多種腫瘤標志物檢測對食管鱗癌的診斷及意義

喬亞光，許翠萍，張艷姣，申宇宏，趙和平 (山西醫(yī)科大學第一臨床醫(yī)學院消化內(nèi)科，太原 030001;通訊作者，E-mail:cuipingxu@hotmail．com)

食管鱗癌是我國常見的消化道腫瘤，因早期癥狀不明顯，大部分食管鱗癌患者確診時已屬中晚期，手術(shù)治療后的5年生存率僅為25%－30%，但是食管鱗癌早期診斷后手術(shù)治療的5年生存率可達70%以上［1］，因此，對食管鱗癌患者的早期診斷可顯著提高其5年生存率。血清腫瘤標志物可從細胞水平、分子水平、基因水平對腫瘤的存在進行檢測，對惡性腫瘤的早期診斷具有重要價值，目前針對食管鱗癌的診斷尚無特異性與敏感性均理想的腫瘤標志物。本研究通過檢測CK15、BMP2和臨床上常見的幾項腫瘤標志物(SCC、PCNA、CEA、CYFRA21-1)在ESCC患者血清的表達水平，探討單項或聯(lián)合檢測上述指標對ESCC的診斷價值，旨在為ESCC的診斷提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1．1 一般資料

本研究通過倫理委員會審查，簽署知情同意書。選擇經(jīng)山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院經(jīng)病理科確診的食管鱗癌患者組30例，其中男性16例，女性14例;年齡44－70歲，平均(59．9±7．38)歲。選擇同期在山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院健康體檢者30例作為正常對照組，其中男性10例，女性20例;年齡28－60歲，平均(42．40 ±9．95)歲。

1．2 方法

1．2．1 樣本收集 所有食管鱗癌組和正常對照組均取清晨空腹靜脈血5 ml，以3 000 r/min離心10 min，取血清置Eppendorf管于－80℃保存待用。

1．2．2 試劑與儀器 CK15、SCC、PCNA酶聯(lián)免疫分析檢測試劑盒購自上海酶聯(lián)生物有限公司，BMP2定量酶聯(lián)檢測試劑盒(進口分裝)購自上海森雄科技實業(yè)有限公司，檢測儀器使用Z-LX800全自動酶標儀(Bio-Tek，USA)。CYFRA21-1和 CEA試劑盒購自蘇州長光華醫(yī)生物試劑有限公司，檢測儀器使用EVERESYS A1800系列化學發(fā)光測定儀(蘇州常光華醫(yī)有限公司)。

1．2．3 方法與步驟 CK15、BMP2、SCC、PCNA 檢測采用酶聯(lián)免疫吸附試驗，按說明書操作步驟稀釋標準品，設空白孔、標準孔、待測樣本孔，加標準品及樣品，溫育、洗板、加酶、再溫育、洗板、加顯色劑，溫育10 min后加終止液，最后在450 nm波長下依序測量各孔的吸光度值，通過標準曲線計算出樣品中各指標的濃度。CEA、CYFRA21-1檢測采用EVERESYS A1800全自動化學發(fā)光檢測儀，使用配套試劑盒，按照說明書進行操作。

1．2．4 檢測項目及對應的陽性判斷標準 參照試劑盒說明書，以 CK15＜25 μg/L，SCC ＞78 ng/L，CEA ＞ 5 ng/ml，CYFRA21-1 ＞ 4 ng/ml，BMP2 ＜ 40 pg/ml，PCNA ＞8．5 ng/ml為陽性判斷標準。

1．3 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2．1 食管鱗狀細胞癌組及正常對照組血清學相關(guān)指標檢測結(jié)果

ESCC患者中血清CK15水平低于正常對照，差異有統(tǒng)計學意義(P ＜0．05);SCC、CEA、CYFRA21-1水平高于正常對照，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0．05);BMP2和PCNA的血清水平與正常對照相比無統(tǒng)計學差異(P ＞0．05，見表1)。

表1 食管鱗癌組及正常對照組各血清指標比較(±s，n=30)Table 1 Comparison of serum markers between patients with esophageal squamous cell carcinoma and normal controls(±s，n=30)

表1 食管鱗癌組及正常對照組各血清指標比較(±s，n=30)Table 1 Comparison of serum markers between patients with esophageal squamous cell carcinoma and normal controls(±s，n=30)

與正常對照組比較，*P＜0．05

組別 CK15(μg/L) BMP2(pg/ml)CYFRA21-1(ng/ml) SCC(ng/L) CEA(ng/ml) PCNA(ng/ml)正常對照組 42．65 ±24．53 86．85 ±13．87 1．47 ±0．82 51．34 ±20．79 2．30 ±1．66 1．86 ±1．19食管鱗癌組 27．04 ±3．48* 83．47 ±15．32 2．71 ±1．61* 71．12 ±17．82* 4．33 ±2．96*2．01 ±1．40

2．2 各腫瘤標志物及其聯(lián)合檢測對食管鱗狀細胞癌診斷的敏感性及特異性

CK15、SCC、CEA 和 CYFRA21－1單項指標檢測的特異性較高，但敏感性較低，聯(lián)合檢測可提高對ESCC診斷的敏感性，但特異性下降(見表2)。

表2 CK15、SCC、CEA和CYFRA21-1單項及聯(lián)合檢測食管鱗癌的效果 (%)Table 2 The diagnostic value of CK15，SCC，CEA and CYFRA21-1 for esophageal squamous cell carcinoma(%)

3 討論

細胞角蛋白15(CK15)是小分子角蛋白家族成員之一，屬于酸性角蛋白，CK15作為一種特定的干細胞標記物，首先發(fā)現(xiàn)于人和小鼠的毛囊［2］，其后的研究表明CK15也存在于表皮的基底層，甚至外分泌腺的腺體［3，4］。Abbas用免疫組化的方法證實一些皮膚的腫瘤，如merkel癌(MCC)、鱗癌(SCC)、基底細胞癌(BCC)也存在CK15的表達［5］，但是目前尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)CK15在ESCC中的研究。本研究發(fā)現(xiàn)，ESCC患者血清中CK15水平顯著低于正常對照組，表明CK15在ESCC的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，但具體機制有待于進一步研究。本研究發(fā)現(xiàn)血清CK15對ESCC診斷的敏感性和特異性分別為33．3%和90．0%，提示其對ESCC的診斷具有重要價值，可將CK15擬為診斷ESCC的一種新的腫瘤標志物，值得我們進一步研究。CEA是腫瘤細胞表面的結(jié)構(gòu)抗原，最先發(fā)現(xiàn)于結(jié)腸癌和胎兒的腸組織的細胞膜，人類胚胎期的消化道黏膜上皮細胞能夠合成并釋放CEA，出生之后逐漸消失，在成人的胃腸道的腫瘤中，惡性細胞會重新表達出CEA，并釋放入血［6］。CEA作為一項廣譜性腫瘤標志物，主要存在于結(jié)腸癌、肺腺癌及胰腺癌以及大多數(shù)上皮組織及其來源的腫瘤，后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)CEA在食管癌中也是升高的［7］。SCC是 TA-4抗原的亞基，最早是從宮頸鱗狀細胞癌中提純得到的，Crombach等［8］研究發(fā)現(xiàn)SCC由鱗癌細胞產(chǎn)生并不斷分泌到體液中，是檢測鱗癌的較好的腫瘤標志物。SCC對于宮頸、食管、肺等鱗癌的診斷、分期及預后判斷都具有重要價值。CYFRA21-1是細胞角蛋白19的可溶性片段，分布于上皮細胞胞質(zhì)中，在上皮細胞癌變時CYFRA21-1經(jīng)激活的蛋白酶降解或在細胞凋亡后其碎片釋放到血清中［9］。本次研究發(fā)現(xiàn)CK15與上述血清腫瘤標志物的單項或多項聯(lián)合檢測可提高對ESCC診斷的敏感性，其中CK15與CYFRA21-1聯(lián)合檢測的敏感性與特異性均較高，CK15與SCC、CEA、CYFRA21-1對ESCC的診斷具有重要價值。

骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(BMP2)屬于轉(zhuǎn)化生長因子－β超家族成員，BMP2除了能誘導骨形成外，還對其他組織器官的發(fā)育與生長過程起重要作用［10］。近年來研究發(fā)現(xiàn)BMP2與許多惡性腫瘤細胞的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，在骨肉瘤、乳腺癌、胃癌及前列腺癌等上皮性腫瘤中都有表達［11］，它主要通過抑制腫瘤細胞增殖、促進腫瘤細胞凋亡來發(fā)揮作用［12］。BMP2能夠調(diào)節(jié)惡性腫瘤的生物學行為，在舌癌、口腔鱗癌的發(fā)生及發(fā)展過程中也起重要調(diào)控作用［13］。但是本次研究發(fā)現(xiàn)ESCC患者血清BMP2的水平與正常對照組相比無顯著差異，且均呈現(xiàn)弱表達，可以認為檢測血清BMP2水平對ESCC無診斷價值。

增殖細胞核抗原(PCNA)是一種分子量為36 kD的蛋白質(zhì)，在細胞內(nèi)合成，為DNA聚合酶δ的輔助蛋白，可作為反映腫瘤增殖狀態(tài)的指標，參與組織的增殖、分化及損傷后的修復［14］。PCNA作為反映細胞增殖情況的一種重要指標，在胃癌、大腸癌、乳腺癌等惡性腫瘤組織中的水平均可升高，許多研究表明PCNA參與了食管癌的發(fā)生、發(fā)展過程，其增殖數(shù)與食管癌的轉(zhuǎn)移、復發(fā)和預后有關(guān)，對于食管癌惡性程度的判斷具有重要價值［15］。本研究發(fā)現(xiàn)ESCC血清中PCNA的水平與對照組相比無統(tǒng)計學差異，表明ESCC中PCNA表達的增加僅僅限于食管鱗狀細胞癌組織，而很少釋放到血清中，食管鱗狀細胞癌組織PCNA的增加與其血清學含量不成比例，故檢測血清PCNA對ESCC無診斷價值。

腫瘤標志物在臨床上主要用于對惡性腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)和腫瘤高危人群的篩查，由于單一腫瘤標志物的檢測對腫瘤診斷的敏感性較低，所以我們常常要對多項腫瘤標志物進行聯(lián)合檢測，以增加其對腫瘤的診斷率。本研究發(fā)現(xiàn)CK15與其他腫瘤標志物聯(lián)合檢測可提高對食管鱗癌的診斷率，其中以CK15與CYFRA21-1聯(lián)合檢測的效果最好。因此我們認為在對一般人群進行ESCC的篩查時可進行CK15與CYFRA21-1聯(lián)合檢測來節(jié)約成本，避免造成不必要的浪費。但對于食管鱗癌高危人群的篩查則需要CK15、SCC、CEA、CYFRA21-1 的聯(lián)合檢測，從而避免漏診，使ESCC患者能夠得到及時診斷與治療，從而顯著提高ESCC患者的生存率，但需要強調(diào)的是四項指標聯(lián)合檢測雖能提高對ESCC診斷的靈敏性，但特異性也隨之降低，因此在進行聯(lián)合檢測時還需要結(jié)合臨床、病理及影像等資料進行動態(tài)觀察，最大限度降低誤診率，提高診斷率。

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