乙肝后肝硬化患者淋巴細(xì)胞亞群的變化

王 昀，郜 茜，綻永華

青海大學(xué)附屬醫(yī)院消化科，青海 西寧810000

乙型病毒性肝炎是一種免疫相關(guān)疾病。細(xì)胞及體液免疫均在肝細(xì)胞損害的發(fā)生中起著重要作用。肝功能失代償后反過來影響機體免疫系統(tǒng)，造成機體免疫系統(tǒng)失衡，尤其是乙肝后肝硬化導(dǎo)致的脾大、脾功能亢進(jìn)更是對機體免疫細(xì)胞的毀滅性打擊。究竟感染乙型病毒性肝炎的患者在免疫系統(tǒng)上會發(fā)生什么變化?通過本研究，對其做初步探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取青海大學(xué)附屬醫(yī)院2012 年1 月-2013 年1 月門診及住院乙肝患者共73 例。慢性乙型肝炎患者34 例，男19 例，女15 例，年齡28 ～58 歲;乙肝后肝硬化患者39 例，男21 例，女18 例，年齡31 ～54 歲，其中Child A 級9 例，Child B 級15 例，Child C級15 例;隨機抽取門診健康體檢者20 名作為對照組，男11 例，女9 例，年齡24 ～47 歲。

1.2 標(biāo)本采集 慢性乙型肝炎組及乙肝后肝硬化組在明確診斷后于次日晨時抽取靜脈血5 ml 測定淋巴細(xì)胞亞群，另抽血化驗乙肝后肝硬化HBV-DNA 的含量。健康對照組空腹體檢時抽取5 ml 靜脈血送檢驗科測定淋巴細(xì)胞亞群。

1.3 檢測儀器及試劑 周圍靜脈血置于EDTA 二鉀鹽中用于淋巴細(xì)胞亞群的檢測。采用美國貝克曼EPICS XL-MCL ADC 流式細(xì)胞儀，試劑采用美國貝克曼CYTO-STAT tetraCHROME CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 及 CYTO-STAT tetraCHROME CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5。HBV-DNA 定量檢測采用DA7600 熒光定量PCR 儀(達(dá)安)，試劑盒購自廣州中山大學(xué)達(dá)安基因有限公司，試劑盒的線性范圍為102～108IU/ml，操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 18.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。計量資料采用s 表示。組間比較采用單因素方差分析，并用SNK 經(jīng)行兩兩比較。P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫指標(biāo)在對照組、慢性乙型肝炎組及乙肝后肝硬化組的比較 健康對照組與慢性乙型肝炎組、乙肝后肝硬化組CD3+、CD4+、CD8+、CD56+、CD19+比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05);慢性乙型肝炎組與乙肝后肝硬化組CD3+、CD4+、CD8+、CD56+、CD19+比較，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05，見表1)。

表1 對照組、慢性乙型肝炎組及乙肝后肝硬化組免疫指標(biāo)的比較(s，/μl)Tab 1 Comparison of immune indexes in healthy control group，chronic hepatitis B group and liver cirrhosis after hepatitis B group(s，/μl)

表1 對照組、慢性乙型肝炎組及乙肝后肝硬化組免疫指標(biāo)的比較(s，/μl)Tab 1 Comparison of immune indexes in healthy control group，chronic hepatitis B group and liver cirrhosis after hepatitis B group(s，/μl)

注:與對照組比較，※P ＜0.05;與慢性乙型肝炎組比較，△P ＜0.05。

組別 例數(shù) CD3 + CD4 + CD8 + CD56 + CD19+對照組 20 1 364.30 ±191.57 795.40 ±111.72 564.90 ±85.74 519.05 ±82.70 519.60 ±81.88慢性乙型肝炎 34 1 157.14 ±136.34※ 680.14 ±107.70※ 485.41 ±54.16※ 435.97 ±57.50※ 606.38 ±72.37※乙肝后肝硬化 39 739.33 ±149.11※△398.56 ±80.71※△ 363.82 ±58.61※△ 248.61 ±56.53※△ 460.33 ±92.51※△F 值 126.88 132.18 73.07 145.32 27.96 P 值＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.2 免疫指標(biāo)在不同乙肝后肝硬化Child 分級的比較 乙肝后肝硬化Child A 組與Child B、Child C 組CD3+、CD4+、CD8+、CD56+、CD19+比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05);乙肝后肝硬化Child B 與Child C 組CD3+、CD4+、CD8+、CD56+、CD19+比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05，見表2)。

表2 乙肝后肝硬化Child 分級免疫指標(biāo)的比較(s，/μl)Tab 2 Comparison of immune indexes in Child A，Child B and Child C of liver cirrhosis after hepatitis B (s，/μl)

表2 乙肝后肝硬化Child 分級免疫指標(biāo)的比較(s，/μl)Tab 2 Comparison of immune indexes in Child A，Child B and Child C of liver cirrhosis after hepatitis B (s，/μl)

注:與Child A 比較，※P ＜0.05;與Child B 比較，△P ＜0.05。

Child 分級 例數(shù) CD3 + CD4 + CD8 + CD56 + CD19+Child A 9 904.04 ±103.03 488.50 ±55.85 421.7 ±50.97 303.40 ±63.50 563.00 ±56.67 Child B 15 755.93 ±75.83※ 407.13 ±40.80※ 365.93 ±33.94※ 251.60 ±38.07※ 471.73 ±48.73※Child C 15 623.66 ±128.00※△ 336.06 ±69.11※△ 323.33 ±47.94※△ 212.73 ±39.98※△ 387.33 ±79.97※△F 值 20.52 20.69 16.01 11.17 21.42 P 值＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3 HBV-DNA 含量在乙肝后肝硬化不同Child 分級中的比較 乙肝后肝硬化Child A 組HBV-DNA 含量［(1.99 ±0.16)×107IU/ml］與Child B［(2.05 ±0.22)×107IU/ml］、Child C 組［(2.02 ±0.16)×107IU/ml］比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05);乙肝后肝硬化Child B 組與Child C 組比較，HBV-DNA 含量的差異也無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05)。

3 討論

肝臟是人體中最大的實質(zhì)性腺體，同時也具有多種作用，包括分泌膽汁、代謝、造血、合成凝血因子及吞噬、免疫功能。乙肝后肝硬化患者由于肝功能受損、病毒的長期慢性感染及門脈高壓癥的形成直接導(dǎo)致內(nèi)環(huán)境的紊亂。加上門脈高壓癥時門脈壓力升高導(dǎo)致腸系膜靜脈及脾臟淤血，脾臟淤血后逐漸腫大。此時，脾臟的過分阻留作用及吞噬作用使血細(xì)胞逐漸減少，并最終導(dǎo)致機體內(nèi)的細(xì)胞及體液免疫失衡［1］。

肝臟的功能紊亂在機體特異性免疫、非特異性免疫的紊亂中起著重要作用。本組資料顯示與對照組比較，慢性乙肝組及乙肝后肝硬化組患者CD3+、CD4+、CD8+、CD56+及CD19+絕對計數(shù)明顯下降，隨著肝功能的下降(Child 分級)，肝硬化患者機體中的CD3+、CD4+、CD8+、CD56+及CD19+絕對計數(shù)明顯下降，這可能與乙肝后肝硬化門脈高壓癥直接導(dǎo)致脾臟免疫功能逐漸亢進(jìn)有關(guān)，主要表現(xiàn)為殺傷和清除機體正常功能的免疫細(xì)胞。CD56+的NK 細(xì)胞殺傷活性無主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex，MHC)限制，不依賴抗體，具有抗感染、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用。本研究也顯示乙肝后肝硬化患者的特異性免疫及非特異性免疫隨著B 細(xì)胞及NK 細(xì)胞的減少而逐漸下降。脾臟作為淋巴細(xì)胞再循環(huán)庫，乙肝后肝硬化時脾臟為外周血補充免疫細(xì)胞的能力下降，從而導(dǎo)致外周免疫細(xì)胞如T、B 及NK 細(xì)胞的絕對數(shù)值減少，說明乙肝后肝硬化淋巴再循環(huán)有阻礙及抑制作用，不利于抵抗外來細(xì)菌及病毒。乙肝后肝硬化Child A級、Child B 級及Child C 級HBV-DNA 含量無明顯變化。提示不能根據(jù)病毒數(shù)量的多少來評估病情嚴(yán)重程度。

總之，乙肝后肝硬化及其導(dǎo)致的一系列機體紊亂對機體的體液及細(xì)胞免疫有抑制作用，具體表現(xiàn)在機體中的CD3+、CD4+、CD8+、CD56+及CD19+絕對計數(shù)明顯下降［2-4］，并隨著肝臟儲備功能的下降，免疫功能的紊亂逐漸加重，可以作為肝硬化患者病程發(fā)展及預(yù)后的監(jiān)測指標(biāo)。

［1］ Guo CH，Deng GJ，Sun TT. Immunological parameters on prophase of severe hepatitis B［J］. Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi，2013，27(5):370-372.

［2］ Deng GJ，Guo CH，Sun TT. The characteristics of immunocompetent cells in peripheral blood on prophase of severe hepatitis B［J］. Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi，2012，26(4):256-258.

［3］ Dong X，Gong Y，Zeng H，et al. Imbalance between circulating CD4+ regulatory T and conventional T lymphocytes in patients with HBVrelated acute-on-chronic liver failure［J］. Liver Int，2013，33(10):1517-1526.

［4］ Lou YF，Dong W，Ye B，et al. Changes in peripheral T-lymphocyte subsets in acute-on-chronic liver failure patients with artificial liver support system［J］. Hepatogastroenterology，2012，59(115):814-817.