鮑曼不動(dòng)桿菌多位點(diǎn)序列分型與抗生素耐藥表型的關(guān)系分析

鮑曼不動(dòng)桿菌多位點(diǎn)序列分型與抗生素耐藥表型的關(guān)系分析

金 甌

目的分析鮑曼不動(dòng)桿菌多位點(diǎn)序列分型及其與抗生素耐藥表型之間的關(guān)系。方法選取我院2013年11月～到2014年10月收集到的非重復(fù)性鮑曼不動(dòng)桿菌101株進(jìn)行分子流行病學(xué)分型分析。結(jié)果101株鮑曼不動(dòng)桿菌共分為10個(gè)ST型，以CC92為最大的克隆復(fù)合體，多黏菌素B的敏感率達(dá)到100.0%。優(yōu)勢(shì)克隆CC92與非CC92的XDR菌株比例均高于MDR菌株（P＜0.05），但CC92與非CC92各自的MDR菌株、XDR菌株比例比較無(wú)差異（P＞0.05）。結(jié)論鮑曼不動(dòng)桿菌中，這可能與其對(duì)醫(yī)院環(huán)境的高度適應(yīng)性有關(guān)；但在耐藥性上，其與非CC92菌株并無(wú)差異，醫(yī)院環(huán)境的適應(yīng)性等與CC92的流行可能存在密切的關(guān)系。

鮑曼不動(dòng)桿菌；多位點(diǎn)序列分型；抗生素耐藥表型

鮑曼不動(dòng)桿菌是革蘭氏陰性菌的一種，屬于非發(fā)酵菌，不僅在自然界中有著十分廣泛的分布，而且是造成醫(yī)院感染的重要原因之一［1］。為控制鮑曼不動(dòng)桿菌，要對(duì)流行菌株和與流行病學(xué)無(wú)關(guān)菌株進(jìn)行分析，因此，要比較菌株的亞種水平。多位點(diǎn)序列分型是一種高分辨率分型方法，可以有效的認(rèn)識(shí)鮑曼不動(dòng)桿菌的毒力、耐藥性等情況，還可以監(jiān)控其傳播情況。CC92是目前最大的克隆群，在我國(guó)多地區(qū)流行，但是其高耐藥性導(dǎo)致其難以被抗生素清除。為探究鮑曼不動(dòng)桿菌多位點(diǎn)序列分型及其與抗生素耐藥表型之間的關(guān)系，本文就我院2013年11月～2014年10月收集到的非重復(fù)性鮑曼不動(dòng)桿菌101株作為研究對(duì)象，現(xiàn)將鮑曼不動(dòng)桿菌多位點(diǎn)序列分型及其與抗生素耐藥表型之間的關(guān)系具體報(bào)告如下，為今后的臨床提供必要的指導(dǎo)意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2013年11月～2014年10月收集到的非重復(fù)性鮑曼不動(dòng)桿菌101株作為研究對(duì)象，共涉及男性患者59例，女性患者42例，患者年齡13～81歲，平均年齡為（56.8±3.1）歲。所有患者經(jīng)過臨床檢查均符合按衛(wèi)生部頒布的《醫(yī)院感染診斷標(biāo)準(zhǔn)》［1］，所有患者均知曉本次研究的目的，自愿參見本次實(shí)驗(yàn)。

1.2 方法

1.2.1 菌株 所有101株鮑曼不動(dòng)桿菌均經(jīng)法國(guó)生物梅里埃公司生產(chǎn)的VITEK‐2 Compact全自動(dòng)微生物分析儀及API20試紙條鑒定。

通過多位點(diǎn)序列分型方法（MLST）對(duì)不同菌株進(jìn)行分子流行病學(xué)分型，采用PCR擴(kuò)增法對(duì)7個(gè)管家基因（包括gltA、gdhB、gyrB、recA、rpoD、cpn60、gpi）上的保守區(qū)域（長(zhǎng)度在305-513 bp）進(jìn)行擴(kuò)增和測(cè)序，并將測(cè)序結(jié)果提交到鮑曼不動(dòng)桿菌MLST數(shù)據(jù)庫(kù)中，做常規(guī)BLAsT比對(duì)，得到不同管家基因?qū)?yīng)的等位基因編號(hào)及序列型（STs）。同時(shí)通過eBURST軟件對(duì)菌株的親緣性進(jìn)行分析，將序列型（STs）歸類為克隆復(fù)合體（CC）。以7個(gè)位點(diǎn)中有6個(gè)及以上相同位點(diǎn)為遺傳相關(guān)克隆。

1.2.2 抗生素紙片 采用紙片擴(kuò)散法對(duì)15種抗生素的耐藥情況進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，判斷其耐藥表型?？股丶埰ǎ哼呃髁?他唑巴坦（TZP）、頭孢吡肟（FEP）、頭孢哌酮/舒巴坦（SCF）、頭孢曲松（CRO）、頭孢他啶（CAZ）、妥布霉素（TOB）、氨曲南（ATM）、左氧氟沙星（LEV）、環(huán)丙沙星（CIP）、替加環(huán)素（TGC）、多西環(huán)素（DO）、多黏菌素B（PB）、阿米卡星（AK）、亞胺培南（IPM）、美羅培南（MEM），上述抗生素紙片均由Oxoid公司提供。

1.3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)于2007年制定的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)（M100-S17規(guī)定的折點(diǎn)）［2］對(duì)不同病原菌對(duì)臨床常用抗生素的耐藥性和敏感性做判斷。參照《中國(guó)鮑曼不動(dòng)桿菌感染診治與防控專家共識(shí)》［3］對(duì)耐藥表型進(jìn)行定義：多重耐藥（MDR）指的是病原菌對(duì)3個(gè)及以上不同種類抗生素不敏感的情況；廣泛耐藥（XDR）則指的是對(duì)大多數(shù)種類的抗生素不敏感，只對(duì)一種或兩種藥物敏感的情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，其中計(jì)數(shù)資料以“n，%”表示，對(duì)比采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 鮑曼不動(dòng)桿菌多位點(diǎn)序列分型

本文101株鮑曼不動(dòng)桿菌共分為10個(gè)ST型，分別包括ST195型、ST208型、ST254型、ST457型、STn1型、STn2型、STn3型、STn4型、STn5型、STn6型，其中，前4種為數(shù)據(jù)庫(kù)里已有基因型，共占到77.22%，而后6種為新發(fā)現(xiàn)的ST型，詳見表1。

表1 鮑曼不動(dòng)桿菌MLST分型與耐藥表型的關(guān)系

采用eBURST軟件對(duì)101株菌株進(jìn)行分析，可見ST195型、ST208型、ST457型及STn1型、STn2型屬于主要克隆群CC92，而ST195型又屬于預(yù)測(cè)的祖先型，共77株，占76.23%；其余ST254型、STn3型、STn4型、STn5型及STn6型均為獨(dú)特型。將本文的101株菌株與125株中國(guó)菌株進(jìn)行比對(duì)eBURST分析，則226株菌株中共分CC92、CC2和CC3等3個(gè)主要克隆群，以CC92為最大的克隆復(fù)合體。

2.2 鮑曼不動(dòng)桿菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

對(duì)15種抗生素的耐藥情況進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果可見，除了多黏菌素B（100.0%）、替加環(huán)素（31.9%）、亞胺培南（10.1%）、阿米卡星（9.2%）、妥布霉素（8.6%）、美羅培南（6.8%）、哌拉西林/他唑巴坦（2.2%）、頭孢哌酮/舒巴坦（2.2%）外，其余臨床常見抗生素的敏感菌均為0，且在敏感性不為0的抗生素中，只有多黏菌素B的敏感率達(dá)到100.0%，替加環(huán)素為31.9%，其余均在30%以下。

2.3 鮑曼不動(dòng)桿菌多位點(diǎn)序列分型及其與抗生素耐藥表型之間的關(guān)系

優(yōu)勢(shì)克隆CC92中，共77株，包括ST195 43株（MDR菌株：12；XDR菌株：31）、ST208 22株（MDR菌株：6；XDR菌株：14）、ST457 6株（MDR菌株：0；XDR菌株：6）、STn1 3株（MDR菌株：0；XDR菌株：3）、STn2 3株（MDR菌株：0；XDR菌株：3），其MDR菌株數(shù)共20株，占25.97%，XDR菌株數(shù)共57株，占74.03%；非CC92共24株，包括ST254 8株（MDR菌株：0；XDR菌株：8）、STn3 4株（MDR菌株：4；XDR菌株：0）、STn4 5株（MDR菌株：0；XDR菌株：5）、STn5 4株（MDR菌株0：；XDR菌株：4）、STn6 3株（MDR菌株：3；XDR菌株：0），其MDR菌株數(shù)共7株，占29.17%，XDR菌株數(shù)共17株，占70.83%；優(yōu)勢(shì)克隆CC92與非CC92的菌株中的XDR菌株比例均顯著高于MDR菌株（P＜0.05），但CC92與非CC92各自的MDR菌株比例、XDR菌株比例，比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

目前，鮑曼不動(dòng)桿菌呈世界性流行，是我國(guó)重要的病原菌之一，相關(guān)研究報(bào)道顯示，其耐藥率呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，而可以選則的藥物越來越少，因此研發(fā)新的藥物是臨床治療鮑曼不動(dòng)桿菌的焦點(diǎn)問題。鮑曼不動(dòng)桿菌是臨床分離率僅次于銅綠假單胞菌的革蘭陰性桿菌，很容易造成暴發(fā)流行［4-5］。而隨著廣譜抗生素類藥物的快速更新與大量應(yīng)用，鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)多種抗生素的耐藥性也相應(yīng)增加，甚至出現(xiàn)多重耐藥的情況［6-9］。鮑曼不動(dòng)桿菌有23個(gè)流行克隆，要想對(duì)其院內(nèi)傳播進(jìn)行有效控制，就要做到對(duì)爆發(fā)流行菌株、流行病學(xué)無(wú)關(guān)菌株進(jìn)行有效的區(qū)分。這也需要研究人員從菌株亞種水平上進(jìn)行分析和比較。多位點(diǎn)序列分型（MLST）是目前廣泛應(yīng)用的一種高分辨率的分型方法［10-12］，是認(rèn)識(shí)鮑曼不動(dòng)桿菌的流行性、多重耐藥性、毒性、監(jiān)控鮑曼不動(dòng)桿菌傳播的重要手段。CC92如何可以廣泛流行以及其對(duì)抗生素的耐藥性等問題是目前存在爭(zhēng)議的問題［13］。本文對(duì)我院各科室收集的101株非重復(fù)性鮑曼不動(dòng)桿菌菌株進(jìn)行多位點(diǎn)序列分型和耐藥分型，發(fā)現(xiàn)CC92克隆復(fù)合體是最大的克隆復(fù)合體，ST型（ST92、CC92）為其祖先包含了224株菌株，為我院的主要流行克隆，特別是ST195型和ST208型，分別占到試驗(yàn)菌株的42.57%和21.78%，在我院廣泛流行，這可能與其對(duì)醫(yī)院環(huán)境的高度適應(yīng)性有關(guān)。第二大克隆群為CC113，共有54株菌株，包括18個(gè)ST型，第三大克隆群為CC109，共包括45株菌株，包括20個(gè)ST型。對(duì)其耐藥表型進(jìn)行分析，則無(wú)論是CC92還是非CC92克隆復(fù)合體，均表現(xiàn)出高耐藥的XDR菌株更多的情況，但兩者無(wú)太大差別。

本次研究結(jié)果說明，101株鮑曼不動(dòng)桿菌共分為10個(gè)ST型，以CC92為最大的克隆復(fù)合體，多黏菌素B的敏感率達(dá)到100.0%。優(yōu)勢(shì)克隆CC92與非CC92的XDR菌株比例均顯著高于MDR菌株（P＜0.05），但CC92與非CC92各自的MDR菌株、XDR菌株比例比較無(wú)差異（P＞0.05）。

綜上所述，鮑曼不動(dòng)桿菌中，CC92菌株的流行性最為廣泛，但在耐藥性上，其與非CC92菌株并無(wú)差異。但本文的樣本量總體比較小，且除了對(duì)抗生素的耐藥性有一定的關(guān)系外，還可能與醫(yī)院的環(huán)境的適應(yīng)性等有關(guān)系，因此為了使研究更加精密準(zhǔn)確，可以通過進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，限制研究環(huán)境等多種因素，分析鮑曼不動(dòng)桿菌多位點(diǎn)序列分型及其與抗生素耐藥表型之間的關(guān)系，從而為臨床合理用藥提供指導(dǎo)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

［1］晏群，鄧爽，李虹玲，等. 鮑曼不動(dòng)桿菌的同源性及碳青霉烯酶基因分析［J］. 中南大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2012，37（11）: 1163-1170.

［2］譚紅麗，程雪琴，王勇．多耐鮑曼不動(dòng)桿菌分子流行病學(xué)分析［J］.疾病監(jiān)測(cè)，2015（1）：8-13．

［3］陳佰義，何禮賢，胡必杰，等．中國(guó)鮑曼不動(dòng)桿菌感染診治與防控專家共［J］．中華醫(yī)學(xué)雜志，2012，92（2）: 76-85．

［4］李裕軍，潘楚芝，趙子文．鮑曼不動(dòng)桿菌多位點(diǎn)序列分型與抗生素耐藥表型的關(guān)系［J］．廣東醫(yī)學(xué)，2015，36（12）：1818-1821．

［5］呂美艷，姚俠，王攀，等. 浙江省永康地區(qū)多重耐藥鮑曼不動(dòng)菌的分子分型研究［J］. 中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2015（5）: 379-383.

［6］蘇運(yùn)欽，葉聰秀，車玉傳，等．多位點(diǎn)序列分型技術(shù)在鮑曼不動(dòng)桿菌同源性分析中的應(yīng)用［J］．中國(guó)抗生素雜志，2013，38（5）：360-362．

［7］胡永強(qiáng)，賈蓓，李崇智，等. 醫(yī)院感染鮑曼不動(dòng)桿菌耐消毒劑基因及同源性分析［J］. 中國(guó)抗生素雜志，2012，37（5）: 348-351.

［8］徐杰，郭潔，王麗麗，等. 125株耐碳青霉烯類抗菌藥物鮑氏不動(dòng)桿菌多位點(diǎn)序列分型［J］. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2012，22（6）: 1101-1103.

［9］楊潮，顏焱鋒，王桂琴，等. 鮑曼不動(dòng)桿菌多重耐藥中國(guó)分離株的多位點(diǎn)序列分型及種群結(jié)構(gòu)［J］. 中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2011，45（8）: 727-731.

［10］陳振華，劉文恩，高騫，等. 鮑氏不動(dòng)桿菌碳青霉烯酶檢測(cè)及流行病學(xué)分析［J］. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2011，21（6）: 1078–1081.

［11］潘楚芝，李裕軍，趙子文，等. 紙片擴(kuò)散法與微量肉湯稀釋法檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)替加環(huán)素體外敏感性的比較［J］. 廣東醫(yī)學(xué)，2013，34（14）：2132-2135.

［12］胡繼紅，張楠，高振祥，等. 頭孢哌酮 - 舒巴坦藥敏紙片中舒巴坦量對(duì)藥敏結(jié)果的影響［J］. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，33（3）：231-235.

［13］馬序竹，呂嬡，張佳，等. 耐亞胺培南鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性及OXA碳青霉烯酶檢測(cè)［J］. 中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2011，27（4）: 268-271.

Relationship Between Multiple Point Sequence Typing of Acinetobacter Bauman and the Phenotype of Antibiotic Resistance

JIN Ou Clinical Laboratory，People's Hospital of Wenjiang District，Chengdu 611130，China

ObjectiveTo analyze the relationship between the multiple point sequence typing of acinetobacter bauman and the phenotype of antibiotic resistance.MethodsThe molecular epidemiological analysis of 101 strains of non repetitive bauman was collected from November 2013 to October 2014 in our hospital.Results101 strains of acinetobacter baumannii were divided into 10 types of ST，to CC92 for maximum clonal complex，polymyxin B susceptibility rate reached 100%. The proportion of CC92 and non XDR CC92 was significantly higher than that of MDR（P＜0.05），but there was no significant difference between CC92 and non MDR（CC92）and XDR（P＞0.05）.ConclusionThis may be related to the high adaptability of the hospital environment，but there is no significant difference between and non CC92 strains.

Bauman acinetobacter，Multiple point sequence typing，Antibiotic resistance phenotypes

R446

B

1674-9316（2015）28-0185-03

10.3969/j.issn.1674-9316.2015.28.139

611130 四川省成都市溫江區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科