔以手工檢索。

1.2 方法

1.2.1 納入和排除標(biāo)準(zhǔn):納入標(biāo)準(zhǔn):(1)研究是基于無相關(guān)的個(gè)人;(2)必須是病例對照研究;(3)必須提供大腸癌的病例數(shù)和對照數(shù);(4)必須提供病例組及對照組Arg/Arg、Arg/Pro 和Pro/Pro 各基因型頻數(shù)，以計(jì)算OR 值及95%CI，若文獻(xiàn)中無基因型頻率，聯(lián)系作者后獲取的方可納入研究。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)研究重復(fù)發(fā)表或者無可用數(shù)據(jù)報(bào)道;(2)未提供基因型頻率且向作者索取無果;(3)研究對象非人類;(4)控制組的基因分布不符合Hardy-Weinberg 平衡(HWE)。

1.2.2 資料提取:由兩名研究者獨(dú)立對文獻(xiàn)進(jìn)行篩選并核對，不一致的地方通過商討或第三方介入?yún)f(xié)調(diào)。提取的資料主要有第一作者的名字、發(fā)表年份、國家、病例組和對照組Arg/Arg、Arg/Pro 和Pro/Pro 各基因型頻數(shù)、對照組H-W 平衡檢驗(yàn)值(P 值)，P ＜0.05 認(rèn)為不符合H-W 平衡規(guī)律)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用Cochrane 協(xié)作網(wǎng)提供的Rev-Man 5.2 版軟件。(1)異質(zhì)性的檢驗(yàn):用Q 檢驗(yàn)和I2檢驗(yàn)，當(dāng)P≥0.1、I2＜50%時(shí)，認(rèn)為不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性，用固定效應(yīng)模型進(jìn)行Meta 分析;當(dāng)P ＜0.10，I2＞50%時(shí)各研究結(jié)果不同質(zhì)，可使用敏感性分析或分層分析等異質(zhì)性處理方法，使之達(dá)到同質(zhì)后，再用固定效應(yīng)模型;若經(jīng)過異質(zhì)性分析和處理后，多個(gè)同類研究的結(jié)果仍然不具有同質(zhì)性時(shí)，可選擇隨機(jī)效應(yīng)模型。(2)H-W 遺傳平衡檢驗(yàn):其方法是利用在線軟件(http://ihg. gsf. de/cgi-bin/hw/hwa1. pl)進(jìn)行計(jì)算，P ＞0.05 說明群體是隨機(jī)婚配，符合H-W 平衡，可以用于遺傳學(xué)分析，否則剔除掉。(3)偏倚的評價(jià):以漏斗圖的對稱性及寬度范圍來評價(jià)。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)檢索結(jié)果 初檢獲得文獻(xiàn)108 篇，無中文文獻(xiàn)，全部為英文文獻(xiàn)，通過閱讀題目和摘要剔除67 篇(其中包括研究非大腸癌類文獻(xiàn)44 篇，重復(fù)21 篇，Meta 分析2 篇)，剩余41 篇通過閱讀全文剔除14 篇(均為機(jī)制研究)，初納入文獻(xiàn)27 篇，因Sotamaa 等研究包括美國及芬蘭人口的兩個(gè)獨(dú)立研究，合并分析時(shí)將其視為兩個(gè)研究，即27 篇［9-35］文獻(xiàn)(28 個(gè)研究)。通過H-W 遺傳平衡檢驗(yàn)計(jì)算，其中有3 個(gè)研究［33-35］(Sameer 等PHWE = 0. 025;Dakouras 等PHWE =0.002;Sjalander 等PHWE =0.049)的P 值＜0.05，不符合H-W 平衡規(guī)律，將其剔除，最終納入24 篇［9-32］文獻(xiàn)(25 個(gè)研究)，其中有6 753 例患者，8 562 例對照者。納入研究的一般情況如表1 所示。

表1 納入文獻(xiàn)的基本情況Tab 1 Characteristics of studies included in the Meta-analysis

續(xù)表1

2.2 Meta 分析結(jié)果 對納入的25 個(gè)研究合并進(jìn)行Meta 分析，結(jié)果如表2 所示，4 個(gè)模型中，由于顯性模型(I2=57%)及PP vs AA 模型(I2=58%)存在異質(zhì)性，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并，其余兩個(gè)模型不存在異質(zhì)性，因此，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并。結(jié)果表明隱性模型PP vs AP +AA 與大腸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)有明顯相關(guān)性(隱性模型:OR=1.13，95% CI:1.02 ～1.26，P=0.02)，其余基因模型與大腸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)無明顯相關(guān)性(顯性模型:OR =0.99，95% CI:0.88 ～1.11，P=0.84;PP vs AA:OR=1，95% CI:0.82 ～1.22，P=1.00;AP vs AA:OR=1.04，95% CI:0.96 ～1.11，P=0.33)(見表2、圖1)。

表2 P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌易感性的Meta 分析Tab 2 Meta-analysis of the P53 codon 72 polymorphism and colorectal cancer risk

圖1 總?cè)巳篜53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)性隱性遺傳模型的Meta 分析Fig 1 Forest plots for the association of the P53 gene codon 72 polymorphism and colorectal cancer risk in the recessive model

2.3 敏感性分析 對各項(xiàng)研究進(jìn)行依次剔除，每次僅剔除1 篇，發(fā)現(xiàn)剔除Zhu 等［19］的研究后，其研究間的異質(zhì)性也隨之消失，但是各個(gè)模型的合并效應(yīng)量OR值無明顯變化，表明我們得到的結(jié)果是穩(wěn)定的，具有可靠性。

2.4 發(fā)表偏倚分析 從漏斗圖的對稱性來看，隱性模型及PP vs AA 模型不對稱，可能存在潛在的發(fā)表偏倚。而顯性模型及AP vs AA 模型較為對稱，且分布范圍較為狹窄，集中在上部，表明其精度較高，不存在發(fā)表偏倚(見圖2)。

圖2 P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌易感性Meta 分析發(fā)表偏倚風(fēng)險(xiǎn)結(jié)果 A:顯性模型;B:隱性模型;C:PP vs AA 模型;D:AP vs AA 模型Fig 2 Funnel plot for publication bias test between the P53 gene codon 72 polymorphism and colorectal cancer risk A:dominant model;B:recessive model;C:PP vs AA model;D:AP vs AA model

3 討論

P53 是一種重要的腫瘤抑制基因，在過去20 年里，已被廣泛研究，根據(jù)以往國內(nèi)外報(bào)道，P53 基因突變與肺癌、宮頸癌、乳腺癌及前列腺癌的發(fā)生均有有一定的關(guān)系。自從Olschwang 等［32］在1991 年第一次研究P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系，此后，關(guān)于兩者關(guān)系的文章被相繼報(bào)道，然而結(jié)果卻不盡相同。先前，Wang 及Tang 等［36-37］分別在2010年及2011 年發(fā)表了薈萃分析，研究結(jié)果表明P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌風(fēng)險(xiǎn)無相關(guān)性。然而這兩個(gè)研究均存在一定的局限性，前者沒有剔除不符合HW 遺傳平衡檢驗(yàn)的研究(納入了34、35 兩篇文獻(xiàn))，且前者沒有研究隱性模型，后者的研究雖然避免了前者的缺點(diǎn)，但是樣本含量較少(病例組3 603 個(gè)，對照組5 524個(gè))。因此，更新的薈萃分析是必要的。

該項(xiàng)薈萃分析樣本含量較之前明顯增加，統(tǒng)計(jì)效能也大大提高。研究結(jié)果表明隱性模型PP vs AP +AA 中P53 基因密碼子與大腸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)有明顯相關(guān)性，其余模型中均未發(fā)現(xiàn)大腸癌風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。該結(jié)果與前兩次研究［36-37］并不完全一致。分層分析顯示，在亞洲人群中，合并OR 值為1.07(95%CI:0.98 ～1.18)，白種人中，合并OR 值為0.99 (95%CI:0.88 ～1.10)，該結(jié)果表明P53 基因密碼子72 多態(tài)性和大腸癌易感性，與種族無關(guān)。薈萃分析的結(jié)果受對照組選擇的影響，不同的對照組來源可能是一個(gè)混雜因素，對我們的研究結(jié)論會產(chǎn)生影響［38］。如一些研究中使用健康人群作為對照組，而其他研究選擇無大腸癌住院患者作為對照組。為了消除對照源不同的混雜因素，我們對對照源進(jìn)行亞組分析。研究結(jié)果表明，P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌易感性也無顯著相關(guān)性，這證實(shí)了我們整體結(jié)果的可靠性。

本文尚存在以下不足:(1)文獻(xiàn)存在發(fā)表偏倚的可能性;(2)未考慮基因與環(huán)境的相互作用;(3)我們沒有調(diào)整OR 值，可能存在年齡、性別、肥胖、吸煙、飲酒等方面的影響。因此結(jié)論的可靠性需要考究。

總之，這項(xiàng)薈萃分析表明，P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌易感性之間存在相關(guān)性。然而受諸多混雜因素的影響，以上結(jié)論需要大樣本、多中心的病例對照研究來證實(shí)，此外，期望在未來，基因與環(huán)境的相互作用能得到進(jìn)一步研究，以更全面了解P53 基因密碼子72 多態(tài)性與大腸癌風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。

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