幾丁聚糖抗自然絕經(jīng)大鼠卵巢衰老的作用及機(jī)制

幾丁聚糖抗自然絕經(jīng)大鼠卵巢衰老的作用及機(jī)制

王愛華張媛媛張?zhí)m娥

(濰坊醫(yī)學(xué)院護(hù)理學(xué)院，山東濰坊261053)

摘要〔〕目的探討幾丁聚糖抗自然絕經(jīng)大鼠卵巢衰老的作用及機(jī)制。方法30只自然絕經(jīng)大鼠模型隨機(jī)分成空白對照組、實驗組和雌激素組各10只。實驗組給予幾丁聚糖1 500 mg/kg灌胃、雌激素組給予雌二醇(E2)1.2 mg/kg灌胃、空白對照組給予生理鹽水10 ml/kg灌胃。每天1次，共1個月。采用酶聯(lián)免疫法測定大鼠血清中孕激素(P)、E2和白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α水平，黃嘌呤氧化酶法測定卵巢組織丙二醛(MDA)活力，硫代巴比妥酸法測定卵巢組織超氧化物歧化酶(SOD)的含量。結(jié)果①實驗組E2和P高于空白對照組，實驗組E2低于雌激素組(P均<0.05)；②實驗組血清IL-2水平明顯高于空白對照組，而IL-6、TNF-α水平明顯低于空白對照組(P均<0.05)。③實驗組和雌激素組SOD與空白對照組相比有升高的趨勢，但實驗組低于雌激素組(P<0.05)；實驗組和雌激素組MDA低于空白對照組(P<0.05)。結(jié)論幾丁聚糖可以通過免疫調(diào)節(jié)作用和抗氧化作用改善卵巢的內(nèi)分泌功能，延緩卵巢衰老。

關(guān)鍵詞〔〕卵巢衰老;絕經(jīng);幾丁聚糖;性激素

中圖分類號〔〕R588〔

基金項目：山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計劃項目(2011HW090)

第一作者：王愛華(1964-)，女，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事婦幼保健，絕經(jīng)期保健與護(hù)理研究。

卵巢衰老是具有累積性、普遍性、漸進(jìn)性、內(nèi)生性和危害性的生命過程〔1〕。卵巢衰老引起性激素減少不僅引起近期軀體、心理癥狀，還能導(dǎo)致心血管疾病、骨質(zhì)疏松等遠(yuǎn)期并發(fā)癥，嚴(yán)重影響絕經(jīng)期及老年婦女的生存質(zhì)量。研究顯示幾丁聚糖具有對機(jī)體細(xì)胞的激活作用，是一種良好的免疫促進(jìn)劑和抗氧化劑〔2〕。本研究旨在利用幾丁聚糖的抗氧化、調(diào)節(jié)免疫作用，激活機(jī)體細(xì)胞活性，延緩卵巢衰老。

1材料與方法

1.1動物模型選擇11～12月齡自然絕經(jīng)Wistar雌性大鼠(山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司提供，許可證號：scxk魯20080002)30只，體重(482.64±56.94)g。連續(xù)5 d對大鼠進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞檢查，出現(xiàn)無規(guī)律動情周期變化則可確定為圍絕經(jīng)期大鼠〔3〕。

1.2藥品使用藥品有雌激素和幾丁聚糖。雌激素使用法國DELPHARM Lille S.A.S.生產(chǎn)的戊酸雌二醇(E2)(批號187B)。幾丁聚糖選擇香港來恩國際事業(yè)有限公司生產(chǎn)的救多善(批號是20110302)。

1.3方法將30只自然絕經(jīng)模型大鼠隨機(jī)分成實驗組、雌激素組和空白對照組各10只。實驗組給予幾丁聚糖1 500 mg/kg灌胃、雌激素組給予E2 1.2 mg/kg灌胃、空白對照組給予生理鹽水10 ml/kg灌胃。1次/d，共1個月。灌胃期間大鼠自由進(jìn)食、飲水。

1.4指標(biāo)測定及方法包括：①卵巢內(nèi)分泌指標(biāo)：E2和孕激素(P)；②免疫學(xué)指標(biāo)：包括白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-6和腫瘤壞死因子(TNF)-α；③抗氧化指標(biāo)：包括超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)。對各組大鼠末次灌胃24 h后麻醉，首先心臟取血，然后取卵巢組織。所取血樣經(jīng)離心后取上清液，按酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)(由上海晶天生物科技有限公司提供，生產(chǎn)批號均為201109)說明書測定血清中E2、P和IL-2、IL-6、TNF-α含量。所取卵巢組織先用4℃生理鹽水沖洗，然后用3層濾紙擠壓，再加生理鹽水(生理鹽水的量是卵巢重量的9倍)用勻漿器制成10%的勻漿，離心(4 000 r/min)20 min后，取上清液備用。卵巢組織內(nèi)SOD活力和MDA含量測定方法按照黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸染色法試劑盒(均由南京建成生物工程研究所提供)說明書進(jìn)行操作。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS11.5軟件進(jìn)行單因素方差分析。

2結(jié)果

2.1幾丁聚糖對大鼠血清E2、P水平及大鼠血清SOD、MDA的影響見表1。幾丁聚糖干預(yù)后大鼠血清E2水平高于空白對照組，低于雌激素組(P<0.05)。幾丁聚糖干預(yù)后大鼠血清SOD活性高于空白對照組，MDA低于空白對照組(P<0.05)。

2.2幾丁聚糖干預(yù)對IL-2、IL-6、TNF-α的影響見表1。幾丁聚糖干預(yù)后大鼠血清中IL-2含量較空白對照組升高，而IL-6、TNF-α含量較空白對照組降低(P<0.05)。

組別E2(ng/L)P(ng/ml)SOD(U/ml)MDA(nmol/ml)IL-2(ng/L)IL-6(ng/L)TNF-α(ng/L)實驗組59.83±17.241)2)89.72±15.201)34.66±6.331)2)4.16±2.051)215.02±4.741)2)129.54±3.361)132.98±2.641)空白對照組44.52±7.2851.23±7.30823.42±2.7711.36±1.59183.84±11.13139.92±4.41149.29±2.40雌激素組74.00±6.851)85.08±15.711)43.99±1.391)3.26±0.251)192.04±6.88136.35±1.89145.07±3.51

與空白對照組比較：1)P<0.05；與雌激素組比較:2)P<0.05，下表同

3討論

研究顯示卵巢衰老不僅和免疫功能減退有關(guān)，而且與自由基堆積導(dǎo)致對細(xì)胞、組織的損害有關(guān)。體內(nèi)E2水平下降，P相對或嚴(yán)重不足〔4〕。幾丁聚糖是一種良好的免疫調(diào)節(jié)劑，可通過抗氧化作用和調(diào)節(jié)免疫功能激活機(jī)體細(xì)胞功能。本研究顯示幾丁聚糖可以通過激活卵泡功能抑制因卵巢衰老引起的內(nèi)分泌功能減退。幾丁聚糖通過抗氧化作用和免疫調(diào)節(jié)作用等激活細(xì)胞功能實現(xiàn)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)〔5,6〕。

MDA是過氧化脂質(zhì)的一種分解產(chǎn)物，能夠反映生物膜的氧化程度，可作為評價衰老的重要指標(biāo)。SOD是機(jī)體防御內(nèi)外環(huán)境中超氧負(fù)離子損傷的重要輔酶。研究顯示卵巢衰老的病理基礎(chǔ)是SOD活性蛋白水平下降、MDA水平升高〔7,8〕。隨著卵巢的衰老，組織氧化與抗氧化失衡導(dǎo)致SOD活性下降，促使活性氧對DNA和蛋白等損傷引起卵巢功能減退。本研究結(jié)果說明殼聚糖可以抑制卵巢老化引起的SOD降低和MDA升高，從而發(fā)揮抗卵巢衰老的作用。E2干預(yù)后大鼠血清中IL-6和TNF-α水平降低，說明E2對機(jī)體免疫具有調(diào)節(jié)作用〔8〕。

細(xì)胞因子是生物信號分子，具有調(diào)節(jié)免疫及刺激細(xì)胞活化、增值和分化等功能。老化的免疫學(xué)理論認(rèn)為衰老過程中T、B細(xì)胞絕對值明顯減少、T細(xì)胞對絲分裂原的刺激的增殖能力下降、B細(xì)胞對外來對外來抗原反應(yīng)能力降低等導(dǎo)致免疫系統(tǒng)防御、自穩(wěn)及監(jiān)視失調(diào)〔1〕。IL-2、IL-6是體內(nèi)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的重要細(xì)胞因子。TNF-α是特異性免疫和天然免疫的重要介質(zhì)，也是炎癥反應(yīng)和特異性免疫間聯(lián)系的重要因子〔9〕。研究顯示衰老進(jìn)程中隨著增齡引起的免疫功能失衡和自身防御能力下降，不僅導(dǎo)致T細(xì)胞分泌的IL-2 減少、IL-6水平升高；而且因體內(nèi)有害物質(zhì)蓄積刺激TNF-α的過度表達(dá)導(dǎo)致TNF-α含量升高。本研究結(jié)提示幾丁聚糖能夠調(diào)節(jié)自然絕經(jīng)模型大鼠血清因子并維持其適宜的水平，其機(jī)制可能是通過增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬能力、促進(jìn)NK細(xì)胞活性及脾臟抗體形成細(xì)胞的功能等，促進(jìn)大鼠非特異性免疫和特異性免疫〔1〕。

本研究顯示幾丁聚糖可以改善內(nèi)分泌功能用于延緩卵巢衰老。幾丁聚糖不僅具有生物兼容性、生物吸附性，吸附性強(qiáng)等理化特點，且無毒副作用，來源豐富，具有很好的應(yīng)用前景。

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〔2012-11-16修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)